围产期缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及巴曲酶神经保护作用的研究

围产期窒息所致缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿期危害最大的常见病,常导致新生儿死亡,存活者可遗留脑性瘫痪、癫痫、智力低下等严重的神经系统后遗症.本文通过夹闭孕足月大鼠双侧子宫动脉复制宫内缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,检测不同缺氧缺血再灌注时间点宫内HIBD仓鼠神经细胞凋亡数量,应用工酶治疗HIBD仔鼠,研究其神经保护作用.     

熊果苷调节Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用

目的 研究熊果苷通过调节Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠神经保护的作用。方法 采用Rice-Vannucci法构建HIBD新生大鼠模型,并将造模成功的48只新生大鼠随机分为Model组、低剂量熊果苷组（50 mg/kg）、高剂量熊果苷组（100 mg/kg）、高剂量熊果苷+Anticancer agent 109组（100 mg/kg+3.00 mg/kg Gas6/Axl抑制剂）;再选12只新生大鼠作为NC组。平衡木法对各组大鼠进行行为学评估;苏木精-伊红（H-E）染色检测大鼠脑组织病理损伤;TTC染色法检测脑梗死面积;ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达;Western blot检测大鼠海马组织中Gas6、磷酸化Axl(p-Axl)、Axl蛋白表达。结果 与Model组比较,低剂量熊果苷组和高剂量熊果苷组大鼠行为学评分降低,脑组织结构较正常,大鼠脑梗死面积减少,血清中IL-6、MDA表达减少,SOD、BDNF表达增加,Gas6、Axl蛋白表达增多,p-Axl...     

黄芪对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织Nogo-A蛋白表达的作用及意义

目的探讨Nogo-A蛋白在缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织中的表达特点及黄芪对其表达的影响方法 7日龄Wistar新生大鼠72只,清洁级,雌雄不限,平均体重10-16g,随机分为假手术组,HIBD组,黄芪治疗组,每组24只。分离左侧颈总动脉并结扎,吸入92%N2+8%O2氮氧混合气体行缺氧处理2h,制成HIBD模型。假手术组只作分离左侧颈总动脉而不结扎,不作缺氧处理,不给与药物处理。黄芪治疗组于建模成功后立即及3h腹腔注射0.5ml/只,假手术组及HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水,上述各组均于术后6h、12h、24h、72h随机抽取6只,于麻醉下处死取脑组织,HE染色观察脑组织病例变化,免疫组化法检测Nogo-A蛋白表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组术后脑组织Nogo-A蛋白表达增高,但Nogo-A蛋白随各时间点有先上升后下降的趋势,差异有统计学意义(P0.05),与HIBD组相比,黄芪治疗组各时间点Nogo-A蛋白,差异有统计学意义(P0.05)。结论提示黄芪可下调缺氧缺血性损伤大鼠脑组织Nogo-A蛋白的表达,对神经元和神经纤维具有保护作用。     

当归对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠神经元的保护作用

目的探讨脑缺氧缺血对幼年大鼠海马齿状回神经元的影响及当归注射对其保护作用。方法取7日龄健康SD新生大鼠33只,随机分为对照组、缺氧组和当归组各11只。缺氧组和当归组新生大鼠在无菌环境下结扎左侧颈总动脉,术后护理2 h后置于三气培养箱持续缺氧2 h/d,连续7 d,制作新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型,对照组仅行假手术,不结扎左侧颈总动脉、不缺氧。术后第8 d开始,缺氧组和对照组大鼠经腹腔注射生理盐水（8 ml/Kg）,连续7 d;当归组用等量当归注射液（250 g/L）代替生理盐水。于生后第40 d取大鼠脑组织,常规石蜡包埋、经海马切片,行神经元特异性烯醇化酶（NSE）免疫组化染色,图像分析海马齿状回NSE阳性细胞的积分光密度（IOD）值。结果缺氧组大鼠海马齿状回NSE阳性细胞的IOD值较对照组降低,而当归组NSE阳性细胞的IOD值较缺氧组增高。结论脑缺氧缺血可降低幼年大鼠海马齿状回NSE的表达,而当归注射液对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠神经元可能具有保护作用。     

大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织中脑红蛋白基因表达的变化

20 0 0年 ,德国Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ等[1] 首次报道了人和小鼠脑内存在特异的功能上类似于肌红蛋白的携氧球蛋白———脑红蛋白 (ｎｅｕｒｏｇｌｏｂｉｎ) ,可特异性的为脑供氧 ,从而对脑缺氧的研究提供了全新思路[2 ] ,并已在国际范围内掀起重新认识和研究脑缺氧的热潮。我们实验室一直在关注脑缺氧损伤的分子机制研究 ,并获得了人脑红蛋白全长ｃＤＮＡ序列和大鼠脑红蛋白基因编码区的ｃＤＮＡ序列[3 ,4] ,随后根据此序列设计引物 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)技术对大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织中脑红蛋白ｍＲＮＡ水平的变化进…     

咪哒唑仑对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的 探究咪达唑仑(midazolam,Mida)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)神经的保护作用.方法 建立HIBD新生大鼠模型,Mida处理后,行为实验评估大鼠的神经功能;2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)检测大鼠脑梗死率,测量大鼠脑含水率和脑指数;苏...     

己酮可可碱对新生大鼠缺氧缺血性脑病的保护作用

目的探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对新生大鼠缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemicencephalopathy,HIE)脑组织中ATP酶和炎性细胞因子的影响,揭示PTX对大鼠HIE的保护机制。方法7日龄Wistar大鼠80只随机分为假手术组、缺血组、低氧组、HIE模型组和PTX组。缺血72h后测定脑组织中Na+、K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活性,以及TNF-αI、L-1和TXB2含量。结果缺血组、低氧组和HIE模型组Na+、K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活性降低(P<0.01),TNF-αI、L-1和TXB2含量升高(P<0.05,P<0.01)。PTX组可显著缓解上述变化(P<0.05,P<0.01)。结论PTX对新生大鼠HIE的保护作用可能与其保护脑组织中ATP酶和降低炎性细胞因子有关。     

高压氧降低缺氧缺血性脑损伤大鼠脑组织内caspase-3表达

目的 探讨高压氧(HB0)对缺氧缺血新生大鼠神经细胞凋亡及easpase-3表达的影响.方法 建立缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠模型,将其分为HIBD组及HBO处理组,并设立假手术组(n=24).观察3组大鼠不同时间脑组织病理学改变,同时用免疫组化的方法检测3组大鼠脑组织内ca8pase-3蛋白表达的动态变化.结果 HIBD组18、24、48和96 h时间点海马及皮层区ca8pase-3蛋白的表达均明显高于假手术组(P相似文献   

木犀草素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用

目的：探究木犀草素（Lut）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠是否具有神经保护作用及其作用机制。方法：将7日龄新生大鼠分为假手术组、模型组（HIBD组）和Lut治疗组（HIBD+Lut组）。用Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型。HIBD+Lut组在造模后即刻通过腹腔注射给予50 mg/kg Lut,连续3 d,模型组和假手术组同时腹腔注射等体积生理盐水。3 d后,用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色评估脑梗死范围;用干/湿重脑含水量法评估缺血脑半球的脑水肿情况;用苏木精-伊红（HE）染色以及原位末端转移酶标记（TUNEL）和神经元核抗原（NeuN）荧光双标共定位法观察缺血脑半球海马和皮质中神经元损伤情况;用商用试剂盒检测缺血脑半球中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）水平;用Western blot法检测缺血脑半球的海马和皮质中核因子E2相关因子2(NRF-2)和血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白表达水平。取35日龄大鼠,用水迷宫实验评估大鼠的认知功能情况。结果：与假手术组比较,HIBD组大鼠脑梗死、脑...     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对脾bcl-2/bax/fas/fasL mRNA的影响

目的 通过检测脾淋巴细胞凋亡基因bcl-2/bax/fas/fasL mRNA表达水平,探讨缺氧缺血性肭损伤(hypoxicischemic brain damage,HIBD)脾细胞凋亡基因的变化与缺氧时间的关系,以此提供HIBD对于免疫功能影响的理论基础.方法 建立新生大鼠HIBD模型测定脾bcl-2/bax/fas/fasL mRNA 的相对表达量.结果 bcl-2处理组相对表达量低于对照组(P＜0.01).bax处理组相对表达量高于对照组(P＜0.01).bcl-2/bax处理组比值低于相应对照组(P＜0.05).fas处理纽相对表达量高于对照组(P＜0.01).fasL 1 h和6 h处理组相对表达量高于对照组,12 h之后则对照组远高于处理组.fas/fasL对照组较分散,除6 h组外其余组均小于1,处理组较集中,除24 h外均大于1.结论 HIBD可促进脾细胞促凋亡基因的表达,减少抑凋亡基因表达;HIBD发生6～12 h是促凋亡基因和抑凋亡基因高峰表达期;HIBD加强了fas/fasL的作用.     

头部贴敷式亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织中线粒体能量代谢的影响

目的研究头部贴敷式亚低温状态下,新生鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织内能量代谢(ATP、ADP和AMP)的变化,探讨亚低温对缺氧缺血性脑组织的保护机制。方法将88只Wistar新生鼠随机分为4组,分别为假手术常温对照组(CN)、假手术亚低温对照组(CH)、HIBD模型常温恢复组(IN)、HIBD模型亚低温治疗组(IH),每组21只,组内动物再随机分配分为3小组,分别给予常温或亚低温干预,干预持续时间分别为2、6、12h,每个时间点7只动物。结果亚低温治疗组(IH)脑组织中线粒体内ATP、ADP和AMP含量与常温对照组(IN)相比具有差异性(P<0.05)。结论头部贴敷式亚低温可保护脑组织,改善线粒体能量代谢。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤tPA、PAI-1表达的动态变化

目的:观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中组织型纤溶酶原激活物(tPA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达变化的规律,探讨纤溶系统在缺氧缺血性脑损伤中的作用。方法:7日龄SD新生大鼠96只,随机分为2组:缺氧缺血性脑损伤组和假手术组。两组动物模型制备成功后3、6、12、24、36、48、72、96小时断头取脑,应用免疫组织化学及原位杂交方法检测缺氧缺血性脑损伤不同时间点t-PA、PAI-1表达的变化。结果:假手术组新生大鼠各脑区均有tPA、PAI-1蛋白及mRNA的弱表达,缺氧缺血性脑损伤组不同时间点t-PA、PAI-1二者表达呈不同的动态变化:tPA蛋白及mRNA 3小时开始表达增强,主要见于皮质和海马,神经元表达明显,血管表达较弱,48小时神经元及微血管内皮表达明显增强,72小时神经元表达明显减弱,微血管内皮见有明显阳性表达,之后表达减弱,3～96小时各时间点阳性着色神经元数目显著高于假手术组;PAI-1蛋白及mRNA 12小时表达有所增强,神经元和微血管内皮表达增多,72小时达高峰,12～96小时各时间点阳性着色神经元数目显著高于假手术组。结论:tPA和PAI-1参与HIBD的发病机制。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤AQP4表达及bFGF治疗效果的研究

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后脑组织水通道蛋白-4(AQP4)的表达变化及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)对其治疗效果的影响.方法结扎阻断左侧颈总动脉,仓内N2浓度95%、O2浓度9±1%,缺氧持续20min,建立脑缺氧缺血模型,用RT-PCR方法检测出脑缺氧缺血后不同时间段AQP4 mRNA基因的表达.并对7日龄HIBD后新生大鼠进行bFGF治疗(4μ/g体重,腹腔注射,连续15d).观察治疗后5h、3d、7d、15d、17d后AQP4 mRNA表达的变化.结果 HIBD后5h,脑组织AQP4 mRNA表达增加;HIBD后7日达到高峰(1.93±0.11),15d后仍高于正常组织(1.41±0.23);HIBD后腹腔注射bFGF,3d脑组织AQP4 mRNA有明显变化(0.79±0.15),15d明显降低(0.47±0.06).结论 AQP4与HIBD的形成密切相关;bFGF对HIBD后有明显的改善作用,可能与其保护作用有关.     

山莨菪碱缓解幼龄鼠缺氧缺血性脑组织形态和功能损伤

目的　探讨山茛菪碱在缺氧缺血性脑损伤幼龄鼠脑组织形态和功能损伤中的调控作用。 方法　50只幼龄大鼠均分为健康对照组、模型组、模型加药组（尾静脉注射山莨菪碱2.5、5、10 mg/kg）共5组。脑组织干湿重法检测脑指数和脑含水率,HE染色观察脑组织病理损伤,TUNEL染色观察脑海马神经元周围组织细胞凋亡情况,Western blot检测脑组织中Bax/Bcl-2、caspase-9、caspase-3、BDNF和NGF蛋白表达水平,RT-PCR检测BDNF和NGF mRNA表达水平,试剂盒检测SOD、MDA和GSH-Px含量。 结果　与健康对照组比较,模型组幼龄鼠脑组织形态和神经功能损伤严重（P<0.05）。与模型组比较,5 mg/kg和10 mg/kg山茛菪碱组脑指数和脑含水率降低（P<0.05）,脑组织病理损伤好转,脑海马神经元周围组织细胞凋亡减少,Bax/Bcl-2、caspase-9、caspase-3表达水平降低（P<0.05）,BDNF和NGF表达水平增高（P<0.05）,MDA含量降低,SOD和GSH-Px含量增高（P<0.05）。 结论　山茛菪碱能够缓解缺氧缺血性脑损伤幼龄鼠脑组织形态和功能损伤。     

Decreased levels of pNR1 S897 protein in the cortex of neonatal Sprague Dawley rats with hypoxic-ischemic or NMDA-induced brain damage

Our objective was to investigate the protein level of phosphorylated N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor-1 at serine 897 (pNR1 S897) in both NMDA-induced brain damage and hypoxic-ischemic brain damage (HIBD), and to obtain further evidence that HIBD in the cortex is related to NMDA toxicity due to a change of the pNR1 S897 protein level. At postnatal day 7, male and female Sprague-Dawley rats (13.12 ± 0.34 g) were randomly divided into normal control, phosphate-buffered saline (PBS) cerebral microinjection, HIBD, and NMDA cerebral microinjection groups. Immunofluorescence and Western blot (N = 10 rats per group) were used to examine the protein level of pNR1 S897. Immunofluorescence showed that control and PBS groups exhibited significant neuronal cytoplasmic staining for pNR1 S897 in the cortex. Both HIBD and NMDA-induced brain damage markedly decreased pNR1 S897 staining in the ipsilateral cortex, but not in the contralateral cortex. Western blot analysis showed that at 2 and 24 h after HIBD, the protein level of pNR1 S897 was not affected in the contralateral cortex (P > 0.05), whereas it was reduced in the ipsilateral cortex (P < 0.05). At 2 h after NMDA injection, the protein level of pNR1 S897 in the contralateral cortex was also not affected (P > 0.05). The levels in the ipsilateral cortex were decreased, but the change was not significant (P > 0.05). The similar reduction in the protein level of pNR1 S897 following both HIBD and NMDA-induced brain damage suggests that HIBD is to some extent related to NMDA toxicity possibly through NR1 phosphorylation of serine 897.     

丙酮酸乙酯拮抗内毒素诱导的脓毒症休克犬急性肺损伤

目的:探讨丙酮酸乙酯(EP)对内毒素诱导脓毒症休克犬急性肺损伤的影响。方法:健康雄性杂种犬20只,内毒素的主要活性成分脂多糖（LPS）静脉注射复制脓毒症休克模型,随机分为对照组（n=8）和EP治疗组（n=12）。对照组只接受林格氏液复苏。EP治疗组另外给予丙酮酸乙酯首剂0.05 g/kg,然后0.05 g· kg-1·h-1持续泵入。休克模型建立前及建立后0 h、4 h、8 h、12 h监测血气分析及呼吸力学指标,包括肺动态顺应性(Cdyn)、肺总顺应性(Ctot)、吸气相气道阻力(Rawi)、吸气峰压(PIP)、呼吸功(WOBvt),并用ELISA方法检测血浆肿瘤坏死因子TNF-α、白介素IL-6、白介素IL-10水平。结果:内毒素诱导建立脓毒症休克犬模型后,血气分析及呼吸力学改变符合急性肺损伤。氧合指数（OI）、HCO-3、pH下降,PaCO2上升（与模型前比较,休克后4 h P<0.05）。肺动态顺应性和肺总顺应性下降,吸气峰压、气道阻力、呼吸功增加（与模型前比较,休克后8 h P<0.05）。与EP治疗组比较,对照组改变更加明显,休克后8 h动脉血气各项指标组间比较有显著差异(P<0.05)。丙酮酸乙酯虽未能改善脓毒症休克犬的呼吸力学指标,但能阻止呼吸力学参数的进一步恶化,休克后12 h组间差异显著(P<0.05)。丙酮酸乙酯可以降低血浆中TNF-α、IL-6水平,提高IL-10水平,休克 8 h组间差异显著(P<0.05)。结论:丙酮酸乙酯可以对抗内毒素诱导的脓毒症休克犬的急性肺损伤。     

地塞米松对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织AQP-4表达的研究

目的探讨DEX（地塞米松）对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织AQP-4表达的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血脑病提供实验和理论依据,揭示其发病机制,以期指导该病的早期治疗。方法将健康7日龄SD新生大鼠96只,清洁级,雌雄不限,平均体重12-18g,随机分为假手术组,HIBD组,DEX组,各组32只,分离左侧颈总动脉并结扎,吸入92%N2＋8%O2氮氧混合气体行缺氧处理3h,制成HIBD模型。假手术组只作分离左侧颈总动脉而不结扎,不作缺氧处理,不给与药物处理。DEX治疗组于建模成功后立即腹腔注射10mg/kg,假手术组及HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水,上述各组均于术后6h、24h、48h、72h随机抽取8只,于麻醉下处死取脑组织,通过Western blot方法检测新生大鼠脑组织AQP-4蛋白表达及实时定量PCR检测AQP-4 mRNA的表达。结果 SD鼠在缺氧处理后出现异常行为学改变。AQP-4 mRNA及蛋白的表达在缺氧诱导后显著升高,DEX的治疗则使SD鼠异常行为的表现程度减轻,后趋于正常,且能够降低HIBD导致的AQP-4的升高。结论 DEX对HIBD的治疗具有一定的疗效。     

Tau的病理性修饰与新生儿缺氧缺血性脑损伤

<正>Tau是脑内含量最多的微管相关蛋白(microtubule-associated proteins,MAPs),其病理性改变与多种中枢神经系统疾病密切相关。1 Tau的生理功能Tau在神经细胞的轴突广泛表达,主要起促进微管(microtubulin,MT)形成和稳定MT的作用,并参与细胞内物质运输、有丝分裂、神经递质和信号传递等生理过程。tau基因定位于17号染色体,含碱基     

丙酮酸乙酯对脓毒症小鼠肝细胞的保护作用

目的:研究丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对脓毒症小鼠肝细胞的保护作用。 方法:制作小鼠盲肠结扎穿孔模型，应用丙酮酸乙酯林格氏液(REPS)与乳酸钠林格氏液(RLS)对小鼠进行液体复苏，检测肝组织的抗氧化能力和肝功能改变。 结果:脓毒症小鼠抗氧化能力低于假手术组，P<0.01。应用REPS复苏显著提高肝组织抗氧化能力，REPS组肝组织丙二醛浓度低于RLS组［(48.18±5.98)μmol·g-1 protein vs (78.34±11.16)μmol·g-1 protein］，超氧化物歧化酶［(5.19±1.41)103U/g protein vs (3.20±1.08)103U/g protein］和总抗氧化能力［(7.02±1.79)103U/g protein vs (4.77±1.35)103U/g protein］高于RLS组, P<0.01；REPS组小鼠丙氨酸转氨酶低于RLS组，［(210.06±23.36)U vs (458.86±51.55)U］,P<0.01。 结论:丙酮酸乙酯具有显著的抗氧化效应，提高脓毒症小鼠肝细胞的抗氧化能力，改善肝功能。     

去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑的保护作用

目的： 研究去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型新生血管形成的影响。方法：新生7 d SD大鼠建立HIE模型，模型组和治疗组建模前24 h分别用去铁胺或生理盐水注射。第1 d、3 d、7 d和14 d处死大鼠，检测缺氧缺血（左）侧脑组织毛细血管密度(BCDI)、增生毛细血管数、脑含水量、脑萎缩程度及其血管内皮生长因子(VEGF)和低氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA表达。结果：治疗组左脑含水量和左脑萎缩比显著低于模型组(P<0.01)；左侧脑组织增生毛细血管数目显著高于模型组［(2.01±0.31)条/HPF vs (0.90±0.25)条/HPF ,P<0.01］。去铁胺显著上调左侧脑组织VEGF 和HIF-1α mRNA表达［12 h时VEGF：(1.41±0.07) vs (1.10±0.15)，P<0.05；HIF-1α：(1.49±0.12) vs (1.11±0.16)，P<0.05］。结论:去铁胺可能通过上调脑组织HIF-1α和VEGF表达，促进缺氧缺血脑组织新生血管形成，减轻缺氧缺血性脑损伤。