Fas通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活调控肝癌细胞增殖

目的 探究肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas)调控肝癌细胞株增殖的潜在分子机制。方法 收集正常肝细胞LO2和肝癌细胞株Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和SK-hep1,实时荧光定量PCR法检测Fas基因表达,运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Fas基因表达与肝癌的关系,设计特异性靶向Fas的siRNA,敲低肝癌细胞中Fas基因的表达,通过噻唑蓝(MTT)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,双荧光素酶实验检测β-连环蛋白(β-catenin)介导的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子(LEF)转录活性,蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-catenin信号通路下游靶基因八聚体结合转录因子3/4(Oct3/4);G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1);血管内皮生长因子(VEGF);B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi)的表达。结果 TCGA肝癌样品中Fas基因表达谱结果显示,肝癌组织Fas ...     

MAGEA1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进恶性黑色素瘤的转移

背景 恶性黑色素瘤是源自黑色素细胞的恶性肿瘤,恶性程度高.其中转移性黑色素瘤患者的5年生存率不足10％,且发病率逐渐增加.黑色素瘤相关抗原家族A1(melanoma?associated?antigen?family?A1,MAGEA1)是MAGE-A基因亚家族的成员,在多种恶性肿瘤中均有表达,但其在恶性黑色素瘤中的表...     

晚期糖基化产物通过RAGE/TLR4/STAT1信号通路诱导巨噬细胞M1型极化

目的 探讨晚期糖基化产物(AGEs)诱导巨噬细胞发生M1型极化的分子机制.方法 提取小鼠骨髓细胞并分离培养原代M0型巨噬细胞.分别用Toll样受体4(TLR4)及AGEs受体(RAGE)特异性抑制剂TAK-242及FPS-ZM1对获得的M0型巨噬细胞进行预处理.制备AGEs并以2.5、5及10μmol/L浓度处理巨噬细胞.流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;免疫荧光染色观察M1型巨噬细胞表面标记物诱导性一氧化氮合酶(iNOS)表达;酶联免疫吸附试验法对巨噬细胞分泌的炎性因子浓度进行检测;Western blot检测相关浆蛋白及核蛋白的相对表达水平.结果 AGEs刺激可使巨噬细胞内ROS水平、分泌炎性因子浓度、细胞质TLR4、磷酸化信号转导与转录激活因子1(p-STAT1)以及STAT1核转位水平显著升高(P均<0.001),巨噬细胞表面iNOS表达水平显著升高(P均<0.001),且均具有显著的AGEs浓度依赖性(P均<0.001).TAK-242预处理对AGEs诱导的巨噬细胞iNOS表达,细胞内ROS水平及TLR4表达水平无显著影响,可显著降低AGEs诱导的巨噬细胞iNOS表达,分泌炎症因子浓度(P均<0.001)、细胞p-STAT1表达水平及STAT1核转位水平(P均<0.001).FPS-ZM1预处理可显著抑制AGEs诱导的巨噬细胞内ROS水平(P<0.001)、分泌炎症因子浓度(P均<0.001)、细胞TLR4及p-STAT1表达水平(P均<0.001)以及STAT1核转位水平(P<0.001).结论 AGEs可通过RAGE/ROS/TLR4/STAT1信号通路诱导巨噬细胞向M1型极化.     

羟基红花黄色素A通过 Wnt/β-catenin 信号通路抑制卵巢癌生长

目的 研究羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)对卵巢癌的抑制作用及其机制。方法 HSYA作用卵巢癌细胞株HO-8910PM 24h后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测卵巢癌细胞中Nuclear β-catenin、menin、MMP7、Survivin蛋白的表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,免疫组织化学法检测肿瘤组织中menin、MMP7、Survivin阳性表达。结果 与对照组比较,HSYA可明显抑制体外卵巢癌细胞生长,并诱导细胞凋亡;HSYA可抑制卵巢癌细胞Nuclear β-catenin、MMP7、Survivin蛋白表达,而促进细胞内menin蛋白表达;体内实验中HSYA可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,亦降低卵巢癌组织中MMP7、Survivin的阳性表达,但促进癌组织中menin阳性表达。结论 HSYA可能通过促进menin表达,导致β-catenin降解,减少下游的癌基因MMP-7、Survivin表达,进而抑制卵巢癌细胞的生长,促进其凋亡。     

双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的] 探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞（LECs）增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊（PCO）的临床治疗提供新的靶点。[方法] 人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组：Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a cDNA表达载体48 h后加入20 μmol/L姜黄素,对照组转染pcDNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果] Western blot检测证实,转染pcDNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组（t=2.782,P=0.049）。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义（t=2.951,P=0.018）。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论] 在SRA 01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。     

齐墩果酸通过Wnt/β-catenin信号通路诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:探讨齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)能否通过Wnt/β-catenin信号通路诱导骨肉瘤U2OS和KHOS细胞发生凋亡.方法:体外培养骨肉瘤U2OS和KHOS细胞,给予OA处理后,MTT法检测细胞的增殖率,TOP-Flash Reporter Assays检测骨肉瘤细胞TCF/LEF的转运活性,We...     

LncRNA GASL1通过Wnt/β-catenin信号通路促进血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨lncRNA GASL1能否通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖.方法 构建lncRNA GASL1 相关的mRNAs共表达网络,并对其进行信号通路分析.将lncRNA GASL1(lncRNA GASL1组...     

ADAMDEC1通过激活Wnt/β-catenin信号转导通路促进T-ALL细胞的增殖

目的 研究去整联蛋白金属蛋白酶家族癸蛋白1(a disintegrin and metalloprotease like decysin 1,ADAMDEC1)对T细胞急性淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL）细胞生物学行为的影响及其潜在的分子机制。方法 qRT-RCR和Western blot检测ADAMDEC1在人T淋巴细胞H9与T-ALL细胞Jurkat和CCRF-CEM的表达。CCK-8法检测ADAMDEC1siRNA干扰表达后T-ALL细胞增殖的变化。流式细胞术检测ADAMDEC1siRNA干扰后T-ALL细胞凋亡情况。Western blot检测干扰ADAMDEC1后凋亡及Wnt/β-catenin通路相关分子蛋白水平的变化。结果 ADAMDEC1在CCRF-CEM和Jurkat细胞中高表达。干扰ADAMDEC1后CCRFCEM和Jurkat细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增高。干扰ADAMDEC1可促进GSK-3β的表达,抑制β-catenin、pGSK-3β和c-Myc的蛋白水平。Wnt/β-catenin通路...     

Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂与骨质疏松

Wnt/β-catenin信号通路是重要的细胞信号转导途径,在细胞的增殖、分化中发挥重要作用。目前的研究表明Wnt/β-catenin信号通路在骨代谢中发挥重要作用,该通路的异常与骨质疏松的发生有关。Wnt/β-catenin拮抗剂可以抑制Wnt/β-catenin信号通路,导致通路表达异常,进一步研究Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂,设计出阻断该通路拮抗剂的物质,可为骨质疏松的治疗提供一种新的途径。     

Wnt/β-catenin信号通路与大肠癌研究进展

Wnt信号通路与人类大肠癌的发病密切相关,Wnt信号通路的基因缺陷可激活Wnt信号通路并使其保持持续激活状态,使肠粘膜上皮过度增生,从而导致正常的肠粘膜向肿瘤转化,针对Wnt/β-catenin信号通路中的关键成分为靶点,靶向治疗大肠癌,已成为肿瘤治疗的新方向。我们就Wnt信号通路的异常变化及其调节和干预综述如下。     

Wnt/β-catenin信号通路与肾脏疾病

wnt信号通路的异常调节已经在许多疾病中被研究,包括肾脏疾病。wnt信号通路传导主要分为两类：经典wnt信号通路、非经典wnt信号通路。其中对经典wnt信号通路,即wnt/β-catenin的研究最为深入。wnt/β-catenin信号通路在肾脏的产生、损伤修复及其他肾脏疾病中有着重要的作用。但是wnt/β-catenin如何影响相关肾脏疾病的机制仍不是非常明确。本文简单总结了近来wnt/β-catenin信号通路与肾脏疾病的相关进展。     

氯化锂激活的Wnt/β-catenin信号通路对激素型骨质疏松的防护作用

目的 研究氯化锂(LiCl)激活的Wnt/β-catenin信号通路对糖皮质激素引发的小鼠骨丢失的防护作用.方法 将C57BL6/J小鼠随机分为3组:对照组、骨质疏松模型组和LiCl组.骨质疏松模型组及LiCl组小鼠皮下注射地塞米松(50 mg/kg),对照组小鼠皮下注射同等剂量生理盐水.LiCl组小鼠在注射地塞米松同时通过饮用水给予LiCl(200mg/kg).处理5周后处死小鼠做骨组织切片,用免疫组化染色检测活性β-catenin蛋白的表达,鉴定体内Wnt/β-catenin通路激活情况;用H-E染色鉴定骨组织形态.同时取小鼠股骨进行microCT扫描,测定骨形态计量学参数.用钙黄绿素荧光标记实验鉴定新骨形成能力,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定骨吸收情况.结果 LiCl组小鼠体内活性β-catenin蛋白水平高于骨质疏松模型组,其骨量、骨小梁数量、骨小梁间隙及骨密度均得到改善(P＜0.05),但与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05).钙黄绿素荧光标记实验证实LiCl组小鼠新骨形成能力比骨质疏松模型组有所提高,但仍低于对照组.TRAP染色证实各组小鼠骨吸收活性未发生明显改变.结论 口服LiCl能有效激活体内Wnt/β-catenin信号通路,促进新骨形成,对糖皮质激素引发的骨丢失有一定的防护作用.     

补肾解毒散结方通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抗大肠癌侵袭转移

目的:探讨补肾解毒散结方抑制Wnt/β-catenin信号通路抗人结肠癌HCT-116细胞侵袭转移的作用和机制。方法:采用CCK-8法检测以不同浓度补肾解毒散结方(10、20、40、60、80、100、120μg/ml)对人结肠癌HCT-116细胞增殖的影响;采用划痕实验检测HCT-116细胞转移能力;Transwell实验检测HCT-116细胞侵袭能力;Western blot检测HCT-116细胞的β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平。结果:补肾解毒散结方能够以剂量-时间依赖性方式抑制HCT-116细胞的增殖;补肾解毒散结方能够呈剂量依赖性方式抑制HCT-116细胞的侵袭和转移能力(P0.05);补肾解毒散结方能够下调HCT-116细胞核内β-catenin蛋白表达水平,抑制其下游靶基因Cyclin D1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:补肾解毒散结方具有抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭和转移能力,其机制可能与其通过Wnt/β-catenin信号通路下调β-catenin蛋白表达水平相关。     

白藜芦醇调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制

目的 分析白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制.方法 采用0(对照组)、25(低剂量组)、50(中剂量组)以及100μmol/L(高剂量组)白藜芦醇对胶质瘤细胞U251进行处理,比较各组细胞培养24、48以及72 h时的细胞活力、侵袭个数、迁移个数、凋亡率,比较各组细胞培养72 h时的...     

延龄草皂苷通过抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路改善大鼠肺纤维化

目的 探讨延龄草皂苷对肺间质纤维化大鼠的治疗作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠50只,随机分为对照组,模型组,延龄草皂苷低、中、高剂量组［25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)］,每组10只。除对照组外,其余各组采用气管插管注入伯莱霉素法(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;次日开始连续给药28 d。处死大鼠后,取肺组织称重并计算肺系数;进行HE和Masson染色观察小鼠肺组织形态病理学变化;ELISA法检测大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blotting法检测大鼠肺组织中纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白Ⅰ型(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、SMAD同源物3(Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。 结果 与模型组比较,延龄草皂苷低、中、高剂量组的肺系数降低;大鼠肺组织炎性细胞浸润、胶原沉积和纤维化程度改善;大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和ROS的表达水平降低, SOD的活性升高,发挥抗炎、抗氧化作用;肺纤维化标志蛋白fibronectin,Collagen Ⅰ和α-SMA表达被抑制;大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Wnt3a、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达水平降低,且治疗效果呈现剂量依赖性。 结论 延龄草皂苷可通过抗炎、抗氧化,抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对肺纤维化产生保护作用。     

circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

乙肝病毒X蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控Gankyrin表达

目的：研究乙肝病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBX）对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法：HBX腺病毒表达载体（Ad-HBX-GFP）感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞,Si-HBX分子（Si-HBX oligo）用 LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞,用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况;β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞,用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果：①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞（P＜0.05）。②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-GFP）组（P＜0.01）。③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照（Si-NC）组（P＜0.01）。④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后,Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,β-catenin腺病毒表达载体（Ad-β-catenin-GFP）组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Si-β-catenin腺病毒表达载体（Ad-si-β-catenin-RFP）组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-RFP）组相比,Gankyrin的蛋白表达水平未见升高（P＜0.01）。结论：HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中,抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路。