灵芝多糖调控PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞恶性表型

目的：观察灵芝多糖对肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法：将肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7作为主要研究对象,设立空白组和灵芝多糖低、中、高组（3.5、7、14 g·L-1）。细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测灵芝多糖对肝癌细胞增殖能力的影响;划痕实验检测灵芝多糖对肝癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术测定灵芝多糖对肝癌细胞周期的影响;Hoechst33258染色法测定灵芝多糖对肝癌细胞凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹法检测灵芝多糖对肝癌细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平的影响。结果：与空白组比较,灵芝多糖低、中、高组SK-HEP-1和Huh-7细胞增殖和迁移能力降低（P<0.05）;灵芝多糖低、中、高组G1期细胞比例升高（P<0.05）,S期和G2期细胞比例降低（P<0.05）;灵芝多糖低、中、高组可以诱导2种肝癌细胞凋亡,并且药物浓度越高作用越明显。与空白组比较,灵芝多糖低、中、高组PI3K和Akt的磷酸...     

灵芝多糖对动脉粥样硬化大鼠炎症因子表达的影响

目的 探讨灵芝多糖对动脉粥样硬化防治作用的可能机制.方法 SD大鼠给予高脂饲料加腹腔注射维生素D3复制动脉粥样硬化模型,全自动生化仪检测血清血脂含量,透射电子显微镜观察主动脉形态,ELISA法检测C反应蛋白(CRP)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Western Blot法检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的蛋白表达,观察灵芝多糖对动脉粥样硬化大鼠相关炎症因子表达的影响.结果 与模型组相比,灵芝多糖高剂量组可明显降低血清低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)水平(P＜0.01);病理形态显示灵芝多糖组可明显抑制大鼠主动脉斑块形成;灵芝多糖高剂量组血清CRP及TNF-α水平与模型组相比明显下降(P＜0.05),并显著下调VCAM-1蛋白表达(P＜0.01).结论 灵芝多糖对大鼠动脉粥样硬化具有一定的治疗作用,其机制可能与降低相关炎症因子表达有关.     

硬孔灵芝粗多糖抗氧化活性研究

目的 研究硬孔灵芝粗多糖的抗氧化活性. 方法 以水提醇沉法提取硬孔灵芝粗多糖,并用标准曲线法测定其总糖含量.通过DPPH、NBT、ABTS、还原力、金属离子螯合5个抗氧化模型研究硬孔灵芝粗多糖的抗氧化活性. 结果 硬孔灵芝粗多糖的平均提取率为0.58％,总糖平均含量为45.45％.DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、超氧阴离子(NBT)清除率、金属离子螯合IC50分别为95.39、1.23、0.11和1.14 mg/mL. 结论 硬孔灵芝粗多糖具有良好的抗氧化活性.     

香菇多糖联合AdIRF3通过刺激IFN-β表达抑制乳腺癌生长

目的利用荷瘤小鼠模型探讨香菇多糖联合干扰素调节因子3(IRF3)表达腺病毒载体治疗肿瘤的价值及潜在的机制。方法利用荷瘤Balb/c小鼠,分别接种磷酸盐缓冲液(PBS)、空白对照腺病毒载体(Ad GFP)、香菇多糖、表达活化型IRF3的腺病毒载体(Ad IRF3)及香菇多糖联合Ad IRF3,观察荷瘤小鼠的肿瘤生长曲线;利用Real-time PCR检测肿瘤组织的β干扰素(IFN-β)水平,酶联免疫斑点检测法(ELISPOT)检测脾脏淋巴细胞功能,流式细胞术(FACS)检测肿瘤局部淋巴细胞比例;记录荷瘤Balb/c裸鼠的肿瘤生长曲线,以及α干扰素受体1(IFNAR1)抗体封闭Balb/c的IFNAR后肿瘤生长曲线。结果与对照组相比,香菇多糖联合Ad IRF3可抑制Balb/c荷瘤小鼠肿瘤生长,且肿瘤局部组织中IFN-β显著高于对照组;肿瘤组织浸润CD8+T细胞比例显著高于对照组,而调节性T细胞(Treg)细胞比例在各组间并无显著性差异;ELISPOT显示联合处理刺激淋巴细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的能力显著高于对照组;荷瘤Balb/c裸鼠在接受不同组处理后,各组间的肿瘤生长曲线并无显著差异;利用IFNAR1封闭抗体阻断干扰素作用后,荷瘤Balb/c小鼠再次接受不同组处理,结果显示封闭抗体处理后可抑制香菇多糖联合Ad IRF3的肿瘤抑制作用。结论香菇多糖联合Ad IRF3通过活化IRF3-IFN通路发挥协同抑制乳腺癌肿瘤生长的作用。     

灵芝多糖的含量测定研究

以苯酚-硫酸法对灵芝多糖含量进行测定，并用正交试验设计选择最佳显色条件，该法灵敏度高，重现性好，平均回收率为99.1％，RSD＝1.23％（n＝5）。     

灵芝补气安神功效对动物焦虑行为影响的实验研究北大核心CSCD

目的:观察灵芝水煎液及其粗多糖对动物焦虑行为的抗焦虑作用及机制。方法:建立装置焦虑模型小鼠和心气虚焦虑装置大鼠模型,除正常对照组、焦虑模型对照组,大小鼠分别灌胃地西泮2.5 mg/kg、灵芝水煎液2、4、6 g/kg、灵芝粗多糖0.04、0.08、0.12 g/kg,末次给药后1 h,观察大、小鼠于高架十字迷宫(EPM)实验中开臂进入次数百分比(OE%)、开臂滞留时间百分比(OT%)及明暗箱(LDT)实验中穿梭次数;行为学实验结束后取大鼠血及大、小鼠脑组织,ELISA法测定小鼠脑组织中小鼠γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLU)、5-羟色胺(5-HT)的含量;试剂盒测定大鼠脑组织中GABA、GLU含量,γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)、谷氨酸脱羧酶(GAD)、谷氨酰胺合成酶(GS)活力,血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA),血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、心钠素(ANP)含量;免疫组化法观察海马γ-氨基丁酸受体α1(GABAARα1)阳性表达。结果:随心气虚造模时间延长,各组大鼠体质量明显降低,19 d起,各给药组大鼠体质量降幅逐渐减小,22 d起各给药组大鼠体质量均大于心气虚焦虑模型组;灵芝水煎液及粗多糖均可显著升高大、小鼠的OE%、OT%、穿梭次数和脑组织中GABA含量,降低GLU含量及GLU/GABA的比值;降低小鼠脑中5-HT含量;降低大鼠脑中GABA-T活性;升高大鼠脑中GAD、GS活力,血清SOD活力、血浆cAMP含量,降低血清MDA、血浆cGMP、ANP含量,增强海马GABAARα1受体阳性表达;等质量灵芝饮片的水提取物、多糖提取物,表现出相似的抗焦虑效果。结论:灵芝水煎液及其粗多糖对动物焦虑行为有明显抗焦虑作用,抗焦虑主要活性部位可能为灵芝多糖。作用机制与通过调节GLU/GABA-Gln代谢环路中相关酶的活力,升高GABA含量和上调下游GABA/GABAARα1信号通路的表达,纠正兴奋-抑制性神经递质的失衡有关。     

平盖灵芝提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制实验研究

目的：探讨平盖灵芝不同极性部位提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。方法：采用噻唑蓝（MTT）法测定各部位提取物对肿瘤细胞增殖的抑制率。结果：平盖灵芝石油醚部位提取物（100μg／mL）和氯仿部位提取物（100μg／mL）对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率分别为27．56％和23．41％,与空白组比较均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：平盖灵芝石油醚部位提取物和氯仿部位提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖有一定抑制作用。     

灵芝多糖对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老的干预研究

目的探讨灵芝多糖保护血管内皮细胞、抑制血管内皮细胞衰老的作用。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立衰老模型,分为对照组、AngⅡ诱导组和灵芝多糖组(给予AngⅡ刺激前1 h先给予100 mg/L灵芝多糖)。采用CCK-8法检测细胞存活率,采用免疫化学染色方法检测衰老相关β-半乳糖苷酶活性,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力。结果与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-半乳糖苷酶阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予灵芝多糖干预后上述变化改善。结论灵芝多糖具有抑制内皮细胞衰老、保护血管内皮功能的作用。     

灵芝多糖对阿尔茨海默病模型大鼠海马内突触 及突触素表达的影响

目的:观察灵芝多糖(GLP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内突触及突触素表达的影响。方法:清洁级雄性SD大鼠,双侧海马内一次性注射β-淀粉样多肽25～35片段(Aβ25～35)制作大鼠AD模型;ip不同浓度的灵芝多糖溶液进行治疗,连续7 d,每天1次;Morris水迷宫检测动物学习记忆能力,采用免疫组织化学染色法、透射电镜技术结合图象分析方法比较各组大鼠海马CA1,CA3区突触素表达、突触的数密度和面密度变化。结果:与模型组相比,灵芝多糖75,50 mg.kg-1能显著降低大鼠水迷宫实验的平均潜伏期,升高跨越平台次数;亦能显著升高大鼠海马突触素的表达(P<0.01)及突触的数密度(Nv)和面密度(Sv)(P均<0.01)。结论:灵芝多糖能显著升高老年性痴呆(阿尔茨海默病)大鼠海马内降低的突触素/突触,此可能是增强大鼠学习记忆产生抗痴呆作用的机制之一。     

灵芝多糖和香菇多糖纠正环磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫抑制的作用研究

目的:探讨灵芝多糖(GLP)及香菇多糖(LNT)拮抗环磷酰胺(Cy)所导致的荷瘤小鼠的免疫抑制作用,同时观察两种多糖与 Cy 合用的抑瘤作用特点。方法:GLP 或 LNT 与 Cy 合用对荷 S_(180)小鼠瘤重影响采用抗移植性肿瘤实验;生物检测法测定 GLP 或 LNT 与 Cy 合用对荷瘤小鼠白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)各项指标的影响。结果:GLP(25 mg/kg、50 mg/kg)或 LNT(2.5 mg/kg、5 mg/kg)与 Cy(20 mg/kg)合用可显著抑制小鼠 S_(180)的生长,与单用 Cy 组比较差异无显著性。GLP 和 LNT均可显著增加 Cy 所致免疫功能低下小鼠脾 IL-2的产生;GLP 和 LNT 可不同程度增加 Cy 抑制的小鼠脾细胞 IFN-γ产生,可对抗 Cy 对小鼠脾细胞分泌 IFN-γ的抑制作用;GLP 和 LNT 可显著拮抗 Cy 时小鼠巨噬细胞(Mφ)TNF-α分泌的抑制作用,使之恢复至正常水平。结论:GLP 和 LNT 可显著恢复 Cy 所导致的小鼠免疫状态低下,增加免疫状态低下小鼠的 IL-2、IFN-γ和 TNF-α的产生。     

碱提灵芝多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性评价

目的从赤芝Ganoderma lucidum中提取、分离和纯化获得碱提多糖组分,在表征其基本理化性质和精细结构的基础上,对其体外免疫调节活性进行研究。方法赤芝子实体干燥粉碎后,利用碱提醇沉法提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱纯化得到灵芝多糖组分(LZJ-0.15)。采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)及高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定LZJ-0.15的单糖组成及相对分子质量特征,并通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)及二维谱(1H-1H COSY和1H-13C HSQC)对LZJ-0.15的精细结构进行表征。采用小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红实验对灵芝多糖LZJ-0.15进行免疫活性评价。结果 LZJ-0.15的相对分子质量、分子半径及Mw/Mn分别为24 700、46.6 nm和1.019,其单糖组成分析显示以葡萄糖为主(92.3%),核磁谱图显示LZJ-0.15为→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→连接为主的葡聚糖。RAW264.7细胞吞噬中性红实验显示LZJ-0.15具有较好的免疫调节活性。结论赤芝碱提灵芝多糖相较于水提多糖组分具有较优的免疫活性,有望开发成重要的免疫调节剂。     

灵芝多糖防治中枢神经系统疾病的研究进展

灵芝是民间常用的传统名贵中药材,对维持人体健康发挥着重要作用。其中,灵芝多糖是灵芝的主要生物活性组分之一,具有抗癌、免疫调节、抗菌、抗氧化、清除自由基等多种药理作用。中枢神经系统疾病病因、病机复杂,临床表现多样,对治疗的反应性个体差异较大,给临床治疗带来了极大的挑战。从阿尔茨海默病、抗癫痫、调节小胶质细胞炎症反应的作用等方面对灵芝多糖中枢神经保护作用的特点及机制进行了综述,为其临床应用提供相关依据。     

赤芝水提取物中的三萜类成分

采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、HPLC等色谱技术手段,从赤芝水提物中分离得到1个新的灵芝三萜酸和18个已知类似物。利用理化性质和波谱数据,鉴定新化合物为2β-acetoxy-3β,25-dihydroxy-7,11,15-trioxo-lanost-8-en-26-oic acid(1)。通过与文献数据比较,已知化合物分别鉴定为ganoderic acid H(2),12β-acetoxy-3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(3),ganoderenic acid D(4),ganoderic acid C1(5),ganoderic acid G(6),3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(7),ganoderic acid B(8),ganoderic acid C6(9),3β,15α-dihydroxy-7,11,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(10),ganoderic acid A(11),ganolucidic acid A(12),lucidenic acid E2(13),lucidenic acid N(14),lucidenic acid P(15),lucidenic acid B(16),lucidenic acid A(17),lucidenic acid C(18),lucidenic acid L(19)。虽然化合物2~19在赤芝中已经报道,但是化合物1是新化合物。因此,该研究进一步丰富了赤芝的化学成分,尤其是填补了赤芝传统水煎剂化学成分研究的空白。     

灵芝多糖肽中单糖的组成

目的从灵芝Ganoderma lucidum子实体中分离得到的GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT43种多糖肽,对其单糖组成和摩尔比进行比较。方法多糖肽经三氟乙酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮(PMP)衍生化,在高效液相245nm紫外检测,使用KH2PO4(pH5.0)-乙腈(83.5∶16.5)等度洗脱,9种单糖的色谱峰分离清晰,大多呈基线分离。结果经实验确定GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT4均由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸等9种单糖组成。结论灵芝子实体活性成分多糖肽中的核糖系属首次报道。     

微波连续抽提用于灵芝三萜类成分的分析

结合索氏提取的原理,自制了微波连续抽提装置,通过与传统方法的比较,研究了微波连续抽提法的特点和萃取效率,并将其用于灵芝三萜类成分的分析.该法的萃取条件为:以95％乙醇为萃取溶剂,微波功率200 W,微波时间14.5 min(5个循环).将上述条件下的萃取结果与传统的回流提取、索氏提取、超声提取和微波萃取法进行比较.结果,微波连续抽提和常规的微波萃取分别需要14.5,10 min即可将灵芝三萜类成分的提取量达到最高,而其他非微波提取的方法则需要几十分钟甚至上百分钟.微波萃取10 min与回流提取120 min所得灵芝三萜的量基本一致,明显高于索氏提取和超声提取法,同时又远低于微波连续抽提法.更为重要的是,由三萜提取量所占粗提物的比例可知,微波连续抽提所得提取物的纯度远远优于其他方法.微波连续抽提有效结合了微波萃取和索氏提取的优点,因此比常规的微波萃取更能将药材中的目标成分提取完全,使分析结果更为准确,为中药的成分分析提供了一种新颖的、高效、快速、可靠的样品前处理技术.同时,由于该方法提高了药材利用率,并且所得提取物具有杂质含量低,有效成分含量高的特点,也可将其用于中药成分的制备和提取工艺的研究.     

不同品种灵芝主要活性成分分析

目的:对不同品种灵芝子实体中4类活性成分进行测定分析,为灵芝品种专用化育种提供依据.方法:采用紫外分光光度法测定灵芝样品总多糖、总三萜和蛋白质含量;采用反相高效液相色谱法测定灵芝样品麦角甾醇含量.结果:不同品种灵芝子实体中总多糖、总三萜、蛋白质均为含量较高的主要成分,但麦角甾醇的含量极低;4类成分在不同灵芝品种中含量差异显著,含量之间未发现有相关性.结论:灵芝多糖、三萜、蛋白质这3类各具典型功效的主要成分含量测定对灵芝子实体的质量控制均有重要的意义,并且可为制剂生产、临床应用的专用品种选育提供科学依据.     

基于GC-Q-Exactive-MS的灵芝孢子油化学成分定性分析

目的 利用高分辨气相色谱-四级杆-静电轨道阱质谱法（GC-Q-Exactive-MS）定性分析灵芝孢子油的化学成分。方法 采用GC-Q-Exactive-MS,在电子轰击（EI）源下获取化合物的全扫描质谱数据,通过总结脂肪酸类、萜类、甾醇类及醛类化学成分的质谱裂解规律,并检索NIST、MassBank、HMDB、PubChem在线数据库及查阅相关文献,对灵芝孢子油的各类化学成分进行鉴定。结果 从灵芝孢子油中共鉴定了22个化学成分,包括3个脂肪酸类、4个萜类、4个甾醇类、4个醛类及7个其他类化合物。结论 研究结果为灵芝孢子油质量控制和中药弱极性化学成分定性分析提供了参考。     

灵芝一共生真菌的脑苷类成分研究

目的：为了从灵芝Ganoderma lucidum中寻找新的天然抗肿瘤活性产物，对其次生代谢产物进行了较系统的研究。方法：利用柱层析和制备RP－HPLC从灵芝一共生真菌（Calcarisporium arbuscula)的发酵菌丝体中分得4个脑苷类化合物。结果：通过光谱分析鉴定，分别为：（4E，8E，3‘E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基－3‘-十六烯酰基－1－O－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（I),(4E,8E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基十六烷酰基－1－O－β－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（Ⅱ），（4E,8E,3‘E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基－3‘-十八烯酰基－1－O－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（Ⅲ，2－（2－羟基二十四烷酰氨基）－1，3，4－十八烷三醇（Ⅳ）。结论：I－Ⅳ均首次从齿梗孢属真菌中分离得到。     

灵芝三萜化合物的抗肿瘤靶点预测与活性验证

研究发现灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤活性,但其作用靶点尚不清楚,该试验主要研究灵芝三萜类化合物的抗肿瘤活性并对其可能的作用靶点进行预测。采用Discovery Studio软件的Lib Dock模块,以灵芝子实体中的26种三萜类化合物作为配体,分别与抗肿瘤作用明确的11个靶点蛋白进行分子对接,获得对接的打分结果,评判配体与靶点蛋白受体结合的亲和力,从而进行灵芝三萜类化合物抗肿瘤的虚拟筛选,探讨可能的作用靶点。同时,MTT实验检测26种灵芝三萜类化合物对5种肿瘤细胞的抑制能力,计算IC_(50),以此反映化合物的抗肿瘤活性。对接结果表明,对接位置数目大于5,且对接得分高于100,可以作为判断化合物是否具有活性的阈值,据此筛选出8种灵芝三萜类化合物可能具有抗肿瘤活性,其中5个具有多靶点作用的三萜成分。MTT细胞实验显示,灵芝酸Y对肺癌细胞H460显示了一定的抑制活性,IC_(50)为22.4μmol·L~(-1),其次是7-oxo-ganoderic acid Z2,IC_(50)为43.1μmol·L~(-1)。其他三萜类化合物对被测肿瘤细胞株未显示活性或活性很弱。该研究建立的分子对接虚拟筛选方法可用于灵芝抗肿瘤活性成分的初步筛选,通过该方法的筛选,结合MTT细胞毒活性实验结果,发现灵芝酸Y具有抗肿瘤,尤其抗肺癌开发的潜在可能性,7-oxo-ganoderic acid Z2和ganoderon B具有一定的抑制活性,其抗肿瘤作用有待于进一步深入研究,该研究结果可为抗肿瘤药物的研制提供参考。     

灵芝菌发酵基质的条件优化及菌质活性物质的分析

目的：通过灵芝菌与玉米须、玉米芯的双向固体发酵,形成新的药性菌质,并对其活性成分进行分析。方法：以不同配比的玉米须和玉米芯为基质,以活性物质多糖和三萜的含量为指标考察菌质的最佳培养基配比,分别采用紫外分光光度法、薄层色谱法和高效液相色谱法进行定性及定量分析。结果：玉米须和玉米芯以1：0,1：1,1：2,1：3,1：4,1：5,0：1配比,用灵芝菌发酵,形成的菌质多糖含量递增,三萜含量递减;薄层色谱结果显示,与发酵前对比,发酵后色谱斑点由红色转为蓝绿色荧光,并随着玉米须在培养基中比重增加而斑点越明亮;高效液相色谱结果显示,发酵后原有一些物质峰减弱或消失,并生成新的物质。结论：以玉米须-玉米芯1：5作为基质产生的菌质长势及活性成分含量最高,发酵前后菌质的物质组成有明显改变。