苯甲酰芍药苷上调miR-520c-3p缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤研究

目的 探究芍药单体成分苯甲酰芍药苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的作用及分子机制。方法 将75只SPF级小鼠按照随机数表法分成5组：空白对照组（生理盐水）、ALI组（2.00 mg/kg LPS 100μl）、阳性对照组（2.00 mg/kg LPS 100μl+血必净注射液100μl）、苯甲酰芍药苷低剂量组（2.5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）、苯甲酰芍药苷高剂量组（5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）,通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;ELISA法检测ALI小鼠肺组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平;蛋白免疫印迹（WB ）检测肺组织IκB激酶（IKKβ）/核因子κB（NF-κB）表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC（RT-PCR）检测ALI小鼠肺组织中miR-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测miR-520c-3p靶基因;A549转染miR-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果 苯甲酰芍药苷低、高剂量均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比（P＜0.05）,ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示苯甲酰芍药苷低、高剂量能明显降低ALI小鼠肺组织中TNF-α、IL-6的水平（P＜0.05）;WB结果显示,与空白对照组相比,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RT-PCR结果发现苯甲酰芍药苷有效促进miR-520c-3p在ALI中的表达（P＜0.05）;Targetscan预测结果显示miR-506-3p直接靶向NF-kB p65亚基RELA基因3’UTR序列;补救实验显示miR-520c-3p inhibitor有效逆转了苯甲酰芍药苷对ALI过程中TNF-α、IL-6的抑制作用（P＜0.05）。结论 苯甲酰芍药能有效缓解LPS引起的ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调miR-520c-3p的表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB 信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。     

穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究

目的 探究穗花杉双黄酮对脂多糖（lipopolysaccharides ,LPS）致大鼠急性肺损伤（acute lung injury ,ALI）的保护作用及机制研究。方法 将60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组、阳性对照组、实验组。模型组、阳性对照组和实验组大鼠均通过气道滴注3.00 mg/kg LPS 100μl,空白对照组气道滴注等体积的生理盐水,6 h后阳性对照组大鼠腹腔注射地塞米松（2.5 mg/kg）,实验组大鼠腹腔注射穗花杉双黄酮（2.5 mg/kg）,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48 h后称重测定大鼠肺组织湿/干比;苏木精-伊红染色( hematoxylin-Eosin staining,HE )观察各组大鼠肺组织病理结构;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平;RT-PCR检测miR-140-5p在肺组织中的表达情况;蛋白印迹法（western Blot,WB）检测肺组织中Toll样受体4（Toll Like Receptor 4,TLR4）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）蛋白表达水平。RT-PCR检测肺组织中miR-140-5p的表达情况。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB的表达。结果 实验组肺组织湿/干比明显低于模型组（P＜0.05）;HE染色结果显示实验组大鼠肺组织结构相比于ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显减轻;ELISA结果显示实验组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组（P＜0.05）;WB结果发现实验组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示实验组大鼠肺组织和细胞中miR-140-5P表达均明显高于模型组（P＜0.05）,而miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB的表达（P＜0.05）。结论 穗花杉双黄酮能明显缓解LPS诱导的大鼠ALI,降低肺损伤病理进程中血清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量,对ALI起保护作用,其作用机制可能是通过促进了miR-140-5P的表达,从而减低ALI炎症过程中关键炎症信号TLR4、NF-κB的表达。     

miRNA-142-3p对肺泡巨噬细胞炎症过程的负向调控及其机制

目的 探索miRNA-142-3p (miR-142-3p)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的负向调控作用及其可能机制.方法 用100 ng/mL LPS诱导肺泡巨噬细胞NR8383,实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法分别检测诱导后0、6、24、48 h时细胞中miRq42-3p和高迁移率族蛋白(HMGB1)的表达.细胞体外转染miR-142-3p拟似物(miR-142-3p mimic),qFCR检测转染后细胞中miR-142-3p及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、l-1β和巨噬细胞炎症蛋白2β(MIp2β)]的表达,蛋白质印迹法检测细胞中HMGB1的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液中HMGB1的含量.结果 LPS诱导NR8383细胞后,细胞中miR-142-3p在48 h时表达最高,HMGB1在24h时最高,与0h时相比差异均有统计学意义(P＜0.05).过表达miR-142-3p后,NR8383细胞中miR-142-3p的表达升高(P＜0.05),HMGB1 mRNA和蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-2β mRNA的表达均降低(P＜0.05).结论 miR-142-3p能介导LPS诱导的NR8383细胞的炎症反应过程,该效应可能是通过负向调控HMGB1的表达来实现的.     

脂氧素A4通过p38 MAPK及Nrf2通路调控气道炎症反应

目的：研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导的人正常支气管上皮细胞炎症反应的抑制作用及其机制。方法：将对数生长期的BEAS-2B细胞分为3组。对照组：不做任何处理;LPS组：100 ng/mL LPS刺激24 h;LPS+LXA4组：100 nmol/L LXA4预处理30 min,加入100 ng/mL LPS刺激24 h。qPCR法检测IL-6、IL-1β、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO-1）mRNA表达水平;流式细胞术测定胞内活性氧（ROS）水平;谷胱甘肽（GSH）试剂盒检测GSH水平。为进一步了解LXA4的作用机制,Western blot法检测各处理组p38的磷酸化水平以及Nrf2的核转位及磷酸化水平。结果：与对照组相比,LPS组IL-6、IL-1β mRNA以及胞内ROS表达水平升高（P＜0.05）,HO-1 mRNA水平下降（P＜0.01）,p38磷酸化水平上升（P＜0.01）,胞核中Nrf2相对表达量下降（P＜0.01）,总Nrf2磷酸化水平下降（P＜0.05）。经LXA4干预后,与LPS组相比,除上述改变逆转外（P＜0.05）,NQO-1和GSH水平显著上升（P＜0.05）。结论：LXA4可减轻LPS引起的BEAS-2B细胞炎症反应并促进炎症消退,其机制可能一方面与抑制p38 MAPK通路,减少促炎因子的分泌有关;另一方面与增强Nrf2的核转位以及磷酸化,减轻氧化应激损伤有关。     

抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用研究

目的 探讨抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用及可能机制.方法 随机将100只SD大鼠分成5组:假手术组(sham组)、模型组(Model组)、antagomir NC组(NC组)、miR-128-3p antagomir组(antagomir组)和miR-128-3p antagomir+ Nrf2抑制剂ML385组(antagomir+ML385组),每组20只.采用尾静脉注射油酸(0.15 ml/kg)的方法建立肺损伤大鼠模型,术前1h给予miR-128-3p an-tagomir或ML385进行干预.造模成功24 h后,测定动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(OI)及肺组织湿/干重比(W/D);苏木精-伊红染色法(HE)观察肺组织病理学改变并评分;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)水平;反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测肺组织中miR-128-3p表达水平以及E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA水平;蛋白质印迹免疫(Western blot)检测肺组织中Nrf2和HO-1的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因实验验证miR-128-3p与Nrf2的靶向作用关系.结果 与sham组比较,Model组大鼠肺组织损伤严重,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平增加(P＜0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.01);与Model组比较,an-tagomir组大鼠肺组织损伤程度得到明显改善,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平下降(P＜0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均上升(P＜0.01),而NC组大鼠以上各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与antagomir组比较,an-tagomir+ ML385组大鼠以上各指标变化趋势又发生逆转(均P＜0.01).荧光素酶报告基因实验证实,miR-128-3p能靶向调控Nrf2的表达.结论 抑制miR-128-3p表达可显著减轻模型大鼠的肺损伤,其作用机制可能与通过靶向调控Nrf2表达,抑制肺组织炎症反应有关.     

MicroRNA-219-5p靶向E-钙黏蛋白调控上皮间质转化抑制肝癌细胞侵袭转移

目的  研究MicroRNA-219-5p（miR-219-5p）靶向E-钙黏蛋白（E-Cadherin）调控上皮间质转化（EMT）抑制肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法  首先通过生物信息学方法,寻找与E-Cadherin结合特异性最好、稳定性强的miRNAs。在30例肝癌组织和20例癌旁肝组织中,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-Cadherin的表达水平;实时荧光定量PCR检测（qRT-PCR）miR-219-5p表达,分析两者之间的相关性。在高转移和低转移的肝癌细胞株中,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin表达。采用Lipofectamine 2000将miR-219-5p 模拟子（mimic）、抑制子（inhibitor）、阴性对照组（negative contral）转染到肝癌HepG2细胞系,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin的表达;Transwell方法检测miR-219-5p表达改变对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。结果  生物信息学发现miR-219-5p与E-Cadherin结合最稳定,且特异性最好。肝癌组织中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达,而癌旁组织中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达。高转移细胞株中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达而N-cadherin高表达,在低转移细胞株中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达而N-cadherin低表达（P <0.05）。miR-219-5p水平表达增高,引起E-Cadherin表达下调,N-cadherin高表达;miR-219-5p表达下调,可引起E-Cadherin表达上调,N-cadherin低表达（P <0.05）;HepG2-miR-219-5p 模拟子细胞株中侵袭细胞计数为（24±3）个/高倍镜视野,明显低于对照组细胞株（P <0.05）。结论  miRNA-219-5p可通过靶向结合E-Cadherin,调控EMT信号通路,抑制肝癌细胞的侵袭转移。

     

miR-16-5p通过调控PD-L1表达影响肝星状细胞炎症反应的研究

目的分析miR-16-5p在肝星状细胞中对程序性死亡受体-1（PD-1）表达的影响,并探讨其在肝纤维化及炎症反应中的作用机制。方法以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,用5ng/ml转化生长因子β1（TGF-β1）处理细胞0、24、48、72h后,光镜下观察细胞形态,RT-qPCR法检测细胞TNF-α和IFN-γ表达水平,筛选出TGF-β1最佳作用时间。将细胞分为6组：对照组、模型组、miR-16-5p超表达组、miR-16-5p抑制组、超表达-空载组、抑制-空载组,采用RT-qPCR法检测miR-16-5p表达水平以验证转染效果;光镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;采用Westernblot法检测细胞PD-1配体（PD-L1）、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平;采用RT-qPCR法检测细胞miR-16-5p、PD-L1以及炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10mRNA表达水平。结果5ng/mlTGF-β1处理细胞0、24、48、72h后,细胞增殖且形态发生改变;炎症因子TNF-α、IFN-γ在TGF-β1处理48h时后表达水平均明显增高（均P＜0.05）。与模型组相比,对照组和miR-16-5p超表达组细胞miR-16-5p的mRNA表达水平以及PD-L1和IL-10蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）,p-NF-κB/NF-κB的蛋白表达水平以及TNF-α、IFN-γ和IL-6的mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）,miR-16-5p超表达组细胞增殖能力降低（P＜0.05）;miR-16-5p抑制组miR-16-5p、PD-L1、IL-10的mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）,p-NF-κB/NF-κB的蛋白表达水平以及TNF-α、IFN-γ、IL-6的mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）,细胞增殖能力增强（P＜0.05）。结论miR-16-5p在肝星状细胞中通过调控PD-L1表达降低肝细胞炎症水平,抑制细胞增殖,其机制可能参与抑制肝纤维化发生。     

miRNA －17－5 p 在免疫细胞炎症反应和自噬中的作用

目的：探讨脂多糖（ LPS）诱导免疫细胞炎症反应和自噬中miRNA－17－5p的调控作用。方法体外培养人白血病单核细胞株（THP－1）,100 ng／mL佛波醇将THP－1细胞诱导24 h分化成为巨噬细胞,设置空白对照组和LPS刺激组,其中LPS刺激组加500 ng／mL的LPS,空白对照组只加灭菌水。刺激THP－1巨噬细胞12 h后采用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）、单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）蛋白水平;采用定量PCR反应检测基因miRNA－17－5p、PTEN的表达情况,采用Western blot检测P62蛋白水平。结果与空白对照组比较, LPS 刺激组培养上清液中TNF－α、MCP－1蛋白分泌量显著增加（ P＜0.01）,PTEN表达显著下调（P＜0.01）,细胞内miRNA－17－5p显著上调（P＜0.01）,细胞内P62蛋白表达上调（P＜0.05）。结论 miRNA－17－5p参与LPS诱导的免疫细胞炎症反应和自噬调控。     

miR-328-5p靶向SPON2介导FAK/Src信号调控胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-328-5p对胃癌细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法将30只小鼠按照随机数字表法分为胃癌组和正常组,每组15只,采用N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）化学诱导法构建小鼠胃癌模型,采用RT-PCR法检测两组小鼠胃组织中miR-328-5p、脊椎蛋白2（SPON2）相对表达量;Westernblot法检测两组小鼠胃组织中酪氨酸蛋白激酶（Src）、磷酸化Src（p-Src）、局部黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK（p-FAK）蛋白表达水平。将胃癌细胞系SGC7901分为miR-328-5p组、miR-con组、NC组共3组,采用RT-PCR法检测3组细胞miR-328-5p、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）相对表达量;采用Transwell小室实验检测3组细胞迁移和侵袭数。采用荧光素酶报告基因实验检测胃癌细胞miR-328-5p、miR-con+SPON2基因野生型（WT）和突变型（MUT）的荧光素酶相对活力值。结果与正常组比较,胃癌组胃组织中miR-328-5p相对表达量明显降低,SPON2相对表达量明显升高（均P＜0.05）;与正常组比较,胃癌组胃组织中p-FAK、p-Src蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组miR-328-5p相对表达量明显升高,同时Vimentin、MMP-9相对表达量均明显降低（均P＜0.05）;与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组细胞迁移数和侵袭数均明显降低（均P＜0.05）。与miR-328-5p+SPON2WT组比较,miR-con+SPON2WT组、miR-con+SPON2MUT组、miR-328-5p+SPON2MUT组荧光素酶相对活力值均明显为高（均P＜0.05）。结论miR-328-5p在胃癌组织中呈低表达,过表达miR-328-5p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-328-5p直接靶向SPON2基因3''UTR序列,调控其转录表达,并抑制其下游FAK/Src信号活化及其下游Vimentin、MMP-9的表达。     

miR-21a-5p 靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤的实验研究

目的 miR-21a-5p对脂多糖(LPS)处理的RAW264.7巨噬细胞的调控作用及分子机制研究。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同浓度LPS处理的巨噬细胞中miR-21a-5p水平;应用miR-21a-5p模拟物(mimics)和阴性对照(miRNA-NC)分别转染LPS处理的巨噬细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例;ELISA检测炎性细胞因子水平;TargetScan数据库分析miR-21a-5p的潜在靶基因,蛋白免疫印迹技术(Western blot法)检测MATN2蛋白表达水平;双荧光素酶实验验证miR-21a-5p和MATN2之间的关系。结果 随着LPS处理浓度的增加,miR-21a-5p水平逐渐降低。miR-21a-5p mimics转染RAW264.7巨噬细胞后miR-21a-5p水平显著升高。上调LPS处理的巨噬细胞miR-21a-5p水平后,细胞活力显著升高,细胞凋亡比例降低;促炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平降低。qRT-PCR和Western blot法结果表明,上调miR-21a-5p水平后,MATN2蛋白表达和mRNA水平明显降低,而下调miR-21a-5p水平后,MATN2蛋白表达和mRNA明显升高。双荧光素酶报告实验显示miR-21a-5p靶向MATN2的mRNA的3′ 非编码区(3′ UTR)。结论 miR-21a-5p 可以靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤。     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

转录因子NF-E2相关因子2对急性肺损伤小鼠的保护作用研究

目的探讨转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）对急性肺损伤（ALI）小鼠的保护作用及其机制。方法采用随机数字表法将小鼠分为对照组、ALI组、Nrf2干扰溶剂对照组（干扰溶剂组）和Nrf2干扰组4组,每组9只。Nrf2干扰组于尾静脉注射Nrf2小干扰RNA（siRNA）,干扰溶剂组尾静脉注射等量干扰溶剂,对照组和ALI组于尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续3d。第4天时,ALI组、干扰溶剂组和Nrf2干扰组腹腔注射脂多糖（LPS）10mg/kg制备内毒素诱发ALI模型,对照组则腹腔内注射等量0.9%氯化钠溶液。注射LPS或0.9%氯化钠溶液6h后,麻醉开腹,从下腔静脉取静脉血,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α水平。光镜下观察肺组织形态学变化,并进行肺损伤评分,测定并计算小鼠肺湿重/干重比值。采用Westernblot法检测肺组织Nrf2核蛋白表达水平,采用比色法检测肺匀浆组织中髓过氧化物酶（MPO）、一氧化氮合酶（iNOS）水平。结果与对照组比较,ALI组、干扰溶剂组和Nrf2干扰组肺组织病理学损伤评分、湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS水平升高,Nrf2核蛋白表达水平上调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与ALI组比较,Nrf2干扰组肺组织病理学损伤评分、湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS水平升高,NRF2核蛋白表达水平下调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论Nrf2siRNA可下调Nrf2核蛋白表达水平,从而加重LPS诱导的小鼠ALI的严重程度,使血清促炎症因子水平和肺组织中氧化应激损伤指标升高,提示Nrf2对ALI的保护作用与其抗炎和抗氧化作用有关。     

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的 探讨microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2（AFAP1L2）对胰腺癌细胞的作用。方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting法检测胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1）及正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）miR-219a-5p、AFAP1L2的表达，采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达，荧光素酶实验观察二者碱基配对关系，进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果 与HPDE细胞比较，胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低（P <0.05）。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达（P <0.05）。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后，与空白对照组（NC组）比较，pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度（OD）值升高（P <0.05），siAFAP1L2组OD值下降（P <0.05），AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后，与miR-NC组比较，miR-219a-5p mimics组OD值下降（P <0.05），miR-219a-5p inhibitor组OD值升高（P <0.05），miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用；上调miR-219a-5p表达，可诱导细胞S期阻滞，导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达；荧光素酶实验显示，miR-219a-5p与AFAP1L2的3''-URT互补结合，miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。     

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型，用CCK-8法检测细胞活力，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组： 正常对照组、LPS＋空白对照(NC)组和LPS＋miR-23a-3p模拟物（mimic）组，采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平，同时，miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比，LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平，而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平，其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。     

脂多糖刺激巨噬细胞分泌含miR-155-5p的外泌体促进肝星状细胞的活化及迁移

目的 探索脂多糖（LPS）刺激下的巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞的激活及迁移能力的影响及分子机制。方法 以100 ng/mL丙二醇甲醚醋酸（PMA）处理人THP-1巨噬细胞24 h,诱导其分化为巨噬细胞,给予脂多糖刺激后收集巨噬细胞的培养上清,运用超速离心法提取外泌体并加以鉴定。荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外泌体中miR-155-5p的表达。采用Transwell共培养体系观察巨噬细胞分泌的外泌体对肝星状细胞LX2增殖、氧化应激、迁移和I型胶原等纤维化标志物表达的影响。同时,LX2转染miR-155-5p-mimics及miR-155-5p-inhibitors分别过表达和干扰miR-155-5p,从正反两方面去验证miR-155-5p对LX2功能的影响。Western blot检测SOCS1以及其下游信号通路蛋白的表达。结果 与对照相比,经脂多糖刺激后巨噬细胞的外泌体处理的LX2细胞增殖迁移能力增强,氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高（P<0.05）。巨噬细胞经脂多糖处理后分泌的外泌体中miR-155-5p的表达显著增高（P<0.01）。miR-...     

重症肺炎肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686、sTREM-1的表达及与病情、预后的关系

目的:探讨重症肺炎（SP）肺泡灌洗液微小RNA-127-5p（miR-127-5p）、微小RNA-3686（miR-3686）、可溶性髓系细胞触发受体-1（sTREM-1）表达及与病情、预后关系。方法:选取2017年3月—2019年8月68例SP患者为观察组，同期68例肺炎患者为对照组。比较两组、观察组不同预后（28 d重症肺炎全因死亡、28 d生存）患者肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686、sTREM-1表达，肺泡灌洗液各指标不同表达（高表达、低表达）SP患者急性生理和慢性健康评分Ⅱ（APACHEⅡ）、临床肺部感染（CPIS）评分，应用Pearson相关分析探讨肺泡灌洗液各指标表达与APACHEⅡ、CPIS评分的关系，绘制受试者工作特征（ROC）曲线及ROC下面积（AUC）探究肺泡灌洗液各指标单一、联合检测对SP重症肺炎全因死亡的预测价值，多元Logistic回归分析SP重症肺炎全因死亡的影响因素。结果:观察组肺泡灌洗液miR-127-5p水平（0.58±0.26）低于对照组（1.23±0.42）（t=10.851，P<0.001），miR-3686水平（1.98±0.46）高于对照组（0.96±0.31）（t=15.163，P<0.001），sTREM-1水平（195.37±48.62）ng/mL高于对照组（26.35±8.20）ng/mL（t=28.268，P<0.001）。肺泡灌洗液miR-127-5p高表达SP患者APACHEⅡ、CPIS评分均低于低表达患者，肺泡灌洗液miR-3686或sTREM-1高表达SP患者APACHEⅡ、CPIS评分均高于低表达患者（均P＜0.05）。肺泡灌洗液miR-127-5p表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈负相关（r=-0.735，P<0.001；r=-0.727，P<0.001），miR-3686表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈正相关（r=0.569，P<0.001；r=0.679，P<0.001），sTREM-1表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈正相关（r=0.694，P<0.001；r=0.667，P<0.001）。观察组28 d重症肺炎全因死亡患者肺泡灌洗液miR-127-5p表达低于生存患者，miR-3686、sTREM-1表达高于生存患者（均P＜0.05）。预测SP重症肺炎全因死亡的AUC:miR-127-5p为0.757，miR-3686为0.782，sTREM-1为0.816，miR-127-5p+miR-3686+sTREM-1为0.862（均P＜0.05）。肺泡灌洗液miR-127-5p为SP 28 d重症肺炎全因死亡的重要保护因素，肺泡灌洗液miR-3686、sTREM-1为SP 28 d重症肺炎全因死亡的重要危险因素（均P＜0.05）。结论: SP患者肺泡灌洗液miR-127-5p表达降低，miR-3686、sTREM-1表达升高，与病情、预后密切相关，检测三者表达能为临床评估患者病情程度、预后情况提供参考。     

叔丁基对苯二酚对急性肺损伤小鼠的保护作用

目的 探究叔丁基对苯二酚（tBHQ）在急性肺损伤（acute lung injury, ALI）中调节炎症反应的作用和机制。方法 通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立C57BL/6J小鼠ALI模型,将C57BL/6J雄性小鼠随机分组。LPS组小鼠按两种剂量（10mg/kg和20mg/kg）腹腔注射,高剂量组观察小鼠生存率,低剂量组观察炎症反应;磷酸盐缓冲液（PBS）组小鼠给予等体积PBS腹腔注射;tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠预先24h腹腔给予tBHQ并在LPS处理的同时给予tBHQ;LPS/tBHQ组小鼠在LPS处理的同时给予tBHQ。监测7d生存率;LPS诱导3h后病理组织学观察评估其肺组织损伤程度,实时定量PCR（RT-qPCR）和多重液相蛋白定量技术分别检测小鼠肺组织和血清中IL-6、TNF-α和IL-10的水平,Western印迹法和RT-qPCR检测各组小鼠肺组织中核外转录因子NF-E2相关因子（Nrf2）的表达。结果 与LPS组相比,LPS/tBHQ组和tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠的死亡率均明显降低（P分别为0.0005和0.0001）,并且小鼠肺组织损伤程度明显减轻,小鼠肺组织和血清中促炎症介质IL-6和TNF-α的表达降低,抗炎介质IL-10的表达增加;同时与LPS组相比,tBHQ可明显增加肺组织中Nrf2的mRNA水平以及核内蛋白水平。结论 tBHQ能够通过调节小鼠肺组织中促炎、抑炎反应平衡发挥对ALI的保护作用,其机制可能与促进Nrf2核转位有关。     

miR-153-3p靶向调控CHI3L1对LPS所致人牙周膜干细胞炎症反应的影响

目的:探索miR-153-3p是否能通过靶向调控几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)改善脂多糖(LPS)所致人牙周膜干细胞(hPDLSCs)炎症反应。方法:分离培养hPDLSCs,采用LPS处理建立炎症细胞模型，并进行miR-NC、miR-153-3p mimics、si-NC、si-CHI3L1以及miR-153-3p mimics+pc-NC、miR-153-3p mimics+pcDNA-CHI3L1转染。转染48h后qRT-PCR法检测各组细胞中miR-153-3p、CHI3L1 mRNA表达，ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western Blot法检测细胞中CHI3L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-153-3p与CHI3L1的靶向关系。结果:LPS处理后hPDLSCs中miR-153-3p表达下调(P<0.05),CHI3L1 mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.05);过表达miR-153-3p或抑制CHI3L1表达可降低LPS诱导的hPDLSCs中IL-6、IL-1β、TNF-α水平...     

miR-1187靶向调控Arhgef9在七氟醚致海马神经元凋亡中的作用

目的探讨miR-1187靶向调控Rho鸟苷交换因子-9（Arhgef9）在七氟醚致小鼠海马神经元凋亡中的调控作用。方法通过基因芯片技术测定小鼠海马miRNA。利用miRWalk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测。为验证预测结果与实际情况是否相符,同步进行mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作关系的mRNA。为说明miRNA与mRNA的互作关系,进一步利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络。采用RT-PCR法检测海马神经元miR-1187mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测miR-1187转染后海马神经元存活率,荧光素酶实验检测Arhgef9是否为miR-1187的靶基因。结果海马神经元凋亡主要与9个miRNA相关,即miR-101b-3p、miR-1187、miR-188-5p、miR-219a-5p、miR-338-3p、miR-425-5p、miR-467a-3p、miR-705、miR-92a-3p。miR-1187在七氟醚诱导海马神经元损伤模型中的相对表达量明显降低（P＜0.05）,miR-1187高表达质粒（miR-1187mimics）转染后,海马神经元存活率明显升高（P＜0.05）。miR-1187与Arhgef9存在靶向关系,miR-1187通过与Arhgef9基因mRNA的3忆非翻译区互补配对来发挥作用。结论miR-1187是海马神经元抗细胞凋亡的抑制因子;高表达miR-1187通过靶向调节Arhgef9mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生。     

miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症中的表达

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症（ITP）中的表达变化。方法：采用RT-qPCR检测25例ITP患儿和15例正常对照PBMCs中3种miRNAs相对表达量,Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血小板计数及未成熟血小板分数（IPF%）;分析miRNAs与血小板计数的相关性,ROC曲线分析检验效能。结果：ITP患儿组PBMCs中的miR-144-5p和miR-668-3p较对照组表达均上调,miR-134-5p表达下调（均P＜0.05）。miR-144-5p和miR-668-3p在急性ITP患儿组中表达量要高于慢性ITP患儿组（均P＜0.05）,且miR-144-5P（r=-0.802,P＜0.001）和miR-668-3p（r=-0.753,P＜0.001）的相对表达量与外周血小板计数呈负相关。相较于单个指标,miR-144-5p联合IPF%诊断急性ITP的AUC为0.960,灵敏度和特异度分别为93.3%和100%;而miR-134-5p联合IPF%诊断慢性ITP的AUC为0.967,灵敏度和特异度分别为90.0%和93.3%。结论：miR-144-5p和miR-668-3p在ITP患儿PBMCs中表达显著上调,miR-134-5p表达下调,这些改变可能在疾病的发生与发展中发挥了重要作用。