宁夏回族永生B淋巴细胞株的建立及保存

目的永久地保存现有的回族遗传资源。方法以EB病毒（Epstein—barr virus，EBV）转化同时加入环孢霉素A的方法建立永生细胞。结果成功建立了10株宁夏回族永生B淋巴细胞株。结论该永生细胞地建立为回族遗传资源的永久保存以及今后在细胞和分子水平上深入开展回族遗传病的研究奠定了基础。     

永生细胞库建立方法的探讨

目的：用HLA基因分型技术筛查中国人特有HLA－DPB1＊2101－DQA1＊0601－DRB1＊1202单倍型并建立该单倍型的永生细胞库，以备进一步研究该单倍型特别连锁的成因和机理。方法：采集中国某地具有该单倍型的南方人及其家系血样，用微量全血法和淋巴细胞分离法，加入环孢霉素A抑制T淋巴细胞，提高EB病毒转化B淋巴细胞的成功率，结果：HLA－DPB1＊2101－DQA1＊0601－DRB1＊1202单倍型20人份血样，微量全血法建株19份，转化率95％，淋巴细胞分离法建株17份，转化率85％，结论：环孢霉素A可有效地提高EB病转毒化B淋巴细胞的成功率，微量全血法方法简单，用血量少，特别适合在临床上采血困难的老弱病人及儿童。     

建立巴马长寿老人经EBV转染永生细胞株的方法

目的：建立用EBV转化长寿人群外周血淋巴细胞永生细胞株（LCL）的方法。方法：用EBV份百岁以上健康老人，20份89-99岁健康老人及8份66岁以下健康人的血样共36份。采用20％FBS RPM11640培养液，配合环孢菌素A、植物血凝素(PHA)，置37℃5％CO2培养箱内培养。结果：成功地获得24份永生细胞株（其中，百岁老人6份，89-99岁老人12份，66岁以下6份）。结论：采血后24-48h之间接种，转化成功率高。转染后2-3周，大部分标本出现细胞分裂、变形，标志着转化成功。超过5周仍无细胞分裂者即发生细胞凋亡。PHA有缓解细胞凋亡的作用，但不能使细胞分裂。污染是引起转染细胞株凋亡的主要因素。严格的无菌操作、保持培养细胞的适当密度、适时换液、打散较大的细胞克隆团是培养LCL的关键。     

新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞株的建立

目的通过用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之成为永生细胞株的方法,建立新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞株,为永久保存新疆长寿老人的基因遗传资源及后续研究奠定基础。方法常规制备EB病毒上清,用环孢素法和冻存全血法转化外周血B淋巴细胞。结果以环孢素法成功建立了5株新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞,其中百岁2人,90～99岁3人,建系成功率为100%(5/5),以冻存全血法建系成功1例(1/5)。HLA基因分型结果在建系前后完全一致。结论与冻存全血法相比,环孢素法能更有效地转化长寿老人永生细胞株,可为长寿的分子遗传机制研究以及某些细胞生物学性状的检测提供充足的实验材料。     

原发性开角型青光眼家系永生细胞株的建立与保存

目的建立并保存我国重庆地区原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)大家系患者及其亲属永生淋巴细胞株,为进一步深入研究该家系奠定良好基础。方法采用EB病毒(Epstein-barr virus,EBV)转化外周血淋巴细胞同时加入环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)法,建立该家系永生细胞株。结果建株成功率达到92.3%,对已建立的永生细胞株经复苏和冻存的成功率为100.0%。结论成功建立并保存了这一具有重要研究价值的家系遗传资源,为在细胞和分子水平上进一步开展POAG的基础研究提供了宝贵资源。     

2型糖尿病遗传家系永生细胞株的建立

目的体外建立2型糖尿病家系永生化B淋巴母细胞系。方法应用EB病毒（EBV）转化技术,将2型糖尿病家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系（LCL）。结果成功地为一个2型糖尿病家系的10名成员建立了永生细胞株,其中4名为患者。 结论2 型糖尿病家系永生细胞株成功建立,该细胞株保存了原来个体完整的基因组,为以后的深入研究提供随时可取的实验材料。     

中国海南黎族永生B细胞系的建立与保存

继人类基因组计划之后，人类基因组多样性计划(Human Genome Diversity Project，HGDP)已成为世界科学研究的热点之一。从世界各地采集不同人群的标本并建立永生细胞系，是HGDP的重要内容^[1-3]。黎族是中华民族的重要成员，集居海南岛。语言属汉藏语系壮侗语族黎语支。根据方言、文化特征及人种学上的差异，又分为孝黎、杞黎、本地黎、美孚黎和加茂     

中国白裤瑶永生细胞库的建立

目的建立和保存白裤瑶B淋巴母细胞永生细胞株.方法采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞,同时加环孢菌素A法.结果成功地建立了含有44株永生细胞的白裤瑶永生细胞库.供血者身体健康,三代均为白裤瑶.结论建立永生细胞库,可永久保存白裤瑶特有的基因组,为民族起源、演进和遗传多样性的研究提供细胞资源.     

中国海南岛3个黎族主要支系永生细胞系的建立与保存

目的:建立侾黎、杞黎、本地黎3个黎族主要支系的永生细胞库。方法:采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞并加环胞霉素A抑制T淋巴细胞建立永生细胞系。结果:成功地对侾黎、杞黎、本地黎的部分个体建立了永生细胞系。其中侾黎66株,杞黎76株,本地黎54株,共196株。结论:侾黎、杞黎、本地黎永生细胞库的建立使特有的黎族基因组得到系统地、永久地保存,并为分析其遗传学差异奠定了基础。     

肾综合征出血热患者永生化B淋巴母细胞系的建立

目的 建立肾综合征出血热患者永生化的B淋巴母细胞系，为进一步研究汉滩病毒感染者的细胞免疫功能奠定基础。方法 自HFRS患者血液中分离外周血单个核细胞(PBMC)，再用EB病毒感染PBMC，同时加入环胞素A(CysA)。结果 20例血样标本经EBV感染4周左右，形成了15例永生化B淋巴母细胞系。成功转化后的B淋巴母细胞系，其体积增大，进而增殖的淋巴细胞积聚成团。结论 永生化的B淋巴母细胞系可传代培养。冻存复苏后细胞增殖活性并无改变。     

瘢痕疙瘩家系外周血淋巴细胞永生化方法探讨

目的探讨建立瘢痕疙瘩家系永生化细胞库的方法,为研究瘢痕疙瘩的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法采用EB病毒转化技术,分别采用新鲜血法和冻存血法。将瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果成功建立了一瘢痕疙瘩家系中27个个体的永生细胞株：新鲜血法较冻存血法可明显提高一次建系成功率。结论EB病毒转化技术可有效保存原来个体完整的基因组,为以后的相关研究提供了长期的DNA资源。新鲜血法明显优于冻存血法,更适用于永生化细胞库的建立。     

宁夏地区28株遗传性眼病永生淋巴细胞系的建立

目的建立宁夏地区多种遗传病性眼病的永生淋巴细胞系,从而为进一步深入研究这些遗传病的发病机理提供研究材料。方法采用EB病毒转化B淋巴细胞的方法,建立永生淋巴细胞系。结果成功建立先天性高度近视、先天性白内障、先天性上睑下垂等遗传病,8个家系的28个永生淋巴细胞株。结论遗传性眼病家系永生细胞株的建立,为从分子水平研究它们的发病机理提供了可用的资源。     

EB病毒转化HLA标准抗原B细胞株的建立及鉴定

本文报导应用EB病毒转化技术,建立7株人B淋巴母细胞样细胞株,其中4株为HLA标准抗原B细胞株。经免疫荧光染色及生物化学分析鉴定,所有细胞株均表达及合成HLAⅠ类和Ⅱ类抗原,可供HLA抗血清筛选及其它研究应用。     

家族性甲状腺肿永生细胞系的建立

目的建立家族性甲状腺肿家系永生细胞系,为家族性甲状腺肿的深入研究提供永久的研究材料。方法应用EB病毒(Epstein-Barr Virus)转化技术,将家族性甲状腺肿家系成员外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果成功地为1个家族性甲状腺肿家系30个个体建立了永生细胞株,转化成功的细胞体积增大,形态多样,所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%。结论家族性甲状腺肿永生细胞株保存了原来个体完整的基因组,为在分子水平上揭示家族性甲状腺肿的发病机理提供了DNA材料。     

贵州布依族淋巴母细胞永生细胞株的研究

目的建立和保存贵州布依族B淋巴母细胞株.方法采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞,同时加环孢霉素A法.结果建立了7株永生细胞,供血者身体健康且三代均为布依族.结论建立永生细胞株可长期保存布依族独特的基因组,为民族起源、演进及遗传多样性等研究提供细胞资源.     

瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株的建立及其染色体分析

目的建立瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株,并对该细胞株进行染色体核型分析,探讨用这种方法建立瘢痕疙瘩永生细胞库的可行性和可靠性。方法采用EB病毒转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。分别对建株前和建株后10、20、30、35代的细胞株进行染色体核型分析。结果成功地对瘢痕疙瘩家系27个个体建立了永生细胞株,建株后10代、20代的细胞株染色体未发现明显异常;而培养30代、35代的细胞株染色体发生数目和结构的异常。结论瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株可以为以后的研究提供随时可取的实验材料,在用做遗传学分析时宜在转化早期进行。     

脑海绵状血管瘤遗传家系永生细胞株的建立

目的:建立脑海绵状血管瘤家系永生细胞株.方法:利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞,同时加入环孢霉素A的方法.结果:成功建立了该疾病家系7名成员永生细胞株,其中5名为患者.结论:脑海绵状血管瘤家系永生细胞株成功建立.     

永生化人肝星状细胞株WM07的建立

目的 以慢病毒载体介导猿猴病毒40（simian virus 40,SV40）大肿瘤抗原（large tumor antigen,TAg）转染原代人肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）获得永生化HSC株。方法 以含SV40 TAg cDNA序列的SV40 tsA58质粒为模板,PCR获取全长SV40 TAg序列,经TOPO克隆进入pENTR^TMTOPO^®;载体,PCR鉴定获得pENTR-SV40 TAg Entrez质粒,再经LR重组反应将SV40 TAg cDNA克隆到目标慢病毒载体pLenti4/V5-DEST,PCR鉴定pLenti4/V5-GW/SV40 TAg质粒,进一步用该质粒转染工程细胞293FT进行假病毒包装,用含包装病毒的细胞培养上清液转染原代人HSC,经博来霉素筛选获得稳定表达SV40 TAg的人HSC株（命名为WM07）,并对细胞进行SV40 TAg及α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达的检测和鉴定。结果 对pENTR-SV40 TAg Entrez质粒及pLenti4/V5-GW/SV40 TAg慢病毒表达质粒进行PCR测序,结果证实所构建的质粒含ATG转录起始位点及SV40 TAg cDNA序列。对经过转染、筛选获得的WM07行免疫荧光染色,结果显示SV40 TAg在细胞核表达和定位,细胞质内均表达活化的HSC标志物α-SMA。结论 pLenti4/V5-GW/SV40 TAg质粒构建成功。经质粒转染,获得永生化HSC株WM07,可稳定传代并用于肝纤维化研究。     

中国人精神分裂症患者永生细胞库的建立

目的 保存精神分裂症特有的基因组资源,方法 采用Epstein Barr(EB)病毒转化技术,把患者外周血B淋巴细胞转化成永生类淋巴母细胞系。结果 建系150个,包括精神分裂症各型、同胞对、双胞胎、核心家庭、三代及三代以旧家系构成永生细胞库。结论 精神分裂症患者基因组保存永生细胞库的建立,为我国精神分裂症分子水平发病机理的研究提供用之不竭的DNA资源。     

简单可行的EB病毒转化B淋巴细胞方法的探讨

介绍两种简便可行的EB病毒转化B淋巴细胞的方法，即微量全血法和冻存全血法。与环孢霉素A法相比较，这两种方法具有操作简单，所需血样少，无需环孢霉素A等优点。这些特点尤其是在进行大量样本转化时显得更为突出。用微量全血法和冻存全血法共进行79例转化试验，转化成功率分别为46％与85％。对于影响这两种EB病毒转化结果的因素也进行了讨论。