RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与直肠癌患者新辅助放化疗疗效的关系

【目的】探讨血清Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)和Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因甲基化程度与直肠癌患者新辅助放化疗(nCRT)疗效的关系。【方法】选取本院收治的109例直肠癌患者为研究对象,均给予nCRT治疗。分析患者治疗效果,根据肿瘤消退程度分级(TRG)标准分为观察组(nCRT敏感,n=73)和对照组(nCRT不敏感,n=36)。收集两组患者年龄、性别、肿瘤距离肛门位置、分化类型、临床分期、淋巴结转移及合并疾病等临床资料,对比两组血清RASSF1A和WIF-1基因甲基化阳性表达率,分析RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与直肠癌患者nCRT疗效的相关性。【结果】两组年龄、性别、肿瘤距离肛门位置、分化类型、临床分期、淋巴结转移、合并疾病构成比及血压、血脂水平相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组血清RASSF1A基因阳性率为16.44%(12/73)、WIF-1基因甲基化阳性率为13.70%(10/73),均低于对照组的41.67%(15/36)和33.33%(12/36),且差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman检验,血清RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与疗效呈负相关(P<0.01)。【结论】RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与直肠癌患者nCRT疗效关系密切,RASSF1A和WIF-1基因甲基化阳性率越高,患者nCRT疗效越低。     

前列腺癌组织中DLC-1启动子甲基化定量检测的HRM方法建立及其应用意义

目的 建立HRM技术定量检测DLC-1启动子甲基化的方法 ,并分析探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌病理参数的相关性.方法 选取89份前列腺癌组织以及10份匹配癌旁组织标本,采用LCM收集肿瘤细胞群,抽提DNA后进行甲基化修饰.以CpGenome Universal Methylated DNA作为100%甲基化样本,以100%非甲基化的健康人外周血DNA作为稀释剂,分别制成100%、80%、50%、30%、10%、0%系列浓度的标准曲线,并进行重复性和灵敏性评价.同时用HRM技术定量检测前列腺癌细胞中DLC-1甲基化水平,探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌患者年龄、PSA水平与前列腺癌TNM的关系.结果 100%、80%、50%、30%、10%、0%甲基化标准品的HRM熔解曲线从右往左依次排列,10份癌旁组织标本、35份前列腺癌组织标本重叠在0%标准曲线上;5份前列腺癌组织标本位于0%～30%区域内,29份位于31%～80%区域内,20份位于81%～100%区域内.HRM技术最低检测限可达10%的甲基化水平,优于MSP检测(30%甲基化水平).DLC-1甲基化水平与前列腺癌患者年龄无明显相关(X~2=3.29,P=0.19),与PSA水平也无相关性(X~2=2.04,P=0.36),但DLC-1甲基化水平与TNM分期显著相关(X~2=9.04,P=0.01),且随TNM分期增高而增高.结论 成功建立的HRM技术定量检测DLC-1甲基化水平的方法 稳定、灵敏、操作简单,DLC-1启动子甲基化有望成为评估前列腺癌TNM的分子指标.     

胃癌组织中RASSF2A基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的:探讨胃癌中RASSF2A基因启动子甲基化特征。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测34例胃癌患者癌组织和癌旁组织RASSF2A基因启动子甲基化情况。结果:胃癌组织RASSF2A基因甲基化发生率为24%,明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF2A基因甲基化与分化程度,转移等无明显相关。结论:RASSF2A基因甲基化是胃癌发生的频发分子事件,可能在胃癌发生起重要作用。     

肺癌患者血浆RASSF1A和BLU基因甲基化检测及临床意义

【目的】探讨肺癌患者外周血血浆中抑癌基因Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）和BLU基因启动子的甲基化状态及其临床意义。【方法】利用巢式甲基化特畀性PCR（nMSP）法检测肺癌患者外周血血浆与正常人血浆中抑癌基因RASSF1A和BLU基因启动子的甲基化状态。【结果】58例肺癌患者血浆样品中分别发现22例（37．93％）RASSF1A基因启动子的异常甲基化和17例（29．31％）BLU基因启动予的异常甲基化,20例正常对照血浆中都未检测到RASSF1A和BLU基因启动子的异常甲基化,差异有显著性（P〈0．01）;但血浆中两基因甲基化检出率与患者性别、肺癌组织学分型及临床分期无明显相关性（P〉0．05）。【结论】利用nMSP法检测外周血血浆中RASSF1A和BLU基因启动子的甲基化,可为肺癌的筛查、早期诊断提供有用的信息。     

ACTL6A在骨肉瘤组织中的表达及其意义

[目的]探讨核内的肌动蛋白样-6a(Actin-like 6A,ACTL6A)在骨肉瘤组织中的表达及其意义.[方法]采用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测ACTL6A mRNA及蛋白在骨肉瘤组织、邻近肿瘤的非瘤骨组织、肺转移结节中的表达水平并比较.[结果]骨肉瘤组织中的ACTL6A mRNA及蛋白表达水平均高于相应的邻近肿瘤非瘤骨组织中的表达水平(P<0.05);Ⅲ期骨肉瘤患者ACTL6A mR-NA及蛋白表达水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);同一患者其肺转移结节、原发骨肉瘤组织、邻近肿瘤的非瘤骨组织中ACTL6A mRNA及蛋白表达水平依次递减(P<0.05).[结论]ACTL6A在骨肉瘤组织呈高表达,且其高表达与肺转移相关,提示ACTL6A表达水平可作为预测骨肉瘤预后的指标.     

p63,p73蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：探讨p63和p73蛋白在乳腺组织的表达情况及其与乳腺癌生物学行为的关系。方法：用免疫组化SP法检测5例正常乳腺组织（对照组）,5例增生乳腺组织（增生组）,15例原位乳腺癌组织（原位组）,60例浸润性乳腺癌组织（浸润组）中p63蛋白、p73蛋白的表达。结果：乳腺良性病变的腺泡和导管周围可见连续的肌上皮围绕,p63阳性;原位组p63染色显示肌上皮呈不连续表达;乳腺癌早期浸润灶及浸润性癌,p63染色显示肌上皮大部分消失或无肌上皮。p73在对照组、增生组、原位组及浸润组中的阳性率分别为0%（0/5）,20.0%（1/5）,33.3%（5/15）和66.7%（40/60）,差异有显著性（P〈0.05）;在乳腺肿瘤组织中,随组织学病理分级的增加、临床分期的进展和腋窝淋巴结的转移,p73表达阳性率则逐渐上升,差异有显著性（P〈0.05）;p63蛋白、p73蛋白表达无相关性。结论：p63、p73在乳腺癌的发生、发展过程中起着重要的作用;二者联合检测可为乳腺癌的早期诊断、及时治疗及预后判断提供必要的理论依据。     

骨肉瘤组织中Survivin、Cox-2的表达及其意义

目的：研究survivin、Cox-2在骨肉瘤中的表达，探讨其在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法：应用免疫组化SP法检测38例骨肉瘤组织、20例骨软骨瘤组织中survivin，Cox-2的表达。结果：65．8％的骨肉瘤组织中survivin的表达阳性，骨软骨瘤组织的表达率为20．0％（P〈0．01）。57．9％的骨肉瘤组织表达Cox-2阳性，显著高于骨软骨瘤组织的表达率（25.0％）（P〈0.05）。Survivin表达上调和Cox-2表达上调与骨肉瘤的临床分期密切相关，survivin的表达与Cox-2的表达密切相关。结论：在骨肉瘤组织中survivin、Cox-2的表达异常，提示它们可能对骨肉瘤的发展起重要作用。     

RASSF2A基因启动子甲基化与肿瘤关系的研究进展

肿瘤抑制基因（TSG）的失活是癌症发病机制的关键因素。TSG失活可能是不可逆的,比如基因缺失或突变;TSG失活也可能通过表观遗传的机制,是可逆的,这为寻找更适合的治疗方法或治疗药物提供了理论基础。CpG 双核苷酸很少出现在人类基因中,但在某些基因的启动子区发现 CpG 保持或高于正常概率,即CpG岛,其甲基化在基因表达的调控上起关键作用。RAS相关区域家族2A（RASSF2A）位于染色体3p21．3,这个区域被证实在一些肿瘤中频繁缺失;其中RASSF2A的表观遗传失活是重要的分子改变。最近的一些研究已陆续阐明了RASSF2A启动子甲基化在肿瘤诊断和预后中的潜在意义,本文对其研究进展综述如下。     

抑癌基因RASSF1A及其甲基化的研究进展

RASSF1A基因位于染色体3p21.3区,是一种新型抑癌基因,多项研究表明它可参与细胞凋亡和多种恶性肿瘤的发生。在多种肿瘤中失活,该基因的失活与其启动子区CpG岛甲基化有关。通过逆转RASSF1A基因甲基化状态使其重新表达,为肿瘤的治疗提供了新思路。     

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.     

Wnt10b在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

[目的]研究骨肉瘤组织中wnt10b蛋白的表达情况,探讨其在骨肉瘤发生发展中的意义.[方法]利用免疫组织化学技术检测15例骨软骨瘤和55骨肉瘤中的wnt10b蛋白的表达并结合患者临床资料分析其临床意义.[结果]①Wnt10b在骨肉瘤中和骨软骨瘤的阳性表达率分别为71.0％(39/55)和26.7％(4/15),骨肉瘤组阳性表达率显著高于骨软骨瘤组,差异有显著性差异(P＜0.05).②在骨肉瘤组织中,Ⅱ期、Ⅲ期骨肉瘤wnt10b阳性表达率分别为75.8％(25/33)和84.6％(11/13)明显高于Ⅰ期的33.3％(3/9),有显著性差异(P＜0.05).而Ⅱ期与Ⅲ期间差异无统计学意义(P＞0.05).在有转移的骨肉瘤中阳性表达率为100％(13/13),在无转移的骨肉瘤中表达阳性率为61.9％(26/42).两者差异有统计学意义(P＜0.05).③在骨肉瘤组织中,wnt10b的表达与患者性别、年龄以及病理组织学分型无关(P＞0.05).[结论]Wnt10b蛋白在骨肉瘤中的发生、发展起重要作用,并且与骨肉瘤的恶性程度有关.     

MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中的表达和临床意义

目的研究骨肉瘤组织中基质金属蛋白酶及其抑制剂(MMP-9、TIMP-1)的表达情况、探讨它们与骨肉瘤侵袭的关系和临床意义,为临床上寻找判断骨肉瘤侵袭性的可靠指标。方法对36例骨肉瘤和15例正常骨组织行免疫组化染色。观察并分析1MMP-9及TIMP-1在骨肉瘤与正常骨组织中的表达;2MMP-9及TIMP-1与骨肉瘤组织学类型及临床分期的关系;3MMP-9及TIMP-1在骨肉瘤中的表达及其相关性。结果MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中的表达率为86.11%和75.00%,二者表达呈正相关(P<0.05);MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中的表达明显高于正常骨组织(P<0.05);MMP-9及TIMP-1与骨肉瘤组织学类型及临床分期无显著相关(P>0.05);骨肉瘤组织中MMP-9阳性表达者肿瘤浸润软组织的比率明显高于阴性表达者(P<0.05)。结论1MMP-9在正常骨组织中呈低表达,而在骨肉瘤中的表达明显上调;2MMP-9可作为骨肿瘤恶性表型的标志,可作为骨肉瘤诊断的辅助指标;3MMP-9是骨肉瘤细胞增殖、侵袭的标志;4MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中二者表达呈正相关。     

晚期非小细胞肺癌组织与血浆EGFR基因表达差异及临床意义

[目的]探讨DNA表皮因子生长受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因在晚期非小细胞肺癌(no-small cell lung cancer,NSCLC)患者组织和血浆中的表达差异及临床意义.[方法]选取2015年3～6月在本院初诊的NSCLC患者65例,提取血浆及组织标本DNA,检测DNA EGFR基因突变情况并比较.[结果]65例患者组织EGFR基因突变检出23例,突变率为35.4％,循环DNA中检出1 2例,突变率为18.5％.以组织标本检测为准,血浆DNA中EGFR基因突变检测的特异性为93.8％;灵敏度为43.5％.在组织标本检测中,44例男性EGFR基因突变率为22.7％;21例女性患者EGFR基因突变率为61.9％,两者比较有统计学差异(P＜0.05).41例吸烟患者EGFR基因突变率为17.1％(7/41);24例不吸烟患者EGFR突变率为66.7％(16/24),两者比较有统计学差异(P＜0.05).41例腺癌患者EGFR突变率为46.3％;24例非腺癌患者EGFR突变率为16.7％,两者比较有统计学差异(P＜0.05).血浆中EGFR基因突变的分布与肿瘤组织检测结果相符,在不同性别、不同吸烟情况及不同病理类型中差异有统计学意义(P＜0.05),在肿瘤分期方面无显著性差异(P＞0.05).[结论]对于晚期NSCLC患者,血浆循环DNA EGFR基因突变检测特异性高、敏感性低,可用于其补充诊断.     

HE4 mRNA在卵巢癌中的表达及临床意义的研究

目的探讨HE4 mRNA表达与卵巢癌临床病理特征关系和临床意义。方法利用RT-PCR方法检测对照组（n=21）、卵巢交界性肿瘤（n=21）和卵巢癌（n=51）组织中HE4 mRNA表达,应用放射免疫法定量测定卵巢癌患者血清CA125含量。结果在卵巢交界性肿瘤和癌组中,HE4 mRNA和血清CA125阳性表达明显高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）,HE4 mRNA阳性表达的特异性明显高于血清CA125（P〈0.05）。在早期卵巢癌中,HE4 mRNA阳性表达的敏感性明显高于血清CA125（P〈0.05）。结论在卵巢癌中HE4 mRNA表达上调,与卵巢癌的发生和病理生物学行为关系密切,可成为区分卵巢良、交界性和恶性肿瘤的重要标志。     

Cox-2和MMP-9在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

目的 观察Cox-2和MMP-9在骨肉瘤组织中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的作用.方法 应用免疫组织化学SP法,检测35例骨肉瘤、14例骨软骨瘤中Cox-2和MMP-9的表达情况,并分析其在骨肉瘤不同病理分级、临床分期中的表达及两者之间的相互关系.结果 Cox-2蛋白在骨肉瘤中阳性表达率为82.9％(29/35),而在骨软骨瘤中阳性表达率为14.3％(2/14),两者比较差异有统计学意义(x2=20.232,P=0.000):MMP-9蛋白在骨肉瘤中阳性表达率为71.4％(25/35);而在骨软骨瘤中阳性表达率为35.7％(5/14),两者比较差异有统计学意义(x2 =5.373,P=0.020).Cox-2和MMP-9在骨肉瘤组织中的表达与Enneking分期、肺转移密切相关,且临床期别越高,二者的表达阳性率越高,且Cox-2蛋白与MMP-9蛋白的表达呈正相关(r=0.384.P=0.023).结论 Cox-2和MMP-9在骨肉瘤组织中均为高表达,提示它们可能对骨肉瘤的发生、发展起重要作用.     

顺铂诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的　研究顺铂 (c DDP)对人骨肉瘤细胞的生物学效应及其作用机制。方法　骨肉瘤细胞经 c DDP处理后 ,用台盼蓝技术法检测 c DDP的 IC50 ,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、TUNEL 及 DNA电泳检测细胞凋亡。结果　c DDP在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制骨肉瘤细胞生长 ,其 IC50 为 1.0 5 μg/ ml± 0 .2 5 μg/ ml。 0 .5～ 2 .0 μg/ mlc DDP处理骨肉瘤细胞后 ,流式细胞仪检测出凋亡峰 ,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征 ,琼脂糖凝胶电泳出现 DNA梯形条带。结论　c DDP在体外可诱导骨肉瘤细胞凋亡 ,这种诱导细胞凋亡的能力是 c DDP疗效的基础 ,在对骨肉瘤的治疗中有着巨大的潜力。     

ROR2在骨肉瘤中的表达及其临床意义

[目的]研究ROR2在骨肉瘤组织中的表达情况,探讨其表达的临床意义.[方法]使用免疫组化方法检测55例骨肉瘤患者和15例骨软骨瘤患者原发灶标本中ROR2表达情况并结合患者临床资料了解其临床意义.[结果]①55例骨肉瘤患者标本中39例ROR2阳性表达,其阳性表达率为70.91%, 15例骨软骨瘤患者标本有3例ROR2阳性表达,阳性表达率为20.00%,两者比较差异有显著性（χ^2 =12.73,P＜0.05）.②在有肿瘤转移的标本中ROR2的阳性表达率为100.00%,而在无转移者标本中ROR2阳性表达率为61.91%,两者比较差异有显著性（χ^2 =5.26,P＜0.05）.③ROR2在骨肉瘤Enneking分期Ⅰ期表达阳性率为22.22%（2/9）,Ⅱ期表达阳性率为72.73%（24/33）,Ⅲ期表达阳性率为100.00%（13/13）.Ⅰ期与Ⅱ期间差异有显著性（χ^2 =5.65,P＜0.05）,Ⅰ期与Ⅲ期间差异有显著性（χ^2 =11.46,P＜0.05）,而Ⅱ期与Ⅲ期间差异无显著性（χ^2=2.84,P〉0.05）.[结论]ROR2蛋白在骨肉瘤组织中有较强表达并可能在骨肉瘤的发生发展中在一定程度上影响其生物学行为.     

多种肿瘤标记物检测在肺癌诊断中的意义

【目的】探讨多种肿瘤标记物检测在肺癌诊断中的应用价值。【方法】本院接受治疗的50例肺癌患者为观察对象,同时选取48例肺良性病变者（肺良性病变组）以及42例健康体检者作为对照。观察三组对象血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖蛋白抗原 CA19‐9（ CA19‐9）、CA125和神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平的差异及不同临床特征肺癌患者肿瘤标志物水平的差异。【结果】三组 CEA 、CA19‐9,CA125,NSE 等肿瘤标志物水平由高到低分别为肺癌组、肺良性病变组和健康对照组,且各组之间相比较差异具有显著性（P ＜0．01）;分化程度低、肿瘤直径≥5 cm 、有远处转移的肺癌患者其 CEA 、CA19‐9、CA125和 NSE 水平较高（P ＜0．05）,而不同年龄、性别的肺癌患者上述指标相比较差异无显著性（P ＞0．05）。【结论】患者血清 CEA 、CA19‐9,CA125,NSE 水平与肺癌的分化程度、转移情况密切相关,其检测结果有利于肺癌的早期发现和治疗,具有较好的应用价值。     

p73蛋白在前列腺癌中的表达及意义

目的：探讨p73在前列腺癌中表达的意义。方法：以免疫组化法检测67例前列腺癌及12正常前列腺组织p73和p53的表达。结果：12例正常前列腺组织均无阳性表达，前列腺癌组织中p73表达的阳性率为40．3％（27／67），27例p73阳性表达的前列腺癌组织中均有p53蛋白过度表达，p73阳性表达率与前列腺癌组织病理分级、临床分期及患者5年生存明显 相关（P＜0．01）。结论：p73在前列腺癌的发生及癌细胞分化过程中起重要作用，对前列腺癌的预后有参考意义。     

多肿瘤标志物蛋白芯片在以占位病变为首发表现的良恶性鉴别诊断中的临床价值

目的探讨多肿瘤标志物蛋白芯片在以占位病变为首发表现的良恶性鉴别价值。方法多肿瘤标志物蛋白芯片技术,检测以占位病变为首发表现的初诊病例血清中12项肿瘤标志物,并与病理结果进行对比分析。结果癌性病变与良性病变比较,甲胎蛋白（AFP）、铁蛋白（SF）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原CA125、CA153和CA199等的血清水平升高,且AFP、CEA和CA125的阳性率也明显升高;癌性病变中,仅男性患者SF血清水平和阳性率较肉瘤病变显著升高;肉瘤病变中,仅女性患者SF血清水平和阳性率较良性病变显著升高。结论多肿瘤标志物蛋白芯片对以占位病变为首发表现的良恶性病变有鉴别意义。