半边莲生物碱抑制内皮素-1诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖

目的：探讨半边莲生物碱(LCLA)对内皮素-1（ET-1）诱导人脐动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制效应及其作用机制。 方法： 采用细胞计数、［3H］-TdR掺入、流式细胞术、免疫细胞化学染色及Fura-3/AM 荧光探针标记方法检测VSMC增殖；并用台盼蓝拒染、乳酸脱氢酶（LDH）检测方法观察LCLA对VSMC的毒性反应。 结果： LCLA(100、200和400 mg/L)、BQ-123(10-6mol/L)、ST(10-7mol/L)均抑制ET-1所诱导的VSMC增殖（均P＜0.05）：明显降低VSMC的细胞数目、［3H］-TdR掺入量、S期和G2/M期的数目百分比，增加G0/G1期的数目百分比；减弱细胞内增殖细胞核抗原（PCNA）的表达强度和Ca2+荧光强度；LCLA的抑制作用存在明显的剂量依赖关系，但对VSMC存活率和LDH释放量均没有影响。 结论： LCLA浓度依赖性地抑制ET-1所诱导的人脐动脉VSMC增殖，其机制与降低VSMC内Ca2+含量有关。     

氟伐他汀抑制高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞,不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血小板源生长因子(PDGF)、氟伐他汀及甲羟戊酸干预后,行细胞计数和[³H]-TdR掺入率测定。结果:①氟伐他汀呈浓度依赖性抑制10^-6mol/LAngⅡ和10μg/LPDGF刺激诱导的血管平滑肌细胞数和[³H]-TdR掺入率增加;②10^-3mol/L甲羟戊酸几乎完全逆转氟伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。结论:氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF诱导的高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖;甲羟戊酸代谢途径可能参与血管平滑肌细胞增殖过程。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中CaN活性及增殖细胞核抗原表达水平的影响

目的：观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）中钙调神经磷酸酶（CaN）活性及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响。方法：建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型，应用免疫细胞化学法观察血管平滑肌细胞PCNA表达；并用酶促反应定磷法测定CaN活性。结果：AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖，VSMCs细胞数目和细胞增殖活度明显高于正常对照组（P＜0.01）；CaN活性和PCNA表达量（A值）显著高于正常对照组（P＜0.01）。同时加川芎嗪处理，各组CaN活性和PCNA表达水平均显著低于AngⅡ组（P＜0.01）。结论：川芎嗪对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用，其机制与抑制CaN介导的信号转导进而抑制PCNA的表达有关。     

降钙素基因相关肽对人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：从细胞周期的角度探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）地人血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响,揭示其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：流式细胞仪分析ＣＧＲＰ对ＶＳＭＣ细胞周期的影响,免疫组织化学检测细胞周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结果：ＣＧＲＰ使细胞停留于Ｇ０／Ｇ１期,并能降低细胞中周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结论：ＣＧＲＰ可能是通过抑制周期蛋白Ｄ１、Ｅ的积累,使人ＶＳＭＣ停留于Ｇ０／Ｇ期,限制细胞周期的     

一氧化碳抑制缺氧所致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究内源性及外源性一氧化碳(CO)对缺氧状态下肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。方法:选用第3-5代培养的大鼠PASMC,分别在常氧及缺氧条件下用HO酶促进剂氯血红素(hemin)、CO清除剂牛血红蛋白(Hb)和CO气体进行干预。通过MTT比色、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的免疫细胞化学检测上述条件对PASMC代谢及增殖的影响,用流式细胞术检测不同条件对PASMC细胞周期的影响。结果:PASMC在缺氧时MTT比色、PCNA表达及S期、G₂/M期细胞所占比例明显高于对照组(P＜0.01),使用hemin和CO后上述指标显著低于缺氧组(P＜0.01或P＜0.05),而用Hb干预则PASMC代谢和增殖较缺氧组进一步增高(P＜0.01或P＜0.05)。结论:缺氧时PASMC产生的内源性CO以自分泌方式抑制PASMC自身增殖,使用hemin促进内源性CO生成或直接使用外源性CO气体均可抑制PASMC在缺氧状态下的增殖。     

肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸的促平滑肌细胞增殖作用

目的和方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上,观察了肾上腺髓质素（Ａｄｍ）对溶血磷脂酸（ＬＰＡ）诱导的ＤＮＡ合成和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性途径激活的影响。结果：ＬＰＡ使［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ活性增加,Ａｄｍ对基础水平的ＭＡＰＫ活性和［３Ｈ］－ＴｄＲ的掺入并无显著影响,但Ａｄｍ对ＬＰＡ刺激［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ活性具有抑制作用。结论：Ａｄｍ和ＬＰＡ相互作用参与血管平滑肌细胞增殖的调节。     

重组人IL-10抑制TNF-α和PDGF-BB所致大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察重组人白介素10(rhIL-10)对SD大鼠血管平滑肌细胞及血管损伤后新生内膜增殖的影响。方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态,应用流式细胞术测定细胞周期。利用大鼠血管损伤模型,观察rhIL-10对新生内膜增殖的影响。结果:与对照组相比,rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P>0.05)。rhIL-10可抑制在TNF-α和血小板源性生长因子分别刺激下的血管平滑肌细胞的生长(P<0.05)。流式细胞术测定的结果显示rhIL-10分别可以使TNF-α和PDGF-BB作用下的VSMC大部分处于G₀/G₁期,与对照组相比有明显差异(P<0.01)。大鼠颈动脉损伤后,rhIL-10治疗组的动脉血管新生内膜/中层面积比低于对照组约45%(P<0.01)。结论:抗炎细胞因子rhIL-10可抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

抑制大鼠动脉损伤后早期中膜平滑肌细胞增殖可降低内膜肥厚

目的:探讨早期中膜平滑肌细胞增殖与内膜肥厚的关系。方法:球囊导管损伤大鼠动脉后,在不同时期投予血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)(temocapril-HCl,10mg·kg^-1·d^-1),观察平滑肌细胞BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶尿苷)标记率和内膜面积。结果:损伤后动脉中膜平滑肌BrdU阳性细胞出现于术后24h,BrdU标记率呈双峰期变化,第1期在1-3d,峰值在2d为5.3%,第2期在3-7d,峰值在5d为2.7%。在第1个增殖期投予temocapril显著抑制第2个增殖期的BrdU标记率(0.05±0.02)%,对照组为(4.50±0.27)%(P＜0.01),同时也显著抑制了术后10d内膜面积的增加(10670.1μm²±7713.3μm²)(P＜0.01)。而仅在第2个增殖期投药,则不能抑制内膜面积的增加(83499.5μm²±31360.0μm²)(P＞0.05),其程度与未投药组相当。结论:球囊导管损伤后动脉中膜平滑肌细胞第1个增殖期是内膜形成所必需的。     

人脑膜瘤VEGF的表达及其与血管生成和细胞增殖能力的关系

血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)是血管生成因子之一 ,在肿瘤血管生成过程中起重要作用。笔者应用免疫组化方法检测了 38例人脑膜瘤组织中ＶＥＧＦ的表达 ,并分析其与肿瘤血管密度及细胞增殖能力之间的关系。1　材料与方法1.1　标本　收集 1981～ 1998年间本院手术切除脑膜瘤共186例 (良性脑膜瘤 118例 ,非典型 39例 ,间变型 2 9例 )。选取其中组织块在 2块以上 ,病理诊断和分型明确 ,资料齐全及术前未用抗肿瘤药物的标本 38例 ,男性 2 1例 ,女性 17例 ,年龄 4～ 72岁 ,平均 4…     

高胰岛素血症对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察胰岛素、内皮素-1(ET-1)和胰岛素+ET-1对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和形态结构的影响。方法: 体外培养VSMC中分别加入320 mIU/L胰岛素,10^-9 mol/L ET-1,320mIU/L胰岛素加10^-9 mol/L ET-1, 通过细胞计数和[³H]-TdR掺入量反映VSMC增殖情况, 进行细胞形态学观察。结果: ①胰岛素和ET-1都能促进VSMC的增殖(均为P<0.05); ②胰岛素和ET-1的联合应用使VSMC增殖约是对照组的两倍(P<0.01), 二者的联合作用也明显强于胰岛素(P<0.05)或ET-1(P<0.05)的单独作用; ③3组VSMC均有不同程度出现形态结构的改变, 由收缩表型转为合成表型。结论: 高胰岛素血症和/或ET-1水平增加均有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展。     

ERK在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞的表达，以探讨ERK信号通路在气道平滑肌增殖中的作用。方法：病理图像分析慢性哮喘大鼠气道重塑，免疫组化法检测ERK和PCNA在肺内表达，激光共聚焦显微镜分析ERK1/2、磷酸化ERK1/2和PCNA在气道平滑肌的共表达，免疫印迹和原位杂交检测气道平滑肌中ERK和PCNA蛋白以及mRNA的表达。结果：慢性哮喘大鼠有气道平滑肌层增厚，出现结构重塑。ERK和PCNA在肺内表达增强，同时在气道平滑肌上有ERK和PCNA蛋白与mRNA表达增加。结论：ERK可能是介导慢性哮喘气道重建中平滑肌增殖的重要信号通路之一。     

c-sis反义寡核苷酸对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨从血小板源生长因子-B链(PDGF-B)的基因水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:给肺动脉平滑肌细胞(VSMC)分别施加不同剂量的c-sis癌基因反义寡核苷酸(ASON), 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线;采用流式细胞术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果:中、大浓度ASON对细胞增殖有明显抑制作用。在中浓度的ASON作用下, 加入PDGF-BB能促进VSMC的增殖。ASON干预前后, VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化, 以G₀＋G₁期细胞增多、S+G₂＋M期细胞减少为特征。各组的G₀＋G₁期细胞均显著多于对照组(P＜0.05)。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G₀＋G₁期细胞有显著差异(P＜0.05)。结论:中、大剂量ASON能明显抑制肺VSMC的增殖, 可使G₀＋G₁期细胞数明显增多, 且与ASON有剂量依赖关系。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

大黄素对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和cyclin D1表达的影响,探讨大黄素抑制平滑肌细胞增殖的作用机制。方法 取对数增长期的平滑肌细胞同步于G0期,药物组:加入含37.5mg·L-1大黄素10％胎牛血清的培养液,对照组:仅加入10％胎牛血清的培养液;作用12、24、36、48 h后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期时相和cyclin D1表达的测定。结果 与对照组比较,药物组在各相同时间点C0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,且随着时间的延长差值增大,cyclin D1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期。结论 大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调,cyclin D1表达,从而阻滞细胞周期进程。     

白介素10抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：观察重组人白介素10（rhIL-10）对晚期糖基化终产物刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，应用不同浓度的AGE分别刺激VSMCs并设立对照组进行比较，将不同剂量的rhIL-10与AGE共同作用并设立对照组进行比较，采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖程度。结果：与对照组相比，晚期糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用（P<0.05）。rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响（P>0.05）。在晚期糖基化终产物刺激下，rhIL-10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长（P<0.05）。结论：结果提示rhIL-10可抑制晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

氟伐他汀抑制大鼠血管平滑肌细胞迁移的机制

目的:研究氟伐他汀抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的可能机制。方法:采用体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;用特异性单克隆磷酸化热休克蛋白27(phospho-HSP27)抗体的Western blotting检测HSP27的活性;用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化;采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。结果:AngⅡ和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化,使VSMCs内F-actin数量明显增加,纵向平行排列,形成应力纤维丝,并促进细胞迁移。100μmol/L HSP27阻断剂槲皮素可阻抑AngⅡ、PDGF-BB刺激VSMCs后产生的应力纤维丝形成,对AngⅡ、PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3%和53.6%,P0.01。氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化,并有量效关系,抑制作用在10-5mol/L时最显著,最大抑制率分别为42.1%和58.5%,P0.01。结论:氟伐他汀可能通过抑制HSP27磷酸化影响VSMCs的迁移。     

阿司匹林抗大鼠血管平滑肌细胞增生及与细胞周期的关系

目的：研究阿司匹林抑制大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增生与细胞周期的关系。 方法： 记数大鼠A10 VSMC在不同浓度阿司匹林处理下细胞增殖数量的变化，测定细胞培养液中乳酸脱氢酶活性以确定有无细胞毒性。用Western免疫印迹技术观察细胞周期中各类分子的变化。 结果： 阿司匹林抑制大鼠A10 VSMC增生，此作用非细胞毒性所致。阿司匹林使p21、p27、非磷酸化 p107和cyclin A 表达增加。 结论： 大剂量阿司匹林能够在体外抑制大鼠VSMC增生，与阻断细胞周期的进程有关，可能有益于血管增生性疾病的防治。