核酸酶P1研究进展

核酸酶P1是由桔青霉产生的一种能将单链DNA和RNA水解为5’-核苷酸的磷酸二酯酶，也是酶法生产5’-核苷酸的主要工业用酶，其水解产物5’-核苷酸广泛用于食品、医药、以及分子生物学等方面。文章概述了核酸酶P1的分子结构、催化特性、影响因素、应用和研究状况。     

链霉菌磷脂酶D的分离纯化及部分酶学性质

由链霉菌发酵所得的磷脂酶D经过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子色谱、Source 30S阳离子色谱和Superdex 75凝胶过滤色谱分离纯化,相对分子质量约为57k。在55℃和pH 7.0时显示最高相对酶活力。酶动力学参数K_m和V_(max)分别为254mmol/L和0.417μmol/min。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶学性质的研究

以野生环毛蚓(Pheretima)为材料，经匀浆抽提、热变性、硫酸铵分步沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE—纤维素离子交换柱层析等纯化步骤，得到纯度较高的蚯蚓纤溶酶(EFE)，具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对酪蛋白和BAEE也具有较强的水解作用，但对ATEE无水解活性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制，说明该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na^ 、K^ 、Mg^2 对此酶有一定的抑制作用，Hg^2 对EFE有强烈抑制作用，而Ca^2 可提高此酶活力。     

青霉素酶分离纯化及酶学性质研究

本文对蜡状芽孢杆菌CMCC(B)63301产青霉素酶的分离纯化工艺及酶学性质进行了研究。粗酶液通过硫酸铵分级盐析、超滤除盐浓缩、SephadexG-75凝胶层析纯化后得到的青霉素酶液的比活力为68.2×106u/mg,纯化倍数为11.32,酶活回收率为35.04%。经SDS-PAGE检测为单一区带。该酶作用的最适温度为37℃,最适作用pH范围为6.5～7.0,在0～20℃下存放比较稳定。酶液中添加5%NaCl或5%甘油可提高酶的保存稳定性。     

纳豆激酶的分离纯化及酶学性质研究

目的　分离纯化纳豆激酶并进行酶学性质研究。方法　从纳豆中分离纯化具有纤溶活性的纳豆激酶 ,采用氯化钠溶液浸提、硫酸铵盐析及 sephadex G- 1 5 0凝胶过滤分离纯化纳豆激酶 ,纯化倍数 5 0倍 ,纤维蛋白平板法测其比活。结果　纳豆激酶比活为 6 0 0 U·mg-1,回收率 40 %。酶学性质研究表明 ,最适反应温度为 5 0℃ ,5 5℃以下稳定 ,最适反应 p H为 8.0 ,在 p H 6～ 1 0溶液中基本稳定 ,分子量约 2 8k D。酶作用机理初探表明 ,纳豆激酶不仅具有纤溶性 ,还有抗凝血性。结论　纳豆激酶有可能成为新型溶栓药物     

酵母SOD分离纯化及其酶学性质的研究

目的发酵培养Y12 酵母菌分离制备酵母SOD并研究其部分酶学性质。方法用已筛选出的一株Y12 酵母菌对其在优化培养条件下发酵培养得到湿菌体 ,破壁抽提得SOD粗酶液 ,采用硫铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG 10 0凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换柱层析 ,分离得到酵母SOD并测定其部分酶学性质。结果Y12 酵母菌SOD产量达 12 6 3u·g-1湿菌体 ,分离得到酵母SOD ,该酶属Cu、Zn SOD ,比活力为 10 73 5u·mg-1,活力回收率为 5 4 1% ,紫外吸收峰在2 5 7 2nm ,分子质量为 32 4 5 6u ,亚基分子质量为 16 2 2 7u。结论此酵母SOD与文献中报道的动物血红细胞Cu、Zn SOD基本相近。     

纳豆激酶的分离纯化及酶学性质研究

目的研究纳豆激酶分离纯化工艺及酶学性质。方法纳豆激酶发酵液的粗提物经Superdex 75凝胶色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离纯化,采用TAME法测定酶的活性,通过SDS-PAGE对纯化结果进行了检验。结果SDS-PAGE中显示单一色带,相对分子质量28000,以TAME为底物时纳豆激酶的米氏常数(Km)为35.47mmol/L,最适宜的温度37℃,最适宜pH为8.6。结论该分离纯化方法可以得到较纯的纳豆激酶。     

纳豆菌糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

目的：通过对纳豆糖苷酶的酶学性质研究,获得其适宜条件,为其各方面研究应用提供理论基础。方法：根据不同蛋白质分子理化和生物学性质差异,应用SDS-PAGE凝胶电泳技术和DEAE-cellulose DE-52柱分离方法建立纳豆糖苷酶的分离纯化方法,确定相对分子量;以酶活力为指标研究其酶学性质。结果：纳豆糖苷酶的相对分子质量约为65.6kDa。最适温度为40℃,最适pH为5.0,在20℃~40℃、pH5~pH7、低金属离子浓度条件下稳定性较好;,金属离子浓度达到5mmol/L时Na 、K 、Ca2 对酶有激活作用,Mn2 、Cu2 对酶有抑制作用。结论：纳豆糖苷酶的热稳定性较好;对较强酸碱性环境敏感,耐受性较差;较高浓度金属离子对该酶有明显激活或抑制作用。     

玉米SOD的分离纯化与部分性质研究

目的建立1种高效而简单的玉米SOD分离纯化方法。方法采用初步提取、40%~80%硫酸铵分级沉淀、Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱处理的方法从玉米中提取SOD。结果获得了比活为1.18×104U/mg的SOD-A组分,活力回收率为11.7%;纯化后的SOD-A组分经PAGE和SDS-PAGE均为一条带;等电聚焦结果表明该组分的等电点为7.2;经鉴定,该组分属于Cu/Zn-SOD。稳定性研究表明,该组分对热、酸碱及常见变性剂(如尿素)的稳定性较好。结论利用Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱相结合的方法可以纯化得到高比活、稳定性好的玉米SOD-A组分。     

海洋链霉菌发酵纤溶酶的分离纯化和酶学性质研究

目的 从筛选的1株海洋链霉菌MY0504发酵液中,分离得到1种新型纤溶酶并对其部分酶学性质进行初步研究。方法 采用高速离心、盐析、Sephadex G-75 凝胶过滤层析对纤溶酶进行分离纯化;采用纤维蛋白平板法测定纤溶活性, SDS－PAGE 电泳测定分子量,小鼠急毒实验检测安全性,并考察温度、pH、金属离子和抑制剂对酶活性的影响。结果 从发酵液提取纤溶酶的纯化倍数为7.15倍,酶活力回收率为32%,其分子量约为14kD,安全无毒。该酶在47℃以下稳定,适宜pH为7.0~9.0,最适pH值为8.0,Cu₂₊对该纤溶酶抑制作用显著,Ca₂₊有一定的促进作用。Aprotinin 强烈抑制纤溶酶活性,PMSF(苯甲基磺酰氟)可以完全抑制该纤溶酶活性,初步推测该酶是1种丝氨酸蛋白酶。结论 从海洋链霉菌MY0504发酵液中获得1种小分子量纤溶酶,为开发新的溶栓剂提供了新的选择和理论依据。     

红树植物老鼠簕内生真菌橘青霉P4-5-1中的1个新异喹啉酮生物碱

目的 研究老鼠簕内生真菌橘青霉(Penicillium citrinum)P4-5-1的化学成分。方法 利用正反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱等技术对P4-5-1次生代谢产物进行分离,利用高分辨质谱、一维及二维核磁共振等波谱鉴定技术确定化合物结构。结果 从P4-5-1大米发酵物中分离得到了6个化合物,分别为4-methoxy-2-methylisoquinolin-1(2H)-one (1)、fischexanthone (2)、penicitrinone A (3)、ent-aspergoterpenin C (4)、sydowiol E (5)和citrinin (6)。结论 化合物1为新异喹啉酮生物碱,命名为citrinadin D;化合物2、4和5首次从该种真菌中获得。     

青霉菌产壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

青霉菌（Penicilium sp.)发酵液经20％－70％硫酸铵分级沉淀，DEAE－Cellulose离子交换层析，Sephadex G-100凝胶过滤层析，得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的壳聚糖酶，比活力1020u/mg，纯化182倍。其分子量为30kD，酶的最适温度和pH分别为50℃和5．0，金属离子Mg^2＋和Ca^2 对酶活力有一定的促进作用，重金属离子Cu^2 、Ni^2 和Zn^2 对酶有较强的抑制作用。该壳聚糖酶具有很强的底物专一性，动力学参数Km值为2．601g/L。     

蓬子菜多糖分离纯化及其性质的研究

目的：从蓬子菜中提取分离水溶性多糖,并分析其理化性质,为板蓝根质量控制与进一步开发利用提供参考。方法：主要采用Sephadex G-100凝胶色谱柱分离纯化,测定各部位中性糖和酸性糖的含量。结果：从蓬子菜水溶性多糖中分离纯化得到2种不同的均一多糖组分TP-1、TP-2,总糖含量均达到90%以上。结论：2种均一多糖首次从蓬子菜中分离得到。     

P27KIP1和P21WAF1在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

目的：研究P27KIP1和P21WAF1在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达及其与临床病理特征的关系。方法运用免疫组织化学法检测P27KIP1和P21WAF1在胃肠道间质瘤良性组、潜在恶性组、恶性组中的表达情况。结果55例胃肠道间质瘤中,P27KIP1和P21WAF1的阳性表达率分别为36.3%和54.5%。随着恶性潜能的增加,P27KIP1的阳性表达逐渐降低,P21WAF1的阳性表达逐渐增高,在良性组和潜在恶性组及恶性组之间有显著性差别。两者表达情况与患者GIST的肿瘤大小、有无坏死、组织学分型无关。结论 P27KIP1和P21WAF1的表达与胃肠道间质瘤恶性潜能密切相关,可作为判断预后的重要指标。     

深海橘青霉Penicillium citrinum SCSIO41305化学成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

研究1株采自深海沉积物中橘青霉Penicillium citrinum SCSIO41305的次级代谢产物。方法 利用薄层色谱法（TLC）、硅胶柱层析法、凝胶柱层析法、中压制备液相色谱法（MPLC）、高效液相色谱法（HPLC）等分离方法对该菌株发酵产物进行了分离纯化;通过核磁共振（NMR）等现代波谱学方法,同时结合相关文献进行数据分析,鉴定化合物结构。结果 从橘青霉Penicillium citrinum（SCSIO41305）的代谢产物中分离得到7个化合物,分别是citrininc（1）、ergosterol（2）、penicillenol A1（3）、penicillenol A2（4）、penicitrinone A（5）、ozazino-cyclo-(2,3-dihydroxyl-trp-tyr)（6）、3,4,5-trimethylbenzene-1,2-diol（7）。活性测试结果表明,化合物2对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,MIC值为0.50 mg/mL,化合物3和4对乙酰胆碱酯酶有较好的抑制作用,其IC50分别为10.43和15.41 μmol/L。     

菌株SIPI-2013406的次级代谢产物分离纯化与菌种鉴定

利用阴离子交换色谱和反相C18色谱柱纯化菌株SIPI-2013406的代谢产物,获得纯度高于98％的化合物样品.采用质谱和核磁共振鉴定结构,推测该产物为富马酰-L-丙氨酸.产生菌经过形态和分子特征鉴定,确定菌株SIPI-2013406为产黄青霉种(Penicillium chrysogenum).     

The ecto-nucleotidase NTPDase1 differentially regulates P2Y1 and P2Y2 receptor-dependent vasorelaxation

Background and purpose:

Extracellular nucleotides produce vasodilatation through endothelial P2 receptor activation. As these autacoids are actively metabolized by the ecto-nucleotidase nucleoside triphosphate diphosphohydrolase-1 (NTPDase1), we studied the effects of this cell surface enzyme on nucleotide-dependent vasodilatation.

Experimental approach:

Vascular NTPDase expression and activity were evaluated by immunohistochemistry and histochemistry. The vascular effects of nucleotides were tested in vivo by monitoring mean arterial pressure, and in vitro comparing reactivity of aortic rings using wild-type and Entpd1^−/− (lacking NTPDase1) mice.

Key results:

The absence of NTPDase1 in Entpd1^−/− mice led to a dramatic drop in endothelial nucleotidase activity. This deficit was associated with an exacerbated decrease in blood pressure after nucleotide injection. Following ATP injection, mean arterial pressure was decreased in Entpd1^+/+ and Entpd1^−/− mice by 5.0 and 17%, respectively, and by 0.1 and 19% after UTP injection (10 nmole·kg⁻¹ both). In vitro, the concentration-response curves of relaxation to ADP and ATP were shifted to the left, revealing a facilitation of endothelial P2Y1 and P2Y2 receptor activation in Entpd1^−/− mice. EC₅₀ values in Entpd1^+/+ versus Entpd1^−/− aortic rings were 14 µM versus 0.35 µM for ADP, and 29 µM versus 1 µM for ATP. In Entpd1^−/− aortas, P2Y1 receptors were more extensively desensitized than P2Y2 receptors. Relaxations to the non-hydrolysable analogues ADPβS (P2Y1) and ATPγS (P2Y2) were equivalent in both genotypes confirming the normal functionality of these P2Y receptors in mutant mice.

Conclusions and implications:

NTPDase1 controls endothelial P2Y receptor-dependent relaxation, regulating both agonist level and P2 receptor reactivity.     

P27~(KiP1)蛋白在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的:研究P27KiP1蛋白表达在宫颈癌发生发展中的作用及其与癌临床病理学因素的关系。方法:采用免疫组化SP法对20例正常宫颈组织、20例宫颈上皮内瘤变组织及67例宫颈癌组织中P27KiP1蛋白表达进行观察。结果:P27KiP1在宫颈癌中蛋白高表达率明显低于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变组织,宫颈上皮内瘤变组织中其蛋白高表达率也低于正常宫颈组织(P<0.05或P<0.01)。P27KiP1蛋白高表达率与宫颈癌患者年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);但其表达与宫颈癌分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:P27KiP1蛋白的异常表达与宫颈癌的发生发展密切相关,可作为判断患者预后不良的指标。     

1-磷酸鞘氨醇受体的研究进展

1-磷酸鞘氨醇S1P(Sphingosine 1-phosphate,S1P)是调节细胞内外多种生物学功能的重要信号分子之一,作用于S1P受体后,在很多生理和病理过程中发挥重要的调节作用。Sphk-S1P-S1PR信号通路及其在炎症、肿瘤、动脉粥样硬化、自体免疫系统疾病、神经系统疾病等多种疾病中的作用已成为目前研究的热点之一。越来越多的S1P受体调节剂被研发。