无明胶保护剂冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）稳定性研究

目的  观察不含明胶的不同保护剂配方冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）的稳定性。方法  在现行冻干乙型脑炎灭活疫苗制备工艺的基础上,以乳糖替代明胶,并适当增加人血白蛋白用量至5、10和20 g/L,制成A、B、C三个保护剂配方疫苗。对疫苗进行25 ℃加速试验、37 ℃热稳定性试验和2～8 ℃长期稳定性试验,检测疫苗的有效抗原含量和效力（T值）,并与现行疫苗（对照）进行比较。结果  三个保护剂配方疫苗于25 ℃放置24周后,A、B疫苗有效抗原含量仅分别降低2.2%和5.9%,效力稳定;而C疫苗有效抗原含量降低13.6%,效力降低5.0%。37 ℃放置8周后,A、B、C疫苗有效抗原含量分别降低11.2%、13.2%、15.2%,效力分别降低5.8%、9.0%、7.2%。2～8 ℃放置48个月后,A、B、C疫苗有效抗原含量分别降低17.2%、18.4%、21.9%,效力均符合《冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）注册标准》。在上述试验中,A、B疫苗均优于或等于对照疫苗;C疫苗与对照疫苗差异较大,但均符合相关标准。结论  含A配方保护剂的冻干乙型脑炎灭活疫苗稳定性高且白蛋白用量少,因此,建议首选A配方保护剂。     

两种国产乙型肝炎疫苗预防接种效果分析

目的  了解郑州某高校新生对两种国产乙型肝炎（乙肝）疫苗预防接种的效果。方法  采用随机抽样方法,抽取743名新生分为两组,分别接种重组乙肝疫苗（CHO细胞）和重组乙肝疫苗（汉逊酵母）,剂量均为10μg/0.5ml, 按0、1、6个月免疫程序接种,免疫后2个月,检测血清抗-HBs滴度,比较两种疫苗的抗体阳转率和几何平 均浓度（GMC）。结果  重组乙肝疫苗（CHO细胞）组的抗体阳转率为87.14%,重组乙肝疫苗（汉逊酵母）组的抗体阳转率为97.20%。两组疫苗的抗-HBs GMC分别为1489.72和2265.68 mIU/ml。 结论  国产重组乙肝疫苗（汉逊酵母）预防接种效果良好,应大力 推广使用。     

牛血清白蛋白残留量检测试剂盒内部参考品的制备及标定

目的    制备牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）残留量检测试剂盒的内部参考品,用于考察试剂盒的稳定性。方法   首先对乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中的3种工作液（病毒稀释液、病毒浸泡液、细胞上清液）进行BSA残留量检测。然后选择BSA含量适宜的工作液,适当稀释后制成内部参考品。由2名实验人员同时选取3个不同批号的试剂盒,在不同的日期进行3次检测,对内部参考品进行标定,并根据标定结果确定其赋值范围。分别采用方差分析和t检验对不同批号试剂盒和不同实验人员的检测结果进行比较。标定后连续8个月20次使用该参考品考察试剂盒的稳定性。结果   根据BSA残留量检测结果,选择病毒浸泡液,以疫苗冻干保护剂3倍稀释后制成内部参考品。2名实验人员的108次检测均值为33.46 ng/ml,标准差为2.15 ng/ml,变异系数为6.40%。根据标定结果,确定内部参考品的赋值范围为27.01～39.91 ng/ml。不同批号试剂盒检测结果的差异有统计学意义（F=11.497,P<0.01）,不同实验人员检测结果的差异无统计学意义（t=0.500,P>0.05）。采用5个批号试剂盒总共对该参考品进行20次检测,BSA残留量均在30.00～36.63 ng/ml范围内,均值为33.14 ng/ml,标准差为1.73 ng/ml,变异系数为5.20% ,不同批号试剂盒检测结果的差异无统计学意义（F=0.997,P>0.05）。结论   制备的BSA残留量检测试剂盒内部参考品可用于试剂盒的稳定性考察。     

柯萨奇病毒A组16型感染性滴度检测用国家参考品的制备及标定

目的 制备柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)感染性滴度检测用国家参考品,为CA16疫苗生产过程中的病毒滴度控制和CA16疫苗的免疫效果评价提供国家参考品.方法 将验证合格的CA16(C1亚型)培养液分装(0.5 ml/支)制成候选参考品.3个独立实验室分别对候选参考品进行协作标定,用细胞培养法检测CA16感染性滴度,用Behrens-K(a)rber法计算半数细胞感染量(50％ cell culture infective does,CCID50).同时,将CA16参考品分别置于-20、4、22～25(室温)和37℃条件下或反复冻融,进行热稳定性、长期稳定性和冻存稳定性研究.结果 制备的CA16参考品的病毒滴度为(6.80±0.95) lgCCID50/ml.CA16参考品于-60℃保存12个月、-20℃保存6个月和4℃保存28 d后的病毒滴度无显著下降,表明稳定性较好;在22～25℃(室温)和37℃条件下,CA16参考品每天的病毒滴度损失率分别为3.4％和4.4％,而且分别保存27和21 d后病毒滴度无明显下降;对CA16参考品反复冻融的病毒滴度损失率为4.8％/次.结论 成功制备了CA16感染性滴度检测用候选国家参考品,将CA16参考品赋值确定为(6.80±0.95) lgCCID50/ml.     

维甲酸固体脂质纳米粒冷冻干燥工艺研究

选用不同辅料作为冻干保护剂，制备维甲酸固体脂质纳米粒冻干品，并考察不同制品的外观、粒径、包封率。以冻干品外观、再分散后的粒径和包封率为评价指标，筛选保护剂的优化处方。结果表明，选择蔗糖、蔗糖＋海藻糖、甘露醇＋海藻糖、甘露醇＋蔗糖为冻干保护剂，冻干纳米粒再分散后粒径减小，包封率与冻干前相比有所降低，含海藻糖处方可大大加快纳米粒的再分散速率，4℃和20℃放置3个月稳定性良好。     

抗-HBs国家标准品的研制

目的：协作标定首批冻干抗-HBs国家标准品。方法：以首批抗-HBs国际标准品（17—2—77批号）为标准，采用放射免疫法标定我国抗-HBs国家标准品。结果：国家标准品（人免疫球蛋白）的效价为2．5IU&#183;支^-1，抗-HBs国家标准品（人血浆）的效价为1．3IU&#183;支^-1。将以上标准品按标示量加水溶解后于4℃放置9d和将冻于标准品分别置于4，23，45℃保存6个月，进行稳定性考察。研制的首批冻干抗-HBs国家标准品稳定性良好，其他项目符合国家标准品要求。结论：已制备首批抗-HBs国家标准品，并获得国家标准品批准文号。     

冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗强制降解的稳定性研究

目的  通过强制降解试验观察冻干b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b，Hib）结合疫苗在高温、高湿、强光照射下的稳定性，为疫苗生产工艺、包装材料和贮存条件的确定提供科学依据。 方法  分别采用40 ℃温度、（75±5）%相对湿度、（4 500 ±500）lx光照处理冻干Hib结合疫苗，取样进行疫苗的全部项目检测。 结果  疫苗经40 ℃处理10 d，水分由2.0%上升至2.9%，多糖分子大小（分配系数小于0.2的洗脱液回收率）由94%下降至85%，但仍分别符合≤3.0%和＞60%的质量标准；而高分子结合物含量由87%降至75%，不符合≥80%的质量标准。（75±5）%相对湿度和（4 500±500）lx光照处理10 d对疫苗的影响不明显，疫苗质量指标仍符合规定。结论  高温是影响冻干Hib结合疫苗稳定性的主要因素。     

检测百日咳抗原的系列酶免疫测定试剂盒的稳定性及其在百日咳疫苗生产中的应用

 目的   评估检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)和黏着素(pertactin,Prn)的3种酶免疫测定试剂盒的稳定性及其在无细胞百日咳疫苗（acellular pertussis vaccine,aPV）生产质量控制中的应用。 方法   对3种酶免疫测定试剂盒进行热加速试验（37 ℃放置3 d）和长期稳定性试验（4 ℃放置6月）,根据试剂盒的标准曲线相关系数、最高浓度标准品与阴性对照的吸光度值之比（P/N）值、质控品回收率评估试剂盒的稳定性。将3种试剂盒用于aPV生产的发酵、纯化、吸附阶段的PT、FHA、Prn定量检测,以确定3种试剂盒对aPV生产质量控制的可行性。 结果   3种酶免疫测定试剂盒的37 ℃热加速试验和4 ℃长期稳定性试验的各项质量参数均符合相关要求。采用试剂盒定量各生产阶段的百日咳抗原含量显示：百日咳杆菌的发酵终点在第42~46 h;各3批PT、FHA和Prn组分液的纯化回收率分别为49.24%、56.12%和63.65%、68.75%、55.60%和49.76%、75.73%、60.63%和50.10%。采用单独吸附的铝佐剂抗原吸附率高于采用混合吸附,但单独和混合吸附方式制备的疫苗的效力无差异。 结论   检测PT、FHA和Prn的3种酶免疫测定试剂盒具有良好的稳定性,可用于aPV生产的质量控制。     

口服轮状病毒活疫苗病毒滴度评价国家参考品的制备

目的 制备口服轮状病毒(rotavirus,RV)活疫苗病毒滴度评价的国家参考品.方法 选取检定合格的口服RV活疫苗原液,加入保护剂,1.0 ml/安瓿分装,冷冻干燥,制备病毒滴度参考品.用微量细胞病变法检测参考品的病毒滴度,用Karber法计算半数细胞培养感染量(50％ cell culture infective dose,CCID50).由3家实验室对参考品的病毒滴度进行协同标定,采用单因素方差分析和最小显著差数法对3家实验室的标定结果进行统计学分析.另外,将参考品于-20℃放置1年、4℃放置1年、37℃放置14d、-60℃放置2年,测定病毒滴度,分析参考品的热稳定性和长期稳定性.结果 经单因素方差分析比较,3家实验室检测结果的差异无统计学意义(F=0.379,P=0.686).采用最小显著差数法对3家实验室检测结果的均值进行两两比较,差异亦无统计学意义(s(x)值均为0.078 2,P值均＞0.05).参考品的平均病毒滴度为6.5 lgCCID50/ml,于不同温度放置一段时间后病毒滴度下降均未超过1.0 lgCCID50/ml.长期稳定性试验结果的变异系数为4.9％.结论 制备了可用于口服RV活疫苗病毒滴度检测的国家参考品.     

HAV抗原检测ELISA试剂盒的验证及应用

目的  验证甲型肝炎灭活疫苗（人二倍体细胞）（甲肝疫苗）生产场地变更后原生产场地制备的ELISA试剂盒对HAV抗原检测的一致性。方法  用原生产场地制备的抗HAV多克隆抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗HAV抗体制备ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行线性、精密度、准确度、专属性和稳定性验证,同时用该试剂盒检测甲肝疫苗中间品的HAV抗原浓度,考察其适用性。结果  在新生产场地中ELISA试剂盒的检测线性范围为0.2～6.4 IU/ml,线性决定系数R2>0.99。该试剂盒的精密度良好,检测结果的变异系数均小于15%。不同HAV抗原浓度样品的回收率为84%～104%。该试剂盒可特异性检测HAV,不与非HAV及HAV培养基质发生反应。包被抗体的酶标板于37 ℃放置7 d对检测结果没有影响。用该试剂盒检测显示,HAV收获液、HAV纯化液和甲肝疫苗半成品的平均HAV抗原浓度分别为213.25、146.70和48.91 IU/ml,符合在生产过程中HAV抗原含量下降的规律。结论  原生产场地制备的ELISA试剂盒可用于检测新生产场地生产的甲肝疫苗。     

肠道病毒71型抗原定量检测方法的建立

目的 建立肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原的定量检测方法,用于EV71疫苗生产过程中EV71抗原含量的监测.方法 用EV71抗原免疫新西兰兔制备抗EV71多克隆抗体,纯化后用辣根过氧化物酶标记.采用双抗体夹心ELISA法建立抗原检测系统.以EV71国家抗原标准品为定量标准,建立剂量反应曲线,确定该方法的线性范围和定量限,并对该方法的特异性、精密度、准确性、稳定性及适用性等进行验证.结果 建立的ELISA法的线性范围为5～80 U/ml,定量限为5 U/ml,线性决定系数均大于0.990 0;不同浓度样品回收率为85.0％～110.0％,变异系数均小于15％;置于2～8℃及37℃3、6d的抗体包被板对不同浓度样品的检测值变异系数均小于15％;该方法可特异性检测EV71原液,与非EV71样品无交叉反应.结论 建立了EV71抗原定量检测方法,为EV71疫苗生产工艺过程的质量控制奠定了基础.     

冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗稳定性研究

目的 对以乳糖作为稳定剂的b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗冻干剂型进行稳定性研究.方法 选取3批冻干Hib结合疫苗,分别于2～8℃保存42个月,20～25℃保存7个月,37℃保存5周.并于考察期内对疫苗进行外观检查、检测回收率(KD ＜0.2)、游离多糖含量...     

四参数模型和平行线分析法在病毒疫苗抗原生物检定统计中的应用

目的 比较四参数模型与平行线分析法在Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin inactivated poliovirus vaccine,sIPV)D抗原和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原生物检定统计中的应用.方法 对sIPV-D抗原和EV71抗原检测数据分别进行四参数模型和平行线分析法的方法验证,并将两种方法应用于不同含量样品检测结果的分析计算.结果 sIPV-D抗原检测数据四参数曲线拟合度好(决定系数为0.998,残差值≤0.059),平行性分析可靠(线性回归:参比品F=727.49,P＜0.01;样品F=1 169.44,P＜0.01.平行性方差分析F=0.24,P＞0.05).EV71抗原四参数曲线拟合度好(决定系数为1.000,残差值≤0.025),平行性分析可靠(线性回归:参比品F=126.63,P＜0.01;样品F=192.74,P＜0.01.平行性方差分析F=4.00,P＞0.05).对于sIPV和EV71不同抗原含量的生物检定统计,两种方法计算结果的差异无统计学意义(t=0.248～1.023,P值均＞0.05).结论 四参数模型和平行线分析法均能较好地应用于sIPV-D抗原和EV71抗原的ELISA检测体系.     

配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗的各病毒原液最适滴度研究

目的 研究配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗(measles-mumps-rubella-varicellacombined attenuated live vaccine,MMRV)的各病毒原液最适滴度.方法 将麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液分别冻干,检测各冻干单价疫苗的滴度和热稳定性,观察病毒滴度的下降幅度.将4种病毒原液按不同配比配制MMRV,检测配制前后的各病毒滴度,摸索配制MMRV的最佳配比.按确认的最佳配比配制MMRV并冻干,检测冻干MMRV的各病毒滴度和热稳定性,确定配制MMRV的各病毒原液最适滴度.结果 各病毒原液冻干后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.6、0.6、0.4 lgCCID50/ml和0.5 lgPFU/ml;各冻干单价疫苗37℃放置1周后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒的滴度分别下降约0.6、0.5、0.5 lgCCID50/ml和0.5 lgPFU/ml.在配制MMRV过程中,仅腮腺炎病毒可能在一定程度上受到其他病毒的干扰.按确认的最佳配比配制的MMRV冻干后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.5、0.6、0.5 lgCCID50/ml和0.6 lgPFU/ml;冻干MMRV于37℃放置1周后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.6、0.6、0.5 lgCCID50/ml和0.5 lgPFU/ml.结论 在按确认的最佳配比配制MMRV时,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液的滴度需分别≥6.0、≥6.5、≥6.0 lgCCID50/ml和≥5.3 lgPFU/ml.     

重组四价人乳头瘤病毒16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗制剂工艺的优化

目的 考察不同制剂工艺流程下制备的重组四价人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗的抗原吸附效果、稳定性及免疫原性,根据实验结果筛选出最合适的制剂配方及工艺。方法  通过改变重组四价HPV疫苗的缓冲体系,以及氢氧化铝佐剂的含量、混合工艺、吸附方式与吸附条件,配制不同的实验疫苗,观察其外观,并分别进行蛋白质稳定性、抗原吸附率和小鼠体内半数有效剂量的检测。 结果 重组四价HPV疫苗原液与450 μg/ml氢氧化铝佐剂在pH6.5的组氨酸缓冲体系下混合后的实验疫苗,外观均一性良好,抗原蛋白稳定性最高,Tm=87.4 ℃,小鼠体内免疫原性较好;搅动吸附条件下的4型别HPV抗原吸附率明显高于静止吸附;铝佐剂和抗原蛋白的吸附与混合先后顺序,不同吸附比例、温度和时间对疫苗外观无显著影响,抗原吸附率均大于99.00%。结论 确定了重组四价HPV16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗合适的制剂工艺条件。     

成人接种重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗后效果观察

目的观察重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗在成人中的免疫效果。方法对HBsAg、抗HBs、抗HBc三项指标全部为阴性、且未接种过乙肝疫苗的162名16岁以上人群,按照0、1、6的免疫程序接种10μg重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗,于全程免疫1个月后采血,测定血清中抗HBs水平。结果接种重组(酿酒酵母)乙肝疫苗的99人,抗HBs阳转率为94.95%,几何平均浓度为331.08mIU/mL;接种重组(汉逊酵母)乙肝疫苗的63人,抗HBs阳转率为98.41%,几何平均浓度为270.79mIU/mL。两组间抗HBs阳转率和几何平均浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。接种两种疫苗均未观察到明显的不良反应。结论重组(酿酒酵母)乙肝疫苗和重组(汉逊酵母)乙肝疫苗均具有良好的安全性和免疫原性。