复方五花血藤对鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨复方五花血藤对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法　采用健康成年ＳＤ大鼠９０只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,其中模型组和治疗组建立视网膜缺血再灌注模型,治疗组于造模前连续３ｄ给予复方五花血藤灌胃,每天２次（总剂量为１０ｇ?ｋｇ－１?ｄ－１）,模型组和正常对照组灌服相同剂量的生理盐水。通过ＨＥ染色、透射电镜观察再灌注６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ与７２ｈ各组大鼠视网膜的形态学变化,原位杂交方法检测各组视网膜凋亡相关因子ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达情况。结果　与正常对照组相比,模型组再灌注后６ｈ视网膜神经节细胞层高度水肿,内丛状层明显增厚,部分视网膜神经节细胞发生空泡变性,但随时间延长病变逐渐减轻。治疗组各时间点视网膜损伤均较模型组轻。与正常对照组相比,模型组ｓｕｒｖｉｖｉｎ在再灌注后６ｈ即开始增加,２４ｈ达到高峰,以后逐渐下降,但各时间点均高于正常对照组（均为Ｐ＜０．０５）。与模型组相比,治疗组ｓｕｒｖｉｖｉｎ各时间点表达均较高（均为Ｐ＜００５）。结论　初步证实复方五花血藤对于大鼠视网膜缺血再灌注损伤有较为明显的保护作用,此研究对于临床药物的开发和利用具有积极意义。     

Edaravone对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究Edaravone对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响.方法 健康Wistar大鼠36只随机分为3组:空白对照组、模型组和Edaravone治疗组.空白对照组不做任何处理,模型组和Edaravone治疗组均采用前房加压法建立大鼠RIRI模型,Edaravone治疗组于缺血前30 min行腹腔注射Edaravone(3 mg·kg-1),恢复灌注30min后再行腹腔注射Edaravone (3 mg· kg-1).免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜缺血-再灌注后24 h视网膜神经节细胞Bcl-2和Bax的表达情况.结果 空白对照组未见Bcl-2和Bax表达.再灌注后24h,模型组Bcl-2表达为0.406±0.022,Bax表达为0.661±0.034,Bcl-2/Bax为0.609±0.015;Edaravone治疗组Bcl-2表达为0.581±0.031,Bax表达为0.491±0.017,Bcl-2/Bax为1.104±0.094.与模型组比较,Edaravone治疗组Bcl-2表达明显增强(P＜0.05),Bax表达明显减弱(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).结论 Edaravone对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有明显的保护作用,其机制可能与上调Bc1-2表达及下调Bax的表达有关.     

黄芪对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中黄芪对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响及作用机制。 方法：前房加压法制作实验性RIRI的大鼠模型。将66只SD大鼠随机分为正常组、缺血再灌注模型组、黄芪注射液治疗组。后两组各分为 6,12,24,48h和3d五个时间段,HE染色后光镜下观察视网膜组织变化, 采用免疫组织化学法与Western-blot法测定大鼠RIRI后视网膜中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。 结果：Bcl-2和Bax在正常视网膜组织中几乎不表达,在缺血再灌注6h开始表达,24h表达显著,48h开始下降,3d后表达已经明显减弱。黄芪注射液治疗组各观察指标变化趋势基本与单纯缺血再灌注组相似。黄芪注射液治疗组与模型组比较,Bcl-2表达均明显增强,Bax表达均明显减弱,两组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。 结论：黄芪注射液预处理可使神经节细胞Bcl-2表达增强,Bax表达减弱,减少神经节细胞凋亡,对RIRI神经节细胞有明显的保护作用。     

Bcl-2／Bax在缺血-再灌注损伤视网膜的表达

目的 探讨Bcl-2/Bax在视网膜缺血-再灌注损伤后的表达与视网膜神经节细胞数量的关系.方法 建立Wistar大鼠视网膜缺血-再灌注模型,计算其再灌注后1、6、12、24、48、72 h的视网膜神经节细胞(RCC);免疫组化SP法检测同时段凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 大鼠缺血-再灌注后RGC在6 h时开始大量减少,6～12 h时快速减少,24 h后呈慢速减少.再灌注6、12、24、48、72 h的Bcl-2、Bax蛋白阳性表达结果与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05).再灌注后6、12小时Bcl-2/Pax比率上升,24、48、72小时下降.结论 视网膜缺血再灌注后RCC凋亡与Bcl-2/Bax表达有关.     

α-硫辛酸对视网膜缺血再灌注损伤中Caspase-3表达的影响

目的观察大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RI-RI)过程中α-硫辛酸对Caspase-3表达的影响。方法采用升高眼压的方法制作实验性RIRI的大鼠模型。将60只SD大鼠随机分为正常组、单纯α-硫辛酸组、单纯缺血再灌注组及α-硫辛酸干预组,同时后3组根据再灌注时间的不同分成1d、3d、7d组,HE染色光镜观察视网膜组织变化,应用SABC免疫组织化学法检测大鼠RIRI后视网膜组织Caspase-3表达的变化。结果正常组及单纯α-硫辛酸组视网膜组织Caspase-3不表达。单纯缺血再灌注组视网膜在再灌注后1d时Caspase-3表达显著,3d表达已明显下降,7d进一步降低。α-硫辛酸干预组各观察指标变化趋势基本与单纯缺血再灌注组相似,但表达明显减弱,2组相比较,于再灌注1d和3d时差异有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase-3参与了RIRI的形成,α-硫辛酸可以抑制Caspase-3蛋白的表达;α-硫辛酸在RI-RI中可能通过抑制细胞凋亡而达到其保护作用。     

MSC移植对缺血再灌注损伤视网膜神经节细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)移植对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)视网膜神经节细胞Bcl-2/Bax表达的影响,为MSC移植治疗RIRI提供实验依据。方法 44只SD大鼠分为正常组(4只)、模型组(20只)、MSC移植组(20只)。前房加压法建立大鼠RIRI模型。体外培养大鼠MSC,MSC移植组于再灌注后予以玻璃体腔注射MSC。免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜缺血再灌注2h、6h、12h、24h、48h后Bcl-2/Bax表达情况。结果正常组视网膜神经节细胞未见Bcl-2、Bax表达。再灌注后2h、6h、12h、24h、48h,模型组Bcl-2表达分别为0.280±0.008、0.323±0.010、0.474±0.020、0.451±0.011、0.407±0.011,MSC移植组Bcl-2表达分别为0.340±0.006、0.401±0.009、0.610±0.006、0.581±0.009、0.490±0.005;模型组Bax表达分别为0.322±0.007、0.457±0.010、0.469±0.022、0.591±0.014、0.529±0.010,MSC移植组分别为0.252±0.008、0.366±0.011、0.389±0.009、0.433±0.013、0.391±0.004。MSC移植组与模型组比较Bcl-2表达均明显增强(均为P<0.01),Bax表达均明显减弱(均为P<0.01)。结论 RIRI大鼠行MSC移植术,可使神经节细胞Bcl-2表达增强,Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比值升高,减少神经节细胞凋亡。MSC移植对RIRI神经节细胞有明显的保护作用。     

N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组.采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6h、12 h视网膜各层高度水肿,24h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6h、12h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24h、48 h、72h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻.缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm-2,随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12h后继续减少,24h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.     

藏红花素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）时藏红花素对视网膜细胞凋亡数目、凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响，探讨缺血再灌注时藏红花素对视网膜的保护作用机制。方法　选取体质量200~250 g的健康雄性SD大鼠24只，随机分为4组:对照组、模型组、藏红花素低剂量组和藏红花素高剂量组，每组6只。藏红花素低剂量组、高剂量组分别于造模前3 d、30 min定时腹腔注射5 g·L^-1藏红花素5 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1。造模成功后24 h处死大鼠并摘取眼球。使用电镜观察各组大鼠视网膜细胞结构，TUNEL染色检测视网膜凋亡细胞数量，免疫组织化学染色法观察凋亡相关蛋白Caspase-3在视网膜中的表达。结果　视网膜TUNEL染色发现，对照组视网膜组织中几乎未发现凋亡细胞的阳性表达，模型组视网膜神经节细胞层和内核层中发现大量棕黄色着色的细胞，其凋亡细胞数为（27.40±0.96）个，藏红花素低剂量组可见神经节细胞层、内核层凋亡细胞数较模型组减少，凋亡细胞数为（8.40±0.41）个，与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）；藏红花素高剂量组凋亡细胞数较模型组和低剂量组明显减少，凋亡细胞数为（4.30±0.47）个，和藏红花素低剂量组相比差异有统计学意义（P<0.01）。对照组大鼠视网膜组织Caspase-3染色阴性，模型组视网膜神经节细胞层可见棕黄色颗粒位于细胞浆内，藏红花素低剂量组Caspase-3蛋白表达量与模型组类似，藏红花素高剂量组Caspase-3蛋白表达量与对照组类似。结论　藏红花素能通过降低Caspase-3蛋白含量及凋亡细胞数，从而有效保护视网膜免受RIRI。     

缺血再灌注损伤诱导大鼠视网膜细胞凋亡

目的 观察缺血再灌注大鼠视网膜损伤及细胞凋亡情况。 方法 采用升高大鼠眼压到109.725 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)持续1 h的方法制作视网膜缺血再灌注模型，采用常规眼球切片观察不同缺血和再灌注时间的视网膜损伤的组织病理改变；采用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测视网膜神经元凋亡情况；采用DNA原位末端标记(terminal dUTP nick end labelling, TUNEL)法定位凋亡的视网膜细胞。 结果 缺血30 min 再灌注24、48 h的大鼠视网膜无明显的病理改变；缺血60 min再灌注24、48 h的大鼠视网膜神经节细胞层和内核层细胞明显变薄；缺血60 min再灌注12、24 h的大鼠视网膜有梯状条带。而正常对照组、缺血30 min再灌注24、48 h组及缺血60 min再灌注48 h组大鼠视网膜均无类似表现。TUNEL法显示视网膜内的细胞凋亡主要发生在节细胞和内核层光感受细胞。 结论 大鼠视网膜缺血再灌注主要是导致视网膜神经节细胞层和内核层细胞损伤，细胞凋亡可能是损伤的重要机制。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 296-298)     

实验性视网膜缺血-再灌注损伤中坏死性凋亡相关因子的表达变化

目的　建立视网膜缺血-再灌注损伤（ｒｅｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ,ＲＩＲＩ）模型,观察坏死性凋亡是否参与其病理过程。方法　野生型Ｃ５７小鼠随机分为对照组及实验组。对照组不做任何处理,实验组采用前房灌注法建立ＲＩＲＩ模型,并于ＲＩＲＩ后１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ分别收集视网膜或眼球,行荧光定量ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫荧光染色检测受体相互作用蛋白（ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＲＩＰ）３及ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的表达变化。结果　荧光定量ＰＣＲ检测ＲＩＰ３、ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的ｍＲＮＡ表达,与对照组比较,实验组在不同时间点均有显著升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＩＰ３及ＲＩＰ１表达以早期升高为主,后期逐渐下降。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。组织切片免疫荧光染色也发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。结论　实验性ＲＩＲＩ模型中,坏死性凋亡参与了其病理过程。坏死性凋亡特异性蛋白ＲＩＰ３表达以早期升高为主,后期逐渐下降。     

N-乙酰-5-羟色胺对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜 Fas、FasL 蛋白表达的影响

目的　探讨N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin，NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retina ischemia-reperfusion injury，RIRI）大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响。方法　取健康成年Sprague Dawley大鼠54只，将大鼠随机分为正常组（6只）、RIRI组（24只）与NAS组（24只）；采用高眼压法建立大鼠RIRI模型，依据造模后不同时间点将RIRI组与NAS组大鼠又分为6 h、12 h、24 h及72 h四个亚组。NAS组于造模前30 min腹腔注射NAS（5 mg·kg^-1），RIRI组腹腔注射等剂量的生理盐水。通过HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠视网膜形态学变化，并记录各组大鼠视网膜厚度及视网膜神经节细胞数，采用免疫组织化学染色法检测NAS对RIRI大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响。结果　HE染色显示，正常组大鼠视网膜各层细胞分界清晰，形态正常，神经细胞排列整齐；RIRI组大鼠再灌注后6 h视网膜各层出现水肿，以神经节细胞层及内核层较显著，神经节细胞数较正常组减少；随后视网膜水肿进一步加重，神经节细胞继续减少；NAS组大鼠在再灌注后6 h、12 h、24 h 视网膜水肿程度较 RIRI组轻，NAS组在再灌注后72 h视网膜厚度较 RIRI组厚，NAS组各时间点神经节细胞数均较 RIRI组多，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。免疫组织化学染色显示，正常组几乎未见 Fas⁺细胞。再灌注后6 h，RIRI组视网膜神经节细胞及内核层开始出现少量 Fas⁺细胞；再灌注后12 h，RIRI组视网膜 Fas⁺细胞表达逐渐增多；再灌注后24 h视网膜Fas⁺细胞数达到高峰，棕色阳性染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层；再灌注后 72 h 视网膜 Fas⁺细胞较再灌注后 24 h 减少。NAS组在再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h 视网膜 Fas⁺细胞数均较 RIRI组各时间点减少，再灌注后24 h，Fas⁺细胞数达较高水平，随后下降，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。正常组视网膜可见 FasL 全层低表达。RIRI组再灌注后 6 h，视网膜神经节细胞层和神经纤维层存在少量 FasL⁺细胞；再灌注后12 h FasL蛋白表达逐渐增多；再灌注后24 h FasL⁺细胞数达高峰，可见深棕色的细胞膜及细胞质染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层；再灌注后72 h FasL蛋白的阳性表达逐渐减少。NAS组再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h 视网膜FasL⁺细胞数均少于 RIRI组各时间点阳性细胞数，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　NAS可通过抑制RIRI大鼠视网膜细胞Fas、FasL蛋白的表达，减轻缺血再灌注对大鼠视网膜细胞造成的损伤。     

Simvastatin upregulates Bcl-2 expression and protects retinal neurons from early ischemia/reperfusion injury in the rat retina

Simvastatin has been shown to enhance the survival of retinal ganglion cells (RGCs) following ischemia-reperfusion (IR) injury by mediating the expression of stress proteins. The purpose of this study was to investigate the effect of simvastatin on retinal neurons and the expression of apoptotic proteins in a rat IR model. Wistar rats received intravitreal injection of simvastatin immediately after retinal reperfusion. Retinal ischemia was induced by increasing intraocular pressure to 150 mmHg for 60 min. The number of viable RGCs was measured after retrograde labeling with Fluoro-Gold. Ischemia-induced apoptotic cell death was studied using terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). We found that simvastatin treatment enhanced RGC survival after retinal ischemia by approximately 40% and decreased retinal neuronal apoptosis. Using western blot analysis, we found that simvastatin upregulated the expression of Bcl-2 in the retina. In contrast, the level of the protein Bax was unaffected by simvastatin treatment. Our results suggest that RGC loss induced by retinal IR may be prevented by simvastatin and that the mechanism underlying this process possibly involves an alteration in the apoptotic pathway.     

苯甲酸雌二醇对大鼠RIRI后Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨外源性雌激素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用机制及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。 方法：雄性SD大鼠72只随机分为正常组（N,n=8）,单纯缺血再灌注组（IR,n=32）,苯甲酸雌二醇处理组(E₂+IR,n=32)。其中后两组又分为再灌注后6,24,48和72h组（每组8只）。通过前房灌注加压法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。常规HE染色观察视网膜组织形态变化,免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。 结果：E2+IR组视网膜组织损害程度在各时间点较IR组好转。IR组Bax蛋白在6h时已经开始表达,24h达高峰,48h表达开始下降,72h仍有部分表达;而E₂+IR组Bax蛋白的表达在各时间点上较IR组明显下调（P<0.01）;IR组Bcl-2蛋白的表达在再灌注6h时表达量最多,随时间延续表达量逐渐减少;Bcl-2蛋白的表达在各时间点上较IR组明显上调（P<0.01）。 结论：缺血再灌注损伤损害了视网膜组织结构。Bcl-2和Bax参与了视网膜缺血再灌注损伤的调控,苯甲酸雌二醇可上调Bcl-2的表达,下调Bax的表达,保护视网膜组织。     

挫伤性视网膜病变中光感受器细胞凋亡与相关基因表达的研究

目的探讨挫伤性视网膜病变中Bax、Bcl-2表达与光感受器细胞凋亡的关系。方法自由落体法制作视网膜挫伤模型,行HE染色观察大鼠视网膜组织的病变情况;末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测感光细胞凋亡情况;PV免疫组织化学法检测视网膜组织中Bax、Bcl-2的表达。结果TUNEL染色显示挫伤后3d组视网膜内可见较多阳性表达的细胞,分布在外核层。余实验组未测到阳性着色细胞。Bax在挫伤后4h即有表达,随时间延长表达逐渐增加,至挫伤后3d达高峰,至7d、14d组表达阴性。Bcl-2的表达在各组均为阴性。结论细胞凋亡是挫伤性视网膜病变的重要机制之一,Bcl-2/Bax相对比值改变可能对细胞凋亡的发生起一定的诱导作用。     

外源性H2S预处理对大鼠RIRI细胞凋亡的影响

目的:探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体。将54只SD大鼠随机分成正常组、视网膜缺血再灌注损伤组(RIRI组)及硫氢化钠(NaHS)干预组,后两组进一步分为再灌注后6,24,48,72h组。采用前房灌注加压的方法建立RIRI模型,TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测视网膜组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:细胞凋亡出现于缺血灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降。与RIRI组比,NaHS组Bcl-2蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少(均P<0.05)。结论:H2S预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值从而调控细胞凋亡,对大鼠RIRI进行保护作用。     

急性视网膜缺血再灌注损伤后大鼠视网膜副凋亡和自噬的发生

目的　探讨大鼠急性视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）后不同时间点视网膜中副凋亡及自噬的发生。方法　将30只健康成年SD雄性大鼠随机分为RIRI组及正常对照组。利用高眼压前房灌注法建立SD大鼠急性RIRI动物模型。正常对照组不做任何处理。急性RIRI后1 d、3 d、7 d、28 d各时间点取各组大鼠的视网膜组织,利用透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）检测视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）副凋亡及自噬的发生;利用免疫荧光染色法检测视网膜微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3）的表达。结果　急性RIRI后1 d持续至28 d,TEM可见RGCs细胞质空泡数量较正常对照组增高。急性RIRI后1 d持续至28 d,TEM可见RGCs细胞质中自噬体数量增加。正常对照组RGCs的细胞质中自噬体每50 μm²平均为0.79个,急性RIRI后7 d自噬体的平均数量达到高峰,每50 μm²平均为2.29个,与正常对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光法检测发现,与正常对照组相比,急性RIRI后1 d开始,RGCs的细胞质中LC3表达增加,并在整个实验期间持续高表达,正常对照组RGCs层的LC3阳性细胞百分比为15.90%,急性RIRI后1 d、28 d时LC3阳性细胞百分比分别为46.95%和52.30%,与正常对照组相比差异均具有统计学意义（均为P<0.05）。结论　急性RIRI后RGCs涉及副凋亡和自噬的激活,各种类型的程序性细胞死亡可作为单一细胞死亡的形式或多种细胞死亡形式共存,参与急性RIRI视网膜损伤。     

不同N-乙酰-5-羟色胺(NAS)给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨腹腔与尾静脉注射N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)两种给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)组织病理学、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法健康无眼疾成年Sprague-Dawley雄性大鼠54只,采用随机数字表法分为正常对照组(n=6)、RIRI腹腔组(n=12)、RIRI静脉组(n=12)、NAS腹腔组(n=12)和NAS静脉组(n=12),后四组采用升高眼压法建立大鼠RIRI模型。NAS腹腔组、NAS静脉组于建模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射NAS(10 mg·kg^-1),RIRI腹腔组、RIRI静脉组于造模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射同等剂量的生理盐水。RIRI后24 h,采用免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL染色检测各组视网膜细胞凋亡情况;RIRI后7 d,HE染色观察各组视网膜组织病理学变化。结果 HE染色结果示,正常对照组大鼠视网...     

视网膜缺血-再灌注损伤中小胶质细胞对微循环的破坏作用

目的　探讨视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)中小胶质细胞活化与视网膜微循环损伤的关系及作用机制。方法　160只雄性C57BL/6小鼠右眼均采用前房灌注建立RIRI模型为RIRI组，左眼不作处理为正常对照组。在损伤后24 h、48 h、72 h分别进行视网膜冰冻切片、视网膜铺片免疫荧光染色检测小胶质细胞的活化情况，检测相关缺氧因子及炎症因子的表达，与正常对照组比较，研究小胶质细胞的激活状态与微循环损伤的关系，并初步分析其作用机制。结果　视网膜微循环结构损伤观察结果显示，与正常对照组相比，RIRI后24 h组大部分血管仍呈正常形态；RIRI后48 h组，闭塞的血管数量增多；RIRI后72 h组，血管损伤明显加重。浅层毛细血管密度正常对照组，RIRI后24 h、48 h、72 h组间两两比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）。而深层血管网毛细血管密度RIRI后72 h组与其余3组相比明显减少，差异均有统计学意义（均为P<0.05），其余3组间差异均无统计学意义（均为P>0.05）。视网膜冰冻切片检测显示，RIRI后24 h组与正常对照组各层视网膜中抗离子钙接头蛋白（ionized calcium bindingadaptor molecule-1，Iba-1）阳性细胞数差异无统计学意义（P>0.05）。RIRI后48 h组各层中Iba-1阳性细胞数与正常对照组及24 h组差异均有统计学意义（均为P<0.05）。RIRI后72 h组各层中Iba-1阳性细胞数与正常对照组、24 h组、48 h组差异均有统计学意义（均为P<0.05）。视网膜铺片结果显示，RIRI后48 h组和72 h组活化的小胶质细胞数明显增加，与正常对照组和RIRI后24 h组在两个层次毛细血管中差异均有统计学意义（均为P<0.05），而72 h组小胶质细胞的活化达到高峰值，与其余组差异均有统计学意义（均为P<0.05）。RT-PCR检测结果显示:血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α的缺血缺氧因子，肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β的炎症因子在正常对照组与RIRI后24 h组、48 h组、72 h组，组间比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　激活的小胶质细胞在RIRI中发挥了对微循环的破坏作用，损伤早期抑制小胶质细胞的活化可能成为此类疾病治疗的新思路。