人季节性H1N1流感病毒小鼠感染模型的建立

目的制备人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,为研究流感病毒致病性、研发抗病毒药物提供模型动物。方法将人季节性H1N1流感病毒在鸡胚尿囊腔扩增后,滴鼻接种小鼠,4 d后将小鼠处死,挑选感染体征严重者进行实时荧光PCR(FQ-PCR)检测肺中的流感病毒,将检测阳性的肺上清在鸡胚尿囊腔扩增,接种于下一代小鼠。比较各代小鼠对流感病毒的适应情况,直至小鼠出现明显的感染体征,取肺研磨制成匀浆,获得流感病毒鼠肺适应株并检测其半数致死量(LD50)。将10 LD50的病毒液接种于小鼠,建立人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,观察模型小鼠的一般活动状态、体质量变化、肺部病变,HE染色观察肺部病理切片,计算肺指数,FQ-PCR检测病毒RNA。结果人季节性流感病毒在小鼠体内传代4次后,鼠肺适应株制备完成,其经鼻的LD50为10-2.41/0.05 mL。人季节性流感病毒的小鼠感染模型,一般状态差,体质量明显减轻,肺指数增大,70%出现死亡。病理切片观察病变明显,FQ-PCR显示流感病毒阳性。结论成功建立了人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型。     

L-ficolin对A型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用

目的:探讨L-ficolin分子与A型H1N1流感病毒的相互作用机制。方法:将pcDNA3.1-L-ficolin真核表达质粒以及对照质粒分别肌注小鼠后感染A型H1N1流感病毒,观察感染小鼠的体重变化、肺内病毒血凝滴度,并通过肺指数以及肺组织HE染色判断感染小鼠的肺部病变情况,ELISA检测肺组织IFN-γ和IL-4的水平。结果:A型H1N1流感病毒感染后,与对照组相比,注射了pcDNA3.1-L-ficolin质粒的小鼠体重无明显下降,肺内病毒血凝滴度较低,肺组织病变较轻,并且肺内IFN-γ和IL-4的水平增高。结论:pcDNA3.1-L-ficolin对小鼠抵御A型H1N1流感病毒感染有一定的保护作用,该质粒可作为抗流感病毒的新型候选制剂。     

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。     

人H7N9禽流感病毒、高致病H5N1禽流感病毒及H1N1流感病毒感染小鼠特征分析

目的 对比分析人高致病H5N1禽流感病毒、H7N9禽流感病毒及H1N1流感病毒分别感染BALB/c小鼠后的机体反应特征。方法 分别以H7N9病毒、H5N1病毒和H1N1病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠存活率、体征变化及感染后肺组织病理损伤差异,检测小鼠感染流感病毒后肺组织增殖细胞核抗原（PCNA）表达并观察小鼠感染后修复状况。结果 H7N9病毒、H5N1病毒和H1N1病毒均感染BALB/c小鼠,小鼠存活率依次为H7N9>H1N1>H5N1,肺组织病理损伤严重程度依次为H5N1 >H1N1 >H7N9,PCNA表达水平依次为H7N9 >H1N1 >H5N1。结论 H7N9病毒感染后宿主炎症反应较小,感染后小鼠肺组织自我修复能力较强;H5N1病毒感染BALB/c小鼠后的机体反应最为强烈,感染后恢复能力差,致死率高。     

重症H1N1流感病毒感染小儿器官功能评估

目的研究重症H1N1流感病毒感染小儿器官系统功能衰竭情况。方法 PCR检测H1N1流感病毒RNA阳性重症患者32例,按小儿多器官功能衰竭诊断标准对各器官系统进行评估。结果 (1)重症H1N1流感病毒感染小儿呼吸系统与中枢神经系统功能衰竭发生机率最高,分别为46.88%与12.5%;(2)其他器官系统功能衰竭未见单独出现,多与呼吸与神经系统异常伴发;(3)急性坏死性脑病是重症H1N1流感病毒感染小儿死亡的重要原因。结论重症H1N1流感病毒感染小儿呼吸系统与神经系统功能衰竭发生机率高,值得临床医生注意。     

2009甲型H1N1流感病毒新进展

甲型猪源性流感病毒属正粘病毒科,其可引起猪、禽和人的上呼吸道感染。2009年3月在美国和墨西哥的流感样患者的呼吸道标本中检测出新的不能分型的甲型流感病毒,并经确认为甲型H1N1流感病毒（简称2009甲型H1N1流感病毒）。这种病毒在美国和墨西哥引起暴发流行,并蔓延到世界各地,引起一些感染者死亡。文中综述了2009甲型H1N1流感病毒在基因分型、抗原特征、传播特点、致病特点、治疗等方面与已知各流感病毒不同的特征。     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

流感病毒H1N1感染后宿主细胞MTH1基因表达的研究

目的 观察H1N1型流感病毒诱导的MDCK细胞抗氧化相关修复基因MTH1表达量的变化.方法 MDCK细胞培养后,H1N1型流感病毒感染0、1、3、6、12、24、48 h,在各时间点经RT-PCR反应检测细胞内MTH1基因的相对表达量.结果 甲型H1N1流感病毒感染后0、6、12 h,MTH1基因的表达量与正常对照组差异无统计学意义;感染后1、3 h MTH1基因的表达量显著高于正常对照组;感染后24、48 h表达量显著低于正常对照组.结论 H1N1流感病毒感染细胞的MTH1基因表达的增加,可能增加细胞对DNA氧化损伤的修复能力,在流感发生和防御机制中起到作用.     

姜黄素体外抗流感病毒H1N1、H3N2实验研究

目的:观察姜黄素提取物体外对流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用.方法:用狗肾细胞(MDCK)观察姜黄素体外对A型流感病毒H1N1亚型、A型流感病毒H3N2亚型病毒的直接杀灭作用.结果:姜黄素最大无毒浓度为12.5g/L,对H1N1有效抑制浓度为6.25g/L,对H3N2有效抑制浓度为1.56g/L.结论:姜黄素提取物确有明显的抗H1N1、H3N2复制作用.     

香烟烟雾对巨噬细胞毒性作用的研究

目的　研究香烟烟雾对体外培养的巨噬细胞的毒性作用。方法　采用台盼蓝拒染法测定不同浓度香烟烟雾提取物(CSE)和CSE 盐酸氨溴索作用于体外培养的小鼠巨噬细胞后多个时间点的细胞存活率。结果　各组巨噬细胞培养 30min ,1h和 3h后的细胞存活率均在 95 %以上 ,组间无统计学差异 ;6h和 12h 10 %CSE(体积分数 )组、10 %CSE 氨溴索组、2 0 %CSE组、2 0 %CSE 氨溴索组细胞存活率明显下降 ,与空白对照组、5 %CSE组、5 %CSE 氨溴索组有明显差异 (P <0 0 1) ;2 4h 5 %CSE组、5 %CSE 氨溴索组、10 %CSE组、10 %CSE 氨溴索组、2 0 %CSE组及 2 0 %CSE 氨溴索组细胞存活率均明显下降 ,与空白对照组有显著性差异 (P <0 0 1) ;在 6h、12h和 2 4h ,各CSE浓度组与相应氨溴索干预组之间细胞存活率均无差异 (P >0 0 5 )。结论　香烟烟雾可对巨噬细胞造成致死性的损伤 ,表现出明显的时间 -剂量依赖性 ,盐酸氨溴索并不能阻止高浓度的香烟烟雾对细胞的致死损伤     

烟雾对支气管哮喘大鼠肺组织激活素A 表达的影响

目的 观察烟雾暴露对卵白蛋白（OVA）致敏的急性支气管哮喘（以下简称哮喘）大鼠模 型肺组织中激活素A（ActA）表达的变化,探讨烟雾对哮喘的影响。方法 雄性SD 大鼠32 只,随机分为 4 组：正常对照组、烟雾对照组、哮喘模型组及烟雾哮喘组,分别复制哮喘和烟雾暴露模型。采用苏木精- 伊红染色观察肺组织病理学改变,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot 检测各组大鼠肺组织中ActA mRNA 和蛋白表达的变化。结果 ①哮喘模型组和烟雾对照组ActA mRNA 表达水平高于正常对照组 （P <0.05）,烟雾哮喘组ActA mRNA 表达水平高于哮喘模型组和烟雾对照组（P <0.05）;②哮喘模型组和烟 雾对照组ActA 蛋白表达水平高于正常对照组（P <0.05）,烟雾哮喘组ActA 蛋白表达水平高于哮喘模型组和 烟雾对照组（P <0.05）。结论 烟雾暴露可以提高OVA 致敏的急性哮喘大鼠模型肺组织中ActA mRNA 表达 水平,促进ActA 蛋白的表达,从而加重气道炎症。     

支气管哮喘患者血清免疫球蛋白E和支气管肺泡灌洗液中白介素8测定及意义

目的探讨免疫球蛋白E(IgE)和白介素8(IL-8)在支气管哮喘发病机制中的作用以及在诊疗中的意义。方法选择25例支气管哮喘急性发作患者为哮喘组,另选正常健康体检者16例为对照组。采集所有研究对象血清和支气管肺泡灌洗液(BALF),使用多抗体夹心酶联免疫吸附方法检测2组血清IgE和BALF中IL-8含量,比较2组血清IgE和BALF中IL-8含量,并进行相关性分析。结果哮喘组血清IgE水平和BALF中IL-8水平均较对照组明显增高(P<0.01);哮喘组血清IgE和BALF中IL-8水平之间呈显著正相关(r=0.73,P<0.01)。对照组血清IgE和BALF中IL-8水平之间无明显相关性(r=0.26,P>0.05)。结论IL-8和IgE可能参与了哮喘的发病过程,测定二者的水平,对临床诊断支气管哮喘有一定的应用价值。     

Effects of early bronchoalveolar lavage fluid collected from dogs with smokeinhalation injury on the lungs of rats

Whether early massive bronchoalveolar lavage can remove the harmful substances from the lungs injured with smoke inhalation remains uncertain. This study was designed to observe the effects of early massive bronchoalveolar lavage fluid (BALF) on the healthy lungs in rats. Methods: Mongrel dogs were inflicted with severe smoke inhalation injury.. The injured lungs were lavaged with large amount of normal saline in the first hour after injury and the BALF was collected. The BALF was injected into the healthy lungs of 30 rats (group C) in the dosage of 5 ml/kg. The functions and pathological changes of the lungs were observed 24 h after perfusion with the BALF. The data were compared with those of 23 rats (group B) whose lungs were perfused with the BALF collected from normal dogs and those of 21 rats (group A) whose lungs were perfused with normal saline. Results: The mortality rate 24 h after lung perfusion was higher in group C than in groups A and B. The survivors of group C exhibited fluctuation of respiratory rate (RR), remarkable decrease of PaO2, significantly higher content of lung water, decrease of total static pnlmonary, compliance and pulmonary expansion index, and increasse of inflammatory cytokines in the tissues of lungs. Only slight mechanic obstructive effect on the airway was observed in rats of group A and B. The pathological changes of the lungs of the rats in group C were similar to those of the dogs with actual smoke inhalation injury.. Conclusion: Our findings indicate that the BALF collected from dogs with acute severe smoke inhalation injury, in the early stage after injury injured the normal lungs of rats with the bioactive substances in the BALF. These findings show us that it is a valuable therapeutic procedure to apply massive bronchoalveolar fluid lavage in the early stage after inhalation injury.     

Genotoxicity and reduced heat shock protein 70 in human airway smooth muscle cells exposed to cigarette smoke extract

Cigarette smoke is associated with the development of several diseases, such as chronic ob- structive pulmonary disease （COPD）. The purpose of this study was to investigate genotoxicity and heat shock protein 70 （Hsp70） in human airway smooth muscle cells （HASMCs） exposed to cigarette smoke extract （CSE）. HASMCs was exposed to CSE with different doses for 24 h. The level of 8-hydroxydeoxyguanosine （8-OHdG） was determined by using HPLC-ECD, the DNA damage was ana- lyzed by using comet assay, and apoptosis was examined by using Annexin-FITC/PI staining. The pro- duction of Hsp70 after CSE stimulation was tested. Results indicated that CSE significantly increased the level of 8-OHdG, DNA damage and cell apoptosis, and reduced the production of Hsp70. In par- ticular, levels of Hsp70 were inversely correlated with 8-OHdG, DNA damage and cell apoptosis. It was concluded that cigarette smoke induced genotoxicity and decreased the production of cell protective protein Hsp70, which may contribute to the development of some airway diseases.     

N-乙酰半胱氨酸对香烟暴露小鼠肺组织中 IL-17A 及 IL-22的影响

目的：探讨香烟暴露诱导的肺气肿小鼠肺组织中白介素-17A（IL-17A）以及白介素-22（IL-22）的变化以及戒烟、N-乙酰半胱氨酸（NAC）对 IL-17A 和 IL-22的影响。方法采用香烟暴露法建立小鼠肺气肿模型,给予戒烟及 NAC 灌胃干预。采用 ELISA 法检测肺匀浆及肺泡灌洗液（BALF）中IL-17A 和 IL-22浓度。HE 染色观察肺组织病理学变化。结果香烟暴露可使小鼠肺组织发生肺气肿样变化。与正常对照组相比,肺匀浆及 BALF 中,香烟暴露后 IL-17A 及 IL-22水平升高（P ＜0．05）。与香烟暴露组比较,戒烟及 NAC 灌胃后 IL-17A 及 IL-22水平下降（P ＜0．05）。肺匀浆及 BALF中 IL-22与 IL-17A 的比值逐渐降低。结论 IL-17A 及 IL-22与香烟暴露导致的小鼠肺组织中慢性炎症的发生有关。戒烟及 NAC 处理对吸烟导致的 IL-17A 及 IL-22变化有一定干预作用。     

金刚烷胺修饰物对禽流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

目的：观察金刚烷胺修饰物（NAM）对禽流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,为抗禽流感病毒新药NAM的开发提供实验依据。方法：采用禽流感病毒（H5N1）感染小鼠模型,实验分正常对照组（NC）、模型组（PC）、金刚烷胺阳性药物组（AMA）及NAM 25、50、100和200 mg?kg-1剂量组。测定小鼠胸腺指数、脾指数、刺激指数(SI)、NK细胞杀伤活性和干扰素（IFN）活性。结果： NAM 100 mg?kg-1剂量组平均脾指数高于PC组(P<0.05);NAM各剂量组平均胸腺指数高于PC组(P<0.05)。NAM 25、100和200 mg?kg-1剂量组的刺激指数高于PC组(P<0.05);NAM 100和200 mg?kg-1剂量组刺激指数高于AMA组(P<0.05)。NAM 100和200 mg?kg-1剂量组NK细胞杀伤活性高于PC组(P<0.05);NAM 25、100和200 mg?kg-1剂量组NK细胞杀伤活性高于AMA组(P<0.05)。NAM 50、100和200 mg?kg-1剂量组IFN活性高
于PC组(P<0.01); NAM 50、100和200 mg?kg-1剂量组IFN活性高于AMA组(P<0.05)。结论：NAM可刺激禽流感病毒感染小鼠脾细胞和胸腺细胞增殖,对T淋巴细胞转化功能、NK细胞杀伤活性及IFN免疫活性均有不同程度的促进作用。     

激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道 黏蛋白5AC基因表达的调控作用

目的：了解激活蛋白-1（AP-1）参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白（MUC）5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径。 方法：体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物（CSE）刺激,干预实验用c-Jun 的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（ERK）的活性。以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化ERK（ p-ERK）和磷酸化P38（ p-P38）含量,RT-PCR检测MUC5AC mRNA 表达水平, EMSA测定AP-1的 DNA结合活性。 结果：CSE（1 g/L）刺激后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组（均P＜0.01）,AP-1 的DNA结合活性也明显强于对照组（P＜0.01）,伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜0.01）,而P38含量无明显变化(P＞0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量均显著降低 (P＜0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的 DNA结合活性 (均P＜0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达（均P＜0.05）。 结论：AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1 DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的。     

烟雾凝聚物对人正常支气管上皮细胞中p16转录的抑制作用及其机制

目的：通过体外模拟吸烟过程来检测抑癌基因p16表达的变化,探讨p16基因在吸烟导致肺癌发生过程中的作用。方法：常规正常支气管上皮细胞（HBE）分为实验组和对照组,分别接受烟雾凝聚物和DMSO处理。利用免疫印迹和Realtime RT-PCR分别检测P16蛋白表达和mRNA的转录水平。构建p16的基因组启动子载体,利用荧光素酶分析烟雾凝聚物对其转录活性的影响。结果：不同浓度（0,10,25,50,100 mg•L^-1）的烟雾凝聚物处理HBE后,其p16的mRNA和P16蛋白表达水平明显降低,并且表现出剂量依赖性。大于25 mg•L^-1的烟雾凝聚物能明显抑制P16蛋白表达和mRNA的转录水平,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,其中100 mg•L^-1烟雾凝聚物表现出最大的抑制效应。烟雾凝聚物也能以剂量依赖方式抑制p16启动子的转录活性,大于25 mg•L^-1的烟雾凝聚物能显著抑制p16启动子的荧光素酶活性,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,其中100 mg•L^-1的烟雾凝聚物表现出最大的抑制效应。结论：烟雾凝聚物能够抑制p16启动子的转录活性,进而抑制P16蛋白的表达;P16蛋白表达水平的降低可能是吸烟导致肺癌发生的一种分子机制。