穿心莲内酯对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖及细胞周期的影响,为其应用于乳腺癌的治疗提供理论基础.方法 将实验分为对照组及Andro组,Andro组加入终浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L的Andro[Andro粉末先用DMSO溶解,再用培养基稀释至细胞处理浓度,控制DMSO的含量为0.1%(v/v)],对照组仅用0.1%DMSO溶剂.采用CCK8检测Andro不同浓度及不同处理时间(24、48、72 h)对MCF-7细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测两组细胞周期分布情况;应用预胶化淀粉细胞块制作方法 ,将两组细胞制作成石蜡切片,应用免疫组织化学方法 检测切片中MCF-7细胞增殖相关的核抗原Ki67及细胞周期相关抗原周期素D1(Cyclin D1)及周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达.结果 CCK8检测结果 显示Andro浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC50值为25μmol/L,并且在IC50浓度下24、48、72 h Andro均显著抑制MCF-7细胞的增殖,并随着作用时间的延长,抑制作用越明显.细胞周期检测结果 Andro处理后G0/G1期细胞数量达(75.51±1.56)%,与对照组(49.16±1.35)%比较,显著升高(P<0.05),而S期的细胞数量仅为(12.69±0.87)%,与对照组(44.07±0.98)%比较,显著降低(P<0.05).细胞块免疫组织化学结果 显示对照组与Andro组Ki67的表达分别为(91.77±2.75)%、(78.05±2.61)%,显著降低(P<0.05),Cyclin D1的IOD值分别为(2.14±0.17)×107、(1.27±0.22)×107,显著降低(P<0.05),CDK4的IOD值分别为(1.14±0.014)×107、(1.16±0.024)×107,无明显差异.结论 Andro可通过抑制MCF-7细胞的增殖及抑制Cyclin D1的表达从而阻断MCF-7细胞的细胞周期进程从而发挥抗肿瘤作用,Andro不能通过影响CDK4的表达发挥阻断MCF-7细胞周期.     

穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：观察穿心莲内酯（Andro）对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法：取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组, MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25 μmol•L^-1) DMSO 、4H-Andro 及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度（IC50）;Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果：通过浓度筛选,Andro平均IC50为8 μmol•L^-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol•L^-1 Andro处理24 h后U87细胞增殖活性降低（P<0.01）,增殖抑制率达到50%;Andro处理96 h时,U87细胞增殖活性进一步降低（P<0.01）,增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol?L-1 Andro处理48 h后, U87细胞中NF-κB（即磷酸化p65）蛋白表达强度下降（P<0.01）。结论：Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。     

穿心莲内酯抑制胰腺癌SW1990细胞的作用机制

目的 胰腺癌治疗上缺乏有效的药物。探讨穿心莲内酯(Ang)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭及可能机制。方法 体外培养胰腺癌SW1990细胞,分为对照组(常规培养)、Ang(低、中、高剂量)组(分别用15、30、60μmol/LAng作用细胞)、miR-1296-5p组(转染miR-1296-5p模拟物)、miR-NC组(转染模拟对照序列)、Ang+anti-miR-1296-5p(60μmol/LAng作用转染miR-1296-5p抑制剂的细胞)和Ang+anti-miR-NC组(60μmol/LAng作用转染抑制剂阴性序列的细胞),CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖抑制率、克隆形成形成能力、迁移及侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,qRT-PCR法检测细胞中miR-1296-5p表达。结果 与对照组比较,Ang(低、中、高剂量)组细胞抑制率、E-cadherin蛋白和miR-1296-5p表达量均升高(P<0.05),细胞克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及N-cadherin蛋白表达量均降低(P<...     

薄层扫描法测定穿心莲中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量

采用薄层扫描法测定了 15批穿心莲商品药材中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量 ,并进行了比较。结果脱水穿心莲内酯高于穿心莲内酯的占 2 6 .7% ,穿心莲内酯高于脱水穿心莲内酯的占 5 3.3% ,两者含量差异在±10 %以内的占 2 0 .0 %。     

穿心莲内酯对人肾细胞癌786-0细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的：研究穿心莲内酯（Andro）对肾细胞癌（RCC）786-0细胞的增殖、迁移和克隆形成能力的抑制作用及诱导其程序性凋亡的作用,并探讨其相关作用机制。方法：取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（5、10、20、40和80 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,MTS法检测各组细胞增殖率。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（0.50、1.25和2.50 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（10、20和40 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,10、20、40和80 μmol·L^-1 Andro组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,0.50和1.25 μmol·L^-1 Andro组细胞克隆形成率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,10、20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞划痕愈合率均明显降低（P<0.01）,20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较,40 μmol·L^-1 Andro组细胞中DNA损伤蛋白γ-H2AX表达水平明显升高（P<0.01）,Caspase-8表达水平明显降低（P<0.05）,Caspase-8剪切体表达水平明显升高（P<0.01）。结论：Andro能够有效地抑制RCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,并诱导其凋亡,其诱导凋亡作用的机制与诱导DNA损伤及JNK/H2AX和Caspase-8介导的细胞程序性凋亡途径有关。     

穿心莲内酯对前列腺癌细胞的增殖及神经内分泌分化的抑制作用

目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对前列腺神经内分泌癌细胞增殖及神经内分泌分化的影响.方法 Andro处理前列腺癌细胞(PC3),用MTT法检测48 h时Andro作用的最大效应浓度及对PC3细胞增殖的时间依赖性;进一步提取细胞蛋白,通过Western blotting检测神经内分泌分化标志物(NSE、CgA)表达情况.结果 Andro作用48 h时7.5 μmol/L达到最大效应浓度,且随着时间的延长Andro抑制PC3细胞增殖的作用越显著;Andro能明显抑制PC3细胞的增殖,并具有浓度和时间依赖性.Western blotting检测结果显示,NSE、CgA是PC3细胞中神经内分泌的标志物,Andro能显著抑制NSE、CgA的表达.结论 Andro可抑制PC3细胞增殖及神经内分泌分化.     

穿心莲内酯对乙醇诱导肝细胞氧化应激损伤的作用及机制

目的 研究穿心莲内酯(AD)对乙醇诱导肝细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 体外培养肝细胞L-02,用0~30 μmol/L AD孵育1 h后,采用酶学方法测定处理前后谷胱甘肽巯基转移酶(GST)及其过氧化物酶(GPx)和还原酶(GR)活性变化,实时定量PCR检测其mRNA表达;同时采用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)中p38,JNK和ERK以及Akt的磷酸化变化,并采用PI3K/Akt和ERK抑制剂LY294002和PD98059处理细胞,观察其在介导核转录因子Nrf2转位和GST、GPx和GR表达中的作用;MTT检测细胞活性变化。结果0~30 μmol/L AD处理L-02细胞后,GST、GPx和GR的酶活性显著增高,同时其mRNA表达也明显增多。AD也能诱导ERK和Akt磷酸化,但对p38和JNK无明显影响。采用LY294002或PD98059处理细胞后,可抑制AD诱导Nrf2核转位及Akt和ERK磷酸化,同时也能明显消除AD对乙醇处理后L-02细胞毒性的保护作用。结论AD经PI3K/Akt和ERK上调抗氧化蛋白GST、GPx和GR的表达而发挥对乙醇毒性的保护作用。     

穿心莲内酯对TBHP诱导的椎间盘髓核细胞凋亡的作用及机制研究

目的：探讨穿心莲内酯（andrographolide,ANDRO）对叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,TBHP）诱导的椎间盘髓核细胞（nucleus pulposus cells,NPC）凋亡的作用及其机制。方法：用TBHP诱导NPC建立细胞模型。将NPC分为5组：对照组、模型组（100μmol/L TBHP）、ANDRO低剂量组（100μmol/L TBHP+9μmol/L ANDRO）、ANDRO中剂量组（100μmol/L TBHP+18μmol/L ANDRO）和ANDRO高剂量组（100μmol/L TBHP+36μmol/L ANDRO）。流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,ELISA试剂盒检测氧化应激相关指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和过氧化氢酶（catalase,CAT）水平,JC-1探针法检测线粒体膜电位,Western blot检测动力相关蛋白1(dynam...     

超微粉体技术对穿心莲药材中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯溶出率的影响

目的:探讨超微粉碎对穿心莲药材中有效成分溶出率的影响.方法:用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定穿心莲超微粉与药材120目细粉中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的溶出率.结果:超微粉药材中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的溶出率明显增加.结论:超微粉碎可显著提高穿心莲药材中有效成分的溶出率.     

HPLC法测定穿心莲叶中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

目的:测定不同产地的穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,Merck-Lichrospher RP-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(60∶40);检测波长:226nm(用于检测穿心莲内酯),254nm(用于检测脱水穿心莲内酯);流速:0.8ml/min;柱温:35℃。结果:实验表明测定方法在4h内是稳定的,穿心莲内酯线性范围0.050~1.500μg,脱水穿心莲内酯线性范围0.048~1.440μg,平均加样回收率分别为100.9%和98.2%,RSD分别为3.4%(n=6)和3.2%(n=6)。结论:用HPLC法测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量方法准确、灵敏、稳定,可作为控制穿心莲质量的方法。     

RP-HPLC法测定不同产地及采收期的穿心莲中穿心莲内酯、新穿心莲内酯的含量

采用反相高效液相色谱法测定穿心莲中穿心莲内酯、新穿心莲内酯的含量。色谱柱为 Ｍｅｒｃｋ Ｌｉｃｈｒｏｍａ Ｒ Ｐ Ｃ１８ 柱,流动相为乙腈 水（３５∶６５） ,检测波长为２２５ ｎｍ ,流速为１ ｍｌｍｉｎ ,柱温４０ ℃,穿心莲内酯和新穿心莲内酯的加样回收率分别为１０２ ．６２ ％ 、９８ ．６ ％ , Ｒ Ｓ Ｄ 分别为０ ．４８ ％ 、０ ．４７ ％ ,上述两成分在广东阳春和安徽临泉所产的穿心莲中含量较高,最佳采收期为开花盛期。     

穿心莲内酯通过Caspase-3/PARP途径诱导人舌癌Tb细胞凋亡作用研究

研究穿心莲内酯对舌癌细胞(Tb细胞)凋亡的作用及其机制。用瑞士吉姆萨染色法、Hoechst 33258荧光染色法、原位Annexin V/PI双染和流式细胞术检测穿心莲内酯对Tb细胞凋亡的作用;Western blot检测穿心莲内酯诱导Tb细胞凋亡的机制。结果显示:穿心莲内酯处理Tb细胞后,与对照组相比,细胞凋亡数明显增加(P<0.05)。Western blot实验结果发现,穿心莲内酯处理组与对照组相比,聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)表达明显增强(P<0.05),表明穿心莲内酯可能通过活化PARP促进Tb细胞的凋亡。     

HPLC法测定清感穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

【目的】建立清感穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定方法。【方法】采用高效液相色谱法:色谱柱为资生堂CAPCELL PAK C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇∶水(52∶48);检测波长:254 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:40℃。【结果】穿心莲内酯在0.2~3μg(r=0.9999)、脱水穿心莲内酯在0.2~3μg(r=0.9999)范围内线性关系良好。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的平均回收率分别为99.45%(RSD=0.19%,n=6),99.57%(RSD=0.19%,n=6)。【结论】该方法简便、准确、重复性好,可用于该制剂中有效成分的含量测定。     

藁本内酯对骨肉瘤细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨藁本内酯对骨肉瘤细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法 DMEM培养基培养骨肉瘤MG-63细胞,采用细胞毒性实验观察藁本内酯对MG-63细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞迁移的影响;流式细胞仪检测不同浓度藁本内酯对骨肉瘤细胞周期的影响。明确藁本内酯作用MG-63细胞的浓度,将细胞分为对照组、顺铂（DDP）组,藁本内酯联合顺铂（DDP+LIG）组,顺铂联合自噬抑制剂（DDP+3MA）组。Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白LC3B、Beclin1、Bcl-2、Bax,细胞色素C以及通路蛋白ULK1、ATG3的表达情况。免疫荧光检测各组细胞LC3B蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,20、40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞增殖均被抑制（均P <0.05）;与对照组比较,160μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞迁移能力显著降低（P <0.01）。与对照组比较,40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞G2/M期细胞均显著阻滞（均P <0.05）。与DDP组比...     

穿心莲片中穿心莲内酯的薄层扫描

对穿心莲内酯的测定方法为:先在硅胶GF_(254)荧光薄层板上用氯仿-无水乙醇(10:1)为展开剂分离穿心莲内酯及其它成分,再用岛津CS-910型双波长薄层扫描仪在紫外区进行荧光熄灭定量扫描(测定波长240nm,参比波长400nm),然后按公式计算含量。其回收率为96.0％(n=5),变异系数为2.1％。     

UPLC法同时测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量

目的：建立以超高效液相色谱法同时测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法.方法：色谱柱：Shi-madzu Shim-pack XR-ODSⅢ（2.0mm×75mm,1.6μm）;流动相：甲醇-水（48：52）;流速：0.3mL/min;检测波长：穿心莲内酯为225nm,脱水穿心莲内酯为254nm;柱温：30℃.结果：穿心莲内酯在10.065～ 161.04ng（r =0.9996）、脱水穿心莲内酯在5.14～82.24ng（r =0.9998）范围内,呈良好的线性关系.穿心莲内酯平均回收率为99.25％,RSD=1.03％（n=6）;脱水穿心莲内酯平均回收率为98.43％,RSD=1.33％ （n =6）.结论：本法重复性好、灵敏度高、定量准确,可用于穿心莲药材的质量控制.     

穿心莲内酯对糖尿病肾病小鼠的治疗作用及机制

利用自发2型糖尿病基因工程Lepr^db/db小鼠糖尿病小鼠模型,探讨穿心莲内酯(andrographolide,Andro)对糖尿病肾病的作用及机制。利用试剂盒检测Andro治疗Lepr^db/db小鼠24 h后的尿蛋白、血肌酐和血尿素氮水平;利用HE染色和PAS染色分别检测Andro对糖尿病小鼠肾脏组织的病理改变和还原糖水平的影响;采用免疫组织化学染色法检测Andro对Lepr^db/db小鼠肾脏的纤维粘连蛋白(FN)和NOX-4的影响。结果显示,Andro治疗组(1 mg/kg,ip)的24 h后Lepr^db/db小鼠的尿蛋白、血肌酐和血尿素氮等生化指标水平明显低于对照组,Andro能抑制Lepr^db/db小鼠肾脏的病理改变和FN、NOX-4的表达,表明Andro可以显著改善自发2型糖尿病基因工程小鼠Lepr^db/db小鼠的糖尿病肾病。     

穿心莲内酯对脓毒症小鼠的保护作用及机制探讨

目的研究穿心莲内酯对脓毒症小鼠的保护作用及相关机制。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作小鼠脓毒症模型。64只C57BL/6小鼠随机均分为4组:假手术组(sham组)、脓毒症模型组(CLP组)、二甲亚砜组(DMSO组)和穿心莲内酯组(AND组)。各组小鼠于术后1、6、12h腹腔内分别注射相同剂量(0.2mL)的生理盐水、5%DMSO或穿心莲内酯(10mg/kg),记录各组小鼠术后7d生存率并绘制生存曲线。另取48只C57BL/6小鼠,分组及给药方法同前,术后24h分别检测腹腔灌洗液(PLF)中性粒细胞(PMN)数量、外周血及PLF细菌负荷以及外周血炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10水平,同时取小鼠肺脏及肝脏组织进行病理分析。结果与CLP组相比,AND组小鼠术后7d生存率增加(P<0.01),腹腔PMN计数下降(P<0.01),外周血和腹腔细菌清除能力增强(P<0.01),外周血TNF-α、IL-6水平降低,而IL-10水平升高(P<0.01),肺组织和肝脏组织病理损伤程度减轻(P<0.01)。DMSO组与CLP组各项检测指标差异均无统计学意义。结论穿心莲内酯对CLP脓毒症小鼠具有保护作用,可能与其调节免疫功能,增强细菌清除能力以及降低过度炎症反应有关。