蛹虫草子实体保健酒的研制

采用冷浸提法制蛹虫草酒,研究了浸提工艺对功效成分的影响,并探讨了后期的澄清工艺.实验表明,蛹虫草酒浸提工艺是完整子实体在40%VoL基酒中浸提1个月,经过添加明胶、活性炭为澄清剂,微孔滤膜抽滤的澄清步骤后,保健酒于室温下静置两个月,未见浑浊再现.以人工培养的蛹虫草子实体为主要原料研制的新型保健酒具有独特的香气和营养滋补保健作用.     

类胡萝卜素对蛹虫草子实体形成的影响

类胡萝卜素对蛹虫草子实体形成有很大影响。为了探讨类胡萝卜素与蛹虫草子实体形成的关系,选取三种典型菌落形态的蛹虫草菌株,研究其在光照黑暗交替条件下不同菌落形态和类胡萝卜素含量对子实体形成的影响。采用酸热法和吸收光谱法提取测定类胡萝卜素含量。结果表明三类蛹虫草在沙氏平板上均有可形成子实体的菌株,说明形态与子实体形成无直接关系。类胡萝卜素含量在3000μg/g以下的菌株在沙氏培养基上无子实体形成,3000~3500μg/g有子实体形成平均为2个/cm2,3500~6500μg/g菌株子实体形成能力较强平均为7个/cm2,含量在6500μg/g以上菌株形成子实体平均在5个/cm2,全黑暗培养菌株未检测到类胡萝卜素,也无子实体形成。      

蛹虫草多糖对紫外线诱发蚕豆根尖细胞微核的影响

目的：研究蛹虫草多糖对紫外线诱发的蚕豆根尖细胞微核的影响。方法：采用蚕豆根尖细胞微核试验。结果：浓度为30、50、80、100μg/ml 的蛹虫草胞内、胞外多糖对蚕豆根尖微核率与阳性对照组相比均具有极显著差异(p ＜ 0.01),浓度为100μg/ml 的蛹虫草胞内、胞外多糖对根尖微核的抑制率分别为47.68%、43.04%。蛹虫草胞内、胞外多糖每种样品的不同浓度之间对微核的影响存在极显著的差异(p ＜ 0.01),且蚕豆微核率随多糖浓度的提高而降低。结论：蛹虫草胞内、胞外多糖均可有效抑制紫外线诱发的蚕豆根尖细胞微核的产生。     

蛹虫草胞内锌多糖对丝裂霉素诱发蚕豆根尖细胞微核的影响

以蛹虫苹为材料,利用蚕豆根尖细胞微核实验,探讨了蛹虫草胞内锌多糖对丝裂霉素（MMC）诱发的蚕豆根尖细胞微核的影响。结果表明：胞内锌多糖对蚕豆根尖细胞微核的产生具有显著的抑制作用,且胞内锌多糖抑制微核产生的能力随胞内锌多糖浓度增加而增强．当胞内锌多糖浓度为100ug／mL时,抑制MMC诱发的蚕豆根尖细胞微核率最高到达59．56％。蛹虫草胞内锌多糖具有显著抑制蚕豆根尖细胞微核产生的能力。     

人工蛹虫草子实体多糖分离最佳工艺研究

蛹虫草又称北冬虫夏草，作为蛹虫草的活性成分之一的蛹虫草多糖，对小鼠的特异性、非特异性、体液免疫及红细胞免疫均有显著增强作用。为了更好地进行蛹虫草多糖活性的研究，本文对其最佳分离条件进行了深入研究。     

人工蛹虫草子实体多糖分离最佳工艺研究

蛹虫草(C．militaris(Vuill．)Fr．)又称北冬虫夏草，与冬虫夏草同属异种，前者有效成分的种类及含量与后者接近，而人工培养又较后者成功，但迄今为止对蛹虫草多糖的研究还寥寥无几，只是近年来，蛹虫草人工培养及其活性成分的研究才相对活跃起来。     

不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响

通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力,研究不固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响。结果表明,不同固体培养基培养蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著（P＜0.05）,其中小米+麦麸培养基培养蛹虫草子实体的生长情况较佳,出芽时间最快,为12 d,子实体最长,为（6.50±0.15） cm,鲜质量最重,为（8.58±0.07） g,其虫草素和虫草酸含量最高,分别为（6.53±0.06） mg/g和（7.66±0.21） mg/g;薏仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高,为（59.07±1.89） mg/g,薏仁米＋麦麸培养基抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率分别为（66.84±0.77）%、（68.28±0.26）%。     

蛹虫草多糖提取纯化工艺研究

为能更好地产业化开发利用蛹虫草,对蛹虫草多糖的提取纯化工艺进行研究。通过正交试验探讨了料液比、提取温度和提取时间对多糖提取率的影响,在此基础上通过分析不同的醇沉和去蛋白纯化条件,确定蛹虫草多糖的最佳制备工艺。结果表明,最佳工艺为先在液料比30∶1(V∶m)、提取温度70℃和提取时间4h下提取多糖,然后在浓缩液浓度为14%、乙醇溶液浓度为80%下进行醇沉,再调节多糖溶液的pH=3并加入4%的硫酸锌。整个工艺多糖提取率为8.97%,纯度高达68.9%,有良好的去杂纯化效果且多糖损失较小。该研究为产业化生产蛹虫草多糖提供了基础数据。     

蓝光对蛹虫草多糖含量的影响

蛹虫草菌种在两种不同的液体培养基(其中一种添加奶粉)中经摇发酵培养后,再在静置培养过程中以蓝光照射蛹虫草菌丝体,研究蓝光照射对其产生胞内和胞外多糖含量的影响。结果表明,在不含有奶粉的液体培养基表面生长蛹虫草菌丝体,其胞外多糖和胞内多糖含量受蓝光照射的影响而降低;而在培养基中加入奶粉以后,蓝光照射时也可降低胞内多糖的相对含量,但使蛹虫草胞外多糖含量稍有增加。     

蛹虫草子实体多糖对腹水型肝癌移植瘤超微结构的影响

目的:研究蛹虫草多糖(CMPS)对小鼠移植型腹水型肝癌(H22)体内诱导肿瘤细胞凋亡作用,探讨其抑瘤作用机制。方法:建立H22移植瘤小鼠模型,采用电镜技术观察H22荷瘤小鼠肿瘤组织的超微结构改变;免疫组织化学法检测蛹虫草多糖作用后H22肿瘤组织细胞内P53蛋白的表达情况。结果:电镜观察到蛹虫草多糖作用后H22肿瘤组织细胞有早期凋亡改变,肿瘤组织内有凋亡细胞存在;免疫组化实验结果显示,蛹虫草多糖作用后H22小鼠肿瘤组织细胞突变型P53蛋白的表达水平降低。结论:蛹虫草多糖具有诱导小鼠H22肝癌细胞凋亡作用,促凋亡作用可能与其降低H22小鼠肿瘤组织细胞内突变型P53蛋白的表达有关。      

蛹虫草基质多糖纳米硒复合物的制备研究

以多糖为软模板,可以制备高效低毒的纳米硒-多糖复合物。本文以废弃的蛹虫草培养基质中提取的水溶性多糖为原料,研究了蛹虫草基质多糖纳米硒复合物的制备工艺及抗肿瘤活性。实验结果表明,在多糖浓度为10 mg/m L、亚硒酸浓度为0.4 mol/L、混合时间为4 h、滴加速度为1.5 r/min的条件下,可以制备出形貌理想、粒径适宜、稳定性良好的蛹虫草基质多糖纳米硒复合物。该复合物对Caco-2肿瘤细胞的生长具有一定抑制效果,且对细胞毒作用呈现出剂量依赖效应。      

一种蛹虫草多糖的结构特征及体外抗氧化活性

采用分子筛层析法从人工培养蛹虫草子实体中分离纯化得到一种多糖W-CBP80Ⅰ,进而分别采用凝胶渗透色谱（GPC）、气-质联用（GC-MS）、红外光谱（IR）、核磁共振(¹H NMR和¹³C NMR)研究其理化性质和结构特征。结果表明:W-CBP80Ⅰ含有α-糖苷键,并主要由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成。它主要成分为低分子量多糖,分子量为8.93×10³。此外,W-CBP80Ⅰ具有体外清除DPPH,羟基和超氧阴离子自由基活性。      

蛹虫草高产胞外虫草素和虫草多糖的诱变育种

通过诱变获得高产胞外虫草素和虫草多糖的蛹虫草菌株.采用紫外线诱变(UV)、化学诱变(LiCl)、复合诱变(UV-LiCl) 3种方式对蛹虫草孢子进行诱变;发酵检测存活菌株的胞外虫草素和虫草多糖的含量.结果:以胞外虫草素为指标,3种诱变方式的最大正突变率分别为化学突变(29.2％)＞紫外突变(28.6％)＞复合诱变(26.5％);以胞外多糖为指标,最大正突变率分别为紫外诱变(35.7％)＞复合诱变(33.3％)＞化学诱变(27.0％).紫外诱变突变株Z-5-1胞外虫草素产量达0.842g/L,比出发菌株高311％;紫外诱变突变株Z-4-7胞外虫草多糖产量达5.250g/L,比出发菌株高148％.在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性.紫外诱变能获得较高的蛹虫草正突变率,同时能获得高产虫草素、虫草多糖的突变株.     

蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性。方法乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品。用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响。结果蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49×10^4,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖。多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用。结论该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用。     

蛹虫草所产类胡萝卜素的稳定性研究

从蛹虫草菌丝体中提取色素,经定性分析,结果显示具有三指峰,确定该色素为类胡萝卜素。考察其稳定性,结果表明,温度越高,对其损失越多;Fe3+、Cu2+对其影响较大,H2O2对其影响不明显;但其对HCl敏感,对NaOH不敏感;光照对其具有影响,储存过程中应置于阴暗处。      

蛹虫草胞外多糖的制备、结构分析及其免疫活性

本实验选择蛹虫草菌株CICC 14014液态发酵培养,提取蛹虫草胞外多糖,测定其理化性质及结构,并对其免疫活性进行研究。采用DEAE-Sephacel阴离子交换柱联合Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱纯化蛹虫草胞外多糖;利用高效液相色谱法测定多糖分子质量,利用傅里叶变换红外光谱鉴定多糖结构;选用BALB/c小鼠构建免疫损伤模型,考察其体质量及免疫器官指数变化情况,观察其脾脏组织切片形态,计算其T、B细胞增殖率,测定其血清细胞因子及免疫球蛋白质量浓度。结果表明,蛹虫草发酵液中多糖质量浓度为3.15 mg/mL,经分离纯化后所得单一多糖分子质量为3.67 kDa,纯度可达86.13%。动物实验结果表明,蛹虫草胞外多糖可明显提高免疫器官指数,能够有效促使T细胞（低剂量时）、B细胞增殖和免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）G、IgA、IgM、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-2、干扰素（interferon,IFN）-γ的分泌,免疫调节效果显著。研究结果表明蛹虫草胞外多糖可修复环磷酰胺导致的BALB/c小鼠免疫功能损伤,为开发蛹虫草发酵液资源建立了部分理论支撑。     

北虫草发酵过程中营养成分及代谢物变化研究

研究了北虫草摇瓶发酵过程中培养基营养成分及其代谢物质变化情况,测定了培养基的pH、总糖、还原糖和可溶性蛋白及游离氨基酸等成分含量,探明了北虫草菌体生长、多糖及虫草素生成规律。结果显示:随发酵时间的延长,发酵液的pH、可溶性固形物、总糖和还原糖含量均总体呈下降趋势;游离氨基酸含量呈先变化迟缓而后上升趋势;北虫草菌丝体及虫草素产量随时间延长先增加后下降;粗多糖含量总体略呈下降趋势。      

蛹虫草营养保健醋的研制

本实验以采收蛹虫草后的培养基残料为原料,经浸提、发酵生产虫草保健醋的工艺过程,并对产品的营养成分进行了测定和分析。结果表明,与传统的醋酸发酵工艺相比,该工艺更适合虫草废料的理化特性,且省却了酒精发酵阶段,发酵周期缩短到了25d;所得产品不仅具有发酵醋的醇厚风味,且含有多种氨基酸和蛹虫草独特的营养及活性成分,如虫草酸、虫草素等。该产品营养丰富、味道醇和、酸甜适口,极具开发利用价值。