嗜水气单胞菌耐药性研究进展

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)具有广泛的致病性,是水生动物尤其是鱼类最常见的致病菌.对嗜水气单胞菌耐药性的产生及机制包括固有耐药性、获得性耐药性以及耐药性基因的种类等进行了论述,并对发展前景进行了展望.     

江苏省渔源性嗜水气单胞菌耐药性分析

[目的]对江苏省渔源性嗜水气单胞菌进行耐药性分析。[方法]2014—2015年,对江苏地区渔源性嗜水气单胞菌进行流行病学调查,用API20E试剂条检测嗜水气单胞菌,采用纸片扩散法进行耐药性分析。[结果]共检测到嗜水气单胞菌阳性菌株92份,阳性率为17.79%。对92株嗜水气单胞菌的药敏试验结果表明,在耐药率方面,利福平、新霉素的耐药率36%,罗红霉素的耐药率23%,诺氟沙星、庆大霉素、恩诺沙星的耐药率10%,卡那霉素、氧氟沙星、红霉素的耐药率9%。在高敏性方面,氧氟沙星90%,卡那霉素、链霉素80%,诺氟沙星、利福平、庆大霉素、恩诺沙星70%,红霉素30%,新霉素10%。[结论]在江苏地区嗜水气单胞菌的药物防控中,首选药物为氧氟沙星、卡那霉素和链霉素,应尽量避免使用利福平、新霉素和罗红霉素。     

中草药延缓嗜水气单胞菌对恩诺沙星耐药性的研究

为了延缓主要淡水养殖病原菌——嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的耐药性,以嗜水气单胞菌ATCC 7966为出发菌株,评价了其对恩诺沙星、氟苯尼考、盐酸多西环素、复方硫磺间甲氧嘧啶钠和硫酸新霉素等抗菌药物的敏感性;并以恩诺沙星为受试药物,对ATCC7966进行低浓度耐药性诱导,获得最小抑菌浓度(MIC)提高了256倍的耐药性菌株。测定了茉莉花、薄荷叶、连翘等26种中草药对嗜水气单胞菌耐药性的延缓作用,结果表明:板蓝根、射干、苦参、大青叶、车前草、连翘、黄芩及艾草8种中草药均具有延缓嗜水气单胞菌对恩诺沙星耐药性的作用,其中,连翘延缓耐药性的作用最为明显。复筛实验结果表明,经过20代接种后,连翘实验组的耐药性只上升了2倍(对照组上升了16倍)。     

嗜水气单胞菌脂肪酸生物合成途径相关蛋白的耐药性

嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila是一种广泛存在于水体与土壤的人-畜-鱼共患病原菌。本课题组前期研究发现生物被膜状态下嗜水气单胞菌在抗生素金霉素的胁迫下,脂肪酸生物合成途径中相关蛋白表达上升,但具体特性与功能尚不明确。为进一步探究这些蛋白在抗生素胁迫下的变化规律与功能,设计引物克隆乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶α亚基(AccA)、乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(AccD)、酰基载体蛋白质合成酶(FabB)以及丙二酸单酰辅酶A酰基载体蛋白酰基转移酶(FabD)。通过比较各高表达菌株在金霉素作用下的生存率,来分析相关蛋白的耐药特性。结果表明,高表达AccD、FabB和FabD蛋白能够显著提高细菌在抗生素胁迫下的生存率,而高表达AccA蛋白则只在前期提高细菌存活率。此研究揭示脂肪酸生物合成途径相关蛋白在细菌的耐药过程中起重要作用,也为后续研究嗜水气单胞菌的耐药机制提供了实验依据。     

不同来源嗜水气单胞菌的抗菌素耐药性及耐药机制分析

分离、收集不同时期来源于俄罗斯及国内各地的40株嗜水气单胞菌,常规生理生化鉴定结果表明这些菌株均为嗜水气单胞菌。9种抗菌素药敏纸片对全部菌株的测定结果显示,菌株的耐药强度与原分离地是否使用抗菌素高度相关。质粒与菌株耐药相关性分析结果表明,12个具有1个以上多拷贝质粒的菌株中,有11株呈现高度耐药性,提示耐药性与多拷贝质粒存在相关性;但无质粒或仅有低拷贝质粒的菌株,其耐药性强弱与质粒无相关性。菌株耐药稳定性试验结果证明,4℃条件下长时间保存会降低菌株的抗性,而连续多次冻存、复苏传代对菌株的抗性无影响。     

嗜水气单胞菌江西地区分离株耐药性及耐药质粒分析

为了解江西地区水产动物中嗜水气单胞菌的耐药性,从江西部分地区分离到52株嗜水气单胞菌,对其进行耐药性试验及耐药质粒抽提,绘制江西地区嗜水气单胞菌的耐药谱及耐药质粒指纹图谱,并将其对比分析.结果52株嗜水气单胞菌对19种抗生素呈现出不同程度的耐药性,其中阿莫西林耐药率为94％,青霉素耐药率为96％,利福平耐药率为62％,林可霉素耐药率为63％,甲氧嘧啶耐药率为75％.质粒提取结果发现52株细菌中有14株菌携带耐药1条～9条不等的质粒电泳条带,菌株提取到质粒的概率为26.93％.耐药质粒指纹图谱显示其质粒谱型可分为14种,每株菌都含有大小和数量不等的质粒,分析表明嗜水气单胞菌耐药性与质粒无明显的直接关系,但来源相同,耐药类型相似,质粒图谱也相似.     

嗜水气单胞菌临床分离菌对抗菌药物的耐药性调查

摘[目的]了解嗜水气单胞菌的耐药性。[方法]从不同水生动物体内分离、鉴定出120株嗜水气单胞菌,采用纸片扩散法研究其对18种药物的耐药性。[结果]120株嗜水气单胞菌对阿米卡星和多西环素的耐药性较低,而对其他药物的耐药性均较强,其中,对p内酰胺类药物的耐药率为38％～90％;氨基糖苷类药物中,嗜水气单胞菌对阿米卡星的耐药率小于100k,而对其他药物的耐药性均较强;其他类药物中,对多西环素、环丙沙星和氧氟沙星的耐药率小于50％,而对其余药物的耐药率均在50％～77％〈之间;嗜水气单胞菌对阿米卡星、多西环素、环丙沙星和氧氟沙星的中介率较高。[结论]水生动物嗜水气单胞菌对抗菌药物具有较强的耐药性。     

嗜水气单胞菌毒素研究

嗜水气单胞菌近年引起我国养殖鱼类暴发性鱼病的大面积流行，给我国渔业生产造成了极大损失。溶血毒素是该菌致病的主要因子，该毒素是一条链的多肽，分子量５２０００道尔顿左右，与红细胞膜上的血型糖蛋白结合形成寡聚体，进而在膜上成洞，溶血。ＤＮＡ序列分析结果显示该毒素基因与典型的原核基因相符。由于该菌的抗药性等问题，应用基因工程的方法改造病原菌是防治暴发性鱼病的有前途的手段之一。     

水产养殖中嗜水气单胞菌拮抗菌的研究进展

水产养殖密度的增加,加大了疾病暴发的风险。嗜水气单胞菌感染的宿主多种多样,毒力因子复杂,为疾病的治疗和防控带来困难。目前水产上对嗜水气单胞菌的防控主要依赖抗生素、化学药物等,容易导致环境中药物残留、病原菌耐药性增加等问题。本文着重对水产养殖中嗜水气单胞菌及其拮抗菌的体外筛选方法、拮抗作用研究方法和拮抗机制(产生抑菌物质、竞争性黏附、群体感应猝灭、竞争营养物质、增强机体免疫功能和抗氧化功能)进行重点归纳阐述,并对拮抗菌在水产养殖中的应用和安全性方面的相关研究进行概述,旨在为嗜水气单胞菌拮抗菌的研发以及水产动物的疾病防控研究提供参考依据。     

水产动物嗜水气单胞菌病病理分析

嗜水气单胞菌对水产动物的致病过程历经粘附因子的粘附,外毒素、胞外酶以及激活剂等毒力因子对肝脏、呼吸和消化器官的组织破坏,容易造成机体抵抗力下降、消化循环系统衰竭、呼吸困难,甚至因出血性败血症而死亡,从而对水产动物养殖造成威胁。每年夏秋两季是该病的高发季节。     

鱼血清转铁蛋白对嗜水气单胞菌的抗性研究

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)在铁限制培养基(M70-Fe)中培养,并用铬天青S(CAS)方法分析,不能产生可检测的含铁细胞;培养两周后,该菌在蓝色的琼脂培养基上产生围绕细菌菌落的清晰的橘黄色晕轮。但在鲫鱼血清中培养36h后,便达到了对数生长期。表明嗜水气单胞菌依靠夺取血清中的铁,可以正常生长;而在铁限制培养时,则难以存活。以细菌胞外蛋白酶消化鱼类血清,并在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后进行原位铁结合试验,结果表明：嗜水气单胞菌胞外蛋白酶只能通过降解血清中转铁蛋白以外的含铁蛋白来补偿含铁细胞中的铁,而含铁转铁蛋白和脱铁转铁蛋白均不能被胞外蛋白酶消化,仍有很强的铁结合能力。     

Antibiotic Resistance and Heavy Metals Tolerance in Gram-Negative Bacteria from Diseased American Bullfrog （Rana catesbeiana） Cultured in Malaysia

A total of 140 bacterial isolates have been successfully isolated from various organs of diseased American bullfrog （Rana catesbeiana） cultured in Malaysia. The most frequently isolated bacteria was Edwardsiella spp. （46 isolates） followed by Aeromonas spp. （33 isolates）, Flavobacterium spp. （31 isolates）, and Vibrio spp. （30 isolates）. Majority of the bacterial isolates were found sensitive to furazolidone （85.0%）, chloramphenicol （85.0%）, oxolinic acid （90.0%）, florfenicol （95.0%）, and flumequine （97.5%）. On the other hand, most of the bacterial isolates were resistant to oleandomycin （77.5%） and lincomycin （87.5%）. Nitrofurantoin and flumequine can be inhibited the growth of all of Vibrio spp. whereas all isolates of Edwardsiella spp. were found sensitive to florfenicol and flumequine. Multiple antibiotic resistance （MAR） index were in range of 0.30-0.40, indicating that bacterial isolates from cultured bullfrogs may have received high risk exposure to the tested antibiotics. In addition, 90-100% of the isolates were resistant to copper, cadmium, and chromium. These results provided insight information on tolerance level of bacterial isolates from cultured bullfrogs to 21 antibiotics as well as heavy metals.     

健康家鱼肠道细菌中的嗜水气单胞菌及其胞外酶分布

从健康鲢、鲤、草鱼和团头鲂肠道食物和肠壁样品中分离出１８５株细菌菌株，利用糊精一品红培养基、氧化酶测定法和淀粉酶测定法对其中的嗜水气单胞菌颁作了调查，鉴别出１９株嗜水气单胞菌、对这批菌株进一步进行了蛋白酶、ＣＭＣ酶、滤纸酶和溶血毒素调查，发现肠道嗜水气单胞菌分别产蛋白酶和ＣＭＣ酶，但均不产滤纸酶和溶血毒素。本文结果证明了肠道嗜水气单胞是肠道正常微生物鲜落之一，对鱼体有一定的有利作用。     

海南牛鼻鲼嗜水气单胞菌病的病理组织学观察

应用常规石蜡切片,H.E染色,对临床初步诊断为嗜水气单胞病的一例死亡海南牛鼻鲼的消化道、脾、肝、肾等进行病理组织学观察。结果表明,消化道的病变主要在黏膜层,黏膜上皮细胞脱落、坏死,炎性细胞浸润;脾主要表现为急性败血型,红髓充血、出血严重,白髓几乎完全消失;肝呈现弥漫性坏死,组织结构被破坏;肾的病变以肾小球严重肿大和肾小管上皮细胞坏死为特征。心肌和骨骼肌也发生轻微病变。以上结果表明嗜水气单胞菌对海南牛鼻鲼的脾、肝和肾的危害最为严重。     

北京市主要养殖鱼类病原菌药物敏感性分析

病原菌药物敏感试验是有效防治抗菌药物滥用的有效手段之一。2009年6月-2011年10月从北京地区主要养殖鱼类的发病鱼体内共分离到病原菌80株,对其进行4类11种水产用抗菌药物的敏感性试验。结果表明:北京地区主要养殖鱼类病原菌对恩诺沙星、氟苯尼考和盐酸沙拉沙星较为敏感,而对盐酸多西环素、甲枫霉素和磺胺类药物敏感率较低;另外,分离株多重耐药率较高。同时发现,不同地区和不同养殖种类的鱼源病原菌对抗菌药物的敏感率不同。     

三北地区鱼源气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

选取三北地区鲤、鲫、草鱼、大西洋鲑等鱼体内分离到的气单胞菌共16株,结合革兰氏染色、氧化酶反应和分子生物学方法对其进行鉴定后,采用K-B药敏纸片法测定16株菌对10类25种药物的敏感性。结果表明:16株菌均为革兰氏阴性、氧化酶阳性细菌;Blast比对分析发现实验菌株的16S rRNA序列分别与Gen Bank数据库中维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌的不同菌株的16S rRNA基因序列同源性较高,相似性达95%以上;系统发育树显示16株菌分别与维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌的不同菌株聚为一支,而与肠杆菌、志贺菌和弧菌分支较远,从而判定为维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌;16株分离菌中有3株维氏气单胞菌、4株嗜水气单胞菌、3株温和气单胞菌和6株杀鲑气单胞菌;药敏试验中16株气单胞菌对氨苄西林、青霉素G、阿莫西林、三甲氧苄氨啶、复方新诺明、磺胺异噁唑、氯霉素、利福平具有较高的耐药性,耐药率达95%以上,对氟喹诺酮类药物普遍较敏感,不同菌株之间的耐药谱存在很大差异。为气单胞菌的鉴定及三北地区淡水鱼细菌病的药物防治提供科学依据。     

AmrB对嗜水气单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药性的影响

AmrB是药物外排系统的重要成员,探讨AmrB与嗜水气单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药性的关系,对研究嗜水气单胞菌耐药机制有重要意义。将amrB基因克隆至pET-28a载体上,双酶切和测序验证得到重组质粒amrB-pET-28a。对amrB-pET-28a/BL21进行诱导表达和镍柱纯化,制备得到效价为1∶6 400的兔抗AmrB抗血清。诱导获得嗜水气单胞菌AH1卡那霉素、链霉素和庆大霉素耐药菌株,Western blotting分析AmrB在耐药菌株中的表达量。Phoretix 1D和SPSS分析表明,AmrB的表达量在卡那霉素、链霉素和庆大霉素耐药菌株中显著地高于对照菌嗜水气单胞菌AH1,分别是对照的2.16、2.65和2.13倍,提示AmrB在嗜水气单胞菌对氨基糖苷类抗生素耐药过程中起重要作用,这将有助于了解嗜水气单胞菌耐药的分子机制。