MAPK信号转导途径在Mtb-Ag激活的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用

目的：探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法：用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增，并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞；用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562和Raji的细胞毒活性，并观察MEK／Erk特异性抑制剂PD98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580，对细胞毒活性的阻断作用：用流式细胞仪检测肿瘤细胞诱导γδT细胞上CD69的表达，并观察PD98059和SB203580对CD69表达的抑制作用。结果：新鲜分离的PB-MC，用Mtb-Ag刺激培养第10天，用磁珠阳性法分离的细胞中γδT细胞的比率，分别为3．56％、74．63％和98．20％。PD98059可抑制γδT细胞的杀瘤活性，且对γδT细胞杀伤Fas低表达的K562细胞的抑制率(39．27％)高于对γδT细胞杀伤高表达Fas的Raji细胞的抑制率(26．58％)。PD98059还能明显抑制肿瘤细胞诱导γδT细胞表达CD69；而SB203580对γδT细胞的杀瘤活性和肿瘤细胞诱导的CD69的表达均无影响。结论：MAPK途径中的Erk通路(而不是p38通路)参与了γδT细胞对肿瘤细胞细胞毒活性的启动，且可能对γδT细胞的颗粒外吐作用较大，而对Fas／FasL介导的细胞毒活性的作用较小。MAPK途径的Erk通路可能还参与肿瘤细胞诱导γδT细胞的活化。     

Gardiquimod增强人γδT细胞杀伤肿瘤细胞的研究

目的研究Toll样受体7激动剂(Gardiquimod)对人γδT细胞杀伤肿瘤作用的影响。方法以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的Gardiquimod处理γδT细胞和肺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖情况。LDH法检测Gardiquimod处理后γδT细胞对A549的杀伤活性;流式细胞术检测处理前后γδT细胞上CD107a、穿孔素和颗粒酶的表达情况。结果 Gardiquimod在5.0~0.31μg/ml浓度可明显促进γδT细胞增殖,同时抑制A549增殖。Gardiquimod处理γδT细胞后,杀伤A549能力明显增强,且CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达显著升高,与对照组相比,有统计学差异(P<0.05)。结论 Gardiquimod通过增高γδT细胞上的CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达来增强其杀伤肿瘤作用。     

辣椒素对人γδT细胞杀伤人骨肉瘤HOS细胞的影响

探讨辣椒素对人γδT细胞体外增殖及杀伤骨肉瘤细胞的影响及作用机制。分离健康人PBMC,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的DMEM-F12完全培养基中诱导培养γδT细胞。不同浓度的辣椒素作用于γδT细胞48h后,CCK-8法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达,用LDH释放法检测各组γδT细胞对骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性。结果显示,培养7d时各组γδT细胞纯度达到了(85.33±6.07)%。浓度为3.2~50μmol/L的辣椒素能显著促进γδT细胞的增殖,在浓度为25μmol/L时其穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达均显著高于对照组,且对人骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性显著增强。以上结果提示辣椒素在体外能通过促进γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达上调显著增强其抗骨肉瘤细胞活性。     

双氢青蒿素对γδT细胞杀伤SW1990细胞的增强作用

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人外周血γδT细胞体外增殖及抗肿瘤活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.不同浓度的DHA作用于γδT细胞4δ h后,MTT法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达,用CCK-8试剂盒检测各组γδT细胞对SW1990细胞的体外杀伤效应.结果 培养8d时各组γδT细胞纯度达到了75.46％ ±5.32％.浓度为50～100μmol/ml的DHA能显著促进γδT细胞的增殖.DHA处理后γδT细胞杀伤胰腺癌SW1990细胞能力及其穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达均显著高于对照组.结论 DHA可增强γδT细胞抗肿瘤活性,其机制可能与其促进γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达上调有关.     

γδT细胞的生物学意义

<正>T淋巴细胞表面可分别表达两种与CD3分子相关联的T细胞抗原受体(T cell re-ceptor,TCR):由α链和β链(TCRαβ)或γ链和δ链构成的异质二聚体.人们一直对αβT细胞的结构和功能研究予以很大程度上的关注,而对于γδT细胞研究投入要少些.主要原因可能是人们认为TCRγδ细胞是一个外周淋巴细胞库中的数量较小的亚群,不大可能在免疫应答中起主要作用.γδT细胞约占正常人外周血淋巴细胞总数的3%～10%,在其表面表达CD3分子,但绝大多数不表达CD4及CD8分子.然而在长期进     

白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1116细胞的影响及机制研究

目的 观察白藜芦醇作用前后γδT细胞对结肠癌SW-1116细胞杀伤活性的变化,并探讨其发生的机制。方法 异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的白藜芦醇作用于γδT细胞和结肠癌SW-1116细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对γδT细胞及结肠癌细胞的生长的影响;流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇作用前后γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达;乳酸脱氢酶( LDH)释放法检测白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1l16细胞活性的影响。Western blot检测药物作用前后γδT细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的活性的变化。结果 白藜芦醇在0.39 ～3.125μmol/L时对γδT细胞的生长具有促进作用,对结肠癌SW-1116细胞作用不明显;经白藜芦醇诱导后γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达显著高于对照组(P＜0.05);对结肠癌SW-1116细胞的杀伤活性也显著高于未诱导组(P＜0.05);经浓度为0.1～10 μmol/L白藜芦醇作用的γδT细胞的p-ERK1/2表达较对照组增加(P＜0.05)。结论 白藜芦醇能够促进γδT细胞的增殖,并增强其对结肠癌SW-1116细胞的杀伤能力,其机制可能与上调γδT细胞表面的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达及活化细胞外信号调节激酶等有关。     

γδT细胞

一小部分T细胞的受体不是由α和β多肽链构成的“常规”T细胞受体(TCRαβ),而是分别由γ和δ链取而代之(TCRγδ)。TCRγδ能够识别抗原。出现在T细胞个体发生的早期。在机体的某些部位,如小鼠的皮肤和肠道TCRγδ占优势,提示γδT细胞可能在抗感染的第一线起着防御作用γδT细胞能分泌淋巴因子,并具有细胞毒活性。由于MHC的非限制性以及CD_4、CD_8两阴性γδT细胞的发现,表明其激活过程可能与已知的αβT细胞不同。结核杆菌抗原能够优先激活γδT细胞,提示γδT细胞可能有一种特异的功能。γδT细胞的数量在许多疾病中稍有增加,但到目前的研究还未能证实γδT细胞有病原性作用。     

根皮素对人γδT细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及机制探讨

目的:探讨根皮素对人γδT细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制。方法:IPP法扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的根皮素作用于γδT细胞及胃癌SGC-7901细胞48小时后,MTT法检测γδT细胞及SGC-7901细胞的生长曲线,FCM检测γδT细胞PFP及GraB的表达;LDH释放法检测γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;Western blot检测γδT细胞中Wnt3a的表达情况。结果:IPP作用10天后,γδT细胞比例由3.12%增加到79.6%。与对照组比较,浓度2.35~18.75μg/ml的根皮素作用后γδT细胞的增殖率显著提高(P<0.05),75μg/ml根皮素对SGC-7901细胞生长抑制率显著提高(P<0.05),且2.35~75μg/ml根皮素作用后的γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05),γδT细胞中PFP、GraB及Wnt3a的表达较对照组显著增加(P<0.05)。结论:根皮素能够增强γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤作用,其机制可能与根皮素促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞PFP、GraB表达及活化Wnt信号通路有关。     

γδT细胞的抗原识别机制

Ｔ细胞表面表达两类抗原受体（ＴＣＲ）：ＴＣＲαβ和ＴＣＲγδ。ＴＣＲαβ可特异地识别由抗原呈递细胞（ＡＰＣ）表面Ⅰ类或Ⅱ类ＭＨＣ分子呈递的抗原肽，而ＴＣＲγδ则主要以ＭＨＣ非限制方式识别各类抗原。最近对ＴＣＲγδ所识别的抗原类型及方式进行了较为深入的研究，本文就其进展作一述评。１　ＴＣＲγδ的多样性和分布特点提示其抗原识别的特殊性　　同ＴＣＲαβ和免疫球蛋白（Ｉｇ）类似，ＴＣＲγδ基因由重组的Ｖ、Ｄ、Ｊ和Ｃ区组成。虽然γ、δ位点的Ｖ区多样性不及α和β，但其连接区多样性则使ＴＣＲγδ存在甚至超过Ｔ…     

γδT细胞杀肿瘤细胞过程中溶酶体运动及肌动蛋白纤维、T细胞受体重排特征研究

目的观察γδT细胞溶解肿瘤靶细胞过程中溶酶体运动特征，了解T细胞受体、肌动蛋白纤维在效应，靶细胞接触区域的分布特征，探讨TST细胞抗肿瘤生物学活性的可能机理。方法Lysotracker Red-DND99标记的TST细胞与人恶性黑色素瘤MeWo细胞共同培养，激光共聚焦显微镜实时观察御细胞杀伤肿瘤细胞过程中溶酶体运动过程及其特点。TST细胞与MeWo细胞共同培养后甲醛固定，以rhodsmine phalloidin标记肌动蛋白纤维或anti-TCRδ1-FTTC抗体标记T细胞受体，激光共聚焦显微镜观察TST细胞及肿瘤细胞之间免疫突触形成特征。结果TST细胞可快速识别并集聚于肿瘤细胞周围。在与肿瘤细胞直接接触的10min内，将胞内溶酶体成分“倾吐”于肿瘤细胞后随之离开。肿瘤细胞受大量TST细胞攻击后约60min，出现细胞膜皱缩、变圆，约80min死亡。在上述效应，靶细胞接触作用过程中，肌动蛋白纤维及T细胞受体均匀分布于TST表面，不出现在效应，靶细胞接触区域富集现象。结论TST细胞通过与肿瘤细胞直接接触，释放其细胞内溶酶体内含物直接杀伤肿瘤细胞。与细胞毒性T淋巴细胞不同，TST细胞与肿瘤细胞之间不形成典型的免疫突触。     

γδT细胞在疾病中的作用

γδT细胞是皮肤表皮内淋巴细胞和粘膜组织上皮内淋巴细胞的主要成分之一,为非特异性免疫细胞。活化的γδT细胞具有较强的杀伤活性,具有抗感染、抗肿瘤作用;γδT细胞还可以维持免疫耐受,调节免疫应签,异常可导致自身免疫性疾病的发生。因此尽管γδT细胞在人类庞大复杂的免疫体系中数量较少,但却具有不可替代的重要功能。     

人γδT细胞表型与功能特征的探讨

目的比较观察人外周血PBMCs和CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能特征,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离正常人PBMCs及脐带血CBMCs,检测表面分子的表达。PMA+Ionomycin刺激PBMCs或CBMCs后,利用流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生以及初始/记忆细胞标记的表达。结果与αβT细胞相比,γδT细胞高表达CD45RO,低表达CD25和CCR7;与CBMCs中γδT细胞相比,PBMCs中γδT细胞表达CD45RO升高,CD45RA与CD25降低。细胞因子表达的结果表明,与αβT细胞相比,γδT细胞分泌大量IFN-γ和TNF-α,较少分泌IL-2,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA-CD62L-CCR7-;与PBMCs中γδT细胞不同,体外刺激CBMCs中γδT细胞后,表达IFN-γ数量较低,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA+CD62L-CCR7-/+。结论PBMCs与CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能均存在差别,记忆性γδT细胞的增加可能与其活化和免疫应答的作用相关。     

肝脾γδT细胞淋巴瘤

Ｔ淋巴细胞受体 (Ｔ ｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＣＲ)存在两种异性二聚体 ,即αβ和γδ ,它们的表达与细胞表面的ＣＤ3蛋白复合物有关。用分子生物学和免疫学技术来识别这两种独特的ＴＣＲ ,可将Ｔ细胞分成两个不同的亚型[1 3 ] 。早在 1981年Ｋａｄｉｎ等[4] 首次报道了 2例“噬血细胞性Ｔγ淋巴瘤” ,主要表现为肝脾肿大 ,肿瘤性淋巴细胞在脾红髓和肝窦中浸润 ,并有吞噬红细胞的现象。 1986年Ｇａｕｌａｒｄ等[5] 又报道了 3例发生在肝脏的特殊外周Ｔ细胞淋巴瘤 ,其肿瘤细胞表面γδＴＣＲ阳性。之后 ,国外相继进行了报道[1,6 15] ,患…     

γδT细胞与病毒免疫

γδT细胞是指在T细胞受体上表达γ和δ链的一类T细胞亚群，已发现其具有抗肿瘤、抗感染、免疫调节等多种生物学活性。在对病毒感染的免疫中发挥重要的免疫监视作用。本文主要从病毒感染后机体内γδT细胞变化，γδT细胞抗病毒的机制，基于γδT细胞免疫的研究和临床应用等几个方面进行综述。     

γδT细胞的发育与其信号传导

γδT细胞在机体的天然与获得性免疫中起重要作用，其发育与组织分布、生物学功能密切相关。本文主要综述了γδT细胞在不同组织中的发育及其信号传导方面的研究进展。     

病毒灭活血浆对人γδT细胞功能影响的实验研究

目的探讨病毒灭活血浆对人γδT细胞生长和功能的影响。方法取人外周血γδT细胞,用异戊烯焦磷酸法体外扩增。用10%病毒灭活血浆和10%新鲜冰冻血浆分别培养γδT细胞,分别检测培养前、培养5d和10d后的扩增倍数;用流式细胞术分别检测培养10d后的γδT细胞表面标记,即颗粒酶B、穿孔素和CD107a的表达等。结果 10%新鲜冰冻血浆和10%病毒灭活血浆对人γδT细胞培养10d时,由扩增前的3.12%增加到80.46%和81.18%,5d和10 d的细胞增殖倍数分别为11.65±2.11、38.21±1.57和11.77±2.13、37.11±1.81,CD107a、穿孔素、颗粒酶B含量表达分别为90.54%±1.99%、23.47%±3.18%、35.47%±2.42%和90.22%±2.21%、22.58%±3.41%、34.63%±2.22%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论病毒灭活血浆在一定浓度下对人γδT细胞生长、增殖,颗粒酶B、穿孔素和CD107a的表达与新鲜冰冻血浆无明显差异。     

人外周血致敏型γδ+T细胞在体外的扩增

建立一种人外周血γδ＾＋Ｔ细胞体外选择性扩增的模式：即在ＩＬ－２的作用下,不需要γδ＾＋ＴＣＲ特异性配体的刺激,可使一类个体体外培养的外周血单个核细胞中的γδ＾＋Ｔ细胞发生优先增殖,逐渐成为培养细胞的主要群体。方法将１０个γδ＾＋ＴＣＲ的个体ＰＢＭＣ分别在含３＊１０＾５Ｕ／ＬＩＬ－２培养液中培养１－２ｗｋ后,其中的γδ＾＋Ｔ细胞的比率可达３８％－７８％。结果对３个宋的个体的坟增帮ＲＴ－ＰＣＲ分析表