尾型同源盒基因2基因表达对胃癌细胞生长影响的研究

目的 观察尾型同源盒基因2(Cdx2)基因过表达对胃癌细胞生物学性状的影响.方法 构建人Cdx2真核表达载体,并转染胃癌细胞MGC-803.实验分为四组:未转染组、转染pCMVHA组、转染pCMV-GAPDH-HA组、转染pCMV-Cdx2-HA组.应用荧光定量PCR检测各组Cdx2基因的表达情况,Western blot法检测各组Cdx2蛋白的表达情况,MTT法观测细胞增殖,透射电镜观察转染细胞形态学的改变,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡.结果 成功构建了pCMV-Cdx2-HA真核表达载体,在瞬时转染pCMV-Cdx2-HA质粒48 h的MGC-803细胞有较高水平的Cdx2基因mRNA和蛋白的表达;与未转染组、转染pCMV-HA组、转染pCMV-GAPDH-HA组比较,转染pCMV-Cdx2-HA组的胃癌细胞在转染72 h时生长受到明显抑制,G0/G1期比例上升,S期比例下降,胃癌细胞的凋亡率也明显升高(P＜0.05);转染pCMV-Cdx2-HA的胃癌细胞胞核消失,核染色质固缩、解体,内质网、高尔基复合体膨大成泡状.结论 Cdx2基因可明显抑制胃癌细胞的生长,提示Cdx2参与了胃癌的生长调控.     

小干扰RNA特异性沉默c-myc基因对人胰腺癌SW1990细胞生物学影响

目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默c-myc基因的表达对人胰腺癌细胞株SW1990细胞生物学影响.方法 用siRNA沉默胰腺癌SW1990细胞中c-myc基因,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot技术检测c-myc mRNA及蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)法检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞增殖的影响;膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测沉默c-myc基因细胞凋亡水平;Transwell细胞迁移实验检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞迁移能力的影响.结果 靶向c-myc的特异性siRNA可以高效抑制人胰腺癌SW1990细胞c-myc基因表达,在mRNA水平(0.263±0.048)较转染对照质粒组(0.970±0.012)明显降低,c-myc蛋白质表达量及细胞增值率均较转染对照质粒组明显降低;转染后48 h c-myc siRNA组细胞凋亡率为(19.90±2.09)％,明显高于siRNA阴性对照组(4.93±0.25)％和空白对照组(4.40±0.34)％;Transwell实验结果示细胞穿膜数c-myc siRNA组[(34.3±1.2)个]较siRNA-NC组[(68.3±5.8)个]和空白组[(72.3±1.2)个]均明显降低.结论 c-myc siRNA能够显著抑制c-myc基因在人胰腺癌SW1990细胞中的表达,降低细胞的增殖和迁移能力,促进细胞的凋亡.     

赖氨酰氧化酶样蛋白-2对胰腺癌细胞的影响

目的 观察沉默赖氨酰氧化酶样蛋白-2(LOXL2)基因对胰腺癌细胞的影响.方法 利用脂质体法将构建好的LOXL2-短发卡RNA(shRNA)质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,应用Western blot检测转染前后胰腺癌Panc-1细胞中LOXL2蛋白表达量的变化,Transwell侵袭实验检测胰腺癌细胞的体外侵袭力,MTT法检测胰腺癌细胞的黏附能力.结果 LOXL2-shRNA转染组Panc-1细胞中LOXL2蛋白表达水平(0.32±0.01)、体外侵袭力[(32.2±3.8)个]、黏附率[(75.4±3.2)％]较转染前[1.05±0.05、68.6±3.5、(90.3±2.1)％,P＜0.05]明显降低.结论 沉默LOXL2基因能抑制胰腺癌Panc-1细胞的侵袭能力和黏附能力.     

CXCR2对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 :探究CXC类趋化因子受体2(C-X-C motif chemokine receptor, CXCR2)对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡等生物学特性的影响。方法:取人胃癌MGC80-3细胞和SGC-7901细胞。转染建立CXCR2过表达细胞,质粒瞬时转染和RNA干扰建立敲减细胞。蛋白质印迹实验研究蛋白质相关细胞表型变化。通过transwell侵袭及迁移实验、增殖实验(cell counting kit-8, CCK8)、流式细胞实验AnnexinⅤ-PI双染法以及实时定量PCR等进行细胞功能、增殖、凋亡以及CXCR2 mRNA表达的检测。结果:胃癌细胞过表达CXCR2后其侵袭、迁移能力显著增强(P0.05),凋亡率显著降低(P0.01)。CXCR2下调后抑制胃癌细胞的侵袭、迁移能力(P0.05),凋亡率显著升高(P=0.02)。CXCR2过表达的胃癌细胞中Akt的磷酸化水平显著上调。Akt磷酸化水平与凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平相一致。结论:CXCR2上调后增强胃癌细胞的侵袭、迁移及抗凋亡能力。胃癌细胞中CXCR2的抗凋亡能力与CXCR2/Akt/Bcl-2通路相关。     

白细胞介素-1受体Ⅱ对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨人白细胞介素-1受体Ⅱ(IL-1R2)对胃癌细胞生物学行为的影响及其对血管的影响。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法检测胃癌细胞株(AGS、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、HGC-27、HSC-39)及人胃黏膜细胞(GES-1)中IL-1R2的mRNA、蛋白水平, 选择MGC-803、BGC-823构建下调及过表达IL-1R2细胞模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖、划痕实验、Transwell侵袭实验明确IL-1R2对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。细胞周期及凋亡实验探究IL-1R2对细胞周期及凋亡的作用。RT-PCR检测下调及过表达IL-1R2的MGC-803、BGC-823细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF) mRNA水平。下调、过表达IL-1R2细胞组及其对照组与血管内皮细胞(HMEC-1)共培养, 明确IL-1R2对HMEC-1增殖、迁移及VEGF、IL-6 mRNA水平的影响。两组间差异表达采用t检验方法比较;多组间采用方差分析(ANOVA)和T...     

吗啡和芬太尼对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响

目的 观察吗啡、芬太尼对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响.方法 将含0.1、10.0、1000.0μmol/L吗啡及0.0001、0.0100、1.0000 μmol/L芬太尼的细胞培养液,分别与胃癌MGC-803细胞一同孵育48 h,同时设空白对照组.应用划痕试验检测细胞迁移能力,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中磷酸酶基因(PTEN) mRNA和蛋白的表达.结果 划痕损伤48 h后,各吗啡组及各芬太尼组细胞的愈合率均低于对照组,细胞迁移能力下降(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡或芬太尼均使胃癌MGC-803细胞PTEN mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 吗啡和芬太尼可通过促进PTEN的表达而使胃癌MGC-803细胞的迁移能力降低.     

叉头框蛋白A2对肿瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化的影响

目的探讨叉头框蛋白A2(FOXA2)对肿瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化的影响。方法选取河南大学淮河医院2019年6月至2021年10月收治的64例卵巢癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用蛋白质免疫印迹分析肿瘤和癌旁组织中FOXA2蛋白表达水平。采用转染试剂转染对照质粒和FOXA2过表达质粒至人卵巢癌细胞SKOV3, 分别为对照组和观察组。采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析对照组和观察组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力。采用体外移植瘤实验分析两组细胞的迁移能力。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析FOXA2靶基因表达。组间数据比较采用t检验。结果癌旁组织FOXA2蛋白表达水平(1.13±0.24)明显高于卵巢癌组织FOXA2蛋白表达水平(0.47±0.14), 差异有统计学意义(t=18.640, P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.67±9.95)%]明显高于观察组细胞划痕愈合率[(56.60±7.06)%], 差异有统计学意义(t=5.452, P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(150.83±18.35)...     

活化因子TEPP-46对胃癌细胞MGC-803侵袭、增殖的影响及机制

目的 :探讨活化因子TEPP-46对胃癌细胞MGC-803侵袭、增殖的影响及分子机制。方法 :Western blot和细胞免疫荧光实验检测胃癌细胞株MGC-803及正常胃粘膜细胞GES-1中PKM2的表达;用TEPP-46预处理MGC-803细胞后,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,将MGC-803细胞种植于BALB/c裸鼠皮下,10 d后取下皮下瘤,测量皮下瘤大小,免疫组化检测增殖细胞核抗原PCNA在皮下瘤中的表达;用TEPP-46预处理MGC-803细胞后,Western blot检测细胞中PKM2、HIF-1α、p-NF-κB及NF-κB的蛋白表达。结果:GES-1细胞PKM2四聚体高表达,MGC-803细胞中PKM2以单聚体表达为主,四聚体表达显著降低;预处理TEPP-46抑制MGC-803细胞的侵袭和增殖能力;预处理TEPP-46促进PKM2四聚体表达,抑制HIF-1α和p-NF-κB的表达。结论:活化因子TEPP-46通过抑制PKM2核转位,促进PKM2四聚体表达,抑制HIF-1α和p-NF-κB的表达,进而抑制胃癌细胞的侵袭和增殖。     

吗啡对胃癌细胞生物学性状的影响

目的 观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞生物学性状的影响.方法 将吗啡加入细胞培养液中使吗啡浓度分别稀释至0.1、10、1000 μmol/L,分别与胃癌MGC-803细胞一同孵育,应用噻唑蓝(MTT)比色法绘制12、24、36、48、60、72h的细胞生长曲线并计算细胞增殖率,7d后应用克隆形成实验检测MGC-803细胞生长增殖的变化;应用流式细胞仪检测MGC-803细胞周期和细胞凋亡的变化,用透射电子显微镜观察MGC-803细胞超微结构的变化.结果 吗啡使胃癌细胞生长缓慢,0.1 μmol/L吗啡组、10 μmol/L吗啡组、1000 μmol/L吗啡组细胞增殖率分别为对照组的(81.89±6.44)%、(78.52±4.68)%和(78.53±5.68)%(P＜0.05),3组细胞的克隆形成率分别为(0.76±0.18)%、(0.72±0.17)%和(0.56±0.18)%,低于对照组的克隆形成率(1.19±0.29)%(P＜0.05);与对照组比较,各吗啡组细胞周期G2/M期比例上升,G0/G1期和S期比例下降(P＜0.05);0.1μmol/L吗啡组、10 μmol/L吗啡组、1000 μmol/L吗啡组细胞凋亡率分别为(17.20±2.95)%、(19.13±3.86)%、(24.38 ±4.94)%,明显高于对照组的凋亡率(11.40±2.86)%(P＜0.05);透射电镜显示吗啡使胃癌细胞出现明显的凋亡表现.结论 吗啡抑制胃癌MGC-803细胞的生长增殖,促进胃癌细胞的凋亡.     

血管内皮生长因子-C和人表皮因子受体2共沉默对人肺腺癌细胞生物学行为的影响

目的 观察靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、人表皮因子受体2(HER2/neu)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响.方法 构建靶向VEGF-C、HER2/neu的siRNA表达质粒,转染A549细胞,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,噻唑蓝(MTY)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定凋亡率.结果 siVEGF-C组、siHER2/neu组、共转染组的细胞侵袭数分别为(42.76±2.87)、(47.10±3.63)、(40.50±3.21),显著低于阴性对照组(61.00±2.48,P＜0.01);转染48 h生长抑制率分别为(19.77±1.15)%、(22.98±2.13)%、(41.27±0.51)%,显著高于阴性对照组(4.99±0.14)%(P＜0.01);转染48 h肿瘤细胞凋亡率分别为(10.8±1.8)%、(11.7±1.5)%、(20.2±3.4)%,显著高于阴性对照组(2.6±0.7)%(P＜0.01).与单独一种siRNA转染比较,联合转染肿瘤细胞生长抑制率增加(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.01).结论 靶向VEGF-C、HER2/neu的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡,共转染后对增殖和凋亡影响更显著.     

RNA干扰下调肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因表达对胃癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 培养人胃癌MGC-803、HGC-27及BGC-823细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP-2基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以计数法检测细胞黏附,以划痕法观察癌细胞迁移、以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果 荧光实时定量PCR方法显示,3株胃癌细胞中,TROP-2均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以TROP-2 siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白明显下降,且呈浓度依赖性;细胞黏附结果显示,转染组细胞黏附数量明显下降;划痕试验和Boyden试验结果显示,细胞迁移和侵袭力明显下降.结论 TROP-2基囚在胃癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

吗啡对人胃癌MGC-803细胞p53 mRNA和E2F-1 mRNA表达的影响

目的 探讨吗啡对人胃癌MGC-803细胞p53 mRNA和E2F-1 mRNA表达的影响.方法 人胃癌MGC-803细胞以1×103/ml或2×105/ml密度接种于6孔培养板中,1 ml/孔,随机分为2组(n=18),正常对照组(C组)不作任何处理,吗啡组(M组)加入吗啡,使其终浓度为10μmol/L.于吗啡孵育7 d时应用克隆形成实验测定细胞增殖情况,于吗啡孵育24 h时测定细胞中p53 mRNA、E2F-1 mRNA的表达情况,并采用透射电子显微镜观察细胞超微结构.结果 与C组比较,M组克隆形成率降低,p53 mRNA表达上调,E2F-1 mRNA表达下调(P＜0.05).C组细胞核膜完整、核仁及染色质清晰,M组细胞核膜破裂、核仁碎裂,并出现凋亡小体.结论 吗啡可上调人胃癌MGC-803细胞p53基因表达、下调E2F-1基因表达,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

野生型P53基因诱导人胃腺癌MGC—803细胞凋亡的实验研究

目的 观察野生型P53基因诱导人胃腺癌MGC－803细胞凋亡的现象,探讨野生型P53基因导入抑制细胞增殖的机制。方法 构建含目的基因P53腺病毒载体（AdCMV P53),转染P53基因表达缺失的人胃腺癌细胞MGC－803。应用流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳图谱及脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡。结果 腺病毒介导的P53基因转染人胃腺癌细胞MGC－803后,流式细胞仪显示75．7％细胞生长停滞在G0／G1期,20．8％的细胞发生凋亡;琼脂糖凝胶电泳可观察到呈阶梯DNA区带图谱（DNA ladder);AdCMV P53转染组可见细胞凋亡,细胞核内有特异性的蓝黑色团块。结论 野生型P53基因通过诱导MGC－803细胞凋亡抑制细胞增殖。     

芬太尼对胃癌MGC-803细胞E2F-1、p53基因表达的影响

目的观察芬太尼对人胃癌MGC-803细胞生长增殖及E2F-1、p53基因表达的影响。方法芬太尼10-4μmol/L与胃癌MGC-803细胞共同孵育为芬太尼组,未加入芬太尼的胃癌MGC-803细胞孵育为对照组。7d后检测胃癌MGC-803细胞生长增殖的变化,观察细胞超微结构的变化,检测细胞E2F-1、p53基因的表达。结果与对照组相比,芬太尼组MGC-803细胞生长增殖缓慢,细胞克隆形成率更低(P<0.05);细胞胞质深染、细胞核固缩、染色质碎裂,出现明显的凋亡表现;细胞E2F-1基因表达增加、p53基因表达减少。结论 10-4μmol/L芬太尼可抑制胃癌MGC-803细胞的生长增殖,促进细胞的凋亡,并改变E2F-1、p53基因的表达。     

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默血管内皮生长因子(VEGF)对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 化学合成针对VEGF的小干扰RNA,实验分4组,转染后收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力.结果 siRNA 1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组;在24、48、72 h,siRNA 1～2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),其中以siRNA2组最为显著;与空白对照组比较,siRNA 1～2组的细胞黏附数量明显下降[(81.5±3.1)％比(40.5±2.6)％、P＜0.05,(81.5±3.1)％比(22.5±2.4)％、P＜0.05],其中以siRNA2组最为明显;siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降(162±9比81±5,P＜0.05;162±9比38±4,P＜0.05);siRNA1～2组细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),且siRNA 2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA 1组(P＜0.05).结论 VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞,可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

GPC3基因对肝癌细胞SK-Hep-1体外迁移、侵袭能力的影响

目的 利用构建好的GPC3真核表达载体,观察GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响.方法 将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法 转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察肝癌细胞转染前后增殖、黏附、迁移及侵袭能力的改变.结果 GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,迁移实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为131.70±7.44.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为71.60±4.76.侵袭实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为220.00±12.80.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为138.00±10.50.两组细胞比较,迁移、侵袭能力均显著增强(P＜0.01).结论 GPC3真核表达载体抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径抑制肝癌细胞的增殖.     

吗啡对人胃癌MGC-803细胞磷酸酶基因表达和NF-κB活性的影响

目的 探讨吗啡对人胃癌MGC-803细胞磷酸酶基因(PTEN)和NF-κB活性的影响.方法 胃癌MGC-803细胞随机分为对照组和吗啡组(n=6):对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终浓度为0.1μmol/L.孵育24 h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,应用RT-PCR和Western blot法检测胃癌MGC-803细胞PTEN表达和NF-κB活性.结果 与对照组比较,吗啡组胃癌MGC-803细胞凋亡率升高,PTEN表达上调,NF-κB活性降低(P＜0.05).结论 吗啡可通过上调PTEN表达,降低NF-κB活性促进胃癌MGC-803细胞凋亡.     

2-脱氧-D-葡萄糖联合氟尿嘧啶对胃癌细胞MGC-803凋亡影响的实验研究

目的探讨糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）与氟尿嘧啶（5-Fu）单独及联合应用对人胃癌细胞MGC-803增殖及凋亡的影响。方法实验设立2-DG组、5-Fu组、联合组（2-DG＋5一Fu）及空白对照组,将2-DG（10mmol／L）及5-Fu（5．0μg／L）单药及联合用药作用于人胃癌细胞MGC-803,MTT法检测各组MGC-803细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果2-DG和5-Fu均可使胃癌细胞增殖受到抑制并可诱导细胞凋亡,两药合用后其作用明显增强。结论2-DG能有效抑制人胃癌细胞MGC-803细胞生长增殖,并诱导其凋亡;2-DG与5-Fu联合应用抗肿瘤作用明显增强。