冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

基于Wnt/β-catenin通路研究三物白散对胃癌AGS细胞凋亡的影响

目的 研究三物白散对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响并基于Wnt/β-catenin通路探讨其机制。方法 SPF级雄性SD大鼠28只,随机分为对照组及三物白散高、中、低剂量组,每组7只。三物白散高、中、低剂量组分别按0.125、0.0625、0.03125g·kg^-1·d^-1剂量灌胃,对照组以等剂量生理盐水灌胃。每日灌胃1次,连续7d。末次给药后45min经腹主动脉取含药血清。CCK-8法检测三物白散含药血清对胃癌AGS细胞活性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,5%、10%、15%、20%高浓度组含药血清可呈浓度—时间依赖性抑制AGS细胞活性。细胞凋亡检测结果显示高浓度组AGS细胞凋亡率显著高于对照组(P<0....     

左旋紫草素靶向Wnt/β-catenin通路抑制宫颈癌HeLa细胞增殖侵袭迁移的机制研究

目的?观察左旋紫草素对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移及Wnt/β-catenin通路蛋白的影响。方法?设置左旋紫草素浓度梯度为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L，干预HeLa细胞，MTS法检测细胞增殖活力，并筛选最佳干预浓度进行后续实验。后续实验中分为对照组、左旋紫草素 0.5、1、2 μmol/L组。划痕实验检测HeLa细胞24、48 h后细胞的迁移能力；Transwell实验检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后细胞侵袭能力；Western Blot检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后Wnt/β-catenin通路相关蛋白Wnt5a、β-catenin、p-LRP、LRP的表达。结果?左旋紫草素1、2、4、8 μmol/L在24 h可明显抑制HeLa细胞增殖（P<0.05，P<0.01），其抑制作用呈现浓度依赖性；与对照组比较，左旋紫草素0.5、1、2 μmol/L组细胞穿过率明显降低，细胞穿过基质胶的能力随着药物浓度的加大而降低（P<0.01），同时Wnt5a、β-catenin、p-LRP蛋白表达下降（P<0.05，P<0.01）。结论?左旋紫草素可通过下调Wnt/β-catenin信号通路，抑制HeLa细胞增殖、侵袭、迁移功能。     

orchinol对胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移和Wnt3a/β-catenin信号通路的影响

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol·L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h,采用MTT法检测orchinol对SGC-7901细胞活力的影响;利用伤口愈合实验、Transwell实验分别分析5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h后对SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测orchinol对SGC-7901细胞β-catenin,Wnt-3a,DvL2,cyclinD1,GSK-3β蛋白表达水平的影响。结果显示,orchinol在5~80μmol·L^-1能以剂量和时间依赖性的方式抑制SGC-7901细胞的活力,orchinol分别处理细胞24,48,72 h后,其对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为77.79,42.96,7.85μmol·L^-1;与对照组相比,5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h,可明显抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移的能力(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖关系;Western blot结果显示,orchinol可显著下调β-catenin,Wnt3a,DvL2,cyclinD1蛋白、显著上调GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。以上结果提示orchinol能显著抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,其机制可能是与orchinol抑制Wnt3a/β-catenin信号通路及下游基因蛋白的表达有关。     

灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡.100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达.分别以20 μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100 μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡.结果 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05).100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05).20 μmol/L XAV-939干预能抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05),20 mmol/L LiCl则能在一定程度上减弱灵芝三萜对HepG2细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用(P<0.05).结论 灵芝三萜能够通过Wnt/[β-catenin信号通路调节c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8蛋白表达,抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨不同浓度丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:提取新生SD大鼠原代软骨细胞,并通过Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光进行鉴定,取P1代细胞进行实验,共设5组,其中1组设为空白对照组,另外4组分别用6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L浓度丹参酮ⅡA对其进行干预,24h后通过蛋白印迹分析法(Western Blot)检测软骨细胞Ⅱ型胶原及β-catenin蛋白的表达情况。结果:随着丹参酮ⅡA浓度的增加,Ⅱ型胶原蛋白表达增加,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L丹参酮ⅡA组Ⅱ型胶原蛋白量均较对照组增高(P<0.05),且Ⅱ型胶原蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈正相关(r=0.949,P<0.001),各丹参酮ⅡA组β-catenin蛋白量均较对照组降低(P<0.05),且β-catenin蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈负相关(r=-0.949,P<0.001)。结论:丹参酮ⅡA可抑制Wnt/β-catenin信号通路,促进软骨细胞Ⅱ型胶原表达,延缓软骨细胞退变。     

通芪方对胃癌MGC803细胞周期和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:从mRNA和蛋白水平阐明通芪方对胃癌MGC803细胞周期和Wnt/β-catenin信号通路的影响作用。方法:MGC803细胞常规体外培养24 h,加入6个质量分数的通芪方,分别于24、48和72 h用MTT染色法检测细胞增殖变化;流式细胞术分析细胞周期;实时荧光定量RT-PCR检测PCNA和Cyclin-D1 mRNA表达变化;western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果:通芪方抑制MGC803细胞增殖24 h的IC50浓度约为6.75 g·L~(-1);48 h的IC50浓度约为3.17 g·L~(-1);72 h的IC50浓度约为2.71 g·L~(-1)。通芪方可抑制细胞于G1期,48、72 h时S期细胞比率显著下降,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05);实时荧光定量RT-PCR检测显示48、72 h通芪方组细胞PCNA和Cyclin-D1 mRNA表达水平显著下降,与阴性对照组比较差异有统计学意义(48 h,P0.05;72 h,P0.01)。western blot检测显示,通芪方作用细胞72 h,Wnt、β-catenin、PCNA和Cyclin-D1蛋白表达水平显著下降,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:通芪方抑制MGC803细胞增殖,具有明显量效、时效性;可调节细胞周期,分子机制与下调Wnt/β-catenin信号通路分子的mRNA和蛋白表达有关。     

苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 体外培养人肝癌细胞MHCC97-H,采用CCK-8法检测细胞活性,计算苍术酮的半数抑制浓度(IC₅₀)。将MHCC97-H细胞分为对照组和苍术酮5、10、20μmol·L^-1浓度组,分别干预24 h。采用克隆形成实验(培养2周)检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western Blot法检测细胞上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 苍术酮干预MHCC97-H细胞24 h的IC₅₀为24.97μmol·L^-1。与对照组比较,苍术酮10、20μmol·L^-1组的MHCC97-H细胞集落数显著减少(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),MHCC97-H细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达显著上调(P<0.01);苍术酮5、10、20μmol·L^-1组的MH...     

左归丸对去势骨质疏松模型大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察左归丸对去势骨质疏松大鼠模型骨代谢和Wnt/β-链蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探讨左归丸防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:采用双侧卵巢切除法制备绝经后骨质疏松症大鼠模型,60只雌性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,雌二醇组(戊酸雌二醇片0.05 mg·kg^-1·d^-1),左归丸低、中、高剂量组(5.5,11,22 g·kg^-1·d^-1)。从造模成功后(第13周)开始,每日灌胃(ig)1次,共持续12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠股骨组织结构变化;双能X射线仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD)和骨矿质(BMC);MTS Acumen3型生物力学测试系统检测各组大鼠骨生物力学性能;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中骨碱性磷酸酶(BALP),骨钙素(BGP),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP),Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)等骨代谢标志物含量及雌二醇(E2)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠胫骨组织中Wnt2,β-catenin,低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)水平及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠BMD,BMC,最大载荷和刚度显著降低(P<0.01),血清E2和PINP含量显著降低(P<0.01),BALP,BGP,TRAP含量显著升高(P<0.01),骨组织中Wnt2,p-GSK-3βSer9,LRP5和β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),股骨骨小梁稀疏变细,数量减少;与模型组比较,雌二醇组和左归丸各组BMD,BMC,最大载荷和刚度明显升高(P<0.05,P<0.01),血清E2和PINP含量明显升高(P<0.05,P<0.01),BALP,BGP,TRAP含量显著降低(P<0.01),骨组织中Wnt2,p-GSK-3βSer9,LRP5,β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),股骨骨小梁较模型组变粗,数量增加,结构基本清晰。结论:左归丸对去势大鼠骨质疏松症具有一定的防治作用,其机制可能与提高雌激素水平,激活Wnt/β-catenin信号通路,上调Wnt2和LRP5蛋白表达,抑制GSK-3β的活性,减少β-catenin的降解,协调骨形成与骨吸收的动态耦联平衡,纠正骨代谢紊乱,从而改善骨组织形态相关。     

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的 探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法 将HBZY-1细胞分为5组：正常组、LPS组(100 ng·m L^-1LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western...     

白杨素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化的机制研究

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^-1)和BLC+ChR(100 mg·kg^-1)剂量组,每组动物15只。气管注射BLC(7500 U·kg^-1)诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。细胞实验设对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)(5 ng·mL^-1)组、TGF-β1+ChR(1,10,100μmol·L^-1)组,Ⅱ型肺泡上皮细胞先用TGF-β1处理24 h,再用TGF-β1和(或)不同剂量ChR处理48 h。肺组织病理变化和胶原沉积情况分别采用HE染色、Masson染色和免疫组化法进行观察。肺组织和细胞内Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、E钙粘蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达分别采用qPCR和(或)Western blot法检测。动物实验结果显示,与BLC组相比,ChR给药28 d后,大鼠肺纤维化程度明显减轻;肺组织collagenⅠ表达明显下降(P<0.05或P<0.01);肺组织肺泡上皮细胞EMT程度明显受到抑制[ZO-1和E-cadherin的表达明显升高,α-SMA和vimentin的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)];肺组织细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平、胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,不同剂量ChR能够明显减轻TGF-β1诱导的collagenⅠ的表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞EMT[E-cadherin和ZO-1的表达明显升高,vimentin和α-SMA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)],同时能够明显抑制TGF-β1诱导的细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平并降低细胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达(P<0.05或P<0.01)。综上结果推测ChR能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。     

红景天苷通过Nrf2-HO-1保护Aβ25-35诱导的原代皮层神经元损伤

目的探讨红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元损伤的保护作用。方法:随机将培养成熟的原代皮层神经分为5组:正常对照组、模型组、红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、激动剂组。后3组分别使用5μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1TBHQ培养24 h,余组正常换液。然后除正常对照组,将余组更换为终浓度为20μmol·L^-1Aβ25-35并维持各药物组终浓度的培养液,24 h后使用CCK8试剂盒测细胞活性、LDH试剂盒测细胞LDH释放量、免疫组化和Western Blot测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等蛋白的表达水平。结果红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够提高Aβ25-35损伤后细胞的活性、减少LDH的释放改善细胞损伤,红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够增加Nrf2、HO-1的表达水平,下调Caspase-3蛋白表达水平、上调Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。锌原卟啉ZnPP可逆转红景天苷及TBHQ对Aβ25-35诱导的皮层神经元的保护作用。结论红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元细胞的保护作用,可能主要通过改善凋亡相关蛋白、上调Nrf2/HO-1信号通路表达实现。     

鸦胆子苦醇对三阴性乳腺癌细胞凋亡的影响

目的: 研究鸦胆子苦醇(BRU)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡影响。方法:用BRU 处理 MDA-MB-231 细胞。采用 CCK-8 法检测MDA-MB-231细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率和周期。结果:BRU对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生长抑制率测定结果显示,不同浓度的BRU对MDA-MB-231细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异,均具有统计学意义(均P<0.05),且呈时间与浓度依赖性,凋亡结果显示,经5、10、20、40 μmol/L BRU作用细胞48 h后,随着浓度增高细胞的凋亡率也相应提高,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。周期结果提示经5、10、20、40 μmol/L BRU作用细胞48 h后,随药物浓度增加,处于G₀/G₁期的细胞比例逐渐增加,S/G₂/M期的细胞比例下降,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:中药鸦胆子苦醇在体外能抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,并能诱导该细胞凋亡。     

恩替卡韦联合康艾注射液治疗晚期肝癌伴乙型肝炎疗效观察

目的探究恩替卡韦联合康艾注射液治疗晚期肝癌伴乙型肝炎患者的临床效果。方法选取2017年2月—2018年10月医院门诊接受治疗的120例晚期肝癌伴乙型肝炎患者,按随机数字表法将其分成两组,对照组60例患者采用恩替卡韦治疗;观察组60例患者采用恩替卡韦联合康艾注射液治疗。对比两组患者治疗后总有效率;治疗前后APTT、TT、PT、FIB以及TBil、AST、ALT水平。结果观察组治疗后临床总有效率较对照组升高(P<0.05);观察组患者治疗后凝血功能APTT(47.30±3.80)·s^-1、TT(17.92±1.28)·s^-1、PT(14.91±1.94)·s^-1、FIB(3.91±0.82)g·L^-1明显低于对照组APTT(52.05±3.92)·s^-1、TT(19.94±1.42)·s^-1、PT(18.82±2.20)·s^-1、FIB(5.10±0.87)g·L^-1(P<0.05);观察组患者治疗后肾功能指标TBil(20.14±10.16)μmol·L^-1、AST(30.18±18.92)IU·L^-1、ALT(29.36±7.73)IU·L^-1明显低于对照组TBil(30.01±11.22)μmol·L^-1、AST(46.32±19.61)IU·L^-1、ALT(40.04±7.54)IU·L^-1(P<0.05)。结论恩替卡韦联合康艾注射液治疗晚期肝癌伴乙型肝炎患者的效果较明显,不仅可修复肝功能,还能改善患者凝血功能,具有重要的临床价值。     

去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3 细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。     

TAB1——基于蛋白质组学的卵巢癌紫杉醇耐药的潜在生物标志物探讨

目的:探究卵巢癌对紫杉醇(PTX)耐药的潜在靶点及其相关机制。方法:体外培养卵巢癌A2780细胞和A2780PTX耐药细胞(A2780/T),采用不同浓度(2,4,8,16,32,64,128,256μmol·L^-1)PTX分别干预24 h或48 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测PTX对A2780细胞和A2780/T细胞存活率的影响,利用液相色谱质谱/质谱(LC-MS/MS)非标记(Label-Free)定量蛋白质组学方法鉴定和筛选两组细胞中表达差异的蛋白,通过基因本体(GO)注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,筛选卵巢癌细胞对PTX耐药的潜在生物标志物。以正常培养的A2780细胞作为空白组,采用0,1,4μmol·L^-1的PTX处理A2780/T细胞,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测验证潜在靶点转化生长因子-β活化激酶1结合蛋白1(TAB1)及其下游相关分子转化生长因子-β活化激酶1(TAK1),p38有丝分裂活化蛋白酶(MAPK)mRNA和蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,PTX干预组的A2780和A2780/T细胞的活力均降低。PTX对A2780细胞的抑制率明显高于A2780/T细胞。A2780细胞中,PTX处理48 h的半抑制浓度(IC50)为0.002μmol·L^-1,A2780/T细胞中,PTX的IC50>设置的最高浓度128μmol·L^-1,与A2780细胞相比,A2780/T细胞对PTX具有耐药性。通过非标记定量蛋白质组学分析筛选出A2780/T和A2780细胞之间有441种差异表达蛋白和421种特殊差异表达蛋白。GO功能富集分析显示,在差异表达的蛋白质中,结合蛋白占大多数(80%)。根据KEGG通路分析结果和表达位点分析,TAB1被认为可能是卵巢癌对PTX耐药的潜在生物标志物。与A2780细胞比较,A2780/T细胞的TAB1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),与TAB1相互作用的TAK1 mRNA和p38 MAPK mRNA亦明显降低(P<0.05,P<0.01),但蛋白表达无显著变化。结论:TAB1可能是卵巢癌对PTX耐药的潜在生物标志物,其机制可能与TAB1/TAK1/p38 MAPK通路有关。     

橙皮苷改善ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:研究橙皮苷对动脉粥样硬化的ApoE^-/-小鼠和LPS诱导的Raw 264.7巨噬细胞的保护作用及可能机制。方法:将60只ApoE^-/-小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组及橙皮苷低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各10只。采用高脂饲料饲养16周造模,检测各组小鼠血清三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、重组人精氨酸酶1(Arginase-1,ARG1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10水平。使用分子对接程序AutoDock vina对橙皮苷与AMPK结合能力进行预测。将Raw 264.7巨噬细胞分为空白组、模型组和橙皮苷低浓度组、中浓度组、高浓度组(5μmol·L^-1、10μmol·L^-1、20μmol·L^-1),采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)进行造模。Western Blot法检测P-AMPK、PPAR-γ、P-P65、P65蛋白表达。结果:与模型组比较,橙皮苷中、高剂量组大鼠血清TG,TC和LDL-C水平降低HDL-C水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。油红O染色结果显示:橙皮苷高剂量组能抑制血管中脂质的累积,较模型组脂质区域明显减小。AutoDock vina预测结果提示,橙皮苷可与AMPK的ILE-46、GLN-109、ASN-111、ASN-110等残基形成氢键而结合,结合力为-10.158 kcal·mol^-1。橙皮苷上调LPS诱导的Raw 264.7巨噬细胞P-AMPK、PPAR-γ蛋白表达,下调P-P65表达(P<0.01)。结论:橙皮苷能够有效改善ApoE^-/-小鼠的动脉粥样硬化,其机制可能与调控巨噬细胞极化相关。     

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??OBJECTIVE To investigate the effect and mechanism of juglone on the apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells. METHODS The antiproliferative effect of juglone on SGC-7901 cells was tested by the MTT assay. The apoptosis rate and intracellular reactive oxygen species(ROS) level were detected by flow cytometry (FCM). The expression of JNK, p-JNK, p38, and p-p38 proteins were examined by Western blot. In order to clarify the role of ROS in the apoptosis induced by juglone on SGC-7901 cells, the combination of the juglone and ROS inhibitor NAC groups were set up in each experiment above. RESULTS Juglone could effectively inhibit the proliferation of SGC-7901 cells (IC₅₀ for 72 h was 24.16 ??mol??L^-1). When combination juglone with NAC, the IC₅₀ raised to 36.91 ??mol??L^-1. After 72 h of exposure to 5-20 ??mol??L^-1 of juglone, the cell apoptosis rate increased gradually with the increase of juglone concentration. After adding NAC, the apoptosis rates declined and the apoptosis rate of 20 ??mol??L^-1 group decreased from 32.06% to 11.56%. After SGC-7901 cells were treated with juglone for 24 h, the ROS level increased and mitochondrial transmembrane potential decreased which were inhibited by the pretreatment of NAC. After 48 h of exposure to different concentration of juglone, the expressions of p-p38 and p-JNK proteins were up-regulated which could also be inhibited by the adding of NAC. Meanwhile, there were no significant changes in p38 and JNK protein expression in all groups. CONCLUSION Juglone can induce apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells by JNK and P38 pathway mediated by reactive oxygen species.     

葆宮止血颗粒对围绝经期无排卵性异常子宫出血性激素、新血管生成因子的改善研究

目的研究葆宮止血颗粒对围绝经期无排卵性异常子宫出血患者性激素、新血管生成因子的改善情况。方法选取医院2018年2月—2019年2月收治的围绝经期无排卵性异常子宫出血患者100例,根据治疗方法不同分为两组。对照组给予常规西医治疗,观察组加用葆宮止血颗粒治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效。结果观察组完全止血时间(35.66±4.52)h短于对照组(48.79±5.26)h,总有效率(92.00%,46/50)高于对照组(76.00%,38/50),差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前性激素、一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后VEGF(42.36±5.55)pg·mL^-1、bFGF(21.79±2.68)pg·mL^-1水平高于对照组,黄体生成素(LH)(27.05±4.12)IU·L^-1、孕激素(P)(1.89±0.52)nmol·L^-1、促卵泡生成素(FSH)(32.10±4.25)U·L^-1、NO(4.14±1.01)μmol·L-1水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗前子宫内膜厚度组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后子宫内膜厚度(0.58±0.17)cm低于对照组(P<0.05)。结论葆宮止血颗粒可调节围绝经期无排卵性异常子宫出血患者内分泌水平,改善NO、VEGF、bFGF的表达,降低子宫内膜厚度,提高治疗效果。