依达拉奉对缺血再灌注损伤后大鼠脑caspase-3表达的影响

目的 观察脑神经保护剂依达拉奉对创伤性脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用,并探讨其作用机制.方法 采用大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,通过凋亡原位TUNEL检测评价神经细胞凋亡情况,并采用免疫组化的方法检测各组不同时段大鼠脑组织caspase-3的表达.结果 脑缺血再灌注后凋亡细胞在48 h达到高峰,治疗组和模型组比较在48、72 h差异有统计学意义(P＜0.05).caspase-3在缺血再灌注12 h起显著增加,48 h达高峰期.治疗组与模型组比较,再灌注后48、72 h可明显降低 caspase-3表达(P＜0.05).结论 脑缺血后 caspase-3表达增高,自由基清除剂依达拉奉可以保护脑组织,其作用可能与抑制caspase-3在损伤脑组织中的表达有关.     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的 观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.方法 选择高血脂SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,每组12只.制备大鼠心肌缺血再灌注模型.缺血再灌注组:收紧结扎线缺血40 min,放松结扎线再灌注240 min;缺血后处理组:缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,连续3个循环,然后再灌注240 min;假手术组:开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线.再灌注结束后自右颈动脉采血测定血清肌酸激酶(CK)活性,用TUNEL法检测再灌注心肌凋亡程度,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达情况.结果 ①血清中CK活性的测定:再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组CK活性明显高于假手术组[分别为(789.68±67.34),(932.86±84.17),(252.48±19.78)U/L,P<0.05],缺血后处理组明显低于缺血再灌注组(P<0.05).②心肌凋亡细胞计数:再灌注结束后假手术组未见明显细胞凋亡(<5%),缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组[分别为(11.9±2.7)%,(21.2±3.5)%,P<0.05].③与缺血再灌注组相比,缺血后处理组Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05),Bax蛋白表达减低(P<0.05).结论 缺血后处理可以增加高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达,进而抑制凋亡.     

重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中环氧合酶-2表达的影响及机制

目的 探讨重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重260～320 g,应用随机数字表法分为四组(n=10):假手术组(Sham组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)、重复高压氧预处理组(HOP组)及COX-2抑制剂NS398预处理的HOP组(HOP-NS398组).HOP实施高压氧预处理的参数为:氧浓度＞97％,氧含量900 ml/L,压力2.5 ATA,1 h/d,连续5d；最后一次处理后24h,I/R、HOP及HOP-NS398组采用夹闭腹主动脉15 min再开放的方法制备脊髓缺血再灌注模型.再灌注48 h后评价后肢运动功能,而后处死大鼠,取L5～7节段脊髓组织,测定COX-2 mRNA及蛋白表达水平,光镜下观察病理学结果.结果 与Sham组比较,I/R、HOP和HOP-NS398组后肢运动功能和正常脊髓前角运动神经元计数降低,L5-7节段脊髓组织中COX-2mRNA及蛋白表达水平上调(P＜0.05)；与I/R组比较,HOP及HOP-NS398组后肢运动功能和正常脊髓前角运动神经元计数升高,L5-7节段脊髓组织COX-2mRNA及蛋白表达水平下调(P＜0.05).与HOP组比较,HOP-NS398组后肢运动功能、正常脊髓前角运动神经元计数降低,COX-2表达升高(P＜0.05).HOP组脊髓组织病理学损伤程度轻于I/R组,而HOP-NS398组损伤程度重于HOP组,但仍轻于I/R组.结论 重复高压氧预处理可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与调节COX-2表达有关.     

高压氧预处理对大鼠肠缺血再灌注机械屏障损伤的影响

目的：探讨高压氧预处理对肠缺血再灌注机械屏障损伤的影响及其机制。方法按随机数字表法将30只大鼠分为假手术组、缺血再灌注组和高压氧预处理组各10只。采用肠系膜上动脉无创性暂时阻断45 min、恢复肠系膜血流再灌注1 h的方法构建大鼠肠缺血再灌注损伤模型。最后进行血清TNF－α、肠组织髓过氧化物酶测定、肠道通透性和组织学的观察。结果假手术组、缺血再灌注组和高压氧预处理组空肠推进长度、空肠推进率、血清TNF－α水平、肠组织髓过氧化物酶活性差异均有统计学意义（ P均＜0．01）。缺血再灌注组黏膜下水肿、淤血,大量炎性细胞浸润,肠绒毛破坏,上皮细胞坏死,紧密连接、中间连接部分融合、模糊不清或消失;高压氧预处理组黏膜下血管轻微充血,少量炎性细胞浸润,微绒毛基本正常,可见清晰的紧密连接、中间连接和桥粒。结论缺血再灌注后大鼠肠道机械屏障出现不同程度的破坏,高压氧预处理可以通过其抗炎作用从而减轻大鼠肠机械屏障的缺血再灌注损伤。     

缺血预处理对移植肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的 探讨细胞凋亡在移植肝缺血再灌注损伤中的作用及缺血预处理对其影响。方法 通过对移植肝进行 因预处理,用全自动生化分析仪检测肝功能、比色法测定移植肝组织的ＭＤＡ、用流式细胞仪结合原位标记技术检测细胞调７亡。结果 移植肝再灌注后血中ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ和肝组织中ＭＤＡ均明显升亮,肝细胞调亡明显增加,经缺血预处理后,血中ＡＳＴ,ＡＬＴ,ＬＤＨ和肝组织中ＭＤＡ均降低,肝细胞调亡亦明显减少,结论 缺血     

缺血再灌注大鼠脑皮质Bcl-2、Bax和Caspase-3的动态表达

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达与再灌注时间的关系。方法采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型,通过TTC染色法检测模型;应用RT-PCR及免疫组织化学方法,分别观察脑缺血再灌注后2、6、12、24、48 h Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的动态变化。结果 Bcl-2 mRNA在缺血再灌注2 h后表达开始增多,6 h明显增多,24 h达高峰,48 h开始减少;Bax mRNA表达较Bcl-2延后,2 h开始微量表达,6 h开始增多,增高趋势持续至48 h;Caspase-3 mRNA在6 h后微量表达,12 h略有增多,24 h明显增多,持续增高至48 h。蛋白表达的时程变化与mRNA一致。结论脑缺血再灌注损伤的早期,凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达显著,且呈增高趋势,其中Bax生成的上调与Caspase-3的激活密切相关。     

高压氧预处理对缺血-再灌注诱导的糖尿病大鼠心功能的影响

目的 探讨高压氧预处理对糖尿病大鼠心功能的影响.方法 雄性Wistar大鼠30只,糖尿病造模成功后随机分为糖尿病对照组,糖尿病缺血-再灌注组,糖尿病高压氧预处理组,采用Langendorff离体心脏灌流方法,记录左室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室舒张末压最大下降速率(-dp/dtmax);采用氯化三苯基四氮唑染色法检测心肌梗死面积.结果 与I/R组比较,高压氧预处理组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著增高(P＜0.05);心肌梗死面积显著降低(56.05% vs 40.30%).结论 高压氧预处理可改善糖尿病大鼠离体心脏的心功能,缩小心肌梗死面积.     

逆灌注对移植肝缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨原位肝移植中经下腔静脉逆行灌注对移植肝缺血再灌注损伤的影响.方法:36例大鼠肝移植随机分为3组,每组12例.门静脉组即经门静脉顺行灌注,肝动脉+门静脉组即同时开放肝动脉及门静脉顺行灌注,下腔静脉组即先吻合下腔静脉后开放逆行灌注,然后吻合门静脉及肝动脉.分别检测术后1、6及24 h的血清转氨酶、移植肝病理变化及...     

缺血再灌注损伤后大鼠脑神经细胞巢蛋白的表达

将30只成年健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组.实验组以线栓法建立大脑中动脉缺血后再灌注模型,应用免疫组化SABC法观察再灌注后各观察部位不同时间神经细胞巢蛋白(Nestin)的表达情况.发现缺血再灌注6 h,Nestin阳性细胞少量表达,1 d时数量增多,3 d时明显增多,7 d时Nestin阳性细胞数的量和形态变化最为显著.认为Nestin阳性细胞在正常成年脑组织中广泛表达,再灌注损伤后大脑各部位Nestin阳性细胞的表达呈一致性增强,各部位Nestin阳性细胞数目的 增加量在不同时间又有所不同.     

中叶素对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察中叶素(IMD)对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法健康雄性SD大鼠74只,给予适应性饲养一周后,随机分为糖尿病组(50只)和非糖尿病组(24只),非糖尿病组给予枸橼酸缓冲液腹腔注射,糖尿病组通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。阻断大鼠左冠状动脉前降支制备心肌缺血再灌注损伤模型。非糖尿病组24只大鼠随机分为对照组和缺血再灌注组(NIR组),糖尿病组50只大鼠成功建立糖尿病模型为36只,随后随机分为糖尿病对照组、糖尿病缺血再灌注组(DIR组)、IMD组,每组12只。光镜观察心肌细胞的形态变化,电镜观察心脏超微结构,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表达量。结果光镜下可观察到NIR组、DIR组心肌细胞损伤变化比相应对照组更趋于严重,IMD组心肌细胞变性坏死的程度较糖尿病缺血再灌注组明显减轻。电镜下NIR组和DIR组心肌细胞损伤较相应对照组严重,IMD组心肌组织的超微结构特别是线粒体损伤与DIR组比较明显减轻。NIR组和DIR组心肌细胞凋亡率明显高于相应的对照组(P0.05),IMD组心肌细胞凋亡率则较NIR组明显减少(P0.05)。NIR组和DIR组Caspase-3、Bax和Bcl-2的蛋白表达量均与相应对照组比较差异有统计学意义(P0.05),IMD组心肌组织Caspase-3、Bax和Bcl-2的蛋白表达量与DIR组相比差异也具有统计学意义(P0.05)。结论IMD对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用可能与IMD减少心肌细胞凋亡有关。     

葛根素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨葛根素(Pue)对大鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及其对细胞凋亡的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组、IR组、缺血预处理(IP)组和Pue预处理组(Pue组),每组按再灌注(1、6、24 h)三个时间点分3个亚组。建立动物模型;测Bcl-2、Bax蛋白的表达情况及肝组织凋亡指数(AI);透射电镜下观察大鼠肝细胞的变化。结果与假手术组相比,IR组、IP组、Pue组肝组织Bcl-2、Bax蛋白表达以及AI均增加(P<0.05);与IR组比较,IP组、Pue组肝组织Bax蛋白的表达及AI减少,而Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05);与IP组比较,Pue组肝组织Bax蛋白的表达及凋亡指数减少,而Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05)。通过透射电镜下对肝细胞学观察,可见假手术组肝细胞形态基本正常,IR组损伤最重,IP组及Pue组损伤较IR组轻,Pue组要更轻。结论 IP及Pue都可通过上调Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,来减轻肝细胞凋亡,相比之下后者效果要更好。     

硫化氢对血管性痴呆大鼠缺血再灌注损伤中NLRP3表达的影响

目的探讨硫化氢(H₃S)对血管性痴呆(VaD)大鼠缺血再灌注损伤(IRI)中NLRP3表达的影响。方法采用改良四血管法(4-VO)制作VaD大鼠IRI模型,随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组(CY-09组)、NaHS组,每组各6只,共24只大鼠。应用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,收集各组大鼠脑组织标本,采用苏木素-伊红(HE)染色,观察海马区形态。各组大鼠血清H₃S含量采用亚甲蓝法检测;白细胞介素(IL)-1β、IL-18采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;用Western印迹检测各组大鼠海马组织中炎症小体NLRP3、Caspase-1表达水平。结果VaD大鼠模型构建成功;模型组大鼠海马区神经元细胞损伤明显,海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。NaHS组大鼠海马区神经元细胞损伤减轻,血清H₃S含量较模型组明显升高(P<0.05),海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白较模型组降低(P<0.05);CY-09组大鼠海马区神经元细胞损伤减轻,海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白较模型组降低(P<0.05),血清IL-1β、IL-18显著低于模型组(P<0.05)。结论VaD大鼠IRI可引起NLRP3表达增加;H₃S能够通过降低NLRP3表达,减轻大鼠IRI。     

缺血后处理对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的影响

目的观察在体条件下缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及可能的途径。方法建立大鼠在体缺血再灌注模型,将30只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组、缺血预适应组。于再灌注末测定心肌酶,超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量,并测定心肌组织梗死面积。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组与缺血预适应组心肌梗死面积明显减小,血浆肌钙蛋白I及MDA的含量均降低(P<0.05),血浆SOD活性升高(P<0.05)。结论缺血后处理可减轻心肌缺血再灌注损伤,具有心肌保护效应。     

远距缺血后适应对缺血再灌注心肌的保护作用

目的:探讨远距缺血后适应(RIP)对兔局部短期缺血再灌注心肌的保护作用.方法:将24只新西兰白兔随机平均分成4组:假手术对照组(S组)、缺血再灌注对照组(IR组)、缺血后适应组(Post组)、RIP组.采用TUNEL分析检测各组心肌组织的细胞凋亡情况,Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:...     

心肌细胞内Livin蛋白过表达对大鼠心肌缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的:观察大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中心肌细胞内黑色素瘤凋亡蛋白抑制剂(Livin)蛋白表达变化及Livin蛋白过表达对心肌细胞凋亡的影响。方法:健康SD大鼠80只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、注射表达Livin蛋白的逆转录病毒载体组(Livin组)和空载体组,其中Livin组和空载体组分别向开胸心肌内注射表达Livin的逆转录病毒载体或空载体,24h后行缺血再灌注过程,以实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定心肌组织内Livin和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)信使核糖核酸(mRNA)的表达,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达,以原位缺口末端标记(TUNEL)法测定凋亡心肌细胞。结果:①实时荧光定量RT-PCR扩增结果LivinmRNA相对表达水平:与假手术组比较Livin组显著增高(P0.01);与缺血再灌注组比较Livin组升高(P0.01)。Caspaes-3mRNA相对表达水平:与假手术组相比缺血再灌注组、Livin组、空载体组均增高(P0.01);与缺血再灌注组比较Livin组降低,差异有统计学意义(P0.01)。②免疫组化显示:与假手术组比较缺血再灌注组、Livin组、空载体组缺血再灌注过程中Caspase-3的表达明显增加(P0.05);与缺血再灌注组比较Livin组表达减少(P0.05),差异均有统计学意义。③TUNEL法检测:与缺血再灌注组比较假手术组、Livin组凋亡细胞数明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:心肌Livin蛋白过表达可以抑制缺血再灌注心肌Caspase-3表达,抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生。     

蛋白酶激活受体-2对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨蛋白酶激活受体2(PAR-2)对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(sham组),缺血再灌注组(I/R组)和丝-亮-异亮-甘-精-亮-酰胺(SLIGRL-NH2)低剂量组(0.5 mg/kg)、中剂量组(1 mg/kg)、高剂茸组(3 mg/kg),每组8只,建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型.采用末端标记法(TUNEL)和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,实时荧光定量PCR检测心肌细胞PAR-2mRNA的表达情况.结果 (1)SLIGRL-NH2中、高剂量组凋亡指数明显低于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为23.36%±3.77%、15.56%±1.24%比I/R组35.19%±4.50%,P<0.05～0.01);凋亡相关蛋白Bcl-2高于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为0.983±0.103、1.197±0.119比I/R组0.761±0.043,P<0.05～0.01);凋亡相关蛋白Bax的表达显著低于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为0.646±0.041,0.578±0.029比I/R组0.759±0.035,P均<0.01);PAR-2mRNA的表达明显高于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为3.73±0.45,7.62±0.81比I/R组1.42±0.41,P均<0.01).(2)DNA凝胶电泳结果显示,I/R组、SLIGRL-NH2低剂量组可见到DNA梯带,假手术组和SLIGRL-NH2中、高剂量组则无明显DNA梯带.结论 PAR-2激动剂SLIGRL-NH2可上调并激活PAR-2,并通过增加Bcl-2/Bax的比值抑制大鼠缺血再灌注心肌细胞的凋亡而发挥心肌保护效应,且该作用具有一定的剂量依赖效应.     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后ERK、Akt的表达与细胞凋亡关系的研究

目的:观察在大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中ERK、Akt的表达规律及其与神经细胞凋亡的关系。方法:采用胸主动脉阻断法建立脊髓缺血(25分)/再灌注损伤模型。健康成年SD大鼠118只,用随机数字表法分为两组:1脊髓缺血再灌注组96只,每个时间点12只;2假手术对照组12只大鼠,只置入球囊而不阻断。用形态学、分子生物学等方法,分别于缺血再灌注后0,1,2,4,12,24,48和72小时检测缺血段脊髓组织中细胞凋亡以及P-ERK、P-Akt的表达水平变化情况。结果:TUNEL染色结果显示,脊髓缺血再灌注损伤后12小时凋亡细胞明显增加,48小时达高峰。损伤后4小时细胞的P-ERK表达水平达高峰,损伤后12小时表达至低谷。损伤后2小时细胞的P-Akt表达水平至高峰,损伤后12小时表达至低谷。假手术组:P-ERK、P-Akt少有表达,少见TUNEL阳性细胞。结论:P-ERK、P-Akt均参与脊髓缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡,ERK、Akt信号通路被调控的有效时间窗可能在再灌注后12小时内。     

心脏死亡器官捐献供肾的缺血再灌注损伤

接受心脏死亡器官捐献(DCD)供肾受者移植肾功能延迟恢复(DGF)发生率明显高于传统尸体供肾,其根本原因是DCD供肾缺血再灌注损伤(IRI).最近研究发现DCD供者体内补体C3a和C5a活化与供肾IRI密切相关,该研究将完善对C3a和C5a活化在DCD供肾IRI中作用机制的认识,并为DCD供肾IRI的防治寻找新的靶点.     

预缺血对大鼠心肌缺血再灌注凋亡的影响

为观察大鼠心肌缺血再灌注的致凋亡作用和再灌注早期不同阶段中性粒细胞浸润与凋亡的关系及预缺血对凋亡的影响 ,制备在体大鼠心肌缺血再灌注模型 ,实验分为四组 :缺血 1h再灌注组、缺血 2h再灌注组 ,缺血 3h再灌注组及预缺血组 ,观察分析心功能、梗死面积、中性粒细胞计数、心肌髓过氧化物酶活性及凋亡指数等指标。结果发现 ,缺血再灌注明显引起心脏功能损伤、中性粒细胞浸润和心肌细胞凋亡 ,且随再灌注时间延长而加重 ,预缺血明显减轻其损伤并抑制凋亡。心肌细胞凋亡与中性粒细胞浸润存在显著正相关关系。结果提示 ,预缺血可通过减轻凋亡对心肌发挥保护作用。     

黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响,以及与缺血预处理(IP)作用效果的比较.方法 清洁级健康雄性SD大鼠96只,随机分为假手术组、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、黄芪组,每组又按再灌注时间(1、3、6、24 h)分为4个时相,每组各时相为6只.制作70%肝缺血再灌注模型,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;测肝组织髓过氧化物酶(MPO)含量;用免疫组化法检测IL-10、TNF-α表达;以及光镜及电镜观察大鼠肝形态学变化.结果 IR、IP、黄芪组ALT、AST、LDH和MPO含量均明显高于假手术组(P<0.01).与IR组相比,IP、黄芪组各个时相点的值均下降(P<0.05).与IP组比较,黄芪组各个时相点的值均降低(P<0.05).IR、IP、黄芪组肝组织TNF-α、IL-10的阳性细胞表达率均比假手术组高(P<0.05);与IR组比较,IP、黄芪组TNF-α的表达减少,而IL-10的表达增强(P<0.05);与IP组比较,黄芪组TNF-α的表达减少,IL-10表达增强(P<0.05).在光镜及电镜下观察肝形态学变化,可见IR组损伤甚为明显,IP及黄芪组损伤程度较IR组轻,黄芪组更轻,而假手术组肝形态正常.结论 IP和黄芪都可减轻缺血再灌注对肝脏的损伤,且后者较前者效果好.