细胞自噬在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究

【摘要】 目的 研究细胞自噬在三氧化二砷（ATO）诱导的肝癌细胞死亡中的作用,观察调控细胞自噬对ATO诱导的细胞凋亡有何影响。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,在ATO作用于HepG2细胞的基础上,加入自噬激动剂〔雷帕霉素（Rap）〕和自噬抑制剂〔三甲基腺嘌呤（3-MA）〕进行调控。以MTT法检测细胞生存率,透射电镜观察自噬体结构,免疫印迹法分析自噬相关蛋白LC-3和Beclin1的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 5~20 μmol/L ATO与10 mmol/L 3-MA联用时HepG2细胞存活率比同剂量ATO单独作用时降低（P <0.05）,凋亡率增加（P <0.05）,细胞内呈现典型凋亡反应特征,自噬蛋白LC3和Beclin1表达低于ATO单独作用组（P <0.05）。相反,5~20 μmol/L ATO与0.25 μmol/L Rap联用时,HepG2细胞的存活率比ATO单独作用时显著增加（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）,细胞内出现大量自噬体结构,自噬蛋白LC3和Beclin1的表达较ATO单独作用组有增加趋势,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论 特异性自噬抑制剂能显著增强ATO杀伤肝癌细胞的敏感性,其机制与增强肝癌细胞凋亡有关。     

细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究细胞自噬在阿霉素诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。 方法 采用Western Blot法观察阿霉素杀伤Raji细胞过程中自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;并在给予阿霉素的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制后利用MTT和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡。 结果 阿霉素能诱导Raji细胞发生细胞自噬,并且通过抑制自噬能显著地增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞凋亡（p<0.05, p<0.01）从而增加阿霉素的疗效。 结论 在阿霉素杀伤Raji细胞的过程中,阿霉素诱导的细胞自噬能减弱阿霉素诱导的细胞凋亡作用;并且自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制细胞自噬能增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞作用,增强对Raji细胞的杀伤,并提示抑制自噬可能能增强阿霉素对淋巴瘤的杀伤。     

“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞凋亡中的作用

目的：初步研究“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞OCCM-30凋亡中的作用。方法：体外培养小鼠成牙骨质细胞,随机分为对照组、低氧组、低氧+Sirt1激活剂白藜芦醇组、低氧+自噬抑制剂3-MA组、低氧+白藜芦醇+Sirt1抑制剂ex527组、低氧+白藜芦醇+3-MA组,MDC染色观察自噬溶酶体变化;LC3Ⅱ免疫荧光检测自噬体变化;透射电镜观察自噬体;Western blot检测Sirt1、LC3Ⅱ、p62等蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同组间结果数据采用单因素方差分析,组间采用LSD-t分析。结果：低氧组较对照组自噬溶酶体含量（P=0.000）及自噬体数量（P=0.000）明显增加,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加（P=0.001）,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率增加（P=0.000）;低氧+白藜芦醇组较低氧组自噬溶酶体（P=0.019）及自噬体数量（P=0.000）、LC3Ⅱ蛋白表达（P=0.049）、Sirt1蛋白表达（P=0.000）明显增加,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率减少（P=0.021）;低氧+白藜芦醇+ex527组...     

神经酰胺代谢在细胞凋亡与自噬中的作用

神经酰胺是鞘脂类的代谢产物,经从头合成及"鞘磷脂循环"形成,调节着细胞对外界不良因素的应激反应.神经酰胺的合成、代谢及信号转导在肿瘤发生、发展、耐药及抵抗放射治疗有着密切的关系.神经酰胺通过内、外在途径促进细胞发生凋亡,还能激活JNK、KSR、PKC等促进细胞凋亡.神经酰胺经PI3K/AKT途径诱导细胞凋亡与自噬,增加Beclin 1水平,诱导自噬发生.本文就神经酰胺及其代谢产物在细胞凋亡与自噬过程所发挥的作用作一综述.     

自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞株（HK-2）凋亡中的作用。方法：培养HK-2细胞,根据培养环境氧浓度不同分为对照组（21%O2）和低氧组（1%O2）;根据低氧培养时间不同,低氧处理细胞进一步分为：低氧6 h亚组、低氧12 h亚组、低氧18 h亚组和低氧24 h亚组。Western blot检测HK-2细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和凋亡相关蛋白活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved-caspase3）表达水平,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡情况;采用低氧诱导稳定表达GFP-LC3的HK-2细胞18 h,在荧光显微镜下观察GFP-LC3自噬小体的变化;进一步采用低氧联合自噬诱导剂雷帕霉素（ra－pamycin,RP）或自噬抑制剂巴弗洛霉素A1（bafilomycin A1,BAfA1）处理HK-2细胞,细胞分为常氧对照组、常氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组、低氧对照组、低氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组。Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和cleaved-caspase3表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：与对照组（0.161±0.043）相比较,低氧12 h[（0.315±0.060）,P=0.019]、18 h[（0.586±0.063）,P=0.000]、24 h[（0.698±0.085）,P=0.000]亚组HK-2细胞cleaved-caspase3蛋白表达明显增多;低氧12 h、18 h、24 h亚组HK-2细胞凋亡率分别为（23.633±5.346）%、（25.200±4.782）%、（38.567±8.046）%,较对照组（11.800±3.966）%明显增多（P=0.036,P=0.021,P=0.000）。同时,低氧18 h、24 h亚组HK-2细胞表达Beclin1蛋白[（0.557±0.071）,（0.897±0.074）[较对照组（0.249±0.040）明显上调（P=0.001,P=0.000）;低氧6 h、12 h、18 h、24 h亚组细胞表达LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白[（1.795±0.143）,（2.873±0.078）,（3.029±0.089）,（3.735±0.059）]较对照组（1.322±0.191）明显上调（P=0.036,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;细胞表达自噬底物P62蛋白[（0.776±0.061）,（0.602±0.119）,（0.419±0.117）,（0.384±0.068）]较对照组（0.957±0.035）明显下调（P=0.028,P=0.001,P=0.000,P=0.000）;低氧组细胞GFP-LC3斑点计数相对值为（40.667±6.028）,较对照组（18.667±5.508）明显增加（P=0.010）。雷帕霉素增加自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡（26.433±3.402）及cleaved-caspase3蛋白表达（0.265±0.066）较低氧对照组[（36.133±5.856）,（0.358±0.060）]明显减少（P=0.012,P=0.000）;巴弗洛霉素A1抑制自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡增多（49.233±3.412）及cleaved-caspase3蛋白表达（1.242±0.110）较低氧对照组[（25.933±3.650）,（0.659 ± 0.060）]明显增加（P=0.000,P=0.000）。结论：自噬在低氧诱导的HK-2细胞凋亡中起保护作用。     

细胞自噬在迷迭香酸促进鼻咽癌细胞凋亡中的作用研究

目的 观察迷迭香酸(RA)对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡的影响,并探讨自噬在其中的作用.方法 将体外培养的CNE-1细胞分别用不同浓度RA(0、20、40、80μmol/L)处理48 h,CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-PE/7-AAD染色流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹技术法检测自噬相关蛋白LC3...     

自噬在双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制

目的 探讨自噬在天然萜类、双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用.方法 以前期筛选得到的具有抑制肿瘤细胞增殖活性的三萜化合物ST52和乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)、双联苄化合物H50、F41、H48和Riccardin D (RD)处理稳定表达GFP-LC3的人胶质瘤细胞株U87,荧光显微镜观察GFP-LC3的聚集斑点,确定化合物的自噬诱导作用.Western blot检测人激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3细胞中的自噬相关蛋白LC3、Atg5、Beclinl和p62的表达以及凋亡标志蛋白多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的剪切情况.自噬抑制剂或siRNA阻断Atg5表达后进行化合物处理,流式细胞技术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞的增殖活力,确定自噬对化合物诱导凋亡的影响.结果 筛选结果显示,双联苄类化合物均有不同程度的自噬诱导作用,其中RD的作用较强.RD促进PC-3细胞中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,中等强度诱导Atg5和Beclin1的表达,并导致自噬底物p62的降解.抑制自噬后,能增加RD诱导的细胞凋亡与PARP剪切,但凋亡抑制剂Z-VAD-FMK并不影响RD对LC3-Ⅱ的诱导程度.结论 RD诱导PC-3细胞产生具有保护性作用的自噬现象,抑制自噬可提高RD的抗肿瘤作用.     

自噬在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡中的作用

目的 观察在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）作用下甲状腺髓样癌TT细胞自噬发生情况,明确自噬在TRAIL诱导甲状腺癌TT细胞凋亡中的作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖抑制率;MDC染色检测自噬的发生情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 ①MTT实验显示：TRAIL对TT细胞增殖抑制作用弱,在浓度为250、500、1000、2000 ng/ml的TRAIL作用48 h后对TT细胞增殖抑制率分别为（3.02±1.82）％、（4.87±1.45）％、（7.51±1.57）％及（12.76±3.23）％;②TRAIL作用48 h后,胞内代表自噬小体的绿色荧光亮点明显增多,且随TRAIL浓度的增加而增加;③3-MA预处理TT细胞4h,TRAIL 500 ng/ml及1000 ng/ml的凋亡率分别为（17.83 ±1.54）％及（27.81±1.79）％,明显高于单用TRAIL（3.70±0.34、6.55 ±0.59）％与3-MA （7.71±0.64）％之和,差异有统计学意义（t=3.282,P＜0.05;t=7.830,P＜0.01）.④各实验组可见明显的caspase-8的活化裂解片段,自噬相关蛋白Beclin 1的表达明显减低.结论 甲状腺髓样癌TT细胞对TRAIL不敏感,TRAIL能诱导TT细胞内自噬发生,抑制自噬可明显改善TT细胞对TRAIL的敏感性.     

细胞自噬在辐射诱导旁效应中的作用研究进展

放射治疗是恶性肿瘤三大治疗手段之一.然而,放射治疗在杀伤肿瘤细胞的同时,也可引起未受辐射细胞及组织器官的损伤,称之为辐射诱导旁效应.研究发现细胞自噬可调控辐射诱导旁效应,探究其调控机制,为临床精准放疗和辐射防护提供依据.本文就辐射诱导旁效应及细胞自噬在辐射诱导旁效应中作用的研究进展作一简要综述.     

自噬与凋亡在骨肉瘤中的作用

骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的原发性骨肿瘤,其恶性程度高,严重影响患者的生存。虽然手术和多靶点化疗的联合治疗使得患者整体的生存率有了大幅度的提高,但化疗耐药仍然是骨肉瘤治疗的阻碍。骨肉瘤化疗耐药与其在发生发展过程中的凋亡和自噬等有一定关系。现在骨肉瘤中细胞凋亡、自噬的机制以及相互作用已经被初步探索,参与细胞凋亡、自噬的分子靶点、介质及相关机制已经开始研究,这对缓解骨肉瘤治疗过程中的化学耐药指导引领新的方向。     

多糖调控糖脂代谢的作用及其机制研究进展

多糖是由多个相同或不同结构的单糖通过糖苷键结合的化合物，广泛存在于动植物体内和微生物细胞壁中，具有安全性高、毒副作用小的特点。近年研究发现多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降低血糖与血脂等方面有着广泛的生物活性。其中，多糖改善胰岛素敏感性，调节糖、脂代谢的功效备受研究者的关注。很多多糖能够通过修护胰岛细胞，改善胰岛素抵抗、调节肠道菌群，增强抗氧化能力，调节糖脂代谢中关键酶的活性等作用机制来发挥降血糖降血脂作用。本文综述了多糖调控糖脂代谢的作用及其相关机制，如多糖调节糖代谢的作用机制包括修护胰岛细胞，增加胰岛素的含量; 增加胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗; 调节糖代谢中关键酶的活性; 增加肝糖原的合成; 调节肠道菌群; 多糖还能够通过改善机体免疫调节，拮抗升高血糖素来调节糖代谢。多糖对脂代谢的作用机制包括：通过调节脂质的吸收分布代谢排泄; 调节体内PPAR-α等相关基因的表达; 调节脂代谢酶的活性; 提高抗氧化能力; 多糖还可以通过调节肠道菌群以及调节信号通路来调节脂代谢。     

IL-17A/IL-17RA通过上调自噬降低卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性

目的 探讨白细胞介素（IL）17A通过调控细胞自噬对卵巢癌细胞顺铂（DDP）化疗敏感性的影响。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞并分别用不同浓度DDP（1、2、4、6、8、10、15、20 μg/mL）处理,MTT法测定细胞增殖活性以及IL-17A（100 ng/mL,处理24 h）对DDP 诱导SKOV3细胞凋亡的影响;流式细胞术检测人卵巢癌细胞SKOV3中IL-17A受体（IL-17RA）的表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况;IL-17RA 中和抗体（IL-17RA mAb）进行IL-17RA阻断实验;合成针对IL-17RA基因的siRNA片段（siRNA-IL-17RA）,转染SKOV3细胞,沉默IL-17RA表达;3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制细胞自噬水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bcl2、Bax、Cleaved Caspase3）、自噬相关蛋白（P62、Beclin-1）表达。结果 DDP可以增加卵巢癌SKOV3细胞IL-17RA表达水平;IL-17A降低SKOV3细胞对DDP的敏感性（P<0.05）;DDP诱导SKOV3细胞内自噬相关蛋白Beclin-表达增强,自噬降解底物P62蛋白减少;IL-17A/IL-17RA增强了DDP自噬诱导作用（P<0.05）;3-MA 阻断自噬后,SKOV3细胞凋亡率较干扰前明显升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl2表达水平降低、凋亡蛋白Bax表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-17A/IL-17RA可能通过上调DDP诱导的自噬水平降低人卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性。     

piRNA NU13对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨piwil2诱导的肿瘤样干细胞（piwil2-iCSCs）来源的差异piRNA NU13对肾母细胞瘤细胞（G401）生物学行为的影响。方法RT-qPCR检测G401中piRNA NU13及NOP56的表达情况；通过脂质体转染技术，在肾母细胞瘤细胞株G401中过表达及抑制piRNA NU13，并用RT-qPCR技术验证转染后G401细胞中piRNA NU13的表达量；通过CCK8检测转染后G401细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡能力，划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变；通过双荧光素酶实验检测NOP56与piRNA NU13的结合情况；通过Western blot检测MMP2、MMP9、BAX、Bcl2、NOP56蛋白表达情况。结果在人肾母细胞瘤细胞G401中piRNA NU13表达水平低于肾小管上皮细胞HK2（P < 0.05）；NOP56在G401及肾母细胞瘤组织均高表达（P < 0.05）；在G401中上调piRNA NU13表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭，并促进肿瘤细胞凋亡（P < 0.05）；过表达piRNA NU13可抑制MMP2、MMP9及Bcl2的表达水平，促进BAX表达（P < 0.05）；piRNA NU13与预测靶基因NOP56非直接结合，但可间接调控NOP56的表达。结论piRNA NU13在肾母细胞瘤中低表达，NOP56在肾母细胞瘤中高表达，piNU13可能间接调控NOP56表达从而抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡。     

基于自适应Unet网络的鼻咽癌放疗危及器官自动分割方法

目的 探讨鼻咽癌放射治疗中的危及器官（OARs）的自动分割的准确性。方法 在自动分割模型研究中,经CT扫描和医生手动分割后,选取147例鼻咽癌患者的CT图像及其对应勾画的OARs结构,并对其进行完全随机化分组,分成训练集（115例）、验证集（12例）、测试集（20例）。采用自适应直方图均衡化对CT图像进行预处理。利用端到端训练提高建模效率,实现一种基于三维Unet的改进网络（AUnet）,将器官大小作为先验知识引入卷积核大小设计中,使网络能自适应地提取不同大小器官的特征,从而提高模型的性能。比较自动与手动分割的DSC（Dice Similarity Coefficient）系数和豪斯多夫（HD）距离以验证AUnet网络的有效性。结果 测试集的平均DSC和HD分别为0.86±0.02和4.0±2.0 mm。除视神经、视交叉外,AUnet与手动分割结果无统计学差异（P>0.05）。结论 引入自适应机制后,AUnet能较为准确地实现基于CT图像对鼻咽癌的危及器官的自动分割,临床应用中可大幅度提高医生的工作效率及分割的一致性。     

27-P-CAUA通过抑制HER2/PI3K/AKT信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡和线粒体自噬

目的探讨大叶冬青叶中三萜类活性成分27-P-香豆酰基-乌索酸（27-P-CAUA）对乳腺癌细胞增殖抑制的作用机制。方法27-P-CAUA处理HCC-1806细胞24、48、72 h后，CCK-8法检测HCC-1806细胞存活率；集落克隆法检测27-P-CAUA对细胞的增殖抑制作用；JC-1检测线粒体膜电位改变；流式细胞术检测细胞凋亡情况；细胞免疫荧光观察C-Caspase-3、P62表达；氯喹预处理后，Western blot观察27-P-CAUA对LC3I/II、P62以及HER2信号通路蛋白的影响。结果CCK-8和集落克隆结果显示，随着药物浓度增加和时间延长，27-P-CAUA对HCC-1806乳腺癌细胞的抑制作用逐渐增强（P < 0.01），24、48、72 h的IC₅₀值分别为83.671、49.479、19.578 μmol/L；JC-1检测结果显示，线粒体膜电位改变明显（P < 0.01）；流式细胞术结果显示，27-P-CAUA可诱导细胞发生凋亡，细胞早期调亡比率增加3.34%；免疫荧光结果显示，C-Caspase-3表达增强，促进细胞凋亡，40 μmol /L 27-PCAUA能显著诱导细胞凋亡（P < 0.01）。Western blot和细胞免疫荧光结果显示，27-P-CAUA降低LC3II表达，导致P62降解，诱导自噬发生。经氯喹预处理后，27-P-CAUA诱导自噬可被逆转。此外，27-P-CAUA可抑制细胞内Her2及AKT蛋白的磷酸化，细胞内的Her2以及磷酸化AKT蛋白表达逐渐减少（P < 0.01）。结论27-P-CAUA可通过抑制HER2/PI3K/AKT信号通路，抑制HCC-1806细胞增殖，诱导细胞发生线粒体自噬和凋亡。     

迷迭香酸激活Parkin介导的线粒体自噬并抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

目的 评估迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞线粒体自噬水平以及细胞肥大的影响。方法 体外培养H9c2大鼠心肌母细胞,分为对照组（葡萄糖5.5 mmol/L）、高糖组（葡萄糖25 mmol/L）、高糖+迷迭香酸组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L）、高糖+迷迭香酸+Parkin-siRNA组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L+Parkin-siRNA转染）;Western blot法测定PINK1、Parkin、LC3II/LC3I蛋白表达水平,透射电子显微镜下观察线粒体自噬体形成情况,流式细胞术检测活性氧物质（ROS）与凋亡水平,分光光度法检测细胞线粒体呼吸链复合酶活性,荧光酶标法检测线粒体膜电位水平,3H-亮氨酸标记法检测细胞蛋白质合成速率,光学显微镜下检测心肌细胞表面积。结果 迷迭香酸可提高高糖培养下心肌细胞内PINK1、Parkin、LC3-II/LC3-I蛋白表达水平（P<0.05）,增多线粒体自噬体数量,并抑制高糖诱导的ROS生成、恢复线粒体呼吸链复合酶活性与线粒体膜电位水平（P<0.05）,抑制高糖诱导的细胞凋亡（P<0.05）,并降低心肌细胞表面积与蛋白质合成速率（P<0.05）。利用Parkin-siRNA抑制心肌细胞线粒体自噬,则阻断了迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞氧化应激与心肌细胞肥大的保护作用（P<0.05）。结论 迷迭香酸可通过激活Parkin介导的线粒体自噬,对高糖诱导心肌细胞的氧化应激损伤有保护作用,并改善心肌细胞肥大。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导人晶状体上皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞

目的 探讨姜黄素对人晶状体上皮细胞株SRA01/04（HLEC-SRA01/04）细胞周期和凋亡的影响及其相关分子机制,为姜黄素治疗和预防后发性白内障提供理论依据。方法 体外培养HLEC-SRA01/04细胞,加入终浓度分别为0 μmol/L（对照组）以 及20、40和60 μmol/L的姜黄素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测HLEC-SRA01/04细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western blot法检测姜黄素对HLEC-SRA01/04细胞中caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin B1、CDK1、β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果 MTT显示：随着姜黄素的浓度逐渐增加,HLEC-SRA01/04细胞较对照组抑制率逐渐增高（P<0.001）;随着作用时间的延长,各实验组HLEC-SRA01/04细胞增殖抑制率均逐渐增高（P<0.001）;流式细胞仪结果显示：各组中HLEC-SRA01/04细胞凋亡率和细胞G2/M期比例随姜黄素浓度增加逐渐增高,而线粒体膜电位随着姜黄素浓度增加逐渐下降（P<0.001）。Western blot 实验显示：随着姜黄素浓度的增加,HLEC- SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9和Bax的表达量逐渐增高,Bcl-2、Cyclin B1、CDK1和β-catenin的表达量逐渐降低,同时Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白Cyclin D1和c-myc表达量也逐渐降低。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HLEC-SRA01/04细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而诱导其凋亡。     

线粒体基因位点G12630A与冠心病患者他汀类药物诱导的肌痛相关

目的 探索确定与瑞舒伐他汀诱导的肌痛相关的线粒体基因变异位点。方法 对403例服用瑞舒伐他汀及双联抗血小板药物（DAPT）的冠心病患者进行GSA基因芯片检测,其中341人具有完整的肌痛相关随访信息,389人测得肌酸激酶（CK）水平。首先采用logistic回归模型评估69个线粒体基因变异位点与341名肌病患者的相关性,最后通过线性回归模型依次评估这些变异位点对389名患者肌酸激酶水平的影响。结果 线粒体G12630A变异与肌痛风险增加有关（OR：8.689;95%CI：1.586-47.6;P=0.01）,但不同G12630A基因型患者肌酸激酶水平无显著性差异（P>0.05）。而CK水平与T12285C、A13105G的相关性有统计学意义（P<0.05）。结论 线粒体基因位点G12630A与他汀类药物诱导的肌痛相关,这为临床上对于携带该风险等位基因的患者采取不同的治疗策略提供了理论基础。     

垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用

目的 研究垂体肿瘤转化基因（PTTG1）在系统性硬化症（SSc）中的表达及其对成纤维细胞的作用。方法 收集皮肤活检组织,其中SSc患者组21例,正常组22例。分别应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测皮肤组织中PTTG1基因表达水平;应用免疫组化方法检测皮肤组织中PTTG1蛋白表达水平;应用小干扰RNA（siRNA）降低成纤维细胞中PTTG1基因表达,通过 Real-time PCR 方法检测细胞中 PTTG1 及与细胞纤维化密切相关的几个基因α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1的表达变化;通过细胞实时增殖检测系统检测细胞增殖。结果 与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中PTTG1的表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中阳性细胞增多,PTTG1蛋白表达明显升高;原代皮肤成纤维细胞中PTTG1表达水平和α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1均存在正相关,差异具有统计学意义（R²=0.8192,P<0.05;R²=0.6398,P<0.05;R²=0.316,P<0.05;R²=0.3723,P<0.05）;同时,原代皮肤成纤维细胞中PTTG1干扰后,细胞增殖被显著抑制,纤维化相关基因（COL1A1、COL1A2、PAI-1）表达下降,胶原蛋白的基因表达降低。结论 SSc患者中存在PTTG1过度表达,干扰PTTG1可降低成纤维细胞活性,提示PTTG1与SSc纤维化程度密切相关。     

补骨脂乙素通过多途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞死亡

目的探究补骨脂乙素（IBC）对人乳腺癌MCF-7细胞死亡的作用及其可能机制。方法使用不同浓度IBC处理MCF-7细胞24、48、72 h后，用MTT法检测IBC对MCF-7细胞增殖的影响；将MCF-7细胞设置10、20、40 μmol/L IBC处理组，用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪、荧光显微镜检测IBC对MCF-7细胞凋亡的影响；免疫印迹法检测凋亡、自噬相关蛋白（Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、p62、LC3）表达的变化；透射电镜观察40 μmol/L IBC处理MCF-7后的细胞亚显微结构；利用JC-1试剂盒、ATP试剂盒和活性氧试剂盒检测IBC对细胞线粒体功能的影响。结果MTT实验结果显示，IBC具有抑制MCF-7细胞增殖的作用，并呈现浓度和时间依赖性，其作用24、48、72 h的IC₅₀值分别为38.46、31.31、28.26 μmol/L。IBC诱导MCF-7细胞发生凋亡，呈现浓度依赖性。预处理凋亡抑制剂z-VAD-fmk后，其细胞存活率显著高于单独处理IBC组（P < 0.05），而程序性坏死抑制剂Nec-1没有保护作用。免疫印迹结果显示IBC增加促凋亡蛋白Bax（P < 0.05）表达，下调Bcl-2（P < 0.05）、Akt（P < 0.05）及其Ser-473位的磷酸化水平（P < 0.05）而诱导凋亡。同时，随着IBC浓度的增加，自噬相关蛋白p62的表达逐渐增加，LC3-II/I比值升高，透射电镜下也观察到IBC处理的MCF-7细胞胞浆内有自噬泡以及自噬小体。试剂盒检测到IBC导致线粒体膜电位降低、细胞内ATP水平下降、产生和积聚活性氧（ROS）（P < 0.05）。结论IBC诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡和自噬等多种死亡形式，可成为今后抗乳腺癌创新药物研发的先导化合物。