吉非替尼对非小细胞肺癌细胞株H358增殖的影响及其作用机制

目的观察吉非替尼(gefitinib)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株H358增殖的影响,并对其分子机制进行探讨。方法体外培养人NSCLC细胞株H358,随机分为正常培养对照组和1μmol/L吉非替尼处理组,培养1、3、5d后,应用MTS法对2组细胞增殖速率进行分析;分别提取胞质、胞核蛋白,蛋白印迹法检测表皮生长因子受体(EGFR)的亚细胞定位变化情况;另外,对细胞中磷酸化-Akt(p-Akt)的表达进行检测,分析其对磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt信号通路的影响。结果 MTS结果表明,1μmol/L吉非替尼能显著抑制H358的增殖(P<0.01),并具有时间依赖性。蛋白印迹法检测结果显示,吉非替尼能够改变EGFR的亚细胞定位,减少其在胞核中的表达,此外,吉非替尼处理后H358细胞内p-Akt的蛋白表达受到抑制。结论吉非替尼能够显著抑制H358细胞的增殖,减少EGFR在细胞核中的表达,并抑制PI3K/Akt信号通路,这可能是其抗NSCLC的重要细胞及分子机制。     

WWOX基因在人非小细胞肺癌的杂合性丢失研究

目的检测WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在人非小细胞肺癌中的杂合性丢失(LOH)情况,并探讨其与非小细胞肺癌临床病理指标之间的可能关系.方法提取52例非小细胞肺癌术后癌组织及相应的癌旁正常组织的DNA,扩增WWOX基因对应的染色体16q23.2～24.1区域的3个微卫星位点多肽性标记(D16S504、D16S3096、D16S3029),变性聚丙烯凝胶电泳、银染后行LOH认定,并分析LOH与患者性别、吸烟史、肿瘤组织类型及临床分期之间的可能关系.结果52例非小细胞肺癌组织样本中29例(55.8%)发现LOH,且LOH发生率男性为66.7%,明显高于女性的23.1%(P＜0.05);吸烟指数≥400年支者为75%明显高于＜400年支者的33.3%(P＜0.01);鳞癌为64.9%,明显高于腺癌的33.3%(P＜0.05);Ⅰ Ⅱ期(52.9%)与Ⅲ Ⅳ期(61.1%)相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论WWOX基因的杂合性丢失普遍存在于非小细胞肺癌中,LOH的发生率与性别、吸烟史、肿瘤组织类型有关,与临床分期无关.     

非小细胞肺癌FHIT基因表达研究

目的　研究FHIT(fragilehistidinetriad)基因在人类非小细胞肺癌中的表达下调及与临床病理特征的关系。方法　应用免疫组织化学 (S-P)法检测了 80例非小细胞肺癌组织标本和 40例肺良性病变组织中FHIT基因的表达水平。结果　非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达水平 (57. 5% )显著低于肺良性病变组织(90. 0% ),P< 0. 01;非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达水平降低与肺癌组织学类型、细胞分化程度、患者P-TNM分期、是否有淋巴结转移存在相关性(P<0. 05);非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达水平降低与患者是否长期大量吸烟存在相关性(P<0. 05)。结论　FHIT基因表达下调与肿瘤的发生、发展关系密切。     

SLC34A2通过JAK-STAT信号通路调节肺癌肿瘤干细胞侵袭和增殖作用研究

目的 探讨SLC34A2对肺癌肿瘤干细胞(carcinoma-initiating cells,CICs)侵袭和增殖作用的影响及机制.方法 采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株H1650中分选出CD44 +/CD133+的CICs;LV3-SLC34A2组沉默SLC34A2基因,LV3-NC组为对照.使用绿色荧光蛋白及免疫印迹法检测SLC34A2沉默效率及沉默效果;沉默SLC34A2后,免疫印迹法检测SLC34A2编码蛋白NaPi-Ⅱb的表达,使用Transwell侵袭实验检测对CICs侵袭能力的影响,肿瘤细胞成球实验检测对CICs增殖能力的影响,免疫印迹法检测JAK/STAT信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与LV3-NC组比较,LV3-SLC34A2组中NaPi-Ⅱb蛋白的表达水平下降(P＜0.05).沉默SLC34A2可以有效抑制肺癌CICs的侵袭和增殖能力(P＜0.05),并使JAK/STAT信号通路中的P-JAK和P-STAT蛋白表达相应降低(P＜0.05).结论 沉默SLC34A2基因可能通过调控JAK/STAT信号通路来抑制肺癌CICs的侵袭和增殖作用.     

金丝桃苷抑制鼻咽癌细胞生物学行为的分子机制研究

目的 探讨金丝桃苷对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响和机制。方法 采用10、20及40 mg/L金丝桃苷的培养液孵育SUNE1细胞,依次记为低、中、高剂量组;将长链非编码RNA(lncRNA)配对盒基因8反义RNA 1(PAX8-AS1)过表达或敲低质粒、miR-494-3p模拟物及其阴性对照分别转染至40 mg/L金丝桃苷处理的SUNE1细胞,采用CCK-8实验、平板克隆实验、Transwell实验检测SUNE1细胞活力、克隆形成以及迁移和侵袭。蛋白质印记法分析基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表达。双荧光素酶报告实验分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p靶向关系。结果低、中、高剂量金丝桃苷降低SUNE1细胞活力、迁移数和侵袭数,下调MMP-2蛋白、MMP-9蛋白以及miR-494-3p表达水平,上调lncRNA PAX8-AS1表达水平（P<0.05）。lncRNA PAX8-AS1靶向负调控miR-494-3p表达。过表达lncRN...     

非小细胞肺癌EGFR基因突变阳性的临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）第19、21号外显子突变与其临床病理特征、家族史的关系,以及对突变阳性患者使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）靶向治疗的效果。方法采用扩增阻滞突变系统聚合酶链反应技术对EGFR第19、21号外显子进行检测。结果162例非小细胞肺癌患者发生EGFR突变阳性63例,突变阳性率为38.89%。腺癌、女性、非吸烟者、有肺癌及其他恶性肿瘤家族史的非小细胞肺癌患者EGFR突变率明显升高,差异有统计学意义（P0.05）。非小细胞肺癌发生EGFR突变阳性使用EGFR-TKIs靶向治疗患者的中位生存期明显长于未治疗及其他药物化疗患者,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论非小细胞肺癌患者EGFR突变筛查应作为常规临床检测指标,特别是对于有肿瘤家族史患者更具有临床意义。     

非小细胞肺癌组织中肿瘤转移抑制基因蛋白和基质金属蛋白酶-2的表达与微血管密度相关性研究

目的探讨肿瘤转移抑制基因蛋白(Kiss-1)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达与微血管密度(MVD)相关性研究。方法收集我院NSCLC组织标本68份,采用免疫组织化学SP法检测各组Kiss-1和MMP-2的表达和微血管密度(MVD)(CD34标记)。结果 NSCLC组中Kiss-1和MMP-2阳性率和MVD值均与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Kiss-1和MMP-2阳性表达均与NSCLC组的临床分期、有无淋巴结转移相关,并且在NSCLC组织中两者表达呈负相关;NSCLC组中Kiss-1和MMP-2阳性者的MVD值与其阴性者差异有统计学意义(P<0.05),在有无淋巴结转移者中Kiss-1和MMP-2阳性者的MVD值差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示Kiss-1和MMP-2的表达与MVD值有相关性(P<0.05)。结论 Kiss-1和MMP-2在NSCLC发生和转移中可能起重要作用,Kiss-1和MMP-2与NSCLC的浸润转移密切相关,可作为预后的判断指标。     

体外转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响

目的 探讨转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响,筛选出有意义的肿瘤治疗的生物学靶标.方法 在人黑色素瘤细胞A375中转染Kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.Western blot方法 检测Kiss-1蛋白以证实转染成功.流式细胞术检测Kiss-1基因对A375生长增殖的影响.结果 稳定转染Kiss-1基因的A375细胞中不仅Kiss-1蛋白稳定表达（1.20±0.21）高于对照组（0.60±0.41）,Kiss-1基因转染A375细胞48 h后对其具有凋亡的作用（凋亡率为28.42%）高于对照组（2.12%）.结论 外源性Kiss-1基因导入A375细胞后,可诱导A375细胞其凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

重组人血管内皮抑制素联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌37例临床观察

目的观察重组人血管内皮抑制素（恩度）联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和毒副反应。方法经病理学或细胞学检查证实的37例晚期NSCLC患者,包括鳞癌21例,腺癌16例。吉西他滨1000mg／m^2,静脉滴注,第1、8天;顺铂80mg／m^2,静脉滴注,分3d给予;恩度15mg／d,静脉滴注,第1～14天,21d为1个周期。每例患者至少完成2个周期。根据WHO疗效评定及毒副反应分级标准,观察其近期疗效、疾病进展时间及毒副反应。结果37例晚期NSCLC患者中,CR1例,PR15例,SD14例,PD7例,总有效率（CR＋PR）43．2％。中位疾病进展时间为5．2个月。毒副反应主要为血液学、消化道毒性,Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞减少占32．4％,Ⅲ-Ⅳ度血小板减少占20．5％,未见与化疗相关的死亡。结论恩度联合GP方案治疗晚期NSCLC近期客观疗效较高,安全性好。     

微小RNA-203a-3p下调Mink相关肽1基因表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的 探讨微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)对非小细胞肺癌恶性生物学行为的影响及机制.方法 本研究于2018年7月至2019年6月进行,正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446购自中国科学院上海细胞库;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-203a-...     

DOC-2基因对卵巢癌细胞周期的影响

目的 :探讨DOC 2基因对卵巢癌细胞周期的影响。方法 :将卵巢癌细胞 (TC 1)和转染空载体的卵巢癌细胞 (TC pcDNA3 1)作为对照组 ,与转染DOC 2的卵巢癌细胞 (TC p93 )同时进行消化收集后 ,经流式细胞仪检测 ,对比各组间细胞周期的改变。结果 :TC 1细胞经DOC 2转染后 ,其受阻于G1期的细胞增多 ,同时S期细胞相应减少 ,而单纯转染空载体对细胞周期并不产生明显影响。结论 :DOC 2基因可改变卵巢癌细胞TC 1的细胞周期 ,它可能会成治疗卵巢癌的目的基因之一     

三氧化二砷对人胶质瘤细胞株U251影响的实验研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)抗人胶质瘤细胞株U251的作用及机制。方法采用0．5、1．0、2．0、4．0μmol／L AS2O3诱导人胶质瘤细胞株U251,于培养第1、2、3、4、5、6d应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪观察人胶质瘤细胞株U251的存活,形态学改变及细胞DNA含量的变化。结果0．5～4μmol／L的As2O3明显抑制U251的增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡。结论体外三氧化二砷能抑制人胶质瘤细胞U251增殖,提示有希望用于神经胶质瘤患者的治疗。     

p27基因在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的探讨抑癌基因p27在子宫内膜癌组织中的表达及其意义.方法应用免疫组织化学方法（SP法）检测p27基因在20例正常子宫内膜及65例子宫内膜癌组织中的表达.结果 p27基因在正常子宫内膜组织中全部为阳性表达,65例子宫内膜癌组织中,33例表达阳性;病理分级为G1、G2、G3级的子宫内膜癌组织中p27基因表达阳性率分别为82%、57%、19%,两两比较差异有统计学意义（P＜0.01或0.05）;临床分期Ⅰ期的子宫内膜癌组织中p27基因表达阳性率为94%,Ⅱ期者为56%,Ⅲ期者为26%,两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）;p27基因表达阳性率与子宫内膜癌的病理分级和临床分期及肌层浸润深度呈负相关（P＜0.05）.结论p27基因的异常表达与子宫内膜癌的生长、浸润及分化密切相关.     

结肠癌组织中乳腺癌转移抑制基因1的表达及意义

目的 探讨乳腺癌转移抑制基因1( BRMS1)在结肠癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化二步法,检测46例结肠癌组织及癌旁组织中BRMS1蛋白的表达情况,并结合临床病理特征分析其临床意义.结果 结肠癌组织与癌旁组织中BRMS1的阳性表达率分别为34.8％(16/46)、84.8％( 39/46),差异有统计学意义(x2 =23.92,p ＜0.01):BRMS1表达与结肠癌肿块大小、临床分期、淋巴结转移状态密切相关(x2=6.02、4.28、4.35,均P＜O.01),与患者年龄、病理类型等无关.结论 BRMS1在结肠癌的转移过程中可能起到抑制作用,检测结肠癌组织中BRMS1蛋白的表达,有助于判断其预后.     

人乳腺癌转移抑制基因真核表达载体的构建及鉴定

目的构建乳腺癌转移抑制基因（BRMS1）的真核表达载体pcDNA3．1（-）B／myc-BRMSI,为进一步研究恶性肿瘤的转移机制及基因治疗提供物质基础。方法常规方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,Trizd法提取细胞株总RNA;设计一对特异性引物,经过逆转录反应获得BIIMS1 cDNA的CDS序列,连接到质粒pcDNA3．1／mye—His（-）B上,构建BRMS1的真核表达载体peDNA3．1（-）B／myc．BRMS1,行基因测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK-293,行Westernblot验证其是否表达。结果重组质粒pcDNA3．1（-）B／myc-BRMS1经双酶切及基因测序分析,验证了克隆的人BRMS1基因cDNA序列与GenBank[AF159141]公布的人BRMS1基因的cDNA序列吻合,重组体peDNA3．1（-）B／myc—BRMS1中插入的目的基因BRMS1是正向、单倍插入。结论成功构建了BRMS1真核表达载体pcDNA3．1（-）B／myc—BRMS1,为深入研究BRMS1基因功能和BRMS1基因治疗奠定了物质基础。     

黄腐醇对肺癌细胞株A549体外抑制作用及其可能机制

目的 探讨黄腐醇对人肺癌细胞株A549的体外抑制作用及其可能机制.方法 体外培养A549细胞,采用MTT法检测黄腐醇10、20 μmol/L或联用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)5 mmol/L对细胞生长的作用,细胞集落实验检测细胞的集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况和活性氧(ROS)含量,Western blot法检测p53、p21、转录激活因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达.结果 黄腐酵呈浓度和时间依赖性地抑制A549细胞生长(P＜0.05).与对照组相比,黄腐醇10,20 μmol/L均可减少A549细胞集落的数量,促进细胞凋亡,增加细胞内ROS含量以及p53、p21、ATF4、CHOP蛋白表达(P＜0.05);而NAC预处理后,可降低黄腐醇诱导的ROS含量以及细胞抑制率(P＜0.05).结论 黄腐酵能够体外抑制肺癌细胞生长并促进细胞凋亡,可能与黄腐酵升高肿瘤细胞内ROS含量、调节细胞周期和内质网应激相关蛋白的表达有关.     

青藤碱联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞增殖作用的影响

目的研究青藤碱联合顺铂对体外培养宫颈癌Hela细胞增殖的作用,及Maspin、Caspase-3、环氧化酶(COX)-2蛋白在Hela细胞中的表达。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞系,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定青藤碱及其联合顺铂对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;免疫细胞化学测定Maspin、Caspase-3、COX-2蛋白表达情况。采用方差分析和LSD-t检验进行统计分析。结果青藤碱对人Hela细胞有增殖抑制作用,呈时间、浓度依赖性,与顺铂联用后协同抑制细胞增殖(P<0.05),凋亡率明显增高(P<0.05),上调Maspin表达,下调Caspase-3、COX-2表达。结论青藤碱具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的作用,与顺铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用。     

膀胱移行细胞癌中FHIT基因异常甲基化及其与临床病理学的关系

目的检测FHIT基因在膀胱移行细胞癌中的异常甲基化及其表达,探讨其与膀胱移行细胞癌临床病理学的关系。方法收集膀胱移行细胞癌新鲜组织标本共49例和10例正常膀胱组织,采用免疫组织化学的方法(S-P法)检测FHIT蛋白表达,用甲基化特异性聚合酶链反应PCR(MS-PCR)方法研究膀胱移行细胞癌组织、正常膀胱组织中FHIT基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果FHIT蛋白在正常膀胱组织均为阳性;FHIT蛋白在膀胱移行细胞癌中阳性表达率为47%(23/49),肿瘤不同分级中随恶性程度的增高,表达减少,Ⅰ级与Ⅲ级比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同临床分期中随分期的增高,表达减少,Tis～T1期与T2～T4期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。49例膀胱移行细胞癌组织中,有8例发生了甲基化,阳性率为16%(8/49)。FHIT基因的异常甲基化和蛋白表达无相关性。正常膀胱组织FHIT基因启动子甲基化频率0(0/10)。结论FHIT基因与膀胱移行细胞癌的发生发展有关,FHIT蛋白异常表达可作为膀胱移行细胞癌肿瘤标志物。FHIT基因甲基化及表达缺失参与膀胱移行细胞癌的发生发展,且与其临床病理有一定关系,可能是影响膀胱移行细胞癌预后的重要因素。     

人参皂苷Rg1对人胃癌BGC-823的抑制作用研究

目的:研究人参皂苷Rg1对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823活性、增殖、凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3及形态学影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,加入不同浓度人参皂苷Rg1加以干预,生长曲线法、MTT法、蛋白质含量分别观察人参皂苷Rg1对BGC-823细胞活性、增殖的影响,荧光定量PCR法测定凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3 mRNA含量变化,形态学方法观察人参皂苷Rg1促BGC-823细胞凋亡作用。结果:人参皂苷Rg1 40、60、80 mg/L不同剂量均不同程度抑制细胞的增殖,且有明显的量-效、时-效关系;人参皂苷Rg1对BGC-823细胞具有明显的细胞毒作用,其IC50为29.56 mg/L;人参皂苷Rg1可明显减少肿瘤细胞内蛋白含量,提高细胞内Bax-2、caspase-3 mRNA含量,提高经人参皂苷Rg1作用后,凋亡细胞皱缩,胞浆稀少或缺乏,淡红色;染色质凝聚,成深紫色;细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制细胞增殖,降低细胞活性,表现出较好的抗肿瘤活性,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞蛋白质合成、促进BGC-823细胞凋亡有关。