在沙土中保存15年后的炭疽杆菌芽胞特征研究

在沙土中保存１５年后的炭疽杆菌芽孢特征研究中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所（１０２２０６）梁旭东，马凤琴，俞东征炭疽杆菌芽孢具有在外环境中长期生存的能力，但这种能力的研究报告很少。为此，我们对新疆自治区喀什地区卫生防疫站１９８２年从５７１份不...     

炭疽杆菌芽胞染色法的改进

芽胞是某些细菌在一定条件下形成的特殊结构 ,不同种类的细菌其芽胞的形态、染色和位置等有较大差异 ,因此直接观察细菌的芽胞可作为鉴定细菌的方法之一。常用的芽胞染色方法很多 ,但这些常规方法用于炭疽杆菌芽胞染色 ,效果总是不很满意。我们通过用微波多次加热菌液 ,对炭疽杆菌芽胞常规染色方法进行了改进 ,取得了较好的效果。1　材料和方法1 .1　材料　 1石碳酸复红染液 :取碱性复红酒精饱和溶液 1 0ml,加 5 %石碳酸水溶液 90 ml。 2 95 %酒精 ;3美兰染液 :取2 %美兰酒精饱和溶液 3 0 ml,加 0 .0 1 %KONa水溶液 1 0 0 ml。4炭疽杆菌…     

炭疽杆菌芽孢污染的消除技术及其应用

在已知病原微生物中,炭疽杆菌芽孢对理化因子的抵抗力较高,在环境中存活时间极长.日常医疗卫生机构常用的消毒方法,如巴氏消毒、煮沸消毒、酒精消毒、碘伏消毒、苯扎溴铵消毒、来苏尔消毒等方法,均不能将其杀灭.在自然界的土壤中,炭疽杆菌芽孢可以存活30年以上.因此,必须采用灭菌的剂量或高水平的消毒措施,才能达到消除污染的目的.现就2001年在美国发生的炭疽恐怖事件之后,实际应用的污染消除手段,以及最新研发的污染消除技术介绍如下.     

一种快速定量检测炭疽杆菌方法的建立

目的：建立一种快速、准确、特异定量检测炭疽杆菌的方法。方法：根据复合探针荧光定量分析原理，以炭疽杆菌染色体rpoB基因为靶序列，设计合成引物和探针，对炭疽杆菌进行实时定量聚合酶链反应（PCR）检测，并探讨荧光探针与淬灭探针用量及比例、镁子浓度、淬灭探针长度对定量结果的影响。结果：本法最适条件：荧光探针浓度300mmol/L、荧光探针与淬灭探针的比例为1／2，镁离子浓度为3mmol/L，淬灭探针长15个核苷酸，该法检测炭疽杆菌的灵敏度达10^3拷贝，能特异区分炭疽杆菌与其他蜡样杆菌。结论：复合探针荧光定量PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对炭疽杆菌进行定量分析，可为临床诊断提供帮助。     

口服还尔金辐照灭菌剂量的设定

为探讨保健品口服还尔金的辐照灭菌剂量,对其初始污染细菌总数与菌谱进行了检测,进而从其中找出耐辐照细菌,对该菌悬液用６０钴不同递增剂量照射法测定。结果,杀灭９０％ 该耐辐照细菌的辐照剂量为１．６８ｋＧｙ,辐照灭菌剂量为 ６．０２ｋＧｙ。     

一起疑似炭疽疫苗菌株毒力恢复事件中炭疽芽孢杆菌的毒力鉴定与分析

目的 对某校疑似炭疽疫苗菌株毒力恢复事件（事件）中,教学实验使用的炭疽芽孢杆菌毒力及其环境污染情况进行鉴定和调查,为合理处理该事件提供参考依据。 方法 调查事件发生的情况、采集实验用培养物、冻存菌株和实验室环境样本。 对实验用培养物进行噬菌体裂解和青霉素敏感试验鉴定;选取炭疽芽孢杆菌的rpoB基因和毒力相关的pagA和capC基因,应用TaqMan荧光探针法对采集样本进行检测。 结果 实验用培养物的噬菌体裂解试验显示有明显的噬菌斑,青霉素敏感试验显示在青霉素纸片周围有明显的抑菌环,并且培养物和冻存菌株rpoB和pagA基因检测为阳性,capC基因检测为阴性;教学场所的环境样本rpoB、pagA和capC基因检测均为阴性。 结论 该事件中实验用培养物和冻存菌株均为缺少capC基因的减毒炭疽芽孢杆菌,未发现毒力恢复情况;教学场所中无炭疽芽孢杆菌的污染。      

炭疽芽孢杆菌基因芯片探针的制备

目的制备炭疽芽孢杆菌(BA)基因芯片探针,应用于BA基因芯片的检测。方法采用PCR方法,以BA疫苗株A16R基因组DNA为模板,扩增pXO1质粒上的8个特异性片段,连接至pMD19-T Simple载体,构建分别包含8个探针序列的重组质粒,以其为PCR扩增模板获取探针DNA。结果基因测序证明,成功获得BA的3个探针。结论 BA基因探针的成功获取,为炭疽芽孢杆菌基因芯片的制备奠定了基础。     

炭疽杆菌菌落标本的制备

目的:制备炭疽杆菌菌落标本,进一步对炭疽杆菌菌落进行形态学的观察。方法:漂浮法固定炭疽杆菌单个菌落,用稀释复红等染料染色,封片后镜下观察。结果:低倍镜下可见染色清晰,形态完整的炭疽杆菌菌落,边缘不整齐,呈卷发状,有小尾突起。结论:用甲醛固定后,采用漂浮法制备炭疽杆菌菌落标本具有安全、方便、可靠、无污染等特点。     

地高辛标记炭疽杆菌DNA探针的研究

本文介绍了试用地高辛标记，将炭疽芽孢杆菌的ＰＸＤ１和ＰＸＤ２两质粒上分别扩增到２９０ｂｐ和２８８ｂｐ基因片断制成非放射性标记探针，利用菌落原位杂交方法进行检测，表明两探针的敏感性、特异性均良好，提示该两探针将能为基层工作提供更准确、快速的炭疽杆菌检验技术。     

脱水蔬菜保质辐照剂量的研究

从脱水蔬菜污染的细菌中分离出耐辐照细菌芽胞,并培养、纯化制成芽胞悬液。测定６０钴辐照对该芽胞杀灭的 Ｄ１０值与悬液中原始芽胞量。以菌量减少至 １０００ ｃｆｕ／ ｍｌ为标准,得出脱水胡萝卜、葱及辣椒粉的保质辐照剂量分别为 ５．１９、４．３０、６.０２ｋＧｙ。     

一种稳定性二氧化氯消毒液的消毒效果观察

目的观察一种稳定性二氧化氯消毒液的消毒效果。方法采用悬液定量杀菌试验和现场消毒试验进行了消毒效果检测。结果用浓度19.7 mg/L该二氧化氯消毒液作用10 min,对悬液内大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均>5.00;用浓度65.7 mg/L的该二氧化氯消毒液作用45 min,对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭对数值>5.00。用浓度39.4 mg/L的该二氧化氯消毒液对物体表面擦拭消毒并作用10 min,对黄瓜表面人工污染的大肠杆菌杀灭对数值均>3.0,对物体表面自然菌杀灭对数值均>1.00。结论该稳定性二氧化氯消毒液对细菌繁殖体和细菌芽孢有较好的杀菌作用,现场实际消毒效果能达到规定要求。     

绩效洗涤丸杀菌效果观察

目的观察绩效洗涤丸的杀菌效果。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对该绩效洗涤丸杀菌效果进行了实验室研究。结果在常温条件下,用含有效氯300mg/L该绩效洗涤丸溶液,对悬液内大肠杆菌作用5min,平均杀灭对数值为5.0以上。以含有效氯250mg/L该绩效洗涤丸溶液对悬液内金黄色葡萄球菌作用5min,平均杀灭对数值均5.0。结论绩效洗涤丸洗涤丸对细菌繁殖体具有较强的杀灭效果,适合作清洁消毒之用。     

菌力克消毒粉杀菌效果试验观察

为了解菌力克消毒粉杀菌效果与腐蚀性 ,进行了载体定量杀菌试验与金属腐蚀性试验。结果 ,以含有效氯2 0 0 0mg/L的该消毒剂对布片上枯草杆菌黑色变种芽孢作用 2 0min ,含有效氯 30mg/L的该溶液对布片上金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用 10min和 3min ,含有效氯 2 0mg/L的该溶液对白色念珠菌作用 10min ,杀灭率均为 10 0 %。含有效氯 15 0 0mg/L的该消毒剂溶液对不锈钢片上乙型肝炎表面抗原作用 30min ,可将其抗原性破坏。含有效氯2 0 0 0mg/L的消毒剂溶液对不锈钢无腐蚀、对铝、铜有轻度腐蚀 ,对碳钢有中度腐蚀。结论 ,菌力克消毒粉具有高效杀菌作用 ,对金属有腐蚀性。     

一种全自动内窥镜消毒机杀灭微生物效果的观察

为观察全自动内窥镜消毒机对微生物的杀灭效果 ,采用载体浸泡定量法和模拟现场试验对其消毒效果进行了观察。结果 ,在实验室内以含二氧化氯 2 0 0mg/L的氧氯灵消毒剂水溶液 ,对不锈钢片上金黄色葡萄球菌、大肠杆菌作用 3min ,对白色念珠菌作用 5min杀灭率均达 10 0 % ;含二氧化氯 6 0 0mg/L该液作用 5min ,对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率达 10 0 %。模拟现场试验中 ,按规定程序进行加酶清洗、循环消毒 (5min)、臭氧水冲洗和风干等处理程序共 15min ,对污染在各种模拟载体上枯草杆菌黑色变种芽孢的消除率≥ 99.99%。含臭氧量 1.0mg/L的内窥镜冲洗水中未检出存活细菌 ,洗涤剂和消毒剂冲洗水中亦无细菌检出 ;经过清洗、消毒和冲洗后的内窥镜内腔和外壁均未检出二次污染菌。结论 ,该内窥镜采用加酶清洗、二氧化氯消毒和臭氧水冲洗等处理 ,具有良好的消毒效果 ,冲洗水排放符合卫生要求 ,消毒干燥后的窥镜无二次污染现象。     

过氧乙酸杀灭微生物效果的试验观察

采用定量杀菌试验方法,对二元瓶装的四环牌过氧乙酸杀菌效果和空气中自然菌杀灭效果进行了观察。结果,以含50 mg/L过氧乙酸水溶液对布片上金黄色葡萄球菌作用3min,对大肠杆菌作用1min,平均杀灭率可达99.90％以上;以含过氧乙酸100 mg/L对白色念珠菌作用10 min,含过氧乙酸500 mg/L对枯草杆菌黑色变种芽孢作用6 min,杀灭率均达99.90％以上。有机物对过氧乙酸杀菌效果有一定影响。模拟现场试验结果证明,以含1000 mg/L过氧乙酸水溶液擦拭并作用20 min,对物体表面自然菌的杀灭率达90.00％以上;以含1000 mg/L过氧乙酸、按10 ml/m~3用量进行气溶胶喷雾作用30 min,对室内空气中自然菌消亡率达90.00％以上。     

一种固体二氧化氯消毒相关性能的研究

目的研究一种以柠檬酸为活化剂的固体二氧化氯消毒相关性能。方法采用悬液定量杀菌试验和理化检测方法以及现场试验进行了试验观察。结果以含二氧化氯225mg/L的该固体二氧化氯溶液对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢作用2min,杀灭对数值>5.0。以5mg/L二氧化氯的该消毒剂溶液对悬液内铜绿假单胞菌作用1min,7.5mg/L对金黄色葡萄球菌作用1min,杀灭对数值>5.0;用7.5mg/L二氧化氯的该消毒剂对悬液内大肠杆菌作用3min和对白色念珠菌作用5min,杀灭对数值>5.0。用7.5mg/L二氧化氯消毒液消毒食(饮)具需作用7min,10mg/L消毒果蔬5min,人工污染大肠杆菌杀灭对数值均≥3.00。含体积分数40%以上小牛血清对该二氧化氯消毒剂杀菌效果有轻度影响。结论该二氧化氯消毒剂具有高效、快速的杀菌特点,但其杀菌效果受有机物影响。     

聚碘树脂复合消毒剂杀菌效果的研究

聚碘树脂复合消毒剂是将碘载于阴离子树脂上所形成的固体颗粒,为了解其消毒相关性能,采用理化分析和悬液定量杀菌试验方法进行了实验室研究。结果,用11 g聚碘树脂制成的过滤柱处理大肠杆菌1 m in,对其杀灭对数值>7.0。该聚碘树脂过滤柱经冲自来水3 t(吨)后,对大肠杆菌的杀灭效果基本不下降。将聚碘树脂复合消毒剂密封包装置54℃恒温箱保存14 d后,其有效碘平均下降率为0.57%。结论,聚碘树脂复合消毒剂性能稳定,对悬液内大肠杆菌杀灭效果好,使用寿命较长。     

光催化空气消毒器杀菌效果试验研究

目的观察光催化空气消毒器和紫外线空气消毒器对室内空气消毒效果。方法采用平板沉降采样法进行了现场空气消毒效果检测。结果光催化空气消毒器持续运行,在不同人数进入室内活动90min,人数由2人增加到8人,光催化空气消毒器所在室内空气自然细菌平均菌数由212cfu/m3增加至573cfu/m3;除菌率波动在59.09%~75.00%之间。紫外线空气消毒器所在室内空气自然菌平均菌数由204cfu/m3增加到535cfu/m3;除菌率波动在28.30%~48.20%。光催化空气消毒器作用时间由45min增加到135min,对室内空气中自然菌除菌率由59.30%增加到68.60%;紫外线空气消毒器作用对室内空气中自然菌除菌率由32.40%增加到51.00%。结论光催化空气消毒器对室内空气中自然菌有一定的除菌效果,但其与紫外线循环风空气消毒器除菌效果基本无明显差异。     

抗坏血酸与铜离子协同杀灭微生物效果及其机理的研究

实验证明，抗坏血酸－铜离子对水中大肠杆菌及其３种噬菌体均有协同杀灭作用。其作用受抗坏血酸与铜离子的用量影响。该混合液稳定性差。试验中测定了铜进入菌体的量，并在电镜下观察了大肠杆菌形态的变化。     

三氯异氰尿酸消毒片杀菌效果与毒性试验观察

为了解三氯异氰尿酸消毒片杀菌效果及毒性,以悬液定量杀菌试验和毒性试验进行了试验观察。结果,以含有效氯250 mg/L该消毒片溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌作用15 m in,杀灭对数值均>5.0,对白色念球菌的杀灭对数值>4.0。含2500 mg/L有效氯该消毒液对枯草杆菌黑色变种芽孢作用30 m in,杀灭对数值>5.0。对铜绿假单胞菌能量试验最低合格浓度为500 mg/L。用含250 mg/L该消毒液浸泡作用30 m in,对瓷盘上大肠杆菌的杀灭对数值>3.0。以含1000 mg/L消毒液作用15 m in,对物体表面自然菌的杀菌对数值为1.72。该消毒片对小鼠经口毒性LD50为>5000 mg/kg,属实际无毒级;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验阴性。结论,三氯异氰尿酸消毒片对细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭作用较强,动物试验属无毒级物质。