槲皮素对PDGF诱导的NIH 3T3细胞增殖的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素对ＰＤＧＦ诱导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖的影响。方法采用ＭＴＴ比色法、Ｇｉｅｍｓａ染色、流式细胞术（测定ＤＮＡ含量的变化及增殖细胞核抗原的表达）、及ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析技术对ＰＤＧＦ诱导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖进行分析。结果与对照组相比，槲皮素处理可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖，而且主要是细胞周期Ｓ期抑制，ＷｅｓｅｔｅｒｎＢｌｏｔ分析提示槲皮素可明显地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞酪氨酸磷酸化程度。结论酪氨酸蛋白激酶抑制剂可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖，可能是通过抑制酪氨酸蛋白激酶活性来完成。     

V79—6TG^s和V79—6TG^r细胞对诱变剂敏感性比较

为探讨细胞先前发生的突变对诱变剂敏感性的影响，在Ｖ７９细胞基因突变试验中用６－ＴＧ选择了抗６－ＴＧ的突变细胞。应用ＳＣＥ和微核试验比较了Ｖ７９－６ＴＧｓ（野生型细胞）和Ｖ７９－６ＴＧｒ（突变型细胞）对ＭＮＮＧ，ＭＭＳ和ＥＭＳ的敏感性。结果表明，Ｖ７９－６ＴＧｒ细胞对上述３种烷化剂较Ｖ７９－６ＴＧｓ敏感。结论指出，Ｖ７９－６ＴＧｒ细胞对诱变剂的敏感性增高可能与先前发生的ｈｐｒｔ基因突变有关。     

α粒子体外诱发叙利亚地鼠胚胎细胞恶性转化

叙利亚地鼠胚胎细胞经２００ｃＧｙα粒子（５．３４ＭｅＶ）照射后连续传代．传至２０代时，用低密度培养法分离出１１个克隆，采用多项指标观察其生物学特性的变化，最后经ＮＩＨ３Ｔ３细胞转染和裸鼠接种试验证实，第２０代细胞和Ｔ４克隆细胞具有恶性转化细胞的特征．     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化及细胞遗传学改变

利用原代大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞研究Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）的致转化作用，并对转化细胞进行细胞遗传学研究．结果表明：增殖旺盛细胞（ＥＧＶ）集落是ＲＴＥ细胞体外转化最早期的特征，ＥＧＶ转化频率与ＭＮＮＧ剂量呈明显的剂量反应关系．从０．３ｍｇＬ－１ＭＮＮＧ剂量组分离到２个ＥＧＶ集落，经消化，传代形成了永生化的细胞系（ＲＴＥＳ１，ＲＴＥＳ２），ＲＴＥＳ１为多倍体核型，２号和７号染色体数目增加至４个且呈高频发生（１００％）；ＲＴＥＳ２呈二倍体核型．电镜结果证实转化细胞来自大鼠气管上皮组织．以上结果提示，原代ＲＴＥ细胞体外培养模型是研究致癌物定量及致癌机理的理想模型系统．     

稀土化合物对MNNG致穿梭质粒pSP189突变的影响

为探讨稀土抗诱变作用机理，本研究以穿梭质粒ｐＳＰ１８９，经具致癌作用的烷化剂甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）或ＭＮＮＧ加柠檬酸稀土同时处理后，转染猴肾ＶｅｒｏＥ６细胞，从细胞中回收的质粒转化大肠杆菌ＭＢＭ７０７０。结果表明，ＭＮＮＧ浓度在１．５～６．０μｇ／ｍｌ范围，突变率明显的高于溶剂对照。稀土浓度分别为１０，２０及４０μｇ／ｍｌ与３μｇ／ｍｌＭＮＮＧ同时处理质粒，发现突变率分别为１５．２×１０－４、１０．０×１０－４及１２．７×１０－４，明显低于ＭＮＮＧ单独处理时的２５．１×１０－４，推测稀土可能阻断ＭＮＮＧ引起的Ｇ．Ｃ→Ａ．Ｔ转换，保护质粒ｐＳＰ１８９的靶基因ＳｕｐＦｔＲＮＡ免受损伤或影响某些基因表达。     

稀土化合物对 MNNG 致细胞转化的抑制作用

稀土化合物对ＭＮＮＧ致细胞转化的抑制作用崔明珍杨华赵素娟李申德１（北京市劳动卫生职业病防治研究所，北京１０００２０；１中国医学科学院肿瘤研究所，北京１０００２１）为探讨稀土对肿瘤防治的可能性，选用了农牧养殖业应用有代表性的硝酸稀土（ＲＥＮＯ３）和柠檬...     

青石棉诱发BALB／c－3T3细胞恶性转化

用国产青石棉染毒ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞７２ｈ后继续培养５ｗｋ，观察其恶性转化．试验结果表明，从１．０μｇ·ｃｍ－２剂量组开始转化率比阴性对照组增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系．将各剂量组转化灶的细胞分别作软琼脂生长试验，结果均有细胞增殖成克隆；将２０μｇ·ｃｍ－２剂量组－转化灶的细胞分别接种至裸鼠皮下，ｗｋ４即形成接种部位包块，所有包块经病理组织学检查证实为纤维肉瘤．本研究首次证明青石棉可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞恶性转化．     

青石棉诱发BALB／c－3T3细胞恶性转化

用国产青石棉染毒ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞７２ｈ后继续培养５ｗｋ，观察其恶性转化．试验结果表明，从１．０μｇ·ｃｍ－２剂量组开始转化率比阴性对照组增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系．将各剂量组转化灶的细胞分别作软琼脂生长试验，结果均有细胞增殖成克隆；将２０μｇ·ｃｍ－２剂量组－转化灶的细胞分别接种至裸鼠皮下，ｗｋ４即形成接种部位包块，所有包块经病理组织学检查证实为纤维肉瘤．本研究首次证明青石棉可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞恶性转化．     

低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱα mRNA表达水平的影响

利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·Ｌ－１ＭＮＮＧ处理２．５ｈ后，ＨｅＬａ细胞ＰｏｌβｍＲＮＡ水平在６－２４ｈ内升高约１倍，而Ｐｏｌα，δ，ε及ＴｏｐＩαｍＲＮＡ水平则无明显改变．提示ＰｏｌβｍＲＮＡ水平改变可能参与ＭＮＮＧ诱发细胞遗传不稳定的发生．     

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人胃腺癌SGC7901细胞程序化死亡并降低c-myc基因的表达

目的：探讨Ａｓ２Ｏ３对胃腺癌ＳＧＣ７９０１细胞系的生物学效应及机制。方法：通过ＭＴＴ还原法检测Ａｓ２Ｏ３对该细胞系存活率的影响,从光学显微镜形态观察,流式细胞仪分析,ＤＮＡ凝胶电泳,细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ）进行细胞凋亡的检测。半定量ＲＴＰＣＲ检测基因表达。结果：Ａｓ２Ｏ３处理ＳＧＣ７９０１细胞后,细胞的存活率明显降低,光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞,流式细胞仪测定细胞周期的Ｇ１期前有亚２倍体的凋亡峰,ＤＮＡ凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ有规律断裂形成的梯状图谱,细胞凋亡原位检测发现ＤＮＡ的断裂,并降低细胞ｃｍｙｃ基因的表达。结论：Ａｓ２Ｏ３能诱导人胃腺癌ＳＧＣ７９０１细胞程序化死亡并可能通过降低ｃｍｙｃ基因的表达。     

Chemopreventive effect of punicalagin, a novel tannin component isolated from Terminalia catappa, on H-ras-transformed NIH3T3 cells

Terminalia catappa and its major tannin component, punicalagin, have been characterized to possess antioxidative and anti-genotoxic activities. However, their effects on reactive oxygen species (ROS) mediated carcinogenesis are still unclear. In the present study, H-ras-transformed NIH3T3 cells were used to evaluate the chemopreventive effect of T. catappa water extract (TCE) and punicalagin. In the cell proliferation assay, TCE and punicalagin suppressed the proliferation of H-ras-transformed NIH3T3 cells with a dose-dependent manner but only partially affected non-transformed NIH3T3 cells proliferation. The differential cytotoxicity of TCE/punicalagin on the H-ras-transformed and non-transformed NIH3T3 cells indicated the selectivity of TCE/punicalagin against H-ras induced transformation. TCE or punicalagin treatment reduced anchorage-independent growth that could be due to a cell cycle arrest at G0/G1 phase. The intracellular superoxide level, known to modulate downstream signaling of Ras protein, was decreased by punicalagin treatments. The levels of phosphorylated JNK-1 and p38 were also decreased with punicalagin treatments. Thus, the chemopreventive effect of punicalagin against H-ras induced transformation could result from inhibition of the intracellular redox status and JNK-1/p38 activation.     

砷致癌机制的细胞分子生物学研究

目的　探讨砷致癌的细胞分子生物学机制。方法　建立砷诱导NIH3T3细胞转化模型。测定细胞液中谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽转移酶 (GST)和谷胱甘肽还原酶 (GR)水平 ,通过NorthernBlot测定GR和谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx)的基因表达。结果　NIH3T3细胞在 0 1 μmol/LAs(Ⅲ )诱导的 1 1 0d后发生了细胞生物学改变 ,由体外有限传代变为无限传代 ,在半固体琼脂上可以每千个细胞形成 60个集落。GR和GST活性显著增高。结论　建立了可行的砷诱导体外细胞转换的模型 ,提出了在引起细胞转化的机制中GSH的水平的下降起了重要的作用 ,而GST和GR蛋白的上升也与此机制有关。     

蚯蚓蛋白对NIH3T3细胞的促进增殖作用研究

目的探讨蚯蚓蛋白(EFP)对NIH3T3细胞的促进增殖作用。方法 MTT法测定EFP对大鼠成纤维细胞(NIH3T3)的促进增殖作用;细胞划痕法测定EFP促进NIH3T3细胞划痕创面愈合作用;测定NIH3T3细胞培养液中胶原降解产物羟脯氨酸的含量。结果 EFP具有促进NIH3T3细胞的增殖作用,促进划痕创面愈合作用,增加了NIH3T3细胞培养液中羟脯氨酸的含量。结论 EFP具有促进NIH3T3细胞增殖和划痕创面愈合作用。     

玻璃纤维诱导的转化细胞活化癌基因的研究

用玻璃纤维处理BALB/C3T3细胞,使细胞发生转化,从转化细胞中抽提DNA用以转染NIH3T3细胞,结果被转染的细胞亦发生转化。用~(32)P标记的Ha-ras癌基因作探针,通过斑点杂交,征明玻璃纤维诱发的BALB/3T3转化细胞中,Ha—ras的原癌基因被激活。     

携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3 T3细胞中的表达

目的：构建单纯LIM蛋白3（LMO3）的逆转录表达载体,并观察其在 NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组：以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹（ Western blot）法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106 cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。     

岗田酸促癌作用过程中对Balb/c 3T3细胞凋亡的影响

目的初步探讨促癌物岗田酸(OA)在促进Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响及其分子机制。方法以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为启动剂,OA为促癌剂,建立Balb/c 3T3细胞转化模型。台盼蓝染色法检测OA的细胞毒性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,小鼠毒理基因芯片分析OA促癌作用过程中的基因表达变化,同时采用荧光定量RT-PCR方法验证部分基因的表达情况。结果MNNG 1 mg.L-1启动后,7.8μg.L-1OA持续处理能促进Balb/c3T3细胞的转化。OA处理3,5和7 d后细胞存活率降低,同时细胞凋亡率显著升高;基因表达谱分析显示,Bnip3,Cycs和caspase3等细胞凋亡相关基因以及Gstp2,Txn1和Prdx1等抗氧化基因的表达发生明显改变。RT-PCR检测显示OA处理3,7 d时,SPP1和Txn1基因的表达变化与芯片检测结果相似。结论OA在促癌过程能诱导Balb/c 3T3细胞凋亡,影响线粒体凋亡通路相关基因和抗氧化基因的表达。     

Cadmium affects genes involved in growth regulation during two-stage transformation of Balb/3T3 cells

Cadmium (Cd), a carcinogenic metal in human and rodents, has been shown to transform cells in vitro. However, the carcinogenic mechanisms of Cd as a mutagen and/or promoter are not well clarified. We already reported that CdCl2 in a range of 1.5 approximately 360 ng/ml enhanced transformation of Balb/3T3 A31 cells induced by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG, 0.1 microg/ml) in a dose-dependent manner (Fang et al., Toxicol. In Vitro 15(3) (2001a) 51-7). In previous study, we observed that Cd stimulated cell proliferation on MNNG-initiated cells through inactivation of p53 and p27 and increase of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression after 24 h treatment (Fang et al., Toxicology 163 (2001b) 175-84). The aim of this study is to further elucidate the long-term effect of Cd in terms of cell cycle control gene expressions during the promotion stage of in vitro two-stage transformation. For the purpose, we determined the expression levels of the genes involved in growth regulation, such as p53, p27, c-myc, mdm2, cyclins D1 and B1, CDK4, and PCNA in the cells treated with Cd for 14 days after MNNG-initiation. In MNNG+CdCl2 group, cells apparently expressed cellular tumor antigen p53 mRNA, but did not express the wild-type p53 protein; the protein and mRNA levels of p27 were reduced apparently in the cells of MNNG+CdCl2 group compared to the cells of control and MNNG group. In addition, the protein levels of cyclin D1, CDK4, PCNA, c-myc, and mdm2, and cyclin B1 mRNA level were higher in MNNG+CdCl2 group than control and MNNG group. Together with previous data (Fang et al., Toxicology 163 (2001b) 175-84), our results indicated that during the transformation process of MNNG-treated cells, Cd may activate oncogenes such as c-myc, mdm2, and cellular tumor antigen p53, inhibit the tumor suppressor genes such as wild-type p53 and p27, and consequently accelerate the proliferation of initiated cells. This work firstly demonstrates that Cd affects the genes involved in growth regulation on initiated cells during the promotion stage of in vitro cell transformation.