丫蕊花甾体皂苷YB16促进A549细胞凋亡及其机制研究

目的观察丫蕊花甾体皂苷YB16对人肺癌细胞A549凋亡的影响,并探讨其促凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,给予不同浓度的YB16干预,采用MTT比色法检测A549细胞增殖;荧光显微镜观察吖啶橙(AO)、5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四甲基咪唑并羰花青碘化物(JC-1)染色的细胞荧光变化;流式细胞术检测碘化丙啶(PI)单染、Annexin V-FITC/PI双染、细胞线粒体膜电位(JC-1染色)的变化;采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)量的变化,免疫印迹法(Western blotting)检测YB16对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果丫蕊花甾体皂苷YB16显著抑制A549细胞的生长(P0.05),呈量效关系;随着药物浓度的增加,与对照组相比,细胞形态有显著变化;不同浓度YB16作用A549细胞后,细胞凋亡率上升(P0.05);细胞线粒体膜电位下降明显;细胞内ROS水平上升,具有显著性差异(P0.05);YB16作用A549细胞24 h后,抗细胞凋亡蛋白Bcl-2表达下降,促细胞凋亡蛋白Bax的表达增加,激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)表达增加(P0.05)。结论丫蕊花甾体皂苷YB16能抑制细胞增殖,降低细胞线粒体的膜电位,提升细胞ROS水平,促进细胞凋亡,具有良好的抗肿瘤活性。     

地黄提取物对人PC-3细胞凋亡机制的影响

目的:探讨熟地黄乙醇提取物对人前列腺癌PC-3细胞凋亡,初步探讨其作用的分子机制。方法:不同浓度(2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL)的熟地黄乙醇提取物作用于人前列腺癌PC-3细胞24 h、48 h后,采用噻唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)法检测熟地黄乙醇提取物对前列腺癌PC-3细胞分裂增殖的影响;Western-bloting法检测Livin、Survivin、Caspase3凋亡相关蛋白的表达。结果:抑制率具有浓度时间依赖性;熟地黄乙醇提取物能够影响PC-3细胞凋亡相关蛋白Livin、Survivin、Caspase3的表达。结论:熟地黄乙醇提取物抑制前列腺癌细胞增殖的机制可能与诱导前列腺癌细胞凋亡以及影响其凋亡相关蛋白的表达有关。     

紫草素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的探讨

目的:研究紫草素诱导人前列腺癌细胞(PC-3)凋亡及其作用机制。方法:以PC-3细胞为研究对象,以不同浓度的紫草素处理PC-3细胞,另设空白组,处理不同时间后,分别采用噻唑蓝(MTT)法检测紫草素对PC-3细胞增殖抑制情况;显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和磷酸化-细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果:不同浓度的紫草素对PC-3细胞的生长抑制呈时间和剂量依赖性;形态学观察结果显示紫草素作用PC-3细胞后可使细胞变圆,脱落,皱缩,细胞内出现空泡,周围出现凋亡小体;与空白组比较,不同浓度的紫草素明显升高Caspase-3和Bax蛋白的表达,明显降低Bcl-2蛋白的表达,不同浓度的紫草素作用细胞48 h后可诱导细胞产生ROS,ROS清除剂二硫苏糖醇(DTT)可以明显逆转紫草素诱导的PC-3细胞的生长抑制率,且0.2 mmol·L-1DTT可以抑制由紫草素诱导的Caspase-3和ERK1/2的活化。结论:紫草素通过ROS/ERK1/2信号通路诱导人前列腺癌PC-3细胞发生凋亡。     

壁虎醇提物体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及机制研究

目的:研究壁虎醇提物(GAE)体外诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡作用及其可能机制,为激素非依赖性前列腺癌的治疗提供理论依据。方法:以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,MTT法检测3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L~(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用;3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后,另设空白组,Hoeehst33342荧光染色法,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,SP免疫组化法检测细胞内半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和Fas的表达情况并做统计学处理。结果:3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L~(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后能显著抑制PC-3细胞的生长且呈剂量和时间依赖性;与空白组比较,3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后Hoeehst33342荧光染色发现部分PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后,早期凋亡细胞分别占6.51%,12.48%和22.81%,且免疫组化显示细胞内蛋白Caspase-3和Fas的表达均上调且呈浓度依赖性(P0.05)。结论:GAE能够诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与死亡受体介导的信号通路有关。     

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞HSP27 mRNA表达及凋亡的影响

目的：评价姜黄素对前列腺癌PC-3细胞热休克蛋白27（HSP27）mRNA表达及凋亡的影响,探讨其抗前列腺癌的可能作用机制。方法：体外培养人正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌细胞LNCaP、PC-3和DU145。采用RT-PCR检测各细胞HSP27 mRNA的表达情况。PC-3细胞随机分为4组,空白对照组：不给药;高剂量组：给予50 μmol·L-1姜黄素2 μL;低剂量组：给予25 μmol·L-1姜黄素2 μL;另设阴性对照组：给予等体积DMSO。采用RT-PCR检测PC-3细胞HSP27 mRNA的表达情况,采用TUNEL法检测PC-3细胞凋亡情况。结果：LNCaP、PC-3和DU145细胞HSP27 mRNA的表达明显升高,与RWPE-1细胞比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。给药组PC-3细胞HSP27 mRNA的表达明显降低,且呈剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;给药组可见大量PC-3细胞凋亡,且呈剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：姜黄素抑制HSP27 mRNA的表达和诱导PC-3细胞凋亡,可能是其抗前列腺癌的机制之一。     

芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的影响

目的:探讨芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9及细胞色素C的影响。方法:SD大鼠50只,建立大鼠骨肉瘤模型,随机分为模型组,顺氯氨铂组(10 mg·kg-1),芹菜素低、中、高剂量组(1,2,4 mg·kg-1),每组10只,ig给药,连续给药30 d。模型组ig给等体积的生理盐水。末次给药24 h后,切取骨肉瘤组织,称质量。TUNEL法原位标记凋亡的骨肉瘤细胞;免疫组化法检测骨肉瘤组织中Bax,Bcl-2的蛋白表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测骨肉瘤组织中Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白含量。结果:与模型组比较,芹菜素低、中、高剂量组的骨肉瘤的质量降低,细胞凋亡数量明显增加,明显上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:芹菜素可通过上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡,从而对骨肉瘤产生治疗和抑制作用。     

构树叶总黄酮调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG-2细胞凋亡的研究

目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)诱导HepG-2细胞凋亡的机制。方法:采用体外细胞培养方法,取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,应用MTT法检测TFBP对人肝癌细胞HepG-2生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察各浓度TFBP作用细胞48 h后的细胞的形态变化;通过免疫细胞化学SP法检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;比色法检测半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果:TFBP在体外对人肝癌细胞HepG-2有较强的浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可分别达52.46%,64.72%,与对照组具有显著性差异(P<0.01),可诱导细胞凋亡,质量浓度9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞48 h后就可出现典型的凋亡小体,TFBP可升高caspase-3活性,并具有浓度效应,同时还可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2/Bax。结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2/Bax以及增强caspase-3的活性有关。     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞及 bcl-2、caspase-3 基因表达的影响

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌PC-3细胞株的作用,以及对bcl-2和caspase-3基因表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法分别用0、50、100、200μg/mL LAMS作用于PC-3细胞,用WST-8法检测细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察PC-3细胞形态,RT-PCR和Western blotting检测细胞增殖、凋亡相关基因bcl-2和caspase-3mRNA及蛋白的表达。结果LAMS能抑制PC-3细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同质量浓度LAMS诱导PC-3细胞出现剂量依赖性S+G2期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后出现凋亡的形态学改变,LAMS对PC-3细胞bcl-2 mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱,对PC-3细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S+G2期阻滞和凋亡,LAMS影响PC-3细胞相关基因蛋白的表达,可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌PC-细胞及bcl-、caspase-基因表达的影响

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌PC-3细胞株的作用, 以及对bcl-2和caspase-3基因表达的影响, 探讨其抗肿瘤的作用机制。方法分别用0、50、00、200μg/mL LAMS作用于PC-3细胞, 用WST-8法检测细胞生长的抑制作用, 利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化, 用荧光显微镜观察PC-3细胞形态, RT-PCR和Western blotting检测细胞增殖、凋亡相关基因bcl-2和caspase-3mRNA及蛋白的表达。结果LAMS能抑制PC-细胞的增殖, 呈时间-剂量效应;不同质量浓度LAMS诱导PC-细胞出现剂量依赖性S+G期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后出现凋亡的形态学改变, LAMS对PC-3细胞bcl-2mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱, 对PC-3细胞caspase-3mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长, 并促进其S+G期阻滞和凋亡, LAMS影响PC-3细胞相关基因蛋白的表达, 可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨

目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制。方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达。结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21μmol·L~(-1),在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡。     

甘草苷对中波紫外线诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草苷作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 m J·cm-2的UVB作用于Ha Ca T细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化Ha Ca T细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化Ha Ca T细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量。结果:筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P0.05,P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡。     

木犀草素对小鼠T淋巴细胞体外增殖及凋亡的作用

目的:研究木犀草素对小鼠T淋巴细胞体外增殖及凋亡作用的影响。方法:设置刀豆蛋白A(Con A)组和空白组,设置3个木犀草素药物组,终质量浓度分别为2.5,5,10 mg·L-1,细胞毒性活性检测-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)和Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞凋亡通路蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)表达水平。结果:CCK-8实验结果显示3个木犀草素药物组细胞数明显低于Con A组和空白组(P0.01),差异有统计学意义。TUNEL实验结果显示,Con A组的凋亡细胞数量显著低于3个木犀草素药物组(P0.01),差异有统计学意义。流式细胞仪检测结果显示3个木犀草素药物组的细胞凋亡率显著高于Con A组和空白组(P0.01),细胞凋亡率随着药物浓度增加而增高,呈明显的量-效关系。Western blot检测结果显示,2.5,5 mg·L-1木犀草素药物组中Bcl-2表达量高于对照组,Bax表达量低于对照组;10 mg·L-1药物组中Bcl-2表达量低于对照组,Bax表达量高于对照组。结论:2.5,5,10 mg·L-1木犀草素能够抑制T淋巴细胞增殖,能够诱导T淋巴细胞凋亡,10 mg·L-1木犀草素可能主要通过下调Bcl-2,上调Bax影响线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡,2.5,5 mg·L-1木犀草素可能通过其他通路诱导细胞凋亡。     

傣百解提取物对人肺癌A549裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨傣百解乙酸乙酯提取物(ethyl acetate fraction,EFA)诱导人肺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用及作用机制。方法:建立人肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,EFA高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg-1)组,环磷酰胺组和消癌平组,每组6只。给药3周后剥离瘤组织,比较各组肿瘤质量,计算抑制率;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测各组移植瘤组织中的细胞凋亡情况;免疫组化法(immunhistochemical staining,IHC)检测瘤组织中p53,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与模型组比较,EFA高、中、低剂量组对肿瘤组织具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01)。TUNEL法检测结果显示EFA给药处理后,与模型组比较,肿瘤细胞凋亡明显增多。免疫组化结果显示,与模型组比较,各给药组移植瘤p53和Bax蛋白表达明显升高,而Bcl-2表达降低。结论:EFA对人肺癌A549裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用,其机制可能与上调p53和Bax蛋白的表达,降低Bcl-2蛋白的表达,诱导肺癌细胞凋亡相关。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡相关Bax和Caspase-12的影响

目的 研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡相关B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-12（Caspase-12）蛋白与mRNA表达的影响,以探究黄芪桂枝五物汤加减治疗糖尿病周围神经病变的作用机制。方法 选用动物实验方法进行研究,将60只雄性SD大鼠通过高糖高脂饲料喂养联合链尿佐菌素（STZ）腹腔注射诱导成糖尿病大鼠动物模型,连续3 d随机血糖≥16.7 mmol·L^-1者为糖尿病大鼠造模成功,将48只造模成功的糖尿病大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,每组各12只,并设正常组10只。监测大鼠体质量和随机血糖水平;干预16周末通过Key point肌电采集系统检测大鼠坐骨神经传导速度;分别通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经中Bax和Caspase-12蛋白与mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著下降（P<0.01）,随机血糖水平显著升高（P<0.01）;干预16周,与模型组比较,中药高剂量组大鼠体质量明显升高（P<0.05）,其他给药组体质量变化差异无统计学意义;各给药组随机血糖水平均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,干预16周,模型组大鼠运动和感觉神经传导速度显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠运动和感觉神经传导速度均明显升高（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12蛋白表达均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12 mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,α-硫辛酸组、中药高剂量组大鼠坐骨神经Bax mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药低剂量组坐骨神经Bax mRNA表达降低有下降趋势;各给药组大鼠坐骨神经Caspase-12 mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可能通过抑制坐骨神经细胞凋亡来改善和修复糖尿病大鼠坐骨神经损伤。     

钩吻总碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨钩吻总生物碱提取物(钩吻总碱)促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:钩吻总碱体外干预HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察HT-29细胞的凋亡情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察HT-29细胞B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2 mRNA表达情况,利用紫外分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)表达量的变化。结果:钩吻总碱可抑制HT-29细胞增殖,200 mg·L~(-1)钩吻总碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达54.17%。DAPI染色及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察到钩吻总碱可促进HT-29细胞凋亡。RT-PCR观察到钩吻总碱能降低HT-29细胞Bcl-2 mRNA表达(P0.05),对Bax mRNA表达无明显影响,提高了Bax/Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。利用紫外分光光度法检测到随着钩吻总碱浓度的升高,HT-29细胞的Caspase-3表达呈上升趋势(P0.05)。结论:钩吻总碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bax/Bcl-2途径诱导细胞凋亡相关。     

疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响以及作用机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,以不同浓度双氧水(H2O2)诱导BMSCs凋亡,取最适宜浓度1.0 mmol·L~(-1)用于实验。疏血通脉胶囊低、中、高剂量(含生药1.81,3.62,7.24 g·kg~(-1))灌胃给药制备大鼠含药血清。选择第3代BMSCs,随机分正常组(不做处理,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液),模型组(H2O2诱导细胞凋亡,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液)和疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组(H2O2诱导细胞凋亡,分别加入对应剂量、体积分数为15%的疏血通脉胶囊含药血清培养液),共5组,作用24 h后噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导BMSCs凋亡。MTT结果显示疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组细胞存活率较模型组有明显提高(P0.01),且存活率随剂量增加而增高(P0.05);Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示疏血通脉胶囊含药血清可以降低H2O2诱导的BMSCs凋亡率(P0.01)。Real-time PCR结果显示H2O2诱导可以增加BMSCs的Caspase-3 mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA表达。疏血通脉胶囊含药血清处理下调了Caspase-3 mRNA的表达(P0.01),上调了Bcl-2 mRNA的表达(P0.01)。结论:疏血通脉胶囊含药血清可通过上调Bcl-2基因表达,负性调控Caspase-3基因,从而抑制H2O2导致的BMSCs凋亡。     

冬凌草甲素诱导人肾癌A-704细胞凋亡及机制研究

目的:研究冬凌草甲素( oridonin,Ori)对人肾癌细胞的生长抑制、诱导凋亡作用及其机制.方法:MTT法检测Ori对密度为1×104/mL的人肾癌A-704细胞的生长抑制作用;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法检测Ori作用于人肾癌A-704细胞24 h的细胞凋亡率;实时监测聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测32 μmol·L-1Ori作用人肾癌A-704细胞24h后的Bcl-2,Bax及Caspase-3基因表达水平的变化.结果:Ori可显著抑制人肾癌A-704细胞的生长,并呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系,64 μmol· L-1 Ori作用人肾癌A-704细胞60 h后抑制率为73％.随着Ori作用浓度增加,凋亡细胞数和坏死细胞数均增加,浓度越高,坏死细胞率增加越多,64 μmol·L-1Ori作用人肾癌A-704细胞24 h后,坏死细胞升至32.4％.随着32 μmol·L-1Ori作用时间延长,人肾癌A-704细胞Bax,Caspase-3基因的表达逐渐增强,Bcl-2基因的表达逐渐减弱(P均＜0.05).结论:Ori通过上调Bax基因和降低Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡,从而抑制人肾癌A-704细胞的生长.     

雷公藤甲素对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素影响人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法:采用细胞药理学实验方法,人肝癌细胞株Bel-7402与雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL及0.25μg/mL)共培养,MTT法检测其对Bel-7402细胞增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组织化学(SABC)染色法检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:作用48h后雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)3个剂量对Bel-7402细胞增殖均有显著抑制作用,P<0.01,抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达38.67%,且呈量效关系,3个剂量组间有显著性差异,P<0.01。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,作用显著,P<0.01,且呈显著的量效关系。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)用药组Bax、Bcl-2表达与对照组比较,无显著性差异,P>0.05。结论:雷公藤甲素能抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用机制可能不是通过Bax、Bcl-2途径。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3 细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。