烟粉虱基因组DNA快速提取方法

以B型烟粉虱为材料,应用改进的方法-氯仿/异戊醇抽提法提取了高质量单头烟粉虱基因组DNA。该方法不仅可用于成虫基因组DNA的提取,对烟粉虱拟蛹及卵同样具有较高的提取效果;同时,该方法操作简便、快捷,较常用的醋酸钾抽提法节省时间3～4h,提高工作效率2.5倍。     

一种球蚧类蚧虫基因组DNA的提取方法

本研究针对一类虫体膨大,体壁硬化,革质化或木质化的球蚧类蚧虫开展了全基因组提取方法的探讨,特别是在材料的选择和前处理过程两个关键环节进行了新的尝试,并通过目前文献报道的SDS、CTAB、TES、NaCl和TNES法进行了随后的基因组提取,运用1%琼脂糖凝胶电泳、DNA OD值测定和特定基因的PCR扩增对基因组的提取效果进行了检测,结果表明,无论是冷冻保存还是75%酒精固定液-4℃保存的球蚧样本均可用于DNA提取,选择球蚧体壁作为提取材料要比整头虫体效果好,前处理采用在少量提取缓冲液中剪碎样品的方法获得的基因组机率大,纯度高、条带整齐无拖尾,同时也证实CTAB法更适合该类蚧虫基因组的提取。     

美国白蛾基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

用改进的SDS法从无水乙醇浸泡美国白蛾幼虫标本中提取到高分子量的可用于RAPD扩增的基因组DNA。用正交试验对影响RAPD扩增的条件进行优化得到最佳反应体系：20 μL反应体系中,模板浓度1.25 ng/μL、引物浓度1.2 ng/μL、dNTP浓度 0.2 mmol/L、Mg2+浓度 3.0 mmol/L、TaqDNA聚合酶用量2.5 U。确定最佳退火温度为38 ℃。PCR反应条件：94 ℃ 30 s、38 ℃ 60 s、72 ℃ 60 s 35个循环后,72 ℃延伸5 min。为在分子水平上讨论美国白蛾种群的遗传分化提供基础。     

土壤蜡蚧轮枝菌DNA提取方法的改进及其应用效果

土壤真菌分子生态学研究需要大量和高效地提取真菌的DNA。应用市售的一般试剂盒提取土壤虫生真菌DNA,常常存在得率和质量低的问题,甚至根本提取不到土壤真菌的DNA样品。针对这一问题,本研究对细胞破碎方式及后续DNA提取参数进行了一系列的改进和优化,建立了一套针对性的提取方法。该提取法对虫生真菌—蜡蚧轮枝菌纯培养物的灵敏度极高,可在10个孢子的条件下提取到DNA,而市售的试剂盒则不能提取到(试剂盒在107个孢子条件仍提不到DNA);该提取法对人工投菌土样的DNA提取灵敏度达到102个孢子/克土,所得的DNA纯度高,无明显抑制后续PCR扩增的物质;施用过蜡蚧轮枝菌的田间土样所得DNA样品可成功扩增出蜡蚧轮枝菌特异片段,而未施用过蜡蚧轮枝菌的田间土样所得DNA样品不能扩增出蜡蚧轮枝菌特异片段。本提取方法具有灵敏度和纯度高的特点,适用于土壤虫生真菌的分子生态学样品制备。     

桃蚜基因组DNA提取及SSR反应体系优化和应用

针对蚜虫体型微小,体表有外骨骼等特点对改进的醋酸钾（KAC）法作了优化,优化后的方法可在常温条件下更加简易和有效地提取高质量的单头蚜虫基因组DNA,结果表明,DNA样品的A260/280值普遍在1.6～1.9之间,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。同时在20 μL的反应体系中将PCR的5个主要成分分别设定10个浓度梯度,研究了适合桃蚜SSR分子标记的优化体系,结果表明,最适宜的优化浓度分别为：1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,1.0U Taq酶,40 ng/μL模板DNA,25 ng/μL引物。利用甘肃省酒泉地区马铃薯桃蚜来验证此优化体系,30%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物大多在100～300 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。     

蚜虫共生细菌多重PCR检测体系的建立

蚜虫中具有多种共生菌,使用常规PCR对它们进行检测,耗时耗力,而多重PCR可以更加高效地进行多种细菌的检测。沃尔巴克氏菌Wolbachia pipientis、杀雄菌属共生菌Arsenophonus和蚜虫U型共生菌Regiella insecticola是蚜虫中常见的3种共生菌。本研究针对沃尔巴克氏菌、杀雄菌属共生菌和蚜虫U型共生菌,分别选择以wsp基因、yaeT基因和gltA基因作为靶标,进行了多重PCR引物的设计和扩增体系的优化。结果显示,本研究建立的多重PCR体系在检测3种蚜虫常见共生菌时,具有较高的扩增特异性、准确性和直观性及较高的检测灵敏度,共生菌的最低检测浓度为104拷贝/μL,远低于共生菌在蚜虫1龄若虫总DNA中的浓度(108拷贝/μL),可以完全满足蚜虫共生菌检测工作的需要。     

Sorhum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中7个近似种的种子为试验材料，采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TakaRa dNA提取试剂盒等4种方法提取DNA，并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较。结果表明：采用Moiler方法对其7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法。     

一种快速简便的植物病原真菌基因组DNA提取方法

 尿素提取法是最新报道的一种植物拟南芥基因组DNA的提取方法,但是还没有应用于植物病原真菌DNA的提取。本研究采用改进的4种不同的方法(尿素提取法、CTAB提取法、氯化苄提取法以及SDS-CTAB提取法),分别对5种分类地位不同的植物病原真菌(草莓疫霉病菌、西瓜蔓枯病菌、草莓炭疽病菌、西瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌)的基因组DNA进行提取和比较。结果表明,尿素提取法和SDS-CTAB法均能提取到所有5种真菌的基因组DNA,而尿素提取法提取DNA的效率更高、质量更好,操作步骤更为快速简单。     

样本保存方法及冷冻胁迫对蝗虫基因组DNA提取的影响

以亚洲小车蝗为研究材料,提出了使用液氮保存蝗虫样本的有效方法,并用基因组DNA提取试剂盒分别对液氮速冻后保存、直接冷冻、无水乙醇保存和干制蝗虫标本进行了基因组DNA的提取和电泳检测。结果表明,在保存3个月后,检测蝗虫样本直接冷冻法和干标本提取的总DNA浓度较低,因而琼脂糖电泳检测亮度低;液氮速冻后保存和无水乙醇保存的蝗虫样本提取的基因组DNA浓度大,琼脂糖电泳检测亮度高。表明液氮速冻后保存和无水乙醇保存的标本适合用于基因组学研究。通过对比,直接冷冻保存与液氮速冻保存结果得出,蝗虫在冷冻胁迫死亡的过程中有DNA降解发生。     

苜蓿假盘菌基因组DNA提取方法

以保定苜蓿上分离的苜蓿假盘菌为试验材料,采用SDS、SDS-CTAB及氯化苄3种方法提取基因组DNA,并进行比较。结果表明:3种方法均能提取到DNA,其中氯化苄法效果最佳,获得的DNA纯度高,此法操作简单、经济;其次是SDS-CTAB法,但DNA有所降解;而SDS法效果最差。此外还较详细地研究了采用氯化苄法提取缓冲液pH值、液氮和蛋白酶K对DNA提取效果的影响。     

不同地区不同寄主植物上孤雌桃蚜及不同蚜型桃蚜共生菌的多样性

为了解桃蚜Myzus persicae共生菌动态变化的影响因素,利用诊断PCR、通用引物PCR及PCR-DGGE技术检测不同地区、不同寄主植物、不同蚜型桃蚜体内共生菌的种类,并用诊断PCR技术测定桃蚜体内次生共生菌的感染率。结果显示,不同地区、不同寄主植物、不同蚜型桃蚜体内初生共生菌布赫纳氏菌Buchnera aphidicola的16SrRNA基因序列高度一致。不同地区相同寄主上孤雌桃蚜体内次生共生菌的种类和感染率均不相同。同一地区不同寄主上孤雌桃蚜体内次生共生菌的种类和感染率略有差异。桃树上不同蚜型桃蚜体内次生共生菌种类有很大差异,孤雌蚜、雌性蚜和雄蚜未感染次生共生菌,卵和干雌分别感染杀雄菌Arsenophonus和沃尔巴克氏菌Wolbachia,干母感染沙雷氏菌Serratia symbiotica和杀雄菌。表明寄主植物、地理位置和生殖方式都影响桃蚜体内次生共生菌的感染模式,不同蚜型间次生共生菌菌群变化更大。     

小麦光腥黑粉菌冬孢子总DNA提取方法比较

以小麦光腥黑粉菌冬孢子为试验材料,比较分析了改良CTAB法、氯化苄法、SDS法对小麦光腥黑粉菌冬孢子总DNA提取的效果。结果表明,SDS法无论在DNA纯度(R=A260 nm/A280 nm)和产量上均优于氯化苄法和CTAB法。利用SDS法能获得186 ng/mg的DNA产率,而氯化苄法和CTAB法只能分别获得145 ng/mg和112 ng/mg。采用SDS法提取的DNA纯度较高,-RSDS=1.485,氯化苄法(BC)和CTAB法所得DNA纯度无明显差异,分别为-RCTAB=1.254和-RBC=1.264。     

几种生物源农药对高架草莓叶螨和蚜虫的防治效果比较

叶螨和蚜虫是草莓生产中的重要害虫,为减少化学农药使用同时提高防治效果,本研究选择几种生物源农药对草莓叶螨和蚜虫进行防治效果比较.研究结果表明,对叶螨,1.8％阿维菌素微乳剂(ME)1 400倍液防治效果最佳,药后7d防治效果达81.15％,显著高于其他处理;2.5％鱼藤酮乳油(EC) 600倍液防治效果最差,药后7d防...     

苇状羊茅与多年生黑麦草内生真菌菌丝基因组DNA提取的优化及PCR初步检测

感染内生真菌的禾草在牧草和草坪业上具有重要的生态和经济意义，家畜采食感染Neotyphodium coenophialum和N.lolii的苇状羊茅和多年生黑麦草会发生中毒。本研究收集天津口岸1998年以来进境的部分苇状羊茅和多年生黑麦草种子，对经镜检确认带有内生真菌的种子进行分离培养，对疑似菌株的菌丝用改进的Moiler等方法进行基因组DNA抽提，测定浓度及纯度，对照原方法，DNA的纯度有较大提高，浓度略有上升。Tubulin2基因的引物IS1-IS3扩增结果显示为单一的条带，结合形态学和序列比对，分离培养得到的菌株可以基本确定为N．coenophialum和N。lolii。根据Genbank中N.coenophialum和N.lolii的NC25基因序列设计出引物F1-R1，扩增得到能区分开N.coenophialum和N．lolii的单一条带（相差160bp），建立了N．coenophialum和N．lolii的PCR检测方法，结果准确可靠。     

昆虫内共生菌-昆虫-植物互作关系研究进展

在长期的协同进化过程中,昆虫与其体内的共生菌建立了密切的互利共生关系。昆虫内共生菌不仅能调控宿主昆虫的营养代谢和生殖代谢,还能协助昆虫抵御生物、非生物胁迫,提高昆虫对化学农药的抗性及对寄主植物的适应性等。因此,内共生菌是宿主昆虫生长发育及适应性的重要调控因子。目前,随着组学技术的不断发展,内共生菌在宿主昆虫和寄主植物中的原位功能不断被挖掘,通过对内共生菌-昆虫-植物互作模型的研究,将进一步揭示昆虫内共生菌与昆虫、植物的互作机理,加深对昆虫适应性机制的理解并推进新型害虫防控和靶标技术的研发。本文就昆虫内共生菌的起源、特点、分布和传递,昆虫内共生菌在昆虫-植物-环境互作中的作用,以及昆虫内共生菌研究的方法和新技术等方面进行了综述,并对未来昆虫内共生菌介导的防御效应及昆虫适应性机理等热点问题进行了展望。     

烟粉虱内共生菌传毒相关groEL基因的克隆及其原核表达

 烟粉虱内共生菌groEL基因编码一种63kD的GroEL蛋白,利用一对特异性引物,通过PCR对长期培养在黄瓜上的烟粉虱体内groEL基因进行了扩增,序列测定表明其长度为1668bp,编码555个氨基酸,与GenBank中烟粉虱内共生菌groEL(AF130421)的核苷酸同源性为99.58%,仅7个核苷酸发生了变异,二者氨基酸序列同源性为99.28%,仅4个氨基酸有别。构建了一个原核表达载体,表达得到了76kD的融合蛋白