急、慢性吗啡依赖大鼠脑内Gi2蛋白的表达

目的研究吗啡依赖大鼠腹侧背盖区（VTA）、伏隔核（NAc）、前额皮质（PC）、海马及蓝斑（LC）各脑区Ⅱ型抑制性鸟苷酸结合蛋白（Gi2蛋白）的改变,探讨吗啡依赖的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为6组,分别为急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、急性空白对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组和慢性空白对照组。建立吗啡依赖大鼠模型。戒断组腹腔注射纳洛酮5mg／kg,作用30min。断头处死各组大鼠,取出脑组织,进行冰冻切片。用免疫组化技术检测NAc、PC、LC、VTA和海马的相对Gi2蛋白水平。结果急性吗啡依赖组和戒断组与急性空白对照组比较,NAc区Gi2蛋白水平明显降低（P〈0．01）。慢性吗啡依赖组和戒断组与慢性空白对照组比较,NAc区Gi2蛋白水平明显降低（P〈0．01）,LC区Gi2蛋白水平明显升高（P〈0．01）。结论吗啡依赖可引起大鼠脑内Gi2蛋白水平发生改变,但各脑区Gi2蛋白水平的变化并不相同。Gi2蛋白水平改变可能是吗啡耐受和依赖潜在的分子机制。     

核因子-кBp65蛋白在大鼠创伤性骨关节炎中的表达

目的观察实验性创伤性骨关节炎大鼠软骨和滑膜组织中NF-кBp65的表达.方法雄性SD大鼠24只,随机分为对照组(n=12)和造模组(n=12),造模组采用切断膝关节内侧副韧带口部分切除内侧半月板建立大鼠创伤性骨关节炎模型.两周后处死大鼠,采用蛋白质免疫印迹法Western Blot)和免疫组织化学染色法检测大鼠关节软骨和滑膜内的NF-xBp65表达.结果与对照组相比,造模组关节软骨和滑膜中的NF-кBp65表达显著增高.结论NF-кBp65可能在创伤性关节炎的发生过程中发挥作用.     

核因子-κBp65蛋白在大鼠创伤性骨关节炎中的表达

目的:观察实验性创伤性骨关节炎大鼠软骨和滑膜组织中NF-κBp65的表达。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为对照组(n=12)和造模组(n=12),造模组采用切断膝关节内侧副韧带和部分切除内侧半月板建立大鼠创伤性骨关节炎模型。两周后处死大鼠,采用蛋白质免疫印迹法(WesternBlot)和免疫组织化学染色法检测大鼠关节软骨和滑膜内的NF-κBp65表达。结果:与对照组相比,造模组关节软骨和滑膜中的NF-κBp65表达显著增高。结论:NF-κBp65可能在创伤性关节炎的发生过程中发挥作用。     

大鼠弥漫性轴索损伤后海马Homer1蛋白各亚型的表达及意义

目的 研究侧向旋转致大鼠脑弥漫性轴索损伤(DAI)后海马Homer1蛋白各哑型的表达规律及其意义.方法 成年雄性SD大鼠95只,随机分为对照组(NC组,n=10)、假手术组(SOC组,n=10)和DAI组(n=70),DAI组又根据致伤后时间分为1、3、6、12、24、48、72h共7个亚组,应用侧向瞬时旋转的方法建立大鼠脑DAI模型,取海马组织分别行Homer1蛋白各哑型(Homer1a、Homer1b/c)的免疫组化染色、Western blotting和实时荧光定量RT-PCR检测.结果 实验过程中5只动物死亡,其余90只进入结果分析.3种检测方法均发现DAI组神经组织中Homer1a蛋白和mRNA水平自伤后1h开始表达,至24h表达量最高(P＜0.01),持续至72h仍维持较高水平(P＜0.05),NC组该蛋白仅有极少量表达;而Homer1b/c在NC组、SOC组和DAI组均可见明确的阳性表达,但3组的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Homer1a在DAI损伤急性期即于海马组织中表达,Homer1b/c则在损伤前后均有表达.Homer1蛋白的两种亚型可能在DAI中均发挥着要作用,抑制Homer1b/c或促进Homer1a表达可能对DAI损伤后神经元具有保护作用.     

NF-KB和MMP-1在子宫内膜异位症中的表达及其相关性研究

目的：检测核转录因子（NF-kB）及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）在子宫内膜异位症（EM）中的表达,探讨其与EM发病机制的相关性。方法：采用免疫组化SP法分别检测NF—KB及MMP-1在35例正常子宫内膜、48例EM在位内膜及76例EM异位内膜中的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果：NF—KB和MMP-1主要定位于3组内膜腺上皮细胞的胞质中,其中异位内膜表达强度最强,正常子宫内膜的表达强度最弱（P〈0．05）。在位内膜和正常子宫内膜NF—KB和MMP-1的表达强度随月经周期发生一定的变化,分泌期高于增殖期,差异有显著性（P〈0．05）。NF—KB与MMP-1之间在正常子宫内膜、异位内膜和在位内膜中的表达具有正相关性,相关系数分别为0．819,0．884和0．914（P〈0．01）。结论：NF—KB和MMP-1在EM患者的在位及异位内膜的高表达及二者之间的正相关性提示其在EM发病机制中起一定的作用。     

P16、Cyclin D1在外阴鳞状上皮增生和外阴鳞癌中的表达及意义

目的:探讨P16、Cyclin D1在外阴鳞癌发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化SABC法,检测32例外阴鳞状上皮增生、32例VIN、34例外阴鳞癌组织标本中P16、Cyclin D1的表达。结果:与正常皮肤及外阴鳞状上皮增生相比,VIN组织中P16的阳性率降低,Cyclin D1的阳性率升高,差异均有显著意义(P<0.05)。VIN及鳞癌组织中,组织分级越高,P16蛋白缺失、Cyclin D1过表达越明显。结论:P16蛋白缺失与Cyclin D1过表达在外阴鳞癌发生、发展过程中具有重要作用。     

NF-κB和MMP-1在子宫内膜异位症中的表达及其相关性研究

目的:检测核转录因子(NF-κB)及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在子宫内膜异位症(EM)中的表达,探讨其与EM发病机制的相关性.方法:采用免疫组化SP法分别检测NF-κB及MMP-1在35例正常子宫内膜、48例EM在位内膜及76例EM异位内膜中的表达,并对检测结果进行统计学分析.结果:NF-κB和MMP-1主要定位于3 组内膜腺上皮细胞的胞质中,其中异位内膜表达强度最强,正常子宫内膜的表达强度最弱(P <0.05).在位内膜和正常子宫内膜NF-κB和MMP-1的表达强度随月经周期发生一定的变化,分泌期高于增殖期,差异有显著性(P <0.05).NF-κB与 MMP-1之间在正常子宫内膜、异位内膜和在位内膜中的表达具有正相关性,相关系数分别为0.819,0.884和0.914(P <0.01).结论:NF-κB和MMP-1在EM患者的在位及异位内膜的高表达及二者之间的正相关性提示其在EM发病机制中起一定的作用.     

CyclinD1、p21WAF1、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin D1、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系。方法选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析。结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8%、40.5%、65.4%及80.0%,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0%、11.5%、0.0%、6.3%,P<0.005)。相关分析显示,cyclin D1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(P=0.001)呈正相关。生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差。Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关。Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(P=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素。结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值。     

重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定

目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-T easy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达.用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物.对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白.用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性.结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白.Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性.结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用.     

RCAS1蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌中的表达

目的 检测RCAS1在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中的表达,探讨RCAS1在宫颈癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P法,分别检测89例宫颈癌、82例子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及24例正常宫颈组织中RCAS1蛋白的表达.临床分期:Ⅰ期34例,Ⅱ期41例,Ⅲ～Ⅳ期14例;病理分级:G1 37例,G2 28例,G3 24例;病理类型:鳞癌58例,腺癌31例;有盆腔淋巴结转移者36例;肿瘤直径:≥4cm 31例,＜4cm 58例.另取同期因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈组织标本24例作为对照.结果 免疫组化结果显示:正常宫颈组织、CIN Ⅰ级、CINⅡ～Ⅲ级和宫颈癌组织中RCAS1蛋白的阳性表达率分别为0、31.4%、44.7%和77.5%.宫颈癌组与正常宫颈组和CIN各组间比较差异有显著性(P＜0.05);正常宫颈组与CIN组比较差异有显著性(P＜0.05).RCAS1阳性表达率在低分化宫颈癌组显著高于高、中分化癌组(P＜0.01);RCAS1阳性表达率在淋巴结转移组中为94.4%,而在无淋巴结转移组中为66.0%,两者相比差异有显著性(P＜0.01);肿瘤直径≥4cm的宫颈癌组织中RCAS1水平明显高于肿瘤直径＜4cm者(P＜0.05);但RCAS1阳性表达与患者年龄、临床分期及组织学分型无关(P＞0.05).结论 RCAS1表达与宫颈癌的发生、发展密切相关.随着宫颈病变恶性程度的进展RCAS1的表达逐渐增强,RCAS1的过度表达可作为宫颈癌恶性程度和不良预后的重要指标.     

微波辐射对大鼠睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的影响

目的 探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25).辐射组接受30mW/cm2微波辐射5min,分别于辐射后6h,1、3、7、14d处死5只大鼠.对照组不接受辐射,于ld时活杀.采用免疫组织化学及Western blotting检测睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的变化.结果 pCREB、CREM和CBP均主要表达于睾丸生精小管精子细胞核.微波辐射后6h～14d(pCREB在1d时除外),pCREB和CBP蛋白表达明显下调(P＜0.05或P＜0.01),辐射后6h～7d CREM表达亦明显下调(P＜0.05或P＜0.01).结论 pCREB、CREM及CBP表达下调在微波辐射致生精细胞损伤中可能发挥重要作用.     

弥漫性脑损伤细胞外信号调节激酶1/2信号通路的激活及意义

目的探讨弥漫性脑损伤（DBI）时细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路激活特点及特异性阻滞剂U0126对损伤神经元的作用。方法制作大鼠DBI模型，Western blot法检测损伤脑组织磷酸化ERK1／2的表达，免疫组化法检测磷酸化ERK1／2、神经元特异性磷酸烯醇化酶（NSE）表达，透射电镜下观察U0126对损伤神经元的作用。结果DBI后磷酸化ERK1／2表达显著增高，持续高水平表达至72h。U0126剂量依赖性抑制磷酸化ERK1／2表达。U0126组12～24h时相点NSE较DBI组明显增高。透射电镜显示U0126组神经元损伤较轻。结论大鼠DBI后ERK1／2通路被过度和持久激活，阻滞其过度激活可减轻继发性神经元损伤。