枸杞多糖对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的 探索枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及其限速酶hTERT表达的影响.方法 采用皮下接种法建立小鼠移植性肝癌模型,将96只小鼠随机分成正常对照组,模型组,LBP高、中、低(20,10,5 mg/kg·d)剂量组和环磷酰胺(20 mg/kg·d)组.观察LBP对小鼠肿瘤体积、抑瘤率的影响.PCR-TRAP-ELISA 法检测端粒酶的活性,Western blot测定hTERT蛋白表达.结果 20,10,5 mg/kg·d的LBP能明显减小肿瘤细胞的体积和质量(P＜0.05),抑瘤率分别为42.23％、25.10％和9.16％;同时,LBP(20,10mg/kg·d)能明显抑制肝癌组织hTERT蛋白表达(P＜0.05),降低端粒酶的活性(P＜0.05).结论 LBP可通过抑制小鼠肝癌组织hTERT蛋白表达、降低端粒酶的活性,从而对小鼠移植性肝癌的生长起到抑制作用.     

吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,TRAP法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果:吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;能够降低HT29端粒酶活性,但二者无协同作用;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论:吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,为临床治疗大肠癌提供实验依据。     

连黛片对大鼠溃疡性胃癌相关癌基因蛋白表达的影响

目的：观察连黛片对大鼠溃疡性胃癌相关癌基因蛋白表达的影响，探讨连黛片防治胃癌的机理。方法：采用SP免疫组化法检测溃疡性胃癌模型组、连黛片治疗组大鼠胃癌组织以及溃疡对照组大鼠胃组织中c-erbB2、p21^ras和p53三种癌基因蛋白的表达情况。结果：所检6例模型组胃癌组织的p^21ras,c-erbB2蛋白均呈阳性表达，而连黛片防治组2例胃癌组织的p21^ras,c-erbB2则呈阴性表达，两缄胃癌组织的p53蛋白也呈阴性表达。另外所检5例溃疡对照组大鼠组织的上述三种癌基因蛋白，均呈阴性表达。结论：ras、c-erbB2原癌基因的激活可能是N－甲基－N'－硝基－亚硝基胍（MNNG）诱发溃疡大鼠腺胃癌的重要原因，而连黛是可能通过对抗ras、c-erbB2原癌基因的激活而抑制c-erbB2、p21^ras蛋白的表达。     

健脾理气中药对肝癌端粒酶活性的影响

目的：在体内和体外观察健脾理气中药对端粒酶活性的影响,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法：采用TRAP方法,观察H22肝癌荷瘤小鼠在服用健脾理气中药后肿瘤端粒酶活性的变化,以及健脾理气中药对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721端粒酶活性的影响。结果：体内实验显示中药组端粒酶的活性明显低于对照组(P=0．038)。体外实验表明,健脾理气冲剂对SMMC-7721细胞的端粒酶活性有抑制作用。结论：对肿瘤细胞端粒酶活性的抑制可能是健脾理气中药抗肿瘤作用机制的一部分。     

肠益煎对裸鼠结肠癌移植瘤抑瘤作用的实验研究

目的探究肠益煎对移植性结肠癌裸鼠肿瘤的抑制作用。方法将接种人结肠癌LOVO细胞悬液于裸鼠皮下成功制备的裸鼠移植性结肠癌模型60只随机分为模型组(A组)、肠益煎组(B组)、5-氟尿嘧啶组(C组)、5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组(D组)、肠益煎+5-氟尿嘧啶组(E组)、肠益煎+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组(F组),每组10只,模拟临床给药。A组给予生理盐水20 m L/(kg·d)灌胃;其他组中肠益煎采用水煎剂12.5 g/(kg·d)灌胃,均每天1次,共14 d;5-氟尿嘧啶及奥沙利铂采用腹腔注射,隔天1次,共5次。疗程中观察并记录裸鼠体质量。疗程结束后处死裸鼠,采集标本,记录瘤质量,计算肿瘤指数和抑瘤率。结果裸鼠去瘤后质量B、C、D、E、F组均显著高于A组(P均<0.05),D、E、F组均显著高于B、C组(P均<0.05),D、E、F组间比较差异均无统计学意义;C、D、E、F组裸鼠瘤质量、肿瘤指数明显低于A、B组(P均<0.05),D、F组明显低于C组(P均<0.05)。C、D、E、F组抑瘤率均明显高于B组(P均<0.05),D、F组明显高于C组(P均<0.05)。结论中药复方肠益煎可以稳定患瘤裸鼠体质量,有一定的抑制肿瘤瘤体生长作用,联合化疗药物5-氟尿嘧啶、奥沙利铂抑瘤效果更佳。     

开道散对胃癌裸鼠移植瘤的影响

目的:研究开道散对胃癌SCG-7901裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:建立胃癌SCG-7901裸鼠移植瘤后传3代模型,接种于裸小鼠前肢腋窝皮下,待肿瘤生长至50~250 mm3后随机分6组,其中A组为对照组,其余各组均为治疗组,A组每周瘤体内注射生理盐水60μl,B组每周瘤体内注射5-Fu注射液0.3 mg/60μl,C组每周瘤体内注射5-Fu注射液、鸦胆子乳剂各60μl,D组每日开道散(用生理盐水配制成4 g/100 ml)200μl灌胃及每周瘤体内注射给药5-Fu注射液60μl,E组每日开道散灌胃及每周瘤体内注射给药5-Fu注射液、鸦胆子乳剂各60μl,F组每日灌服开道散。实验期间,每周测量两次瘤体体积,给药结束,将动物脱臼处死,剥离出肿块称重,比较各组肿瘤重量,并求出肿瘤抑制百分率。结果:除F组瘤重与对照组比较无统计学意义(P>0.05),余各治疗组瘤重均显著低于对照组,其中B组、C组、D组、E组抑瘤率分别为49.4%、64.6%、51.9%7、8.1%与对照组相比有统计学意义(P<0.05),但治疗组间C组与B组、D组与B组间无统计学意义(P>0.05),而E组与B组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:瘤体内注射5-Fu注射液、鸦胆子乳剂联合灌服开道散可抑制裸鼠胃癌的生长,抑瘤效果最佳。     

苦参碱对MCF-7细胞Fas、VEGF及端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞Fas、VEGF及端粒酶活性的影响。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,随机分组,实验组细胞加入苦参碱溶液,对照组或阴性对照组细胞加入等量培养液,阳性对照组细胞加入端粒酶抑制剂莪术油。采用倒置显微镜下观察细胞形态学变化;TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;免疫细胞化学法检测MCF-7细胞中Fas、VEGF蛋白表达情况。结果 苦参碱对乳腺癌细胞有明显的生长抑制作用和促凋亡作用;不同浓度苦参碱处理MCF-7细胞24、48、72 h后,端粒酶活性随苦参碱浓度增加和作用时间延长而逐渐下降,呈剂量—效应正相关和时间—效应正相关;苦参碱能够上调MCF-7细胞Fas蛋白表达和下调MCF-7细胞VEGF蛋白表达。结论 苦参碱对MCF-7细胞具有明显的生长抑制作用和促凋亡作用,可能是通过上调Fas蛋白表达、抑制端粒酶活性诱导乳腺癌细胞凋亡及通过下调VEGF蛋白表达,抑制肿瘤血管形成等实现的。     

梅花鹿角脱盘多肽的分离纯化及对乳腺癌细胞端粒酶活性的影响

目的分离纯化梅花鹿鹿角脱盘多肽;以小鼠乳腺癌细胞系MA782为体外研究对象,初步研究鹿角脱盘多肽对肿瘤细胞端粒酶活性的影响。方法采用酸提醇沉法提取鹿角脱盘多肽,再经Sephadex G-25凝胶过滤层析除盐,BCA法测定的多肽蛋白质含量,TRAP-银染法分析MA782细胞端粒酶活性的变化,再利用相对荧光定量PCR技术检测MA782细胞端粒酶催化亚基TERT基因的表达水平。结果分离纯化出鹿角脱盘多肽粗提物,其蛋白质含量为91.800%;TRAP-银染法检测MA782细胞端粒酶的活性发现,与对照组细胞比较,多肽使细胞端粒酶活性有所下降,典型的重复序列条带数依次减少,多肽处理24 h、48 h、72 h、96 h、120 h后,MA782细胞中相对端粒酶活力分别为91.4、78.3、66.5、47.8、29.2、20.5,呈时间依赖性;相对荧光定量PCR法分析结果表明,与对照组比较,TERT基因的表达水平降低。结论鹿角脱盘多肽对乳腺癌细胞端粒酶活性有一定的抑制作用,可为深入研究鹿角脱盘多肽抗肿瘤活性提供依据。     

何首乌饮含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响

目的观察不同剂量的中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响,探讨其在调节卵泡微环境过程中所起的作用。方法制备大鼠排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC)分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养。用TRAP-ELISA方法分析GC的端粒酶活性;运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况。结果各剂量组何首乌饮含药血清可明显上调GC端粒酶活性,与对照组比较,中、高剂量何首乌饮含药血清能够显著提高GC端粒酶活性(P均<0.05)。随着中药血清药物剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐下降,与对照组比较,中、高剂量组何首乌饮含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P均<0.01),各含药血清组细胞坏死率虽较对照组高,但与各组比较差别无统计学意义。结论何首乌饮通过上调离体培养的大鼠卵巢GC端粒酶活性、抑制凋亡从而对卵泡局部微环境的调节,可能是其调节下丘脑-垂体-卵巢轴的重要靶点之一。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨口虾蛄提取物(EOS)对人鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立CNE-2Z裸鼠移植瘤模型,腹腔给药,然后观察不同剂量EOS对CNE-2Z裸鼠移植瘤生长的影响。结果对照组及400mg/kgEOS组裸鼠移植瘤成瘤率均为100%(8/8),而800mg/kg、1600mg/kgEOS组成瘤率分别为87.5%(7/8)及62.5%(5/8),成瘤率有随EOS剂量增高而下降的趋势;同时随EOS剂量的增高,裸鼠移植瘤生长速度减慢,平均瘤质量也有降低的趋势,其中800mg/kgEOS组抑瘤率达57.1%。结论EOS对CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长可能具有一定的抑制作用。     

胃复方对人胃癌BGC-823细胞移植瘤裸鼠作用及其对c-Myc、人端粒酶逆转录酶基因表达的影响

目的:观察胃复方对人胃癌BGC-823裸鼠的抑瘤作用及c-Myc、人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响,评估胃复方作用及其可能的作用机制。方法:建立人胃癌BGC-823裸鼠模型;将成功建立的裸鼠胃癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠随机分为5组(n=8):模型对照组、胃复方低剂量组、胃复方高剂量组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合中药组,连续给药4周。每7天记录肿瘤长径、短径,计算瘤体体积并绘制肿瘤生长曲线图;给药4周后处死所有荷瘤鼠,剥离皮下移植瘤称瘤重、计算抑瘤率;免疫组织化学法检测瘤体组织c-Myc、hTERT蛋白表达。结果:1)胃复方对人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤具有明显抑制作用,各剂量间有量效关系。其中胃复方低剂量组、胃复方高剂量组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合中药组的抑瘤率分别为21.06%、45.89%、30.65%、59.42%。氟尿嘧啶联合中药组效果最好。2)瘤重显示与模型组比较,各药物组瘤重均有不同程度的减轻差异有统计学意义(P 0.05);其中氟尿嘧啶联合中药组降低明显。3)肿瘤生长曲线图显示与模型组比较,各药物组瘤体积均有一定程度缩小差异有统计学意义(P 0.05)。4)与模型组比较,药物组均能下调c-Myc、hTERT蛋白表达量差异有统计学意义(P 0.05)其中氟尿嘧啶联合中药组下降最明显。结论:胃复方能够抑制人胃癌BGC-823细胞BALB/c-nu裸鼠皮下移植瘤生长,可能与下调c-Myc、hTERT蛋白表达有关,并且与氟尿嘧啶联合用药有增效作用。     

老鹳草提取物对人结肠癌细胞株裸鼠肝转移的影响

目的:建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型,研究老鹳草提取物对裸鼠肝转移模型的影响.方法:采用BALB/C裸鼠,Ls174t人大肠癌细胞株,脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠肝转移模型.将36只裸鼠随机分成模型对照组、老鹳草提取物组和羟基喜树碱阳性对照组,给予老鹳草提取物喂养,观察一般情况及肿瘤生长情况;采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测裸鼠循环血中pS2表达;标本作病理组织学检查.结果:①脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠结肠癌肝转移模型的成功率为100%,病理组织学证实肝转移癌细胞呈人结肠癌低分化腺癌特征;②老鹳草提取物组裸鼠肿瘤数目及质量明显低于羟基喜树碱组(P＜0.05);③老鹳草提取物组裸鼠血中pS2表达为7.598±0.046,明显高于羟基喜树碱组3.794±0.020(P＜0.05).结论:老鹳草提取物可显著降低肝转移裸鼠血中pS2表达,抑制裸鼠结肠癌肝转移的发展,且效果优于羟基喜树碱,可作为大肠癌术后预防复发和肝转移的治疗手段之一.     

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低剂量组、消痰散结方中剂量组、消痰散结方高剂量组、5-Fu组,每组8只,运用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR方法检测hTERT蛋白及mRNA的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中、高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01);③消痰散结方中、高剂量组hTERTmRNA含量与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方通过下调hTERT蛋白及mRNA的表达而抑制端粒酶的活性,使癌细胞端粒长度逐渐缩短,丧失无限增殖能力,起到抑制肿瘤细胞生长、增殖的作用。     

柴胡疏肝散对夹尾应激大鼠脑和胃组织GASR mRNA和CCK-AR mRNA表达的影响

目的 探讨柴胡疏肝散对夹尾应激大鼠脑和胃GASR mRNA和CCK-AR mRNA表达的影响.方法 将30只大鼠随机分为3组,正常对照组、模型组和柴胡疏肝散组,每组10只,采用慢性夹尾刺激方法制作慢性应激模型,分别给予生理盐水、柴胡疏肝散水煎剂灌胃,共4周.观察其一般情况及胃组织学变化,并用原位杂交方法检测大鼠脑和胃组织胃泌素受体(GASR)mRNA和胆囊收缩素受体A(CCK-AR)mRNA的表达.结果 ①模型组出现了抑郁和消化不良行为表现, 而柴胡疏肝散组则较不显著;②模型组胃黏膜均出现不同程度的糜烂和炎症反应,而柴胡疏肝散组则较轻;③模型组大鼠胃和脑组织上的GASR mRNA表达量较正常对照组有显著升高(均P<0.05),柴胡疏肝散组则较模型组有显著降低(均P<0.05).模型组大鼠胃组织CCK-AR mRNA表达较正常对照组显著升高(P<0.05),柴胡疏肝散组较模型组有显著降低(P<0.05).结论 柴胡疏肝散能改善慢性应激抑郁和消化不良行为,其机制可能与其能减低脑和胃组织GASR mRNA表达和减低胃组织CCK-AR mRNA表达有关.     

蛞蝓提取物对肺癌细胞P53及端粒酶基因hTERT表达的影响

目的:了解蛞蝓提取物对肺癌细胞P53、端粒酶基因hTERT表达的影响。方法:体外培养肺癌细胞株,用免疫组化SP法进行检测。结果:蛞蝓提取物可抑制肺癌A549细胞端粒酶基因hTERT表达,并改变突变型P53表达。结论:蛞蝓提取物对肺癌细胞的抑制作用有可能是通过抑制突变型P53及端粒酶基因hTERT表达而实现的。     

莪术油联合干扰素对小鼠宫颈癌端粒酶活性和细胞凋亡的影响

目的探讨莪术油、莪术油联合α-2b干扰素抑制宫颈癌细胞的分子机制及其协同作用。方法通过莪术油、莪术油联合干扰素作用小鼠宫颈癌细胞,并设立阴、阳性对照组,比较各组间端粒酶活性和细胞凋亡率有无差异。结果莪术油可明显抑制宫颈癌细胞的端粒酶活性和诱导肿瘤细胞凋亡,并有一定的剂量依赖性;莪术油联合α-2b干扰素比单独莪术油效果好,统计学显示差异有显著性。结论抑制肿瘤的端粒酶活性和诱导肿瘤细胞发生凋亡可能是莪术油抗鼠宫颈癌的重要分子机制;α-2b干扰素与莪术油联合使用对抑制宫颈癌细胞增殖有协同效应。     

复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒mRNA复制和干扰素(IFN)表达的影响

目的:研究复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒(influenza virus,Ⅳ)mRNA复制的抑制作用和干扰素(interferon,IFN)表达的诱生作用。方法:以流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染的小鼠肺炎为模型,采用RT-PCR技术测定小鼠体内流感病毒mRNA和干扰素含量。观察复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒mRNA复制和IFN表达的影响。结果:复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒mRNA表达有较好的抑制作用(P<0.01),对干扰素的表达有诱生作用(P>0.05)。结论:复方黄芩提取物具有诱生干扰素、抑制流感病毒在小鼠体内的复制作用。