氨基酸对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的效应

研究Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Met、Asn、Cys、Ser、Thr、Asp、Glu、His、Lys、Arg等17种氨基酸对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:非极性氨基酸中Gly、Ala、Leu、Phe对酶活力几乎没有作用,而Val、Ile对酶略有激活,20 mmol/L的Val可以使酶活力提高7.5%,40 mmol/L的Ile可以使酶活力提高10.5%;Pro、Met对该酶略有抑制作用,当浓度为40 mmol/L时,分别可以使酶活力下降15.2%和9.8%;极性氨基酸Asn、Cys、Ser、Thr对酶的活力没有影响;带负电荷的酸性氨基酸Asp和Glu对酶有抑制作用;带正电荷的碱性氨基酸His对该酶略有抑制,Lys和Arg对该酶抑制作用较强.研究Lys和Arg对酶催化pNP-NAG水解反应的抑制机理,并测定其抑制常数,结果表明:Lys和Arg的抑制作用均表现为可逆效应,抑制类型均为反竞争性抑制,其K.分别为5.29mmol/L和3.76 mmol/L.     

两种尿激酶原变体(Ala175→Ser,Tyr187→His,Lys300→His和Ala175→Ser,Tyr187→His)的构建及性质研究

利用定点突变方法 ,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Ser,Tyr187→His ,Lys30 0→His)及muk2 (Ala175→Ser ,Tyr187→His) .两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL2 1中表达得到包涵体 ,经体外变复性 ,SP Sepharose离子交换柱层析 ,Benzamidine Sepharose吸附除去双链尿激酶 ,得到的蛋白均为银染一条带 .用人工合成的发色底物S2 4 4 4测量muk1、muk2的动力学性质 ,muk1的内在酶活性比野生型 pro UK降低 8倍 ,muk2的内在酶活性比野生型 pro UK降低 2 .5倍 ;它们经纤溶酶 (plasmin)激活后的双链活性与 pro UK相比分别为muk1提高 50 % ,muk2和pro UK相当 .在实验基础上讨论了 pro UK高内源性催化活性的机制及其结构基础 .     

降纤酶的分离纯化及其性质

蛇毒蛋白对抑制血栓形成和溶解血栓具有较好的疗效 ,但由于得不到性质稳定、组分单一的酶蛋白 ,影响了其临床效果。该研究通过亲和层析方法 ,从长白山白眉蝮蛇乌苏里种蛇毒中分离提纯到 SDS- PAGE图谱为单一组分糖蛋白——降纤酶 ,相对分子质量约 3.6× 10 4。该酶具有体外凝血、体内抗凝作用。等电点约为 4 .2 5。HPL C分析结果表明其纯度为 99%。最适温度为 70℃ ,最适 p H =8.0。动力学研究表明该酶为一 Michaelis- Menten酶 ,Michaelis常数为0 .32 0 mm ol/ L,最大反应速度为 0 .117μm ol/ m in。EDTA,Mg2 + ,Cu2 + 对其有抑制作用。测定该酶 N端 2 0个氨基酸的序列是 Val Ile Glu Glu Asp Glu Cys Asn Ile Asn Glu His Arg Phe L eu,与其他的蛇毒类凝血酶有高度同源性。     

饲料用灌木中氨基酸含量的快速定量分析方法

用日立L-8800型氨基酸自动分析仪对饲料灌木中Asp(天冬氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ser(丝氨酸)、Glu(谷氨酸)、Pro(脯氨酸)、Gly(甘氨酸)、Ala(丙氨酸)、Cys(半胱氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Lys(赖氨酸)、NH3(氨)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)等18种主要氨基酸作了定量分析,提出了一种同时测定饲料用灌木中多种氨基酸含量的自动分析方法.结果表明,灌木样品18种氨基酸测定的变异系数在2.02～3.96%之间,标准回收率在99.90～101.47%之间,该方法快速、简便、灵敏度高、重现性好、人为因素影响少,结果令人满意.     

c-Mpl信号转导相关蛋白的结合域确定

血小板生成素（thrombopoietin,TPO）是调节血小板生成最主要的细胞因子，它的生物学效应由其受体c-Mpl介导，为了确定SGK，14-3-3，Siva,Toml,Cop9-S3和c-MplBP等6种蛋白在c-Mpl上的结合区域，构建c-Mpl膜内部分系列缺失片段及点突变，用酵母双杂合的方法检测这些片段与上述6种蛋白的结合情况，发现Box1是c-Mpl与这6种蛋白结合的主要区域，Box1两侧的序列及C端区域对c-Mpl与这6种蛋白的结合也有帮助，将c-Mpl膜内部分的第531位Ser(位于Box1内）突变为Ala和Val后，c-Mpl与SGK,14-3-3，Toml和Cop-S3的结合能力明显下降，提示Ser531可能对c-Mpl与这4种蛋白的结合起重要作用。     

珍珠薏米乳酸发酵饮料的研究

研究了以珍珠和薏米为主要原料制作乳酸发酵饮料的工艺。通过正交试验,确定最佳调配组合为:蔗糖10%,香精0.1%,薏米发酵液与珍珠水解液的体积比为2∶1。对饮料的可溶性固形物、酸度、还原糖、金属元素、氨基酸含量等指标进行了测定。结果表明,还原糖质量浓度为11.9 mg.mL-1;可溶性固形物为4.6%;pH值为4.97(16.5℃时);Zn、Mg、Fe、Mn、Na、Ca、K的质量浓度分别为0.1672,5.14340,.23260,.2933,241.76,136.093,4.87μg.mL-1;Cd、Pb、Cr、Cu和Co等均未测出;且含有Asp、Thr、Ser、Glu、Gly、Ala、Val、MetI、le、Leu、Tyr、Phe、Lys、His、Arg和Pro等16种氨基酸。     

紫菜降血压肽制备技术研究

江苏大学开发的“紫菜降血压肽制备技术研究”日前通过省科技厅组织的鉴定．该成果建立了超声渡与酶水解耦合技术制备条斑紫菜降血压肽的方法，进行了条斑紫菜降血压肽的纯化与结构鉴定，从条斑紫菜酶解液中获得了Cys—Ser—Asn—Arg和Pro—Cys—His—Trp两条新的高活性降血压肽。其抑制ACE活性的IC50值分别为24．71和5．38μg／ml，具有良好的耐高温性和酸稳定性．条斑紫菜降血压肽对原发性高血压大鼠具有降血压作用，呈量效关系．该研究成果将与南通、连云港等我省重要的紫菜产地企业、我省乃至全国的功能食品、医药等高新技术企业密切联系、合作。加速产业化进程．     

木糖还原酶定点突变设计的生物信息学分析

木糖代谢过程中,木糖还原酶（XR）和木糖醇脱氢酶（XDH）的氧化还原不平衡是利用纤维素生成酒精的关键问题之一.文中借助生物信息学手段（同源建模、酶和辅酶分子对接）,通过分析数据库资源,找到了一些影响XR活性或辅酶依赖性的关键氨基酸.结果表明：树干毕赤氏酵母XR与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）之间形成氢键的氨基酸有Lys21、Val222、Glu223、Phe236和Thr273,与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）之间形成氢键的氨基酸有Val222、Glu223、Phe236、Glu237和Thr273;突变Lys21（完全保守）使树干毕赤氏酵母XR只与辅酶NAD结合,突变Glu237（不完全保守）使树干毕赤氏酵母XR只与辅酶NADP结合;热带假丝酵母XR与NADP之间形成氢键的氨基酸有Asn278和Arg282（两者都不完全保守）,要改变其NADP依赖性,可以替代Asn278和/或Arg282.     

新型Caspase-3抑制剂1,2–苯并异噻唑–3–酮–1,4–二取代–1,2,3–三唑类衍生物的合成

为探究对Caspase-3有更高抑制活性的非肽类小分子抑制剂,用"点击反应"合成了一系列1,2–苯并异噻唑–3–酮–1,4–二取代–1,2,3–三唑类衍生物.通过体外Caspase-3和Caspase-7抑制活性测试发现,化合物7c对Caspase-3有最好的抑制活性,IC50达到11.0±1.2,nmol/L.为了更好的理解这些化合物与Caspase-3蛋白的相互作用模式,进行了分子对接实验.结果表明,化合物7c与蛋白作用位点具有很好的结合模式,验证了该化合物具有很好的体外Caspase-3抑制活性.     

文昌鱼ALPase底物特异性及其效应物对酶活力的影响

研究了文昌鱼碱性磷酸酶的底物特异性,测定酶催化几种单核苷酸和磷酸酯化合物水解反应的Kcat/Km值,酶对单核苷酸的新和力大小依次为3’-AMP>3’-UMP>3’-CMP>3’-GMP=2’-AMP>ε-AMP>5’-CMP>5’-AMP,研究效应物对酶水解对-硝基苯磷酸的影响表明:无机磷酸盐、砷酸盐为竞争性抑制,L-?丙氨酸为反应竞争性抑制,L-半胱氨酸、二巯基苏糖醇为混合型抑制;并测定于它们的抑制常数。     

印迹膜测序法分析结核分枝杆菌抗原蛋白

把WesternBlot技术分析抗原抗体反应的高度特异性与用PVDF膜作载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,TB)的特异性、保护性抗原进行筛选和分析鉴定 ,获得了分子量为 31KDa、30KDa的抗原 这两种抗原与抗结核分枝杆菌的单克隆抗体和结核病人血清均发生阳性反应 ,而与正常小鼠血清和健康人血清呈阴性反应 用印迹膜测序法测出 31KDa抗原蛋白的N 末端序列为AlaGluValAspTrpLeuValPheAlaValSerTrpProValGly ,30KDa蛋白序列为PheSerArgProGlyLeuProValGluTry 印迹膜测序为分子生物学研究提供了一种有效的新途径     

不同季节中兰州鲇肌肉水解氨基酸

目的研究兰州鲇(Silurus lanzhouensis)肌肉中常规营养成分和不同季节中肌肉水解氨基酸的组成和含量。方法采用氨基酸自动分析仪测定肌肉中水解氨基酸。结果兰州鲇肌肉中含有18种氨基酸,组成和含量顺序未呈现出季节性变化特点;蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸这5种氨基酸的含量及氨基酸总量,均随季节的推移呈上升趋势,但在3个季节中仅有秋季显著高于春季(P<0.05);苏氨酸、丝氨酸和谷氨酸等9种氨基酸的含量和必需氨基酸总量等虽有季节性上升趋势,但在3个季节间均无显著差异(P>0.05);胱氨酸、组氨酸和精氨酸等4种氨基酸含量未呈现出季节性变化。结论兰州鲇是一种蛋白质含量较高的经济鱼类,肌肉中水解氨基酸的种类、含量顺序及多数氨基酸的含量在季节变化中有较大的保守性。     

捕食线虫真菌丝氨酸蛋白酶PII结构的同源模建

通过同源模建方法构建捕食线虫真菌丝氨酸蛋白酶PII的三维结构模型,并结合以往研究对其结构进行分析。结果表明,蛋白酶PII的结构具有枯草杆菌丝氨酸蛋白酶特有的a／B脚手架折叠模式,具有保守的催化三聚体和氧负离子孔结构组织,整体表现为坚固的球状折叠构型,不具备二硫键。研究结果将为进一步深入研究PII的结构和功能之间的关系奠定结构基础。     

真菌Penicillium sp. MO3 产生的抗菌肽AF2的分离纯化和性质的研究

从真菌Penicillium sp. M03发酵液中提取到一种具有抗菌活性的肽类物质AF2，并对其性质进行初步研究. 真菌发酵液经纱布过滤，离心后经10000D超滤膜超滤，冻干，以纯水溶解经Sephadex LH-20，DEAE Sepharose及Sephadex G-15进行分离纯化得到纯净物质，并对其基本性质进行研究. 结果证明：AF2具有典型的肽类物质特征反应，分子量约为1155，含有12种常见氨基酸，对酸碱，胰蛋白酶，β-内酰胺酶稳定，对热有较好的耐受性.     

结核分枝杆菌特异性抗原的N末端氨基酸序列分析

把ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析抗原抗体反应的高度特异性与ＰＶＤＦ膜作为载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝菌的特异性抗原表位刊物筛选和分析鉴定,获得了一个分子质量为３１ｋｕ,Ｎ末端为ＡｌａＧｌｕＶａｌＡｓｐＬｅｕＶａｌＰｈｅＡｌａＶａｌＳｅｒＴｒｐＰｒｏＶａｌＧｌｙ的结核分枝杆菌抗原。     

Amino acid sequence of rat submaxillary tonin reveals similarities to serine proteases

Tonin, an esteroprotease isolated from rat submaxillary gland, is a serine protease with trypsin- and chymotrypsin-like activity. The substrate specificity of tonin shows that it differs from kallikreins and is definitely not a renin-like enzyme or an angiotensin-converting enzyme. Tonin can produce directly the vasoactive peptide angiotensin II, from angiotensin I, angiotensinogen and the synthetic tetradecapeptide substrate of renin by cleavage of a Phe-His bond. It has also been found to cleave some Phe and Arg bonds in various substrates such as beta-lipotropin (beta-LPH), adrenocorticotropin (ACTH), pro-opiomelanocortin (POMC) and substance P. Here we describe the complete amino acid sequence of rat submaxillary gland, tonin. Comparison of the sequence of 219 amino acids with other serine proteases, particularly kallikreins, gamma-subunit of nerve growth factor (NGF) and the recently described gamma-renin, reveals extensive similarities. More interestingly, it also reveals the substitution of an Asp residue always found in the serine protease active site triad (Asp, His, Ser) by a Leu residue. This unusual substitution does not seem to affect the proteolytic activity of the enzyme.     

Structure and Properties of Silk Fibers Grafted with Vinyl Siloxane Monomer

IntroductionSilk are used extensively in textile field because of itsexcellent characteristics , but silk crease and yellow easily .Grafting of silk fibers with vinyl monomers is considered asan effective method to substantially i mprove its intrinsicproperties . The most popular vinyl monomers currently usedare methyl methacrylate[1 ,2], hydroxypropyl methacrylate[3]and methacrylamide[4]etc .. The properties of silk fibersgrafted with these monomers were i mproved . But thephysical propertie…     

Kinetic parameters of oscillating reaction of amino acid- BrO3^——Mn^2＋-H2SO4-acetone system

In the previous papers[1—3], the oscillating reactionusing amino acids as organic substrates was studied. Inorder to obtain information about the kinetic parameters ofoscillating reaction of amino acids in amino acid- BrO3 - ?Mn2 -H2SO4-acetone sy…     

化学修饰对川泽泻凝集素生物学活性和构象的影响

用特异性化学修饰和荧光光谱的方法分析川泽泻凝集素(APL)活性位点氨基酸的分布情况.研究结果发现,色氨酸的化学修饰使活性降低80%,统计出每分子APL含有2个色氨酸残基,一个色氨酸位于凝集活性中心,另一个位于分子表面的疏水袋中,与凝集活性无关.精氨酸的化学修饰使活性降低50%,半胱氨酸的化学修饰使活性完全丧失.天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等化学修饰后凝集活性无明显变化.表明色氨酸、精氨酸和半胱氨酸对凝集素的凝集活性中心的构成起重要作用,天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等氨基酸位于凝集素的凝集活性中心附近,只是在维持凝集素分子的构象上具有一定的作用.