环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞中功能及作用机制研究

目的探索环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤中功能及作用机制。方法荧光定量PCR验证环状RNA-circ-VCAN在正常胶质细胞以及胶质瘤细胞中的表达情况;核质分离实验验证circ-VCAN在细胞核质分布情况;RNase R消化线性RNA实验验证circ-VCAN对RNase R消化的抵抗能力;构建敲低环状RNA-circ-VCAN的U373和T98G瞬时转染细胞株;CCK8实验检测敲低环状RNA-circ-VCAN后细胞的增殖能力;Western blot检测NF-κB通路蛋白P-P65表达水平。结果与正常胶质细胞(HA1800)相比,环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞(尤其是在U373和T98G)中高表达,差异均有统计学意义(P0.05);细胞核质分离实验证明circ-VCAN主要存在细胞质中;circ-VCAN能抵抗RNase R的消化;CCK8实验证明敲低circ-VCAN能抑制U373和T98G的细胞增殖(P0.05);Westernblot检测敲低circ-VCAN后的U373和T98G细胞显示NF-κB通路蛋白P-P65表达水平减少。结论在胶质瘤细胞中敲低circ-VCAN能减慢胶质瘤细胞的生长,提示circ-VCAN可能成为一个新的治疗靶点。     

莪术醇对胃癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察莪术醇对胃癌细胞株BGC823细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养BGC823细胞,分别加入12.5、25、50、100 mg/L莪术醇培养液,对照组加入10 ml/L无水乙醇培养液,分别孵育24 h和48 h,采用MTT法分析增殖率;应用流式细胞仪检测各浓度莪术醇处理BGC823细胞48 h的凋亡率及细胞周期的分布;分光光度法检测Caspase-3活性;100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,用RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax和Survivin mRNA和蛋白的表达水平.结果 莪术醇抑制BGC823细胞增殖,并且随浓度的增加和时间的延长而加强;不同浓度莪术醇处理BGC823细胞,均使处于G0/G1期的细胞显著增加,S期细胞明显减少(P＜0.05);细胞凋亡率随莪术醇浓度增加而升高(P＜0.05);Caspase-3活性呈浓度依赖性增加(P＜0.05);100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,Caspase-3、Bax表达均显著升高(P＜0.05),Survivin、Bcl-2表达均显著下降(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05).结论 莪术醇对胃癌BGC823细胞生长具有抑制作用,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进其凋亡.其作用与增强Caspase-3的活性,上调Caspase-3、Bax表达,下调Survivin、Bcl-2表达及降低Bcl-2/Bax比值有关.     

胃癌细胞中长链非编码RNA CCAT2的表达及其作用

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)CCAT2在胃癌细胞中的表达及其作用。方法:用q RT-PCR检测胃癌细胞系AGS、Hs746T和BSG823及正常胃黏膜上皮细胞GES-1中CCAT2的表达,将胃癌AGS细胞分别转染CCAT2si RNA(si-CCAT2组)与阴性对照si RNA(阴性对照组)后,以无转染的AGS细胞为空白对照,CCK-8法检测细胞的增殖情况,并分别用流式细胞术分、细胞划痕和Trans well实验、Western blot检测si-CCAT2组与阴性对照组的凋亡情况、迁移和侵袭能力以及凋亡相关蛋白的表达。结果:各胃癌细胞系中CCAT2相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(均P0.05);转染后72、96h,si-CCAT2组的增殖能力明显低于空白对照组与阴性对照组(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组各时间点增殖能力均无明显差异(均P0.05);与阴性对照组比较,si-CCAT2组细胞凋亡率明显升高、划痕愈合率明显降低、侵袭细胞数明显减少(均P0.05);P53、caspase-8、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调(均P0.05)。结论:CCAT2在胃癌细胞中高表升高,敲低其表达可抑制胃癌细胞的增殖及迁移与侵袭能力,机制可能与其调控凋亡相关蛋白的表达有关。     

非编码RNA在胃癌中的作用机制研究进展

胃癌是目前世界上恶性程度最高的肿瘤之一.近年来大量的研究证明非编码RNA在胃癌的发生、增殖、转移等生物过程中占据着重要地位,其中小RNA(miRNA)、环状RNA(circRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)组成的非编码RNA调控网络涉及多种基因调控过程.目前对胃癌的诊断主要依赖于内镜检查,缺乏简单有效的筛查手段...     

RNA干扰沉默STIL基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨STIL在胃癌中的表达以及沉默STIL基因对胃癌细胞株SGC-7901各生物学活性的影响.方法 采用实时定量PCR（qPCR）法和Western Blot法检测STIL在胃癌及癌旁组织中的表达.构建靶向STIL的SiRNA并转染SGC-7901细胞,以MTT法检测细胞增殖、平板克隆法检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中STIL在mRNA和蛋白水平表达显著增高.与对照组相比,STIL特异性SiRNA（Si-STIL）转染后,SGC-7901细胞中STIL mRNA表达受到抑制,细胞增殖、克隆形成能力下降,凋亡增加,细胞周期被阻滞于S期.结论 STIL在胃癌组织中高表达,STIL基因沉默可抑制胃癌细胞生长和克隆增殖、抑制有丝分裂期（M期）转换,促进细胞凋亡.     

lncRNA HAGLR通过靶向miR-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HA...     

丙谷胺阻断胃泌素促胃癌细胞增殖作用的机制研究

目的 探讨丙谷胺治疗胃癌的可行性。方法 应用ＭＫＮ４５胃癌细胞株进行体外培养,经胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺作用后,观察细胞增殖率、周期分布以及细胞内ＣＡＭＰ浓度变化。结果 胃泌素可明显促进ＭＫＮ４５细胞的增殖、促进细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ、Ｇ２／Ｍ期转化,经胃泌素作用０．５小时后细胞内ＣＡＭＰ浓度增加,与对照组相比Ｐ〈０．０１,而丙谷胺能完全阻断上述作用。结论胃泌素通过其受体介导了细胞内信号传导,促     

环状RNA FBLIM1在肝细胞癌中生物学功能的初步研究

目的:探讨环状RNA FBLIM1(circ FBLIM1)对肝细胞癌(HCC)增殖与侵袭能力的影响。方法:将HCC细胞系Hep G2、7402、97H分别转染circ FBLIM1干扰序列(si-circ FBLIM1)和阴性对照序列后,用q RT-PCR验证转染效果,然后分别用CCK-8实验和Transwell实验检测细胞的增殖情况与侵袭能力;将10只裸鼠皮下接种Hep G2细胞后随机均分为两组,分别以40μL si-circ FBLIM1或阴性对照序列进行原位注射,1次/4 d,每4天记录移植瘤体积,28 d后完整剥离肿瘤称重。结果:q RT-PCR结果显示,3种HCC细胞系转染si-circ FBLIM1后,circ FBLIM1的表达均明显降低(均P0.05)。CCK-8实验与Transwell实验结果显示,3种HCC细胞系转染si-circ FBLIM1后的增殖能力与侵袭能力均明显减弱(均P0.05)。裸鼠移植瘤实验结果显示,注射si-circ FBLIM1的移植瘤生长速度明显减慢,肿瘤体积与质量均明显降低(均P0.05)。结论:circ FBLIM1具有促进HCC细胞增殖与侵袭的作用,可能是HCC恶性生物学特征的重要调节因子,抑制circ FBLIM1的表达可能是HCC有效的治疗策略。     

柠檬酸钠促胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨柠檬酸钠(SCT)促进胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及机制。方法:胃癌MGC-803细胞分别经SCT(5、10、20 mmol/L)和5-FU(0.5 mmol/L)作用,以未处理的MGC-803为阴性对照,用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;比色法检测细胞内乳酸含量、磷酸果糖激酶1(PFK-1)活性及三磷酸腺苷(ATP)水平;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、caspase-3及Cyt-c蛋白的相对表达量。结果:与阴性对照细胞比较,SCT处理的MGC-803细胞G2/M期阻滞与细胞凋亡明显增加;细胞内乳酸含量、PFK-1的活性和ATP水平均明显降低;细胞内Bcl-2的表达明显降低,而Bax、caspase-3和Cyt-c表达明显升高(均P0.05)。5-FU对MGC-803细胞乳酸含量、PFK-1的活性无明显影响(均P0.05),但其他作用与SCT相似。结论:SCT可促进MGC-803细胞凋亡,其作用可能与其抑制PFK-1的活性,降低糖酵解效率,并与线粒体凋亡通路的激活有关。     

敲低Abl相互作用蛋白1的表达抑制胃癌细胞NCI-N87的体外增殖和迁移

目的 探讨敲低Abl相互作用蛋白1(Abl interactor 1,ABI-1)对胃癌NCI-N87细胞体外增殖和迁移能力的影响.方法 利用脂质体和嘌呤霉素筛选稳定表达ABI-1短发夹RNA(short hairpin RNA,ShRNA)的NCI-N87模型细胞,用实时定量RT-PCR和Western blot鉴定ABI-1敲低的效果;用CCK-8试剂盒、细胞骨架染色和Transwell小室检测ABI-1敲低对细胞增殖、形态和骨架以及迁移的影响;用Western blot检测磷酸化AKT蛋白的表达.结果 成功获得表达ABI-1-ShRNA的NCI-N87细胞模型.CCK-8法检测显示NCI-N87-Vector和NCI-N87细胞在36 h和48 h的增殖率之间相比差异均无统计学意义(t=0.400、0.489,P＞0.05),而NCI-N87-ABI-1-ShRNA在36 h和48 h这2个时间点的增殖率均低于NCI-N87细胞(t=2.85、4.166,P＜0.05),ABI-1敲低抑制NCI-N87细胞的增殖.细胞骨架染色显示ABI-1敲低能够改变90%NCI-N87细胞的形态和骨架结构.Transwell研究显示NCI-N87、NCI-N87-Vector和NCI-N87-ABI-1-ShRNA的细胞迁移数分别是66±8、65±8和30±4,前两者相比差异无统计学意义(t=0.269,P＞0.05),敲低组与NCI-N87相比差异有统计学意义(t=9.550,P＜0.05),ABI-1敲低抑制NCI-N87细胞的迁移.Western Blot显示ABI-1敲低抑制磷酸化AKT蛋白的表达.结论 ABI-1敲低可能通过PI3K/AKT通路抑制胃癌细胞NCI-N87的体外增殖和迁移.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ABI-1 gene knockdown upon the proliferation and migration of human gastric cancer cell NCI-N87 in vitro. Methods NCI-N87-ABI-I-ShRNA cell model was successfully constructed and validated by Real-time PCR and Western blot. The cellular morphous and skeleton, proliferative and migrative potents, and also AKT expression were compared between NCI-N87-ABI-1-ShRNA and its parents by immunofluorental staining, CCK-8 assay, transwell chamber and Western blotting. Results CCK-8 assay showed there was no significant difference in the proliferation rates at different time points between the NCI-N87-Vector and NCI-N87 cells while the proliferation rates at the time points of 36 and 48 hours of the NCI-N87-ABI-1-ShRNA were significantly lower than the NCI-N87( t =2. 85and 4. 166, P ＜ 0. 05 ). Transwell assay showed that migrated cell number were 66 ± 8, 65 ± 8 and 30 ± 4,respectively, and there was significant difference between the NCI-N87-ABI-1-ShRNA and NCI-N87 cells (t =9. 550,P ＜0. 05). Finally, ABI-1- knock-down altered the cellular morphoos and skeleton of 90％NCI-N87 cells and inhibited p-AKT expression. Conclusion ABI-1 inhibits proliferation and migration of NCI-N87 cells in vitro probably by PI3K/AKT pathway.     

微小RNA-148a对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响及机制研究

目的：探讨微小RNA（miR）-148a对人胃癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR技术检测60例胃癌组织及癌旁组织中miR-148a的表达水平。利用慢病毒包装建立稳定表达miR-148a的MKN45细胞系为转染组,未转染的MKN45细胞系为对照组。 CCK8法检测MKN45细胞的增殖情况,通过targetscan预测miR-148a的靶基因,Western-blot检测靶基因的表达水平。结果54例（90．0％,54/60）胃癌组织中miR-148a的表达量较癌旁组织下调,其中37例（61．7％,37/60）下降2倍以上;淋巴结转移、有无癌旁血管浸润及TNM分期Ⅲ～Ⅴ期者其表达量明显降低（P＜0．05）。转染miR-148a后3 d,MKN45细胞生长明显受抑,转染组吸光度值（0．978±0．091）明显低于对照组（1．182±0．074,P＝0．000）。转染组CDC25B（通过targetscan发现的miR-148a靶基因）蛋白表达较对照组明显降低。结论 miR-148a在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织;其具有抑制胃癌细胞增殖的作用,CDC25B可能是miR-148a发挥抑癌作用的靶基因。     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察CO2在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法以CO2为气体介质,在气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为0、5、10、15mmHg,作用时间为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;采用AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈酸性,但在恢复正常培养后6h即恢复正常。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg压力下处理组与对照组比较无明显差异(P>0.05),而在15mmHg压力下处理组与对照组比较OD490值在前3d无明显差异(P>0.05),在4～7dOD490值下降非常显著(P<0.01)。在CO2环境下,0mmHg组细胞凋亡指数和凋亡比例与对照组相比无明显差异(P>0.05),而5、10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.05)。结论在较低压力范围内(≤10mmHg)CO2对胃癌细胞增殖、凋亡影响不大,而在15mmHg压力下,CO2可抑制MKN-45细胞增殖,促进其凋亡。     

长链非编码RNA在胃癌中的作用研究进展

长链非编码RNA是一类长度大于200个核苷酸的不编码任何蛋白质的核糖核酸分子.长链非编码RNA虽然不编码任何蛋白质,但其通过染色质修饰,转录激活与干扰等参与了细胞内多种调控过程.近年来研究发现,在胃癌中多种长链非编码RNA的表达出现异常.这些异常改变与胃癌的发生、发展及预后密切相关,调控相关长链非编码RNA的表达可显著改善患者的预后.靶向调控长链非编码RNA的表达可为胃癌治疗提供新的策略.     

靶向丝氨酸/苏氨酸激酶15基因小片段干扰RNA抑制胃癌细胞生长的实验研究

目的观察丝氨酸／苏氨酸激酶15基因(serine／threonine kinase15,STK15)沉默后对胃癌细胞系MKN45体内外生长的抑制作用,探讨STK15基因作为胃癌靶点治疗的可行性。方法应用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制STK15基因的表达;Western blot检测STK15蛋白质的表达变化;体外侵袭实验检测MKN45细胞侵袭能力的变化;MTT法检测MKN45细胞增殖速度的变化。将裸鼠随机分成2组,每组10只,皮下移植经STK15siRNA处理的MKN45细胞,观察其成瘤性的改变。结果 MKN45细胞经STK15 siRNA作用后,蛋白表达水平均明显降低;STK15-组与对照组比较体外侵袭能力明显下降[平均4值为(182±27)比(308±38),P<0．05];更多的MKN45 细胞聚集于G2／M期附近[G2期DNA含量细胞为(30±5)％比(14±3)％,P<0．05];增殖速度明显减缓(P<0．05);在裸鼠体内成瘤性明显减低[平均肿瘤重量为(0．15±0．07)g比(0．29±0．16)g, P<0．05]。结论靶向STK15的siRNA可在体内外抑制胃癌MKN45细胞的增殖,STK15有可能成为胃癌治疗的靶点。     

厚朴酚对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究

目的探讨厚朴酚对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究。 方法0(对照组), 20, 40, 80 μmol/L的厚朴酚作用SGC－7901细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中B淋巴细胞瘤－2(Bcl－2)、Bcl－2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶－3(cleaved caspase 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、CyclinE及细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)蛋白的表达。所有数据均用SPSS 17.0软件进行统计分析,细胞增殖抑制率、细胞凋亡及细胞周期、蛋白表达量等用( ±s)表示,组间差异采用t检验进行分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果20, 40, 80 μmol/L的厚朴酚较对照组细胞活力降低(P<0.01),细胞凋亡率提高(P<0.01),细胞周期阻滞于G1期(P<0.01),Bcl－2,CyclinD1,CyclinE及CDK2表达量下调(P<0.01),Bax、cleaved caspase 3表达量上调(P<0.01)。 结论厚朴酚可能通过调控细胞周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白抑制SGC－7901细胞增值,并诱导细胞凋亡。     

体外模拟二氧化碳气腹对人胃癌细胞迁移运动的影响

目的探讨通过体外模拟气腹环境，观察不同压力二氧化碳（CO2）和氦气（He）对胃癌细胞MKN-45迁移运动的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中，按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组，模拟气腹压力分别12mm Hg和15mm Hg，作用时间均为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值；用Transwell法观察细胞迁移运动变化。结果处理结束后即刻检测，CO2组细胞培养液呈酸性，He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mm Hg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无明显统计学（P〉0．05），CO2 15mm Hg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少（P〈0．01）；He 15mm Hg组与对照组差异无明显统计学（P〉0．05）。结论在临床常用气腹压力下（12mm Hg）CO2对胃癌细胞迁移运动无明显影响。