血清Dickkopf-1水平在诊断肺癌及其骨转移中的应用价值

目的 分析血清Dickkopf-1(DKK1)水平在肺癌及其骨转移中的变化,应用ROC曲线评价其在肺癌诊断中的价值.方法 将116例肺癌患者根据骨转移程度分为未转移组、局限转移组和广泛转移组,另外收集82例肺结核患者作为疾病对照组和105例健康体检者作为健康对照组.所有对象均测定血清DKK1和细胞角蛋白19片段(Cyf...     

血浆DNA甲基化检测在宫颈疾病诊断中的应用

目的对宫颈疾病患者血浆APC和RASSF1A基因启动子甲基化水平进行定量检测,探讨其在宫颈疾病诊断中的意义。方法收集34例宫颈低度病变(CINⅠ期)、43例宫颈高度病变(包含CINⅡ、CINⅢ期)、41例宫颈癌患者治疗前血浆及25例健康妇女血浆。另收集31例与血浆对应的宫颈组织标本。用双重实时荧光定量甲基化特异性PCR(qMSP)技术检测APC和RASSF1A基因启动子甲基化水平并进行统计学分析。结果宫颈疾病患者血浆中APC和RASSF1A甲基化水平与肿瘤组织有较好的一致性,且肿瘤组织水平高于血浆水平(Z分别为-2.236和-3.228,P均<0.05)。宫颈癌组血浆APC与RASSF1A甲基化率均高于低度病变组(P均<0.05);宫颈高度病变组血浆RASSF1A甲基化率也高于低度病变组,差异有显著性(P<0.05)。血浆APC和RASSF1A甲基化阳性结果在低度病变组、高度病变组和宫颈癌组均无显著性差异(P>0.05)。结论血浆DNA甲基化水平能反映宫颈癌的发生、发展变化,在宫颈癌的早期诊断中可能有重要价值。     

单发及双原发癌食管鳞癌CDH1基因甲基化的研究

目的:研究单发及双原发癌食管鳞癌组织CDH1基因甲基化变化特征及其与性别、年龄、烟酒史和肿瘤家族史的关系。方法:应用甲基化特异性PCR法,检测62例单发食管鳞癌(esophageal squamouscell carcinoma,ESCC)、18例双原发癌食管鳞癌患者癌及癌旁组织CDH1基因甲基化的表达。结果:单发及双原发癌食管鳞癌,CDH1基因甲基化阳性率在癌组织中为51.6%和66.7%,癌旁组织为22.6%和22.2%,正常组织为0%。癌与癌旁组织相比差异均有统计学意义(均P<0.05),癌与正常组织差异均有统计学意义(均P<0.05),癌旁与正常组织间差异均无统计学意义(均P>0.05)。单发和双原发癌食管鳞癌组织CDH1基因甲基化阳性率比较无统计学差异(P>0.05)。CDH1基因甲基化与性别、年龄、烟酒史及上消化道肿瘤家族史均无关。结论:CDH1基因甲基化在单发及双原发癌食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件;CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素。     

WNT1在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的研究

目的探讨WNT1在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及在宫颈癌的发生发展中的意义。方法应用免疫组化方法检测WNT1在20例正常宫颈组织、21例低度病变(CINⅠ)、45例高度病变(CINⅡ~Ⅲ)及42例宫颈鳞癌中的表达。用杂交捕获第二代方法检测高危人乳头状病毒(HR-HPV)载量。结果与正常宫颈对照组相比,CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ中WNT1表达逐步增加,宫颈上皮内瘤变中WNT1表达明显增加(P<0.05);与低度病变相比,高度病变中WNT1表达增加,但无统计学意义(P>0.05)。与正常宫颈组织相比,宫颈鳞癌中WNT1表达明显增加(P<0.05);与高度病变相比,宫颈鳞癌中WNT1表达明显减少(P<0.05);WNT1在宫颈鳞癌组织中的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。WNT1蛋白表达强度与HR-HPV感染负荷量无相关性(P>0.05)。结论 WNT1可能成为辅助诊断CIN的相关标志物,WNT1可能参与宫颈癌的发生。     

五聚素3基因甲基化在食管鳞癌中的作用

目的研究食管鳞癌组织中五聚素3(PTX3)基因的表达,以及基因启动子区甲基化状态对其表达的影响。方法应用半定量逆转录PCR(RT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)、免疫组织化学的方法对癌旁食管黏膜组织和食管鳞癌组织进行检测,分析PTX3基因mRNA的表达、基因启动子区甲基化状态和PTX3蛋白阳性表达与食管癌临床病理特征的关系。结果 25%(5/20)食管鳞癌组织和90%(18/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因表达,PTX3mRNA在食管癌与癌旁组织之间的表达差异有统计学意义(χ2=17.289,P<0.001)。80%(16/20)食管鳞癌组织和25%(5/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因CpG岛超甲基化,提示PTX3基因超甲基化与食管癌发生之间有关联(χ2=12.13,P<0.001)。PTX3蛋白在食管癌组织中表达的阳性率为30.38%(24/79),癌旁食管组织PTX3蛋白阳性表达率为84.81%(67/79)(P<0.001)。随着食管癌临床分期增加,PTX3蛋白阳性表达率逐渐降低。结论 PTX3基因启动子高甲基化是PTX3表达失活的主要原因,在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,PTX3基因启动子甲基化可作为食管鳞癌预后评估的潜在肿瘤标志物。     

RASSF1A基因甲基化在乳癌中的研究进展

随着人们对肿瘤的深入研究．发现多数实体肿瘤存在3号染色体短臂（3p）缺失，提示3p区域所含的基因对肿瘤发生发展起着重要作用，可能隐含肿瘤抑制基因。因此，人们从染色体3p上发现了BLU、FUS1、RASSF1A等抑癌基因。现将RASSF1A甲基化在乳癌中的研究进展综述如下。     

甲基化寡核苷酸诱导灭活RASSF1基因在肝癌发病机制中的应用

目的:甲基化寡核苷酸诱导灭活RASSF1基因并探索其启动子甲基化在肝癌发病机制中的应用。方法:将与RASSF1基因启动子互补的甲基化寡核苷酸转染至肝癌SMMC-7721细胞系内,分别采用BSP和RT-PCR检测转染前后RASSF1基因启动子甲基化状态和mRNA表达状况。结果:正常SMMC-7721细胞系RASSF1基因启动子表现无甲基化状态并表达相应mRNA。转染互补甲基化寡核苷酸后,相应CG位点被诱导成完全甲基化状态,mRNA表达明显受到抑制。结论:互补甲基化寡核苷酸可诱导基因启动子甲基化状态,RASSF1基因启动子甲基化在原发性肝细胞癌发病机制中扮演重要角色。     

急性白血病zo-1基因启动子区甲基化状态研究

本研究探讨健康人和急性白血病(AL)不同时期患者zo-1基因启动子区甲基化状态差异。采用硫化测序特异性PCR(BS-PCR)方法对白血病细胞系、AL患者及健康人骨髓标本进行zo-1基因启动子区甲基化状况检测。结果显示:在健康人骨髓中呈低甲基化状态(1.9%),初治、复发和完全缓解的AL患者骨髓中zo-1基因呈高甲基化状态,甲基化率分别为93.2%、66.9%及16.4%,明显高于健康人,差异均有统计学意义(p0.05)。结论:与健康人相比,急性白血病患者骨髓细胞zo-1基因呈高甲基化状态,且AL不同时期的患者中zo-1基因都发生了不同程度的甲基化改变,对zo-1基因甲基化状态的分析有助于监测AL患者疾病的进展。     

乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:对乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1(thyroid hormone receptorβ1,TRβ1)基因沉默机制进行初步探讨.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)和直接测序法检测40例乳腺癌、癌旁组织及10例正常乳腺组织中TRβ1基因启动子甲基化状态;分析其与临床病理特征间的关系.结果:乳腺癌及癌旁组织中TRβ1 基因启动子甲基化率分别为80.0%、72.5%,而正常乳腺组织仅10%;直接测序结果显示至少3个CG位点有甲基化改变.TRβ1基因启动子甲基化与患者的年龄、淋巴结转移、临床分期不相关.结论:甲基化可能是乳腺癌中TRβ1基因表达沉默的重要机制之一,在乳腺癌发生发展中起一定作用.     

CDH1基因甲基化与食管鳞癌的关系

目的 探对食管鳞癌组织中CDH1基因启动子区甲基化的表达状况及其与烟酒史、肿瘤家族史的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测食管鳞癌中CDH1基因启动子区甲基化情况.结果 食管鳞癌、癌旁及正常组织CDH1基因的甲基化阳性率分别为51.6％(32/62)、22.6％(14/62)和0(0/18).癌与癌旁组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01);癌和正常组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=15.484,P＜0.01);癌旁与正常组织间差异无统计学意义(x2 =3.487,P＞0.05).食管鳞癌CDH1基因甲基化情况与其性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CDH1基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生关系密切,在食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件.CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素.     

白血病细胞WT1基因启动子区DNA甲基化研究

目的：研究白血病细胞WT1启动子区DNA甲基化与其表达的关系。方法：采用RT-PCR技术、硫化PCR结合限制性内切酶技术检测白血病细胞系及正常人外周血单个核细胞WT1基因的表达及其启动子区DNA甲基化水平。结果：正常人外周血单个核细胞及U937细胞不表达WT1基因，而HL-60、K562和KG1细胞高表达WT1基因，HL-60细胞WT1基因无甲基化。结论：WT1基因启动子区DNA甲基化不能抑制其表达，尚存在其他调节WT1基因表达的因素。     

食管鳞癌患者血浆与肿瘤组织DNA甲基化检测的应用价值

目的 研究食管鳞癌患者肿瘤组织和血浆多基因甲基化状态及其对食管鳞癌诊断的应用价值.方法 用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对癌旁正常组织、患者术前1d、术后7d血浆游离DNA中腺瘤性息肉瘤基因(adenomatous polyposis coli,APC)、维甲酸受体β2基因(retinoic acid receptor-beta2,RARβ2)、上皮细胞钙黏蛋白基因(E-cadherin,CDH1)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂4A家族p16基因(cyclin-dependent kinase inhibitor4A,p16INK4α)、Ras相关家族蛋白1A基因(ras association domain family member 1A,RASSF1 A)甲基化,选取同期60名年龄、性别匹配的健康志愿者血浆DNA作对照.用x2检验分析各类组织与血浆标本中5个基因DNA甲基化率的差异;血浆与食管鳞癌组织标本DNA甲基化的相关性用Spearman相关分析;绘制受试者操作特征(receive operating characteristic,ROC)曲线评价单基因与5个基因联合检测诊断食管鳞癌的敏感度、特异度.结果 食管鳞癌组肿瘤组织中的APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A基因甲基化阳性率分别为44.7％ (34/76)、72.4％(55/76)、72.4％( 55/76)、86.8％( 66/76)、55.3％ (42/76),均显著高于对应癌旁正常组织[6.6％(5/76)、3.9％ (3/76)、3.9％ (3/76)、3.9％ (3/76)、2.6％( 2/76),x2值分别为29.01、75.39、75.39、105.34、57.18,P均＜0.001].食管鳞癌组术前血浆中5个基因的甲基化阳性率分别为42.1％(32/76)、63.2％ (48/76)、63.2％ (48/76)、71.1％ (54/76)、50.0％( 38/76),均显著高于健康对照组[3.3％ (2/60)、3.3％(2/60)、1.7％( 1/60)、3.3％ (2/60)、1.7％ (1/60),x2值分别为26.88、51.62、55.01、63.48、38.30,P均＜0.001].食管鳞癌患者血浆与肿瘤组织中5个基因甲基化的符合率均较高(Kappa值分别为0.679、0.791、0.791、0.542、0.895,P均＜0.001).血浆中APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A基因甲基化单项诊断食管鳞癌的敏感度分别为42.1％( 32/76)、63.2％(48/76)、63.2％( 48/76)、71.1％ (54/76)、50.0％( 38/76),特异度分别为96.7％( 58/60)、96.7％(58/60)、98.3％ (59/60)、96.7％( 58/60)、98.3％( 59/60);ROC曲线下面积(AUC)分别为0.694[95％可信限(CI)0.606～0.782]、0.799( 95％ CI 0.723 ～0.875)、0.807( 95％ CI 0.733～0.882)、0.839(95％ CI0.769～0.908)、0.742(95％ CI 0.659～0.824);5个基因联合检测血浆甲基化的敏感度为80.3％ (61/76),特异度88.3％ (53/60),ROC曲线AUC为0.843(95％ CI 0.773～0.913).联合检测的敏感度显著高于APC、RASSF1A单项检测(x2值分别为23.30、15.33,P均＜0.001),但与RARβ2、CDH1、p16INK4α的敏感度差异无统计学意义(x2值分别为5.48、5.48、1.75,P值分别为0.019、0.019、0.186);联合检测与单项检测的特异度差异无统计学意义(x2值分别为1.922、1.922、3.348、1.922、3.348,P均＞0.05).结论 食管鳞癌患者血浆与肿瘤组织中抑癌基因甲基化符合率均较高,血浆中5个基因甲基化联合检测诊断食管鳞癌与单基因检测相比无显著优势,但前者敏感度高于后者.     

造血系统肿瘤WT1基因启动子区域DNA甲基化及其调控的研究

目的 应用聚合酶链反应（PCR）的实验方法研究白血病细胞系中WT1基因启动了区域的DNA甲基化水平，及其与WT1基因表达的关系。方法 ①采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR（Methylation-spectific PCR，MSP）技术检测8226、HL-60、Jurkat、KG-1及Raji等血液系统肿瘤细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态；②以5-杂氮脱氧胞嘧啶（5-aza-CdR）对U937细胞系进行去甲基化处理，并观察WT1基因表达水平的改变。结果 ①HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1表达水平高，而8226、Jurkat、Raji、U266和U937细胞系WT1表达水平则极低，同时检测到在8226、Jurkat、Raji、U266和U937这5个细胞系存和WT1基因启动子区域DNA高甲基化；②经去甲基化处理后，U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者上升，同时伴随着WT1启动子区域DNA甲基化水平的下降和未甲基化水平的升高。结论 WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一。     

宫颈脱落细胞RASSF1A基因甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究宫颈脱落细胞RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测宫颈癌患者和健康女性宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化,分析与病理因素间的关系。结果宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率为64.0%,高于健康女性的1.3%(P<0.05)。宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率在宫颈癌不同组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、Figo分期患者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌病理因素密切相关,可作为宫颈癌病情判断和预后评估的标志物。     

磁微粒化学发光法测定DKK-1在肝细胞癌诊断中的价值

目的首次运用磁微粒化学发光免疫分析法探讨血清Dickkopf-1(DKK-1)检测在肝细胞癌(HCC)诊断中的临床应用价值。方法采用双抗体夹心磁微粒化学发光免疫分析法定量测定205例HCC患者、40例肝硬化患者和200例健康体检者血清DKK-1和AFP水平,计算ROC曲线下面积及DKK-1和甲胎蛋白(AFP)对HCC诊断的灵敏度和特异度。结果 HCC组DKK-1水平显著高于肝硬化组和健康体检组(P0.01)。DKK-1对AFP阴性的HCC阳性率高达66.3%。ROC曲线结果表明:DKK-1最佳诊断界值为2.4ng/mL,AUC为0.822(95%CI:0.783~0.856),灵敏度为65.9%,特异度为87.5%。此外,DKK-1与AFP联合检测HCC曲线下面积(AUC)为0.915(95%CI:0.886~0.940),灵敏度为81.5%,高于任一单一指标检测(P0.05)。结论 DKK-1对HCC的诊断具有重要价值,尤其对AFP阴性的HCC患者有较高的检出率,DKK-1联合AFP检测可显著提高HCC诊断的灵敏度及准确度。     

卵巢上皮癌中DNA错配修复基因启动子区甲基化状态研究

目的探讨卵巢上皮癌中DNA错配修复基因（hMLH1、hMSH2）启动子区甲基化状态及其在卵巢癌发生发展中的作用。方法用甲基化特异性PCR（MSP）法检测20份正常卵巢组织，25份良性卵巢肿瘤，56份卵巢上皮癌中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态；同时检测5-氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理前后卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中hMLH1、hMSH2甲基化改变；逆转录（RT）-PCR法检测5-Aza—CdR（1μm/L）处理前后卵巢癌细胞株中hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平。结果正常卵巢癌组织中均未见hMLH1、hMSH2启动子甲基化；良性卵巢肿瘤中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为4％（1／25）、8％（2／25）；卵巢上皮癌中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为30．4％（17／56）、51．8％（29／56）；且与肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。5-Aza—CdR处理卵巢癌细胞株后，可逆转hMLH1和hMSH2启动子区的甲基化，细胞株的hMLH1和hMSH2 mRNA表达均有不同程度的增加。结论DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2甲基化为卵巢癌发生发展中的早期基因改变，有可能成为卵巢癌早期诊断、评价疗效和判定预后的分子生物学指标。hMLH1和hMSH2甲基化与mRNA表达密切相关，是表达调节的重要方式之一，这种改变可被甲基化酶抑制剂所逆转。     

血浆鳞状细胞癌抗原在宫颈肿瘤中的表达

目的 通过检测宫颈上皮内瘤变及不同分期宫颈癌患者血清鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)的水平,结合临床病理特征探讨其在评估宫颈肿瘤中所起的作用.方法 检测40例不同分期宫颈癌患者,20例宫颈上皮内瘤变患者治疗前后血清中的SCC-Ag水平.结果 血清SCC-Ag水平与宫颈癌的病理分期有关,分期越晚,阳性率越高,同时血清SCC-Ag水平也越高.血清SCC-Ag≥4.0ng/mL时,其表达的阳性率与盆腔淋巴结转移有关.各病理学分期患者治疗后血清SCC-Ag水平均明显低于治疗前,分期越晚,治疗后sCC-Ag表达较治疗前降低越明显,宫颈癌复发后SCC-Ag表达明显增高.结论 血清SCC-Ag的表达对宫颈癌的诊断、预后评估和疗效观察有较高的临床价值.