肝病患者中抗—TTV—IgG和TTV DNA检测的临床意义

为研究ＴＴ病毒 (ＴＴＶ)在肝病患者中的感染状况 ,我们对 12 7例各类肝病患者进行了抗 ＴＴＶ ＩｇＧ及ＴＴＶＤＮＡ检测。一、材料和方法1.对象　 12 7例肝病患者为按 2 0 0 0年 9月西安全国传染病寄生虫病、肝病学分会制订的标准诊断的本院住院病人 ,其中乙型肝炎 84例、甲型肝炎 5例、丙型肝炎 3例、戊型肝炎 5例、非甲非戊型肝炎 30例。南通市血站的 2 0名献血员作为对照。2 .方法　ＴＴＶＤＮＡ检测采用套式ＰＣＲ法 ,抗 ＴＴＶ ＩｇＧＨＤＶ Ｍ采用ＥＩＡ法 (北京医科大学肝病研究所试剂 ) ,抗 ＨＡＶ ＩｇＭ、ＨＢＶＭ、抗 ＨＣ…     

泰州地区献血员及病毒性肝炎患者TTV核酸检测

为了了解泰州地区献血员和各种病毒性肝炎患者ＴＴＶ的感染状况，用套式聚合酶链反应测定被 调查者血清ＴＴＶ核酸。ＴＴＶ检测阳性发别为：义务献血员４．８％、职业献血员８．６％、急性乙型肝炎１３．６％、慢性乙型肝炎１７．１％、慢性丙型肝炎２８．６％、慢性非甲－非庚型肝炎４４．８％。结果表明，泰州地区义务献血员、职业献血员和各种不同型肝炎患者中均存在ＴＴＶ感染者。     

输血传播病毒(TTV)研究进展

过去 ,临床上将病毒性肝炎分为甲型、乙型和非甲非乙型。80年代以来 ,随着医学分子生物学研究的飞速发展 ,发现了ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＥＶ病毒 ,从而解决了部分非甲非乙型肝炎的病原问题。Ｓｉｍｏｎｓ等 ( 1995 )和Ｌｉｎｎｅｎ等 ( 1996) ,分别从肝炎患者血清中分离出了ＧＢＶ Ｃ和ＨＧＶ病毒[1,2 ] ,两者同属于黄病毒ＲＮＡ序列 ,统称为庚型肝炎病毒。近年来 ,各国肝病学者对庚型肝炎流行病学、传播途径等方面进行了大量研究 ,但对其致病性尚存在一些争议[3 ,4 ] 。 1997年 10月 ,日本学者Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等应用代表性分析法 (ｒｅｐｒ…     

PCR微孔板杂交法检测TTV DNA影响因素探讨

1997年底日本学者利用代表性差异分析法首先发现ＴＴＶ[1],1998年我国周育森、周伯平、孟庆华等[2～4]用巢式ＰＣＲ证实我国存在ＴＴＶ。我们根据Ｏｋａｍｏｔｏ[5]报道的ＴＴＶ基因全序列设计引物和探针,建立了ＰＣＲ微孔板杂交法检测ＴＴＶＤＮＡ。本文对该法影响因素进行探讨。1　材料和方法11　血清标本　取10份ＴＴＶＤＮＡ阳性血清混合作阳性对照,取10份ＴＴＶＤＮＡ阴性献血员血清混合作阴性对照。12　方法　将血清标本中的ＴＴＶＤＮＡ抽提后经ＰＣＲ扩增,扩增产物变性后,加入到包被有链霉亲合素的微孔板中,产物中的生物素与微孔板…     

斑点杂交法检测TTV DNA

用ＴＴＶ基因组ＯＲＦ１区段的引物进行ＰＣＲ扩增，扩增产物用地高辛标记的特异性探针进行斑点杂交检测。结果检测了５４３例肝炎病人和献血员血清标本中ＴＴＶＤＮＡ，阳性检出率为１８．４％（１００/５４３），其中甲型肝炎阳性率为６．０％（２/３３），乙型肝炎为７．８％（５/６４），丙型肝炎为２．３％（１/４３），非甲－戊型肝炎为３９６％（４０/１０１），输血后肝炎为１２．５％（５/４０），献血员为１７．９％（４７     

生殖泌尿道分泌物中TTV DNA检测

自从 1997年底日本学者首次从输血后肝炎病人血清中发现了新的肝炎相关病毒 -ＴＴＶ[1] ,国内学者也研究证实我国人群中存在ＴＴＶ感染[2 ] ,并发现ＴＴＶ能够通过肠道途径传播[3] 。为了解ＴＴＶ是否通过性接触传播 ,我们采用聚合酶链反应方法检测了 94例生殖道和尿道分泌物中ＴＴＶＤＮＡ ,现将结果报告如下 :1　材料与方法1.1　标本来源　分泌物标本 :1998年 8～ 10月间 ,我院妇科门诊、男性科门诊随机病人 95例 ,其中男性 30例 ,女性 6 5例 ,年龄 10～ 6 5岁 ,男性病人取尿道分泌物 ,女性病人取阴道分泌物。血液标本 :7例分泌物ＴＴＶＤ…     

应用原位PCR、原位杂交技术对比检测尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒DNA

为探讨原位ＰＣＲ(ＩＳＰＣＲ)的敏感性 ,对原位杂交 (ＩＳＨ)检测阴性或弱阳性的尖锐湿疣组织 (ＣＡ)进行ＩＳＰＣＲ检测 ,为其推广应用提供依据。1　材料与方法1.1　材料　标本来自我院和西京医院 ,从 80例光镜诊断为ＣＡ或可疑ＣＡ中选择 2 7例ＨＰＶ6 11ＤＮＡ弱阳性 (ＩＳＨ)和 18例ＨＰＶ6 11阴性的标本行ＩＳＰＣＲ对比检测。标本经 10 %福尔马林固定 ,石蜡切片 4μｍ厚。ＨＰＶ6 11ＤＮＡ探针为第四军医大学病理教研室制备 ,试剂盒购自德国ＢｏｃｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司。ＨＣ 2 0 0型多功能ＰＣＲ仪为西安飞机工业…     

Detection of hepatitis C virus RNA by in situ hybridization: a critical appraisal

Summary Despite the several papers that have appeared in the literature or have been communicated at scientific meetings, the detection of hepatitis C virus RNA by in situ hybridization seems a difficult goal to achieve. There have been conflicting reports on the type and proportion of hepatitis C virus-infected cells, the intracellular distribution of viral RNA and the topographical association with cell damage. As a consequence, some of the findings should probably be considered as non-specific and all protocols and data critically reviewed before a firm conclusion be made.     

鼻咽癌中EBV DNA的原位检测及其意义的探讨

本文回顾性地用原位分子杂交法检测了39例经2次以上活检才由病理确诊的鼻咽癌所有阳性和阴性切片中EBVDNA的存在。所用探针为病毒基因组中BamHI－W片段。结果表明39例鼻咽癌中36例EBV阳性，检出率为92．3％。4例癌旁上皮有不同程度的阳性，所有间质成分均为阴性。这39例鼻咽癌的43次阴性活检中11例检出了EBVDNA。对该11例本次所作的HE切片重新进行了评价，4例诊断为鼻咽癌，4例为可疑鼻咽癌。3例未见癌。根据前述结果，有理由认为这7例“可疑癌和未见癌”中EBV阳性细胞为鼻咽癌细胞。以上结果提示用原位杂交方法检测EBV为鼻咽癌诊断和鉴别诊断中一有用的工具。     

原发性中枢神经系统淋巴瘤的临床病理及与EB病毒的关系

目的　探讨原发性中枢神经系统淋巴瘤 (primarycentralnervoussystemlymphoma ,PCNSL)的临床病理特点及与EB病毒 (EBV)的关系。方法　对 6例PCNSL进行临床病理观察 ,采用ABC法行LCA、CD2 0、CD79a、CD4 5RO、CD3免疫组化标记 ,并以生物素标记的EBER 1寡核苷酸为探针进行原位杂交检测。结果　 6例均无HIV感染病史 ,其中 5例为B细胞来源淋巴瘤 ,1例为T细胞来源淋巴瘤 ,EB病毒原位杂交检测均为 (- )。结论　PCNSL多数为B细胞性淋巴瘤 ,少数为T细胞性淋巴瘤 ,非HIV感染的PCNSL的发生可能与EB病毒感染关系不密切。     

新疆地区献血者HGV和TTV感染的流行病学分析

目的：研究分析庚型肝炎病毒（HV）和输血传播病毒（TTV）在新疆地区献血中的感染状况，方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测抗－HGV IgG、逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测HGV RNA，聚合酶链反应（PCR）技术检测TTV RNA，对1997年维吾尔族献血和321名汉族献血的血清标本进行了检测分析。结果：518名研究对象中抗－HBV IgG的阳性检险率为6．5％（34／518）。维吾尔族和汉族血抗－HBV IgG阳性率分别为11．2％（22／197）和3．7％（12／321），X^2=10．9，P＜0．005，维吾尔族有偿献血，无偿献血抗－HBV IgG阳性率分别为13．5％（21／156）、2．4％（1／41），X^2＝4．0，P＜0．05；汉族有偿献血、无偿献血抗－HGV IgG阳性率分别为7．5％（8／106）和1．9％（4／215），X^2＝6．4，P＜0．05，维吾尔族和汉族抗－HGV阳性献血HGV RNA阳性率分别为77．3％（17／22）和66．7％（8／12），X^2=0．5，P＞0．05。维吾尔族和汉族献血TTV DNA阳性率分别为25．7％（9／35）和13．0％（6／46），X^2＝2．1，P＞0．05，抗－HGV阳性和阴性献血中TTV DNA阳性率分别为35．3％（12／34）和14．0％（7／50），X^2=5．2，P＜0．05。结论：新疆地区存在HGV和TTV感染，有偿献血为HGV感染的高危人群，抗－HGV阳性献血有更高的TTV DNA检出率，这种重叠感染的机制有待进一步研究分析。     

Comparative study with in situ hybridization and immunocytochemistry in detection of HIV-1 in formalin-fixed paraffin-embedded cell cultures

The sensitivities of three immunohistological techniques were compared in this study for detecting human immunodeficiency virus (HIV-1) in infected cultured human lymphocytes that had been formalin-fixed and paraffin-embedded. The techniques included in situ hybridization (ISH) with HIV-1 cDNA; immunocytochemistry with HIV-1 p24 monoclonal antibody (ICC-m); and immunocytochemistry with HIV-1 polyclonal antibody from a patient with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) (ICC-p). Procedures were optimized for enzyme digestion and for antibody reaction conditions. HIV-1--infected cells and noninfected control cells were tested. Noninfected controls were uniformally negative by all three methods. Infected cells had the highest positivity rate by the ISH method (p less than or equal to 0.0001), and the ICC-p method was more positive than the ICC-m (p less than or equal to 0.0001). Both the ICC-p and the ICC-m techniques were more positive with the cocultivated cell cultures than the ISH, which was more sensitive with the infected continuous cell line (P less than or equal to 0.0001). The ICC-p method had a lower standard deviation on positive results than either the ICC-m or ISH method. The variability observed with these test procedures, reagents, and specimens suggests that these are important technological parameters in detecting p24, with implications for detecting other HIV-1 markers in infected tissues.     

采用原位杂交法检测移植患者外周血白细胞中HCMV DNA

目的建立DNA原位杂交方法（ISH）检测移植患者外周血白细胞中的人巨细胞病毒（HCMV），并与HCMV-pp65抗原血症（免疫组织化学法，IHC）结果比较。方法选取本院肾移植患者标本60例，移植前后采集外周血标本250例，分离获得白细胞经涂片固定后分别采用ISH和IHC检测HCMV。结果ISH检测阳性率高于IHC，ISH检测的HCMV DNA阳性细胞见于外周血单个核细胞，IHC检测的HCMV抗原阳性细胞主要见于中性粒细胞，ISH检出的阳性细胞数明显高于IHC，且显然早于IHC。结论原位杂交检测HCMV DNA，敏感性高、特异性强，有利于早期、快速监测HCMV的激活。     

应用荧光原位杂交技术筛选bcr基因探针及分析微小残留病

目的　定量检测慢性髓细胞白血病（ Ｃ Ｍ Ｌ） 造血干细胞移植（ Ｈ Ｓ Ｃ Ｔ） 后ｂｃｒ 基因重排。方法　应用荧光原位杂交（ Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ） 技术,从 Ｃ Ｅ Ｐ Ｈ 酵母人工染色体（ Ｙ Ａ Ｃ） 文库的３ 个ｂｃｒ 相关候选克隆中筛选探针,并对７ 例造血干细胞移植后病人进行检测,同时进行细胞遗传学和逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 分析。结果　确定了定位于２２ｑ１１ ｂｃｒ 基因区域且可在 Ｐｈ 染色体阳性细胞中易位至９ｑ３４的 Ｙ Ａ Ｃ 克隆７６５ Ｅ３ ,应用该 Ｙ Ａ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针进行荧光原位杂交,发现７ 例病人中５ 例存在ｂｃｒ 易位阳性细胞（６ ％ ～９８ ％ ） ,常规 Ｇ 显带检出３ 例, Ｐ Ｃ Ｒ 检出６ 例。结论　 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 可能成为白血病造血干细胞移植后疗效观察和微小残留病定量监测的重要手段。     

荧光原位杂交检测宫颈上皮脱落细胞人端粒酶基因表达与人乳头瘤病毒的临床应用

目的研究宫颈癌人端粒酶基因(TERC)的表达情况和宫颈癌人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性,评估荧光原位杂交(FISH)技术检测TERC基因的表达对子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)发展到宫颈癌的预测价值。方法采用FISH技术进行子宫颈上皮脱落细胞TERC基因的检测,实验对象81例,病理正常组20例,CIN1组28例,CIN2组12例,CIN3组9例,宫颈癌组12例。同时利用实时荧光定量聚合酶链反应技术(FQPCR)检测这81例病人的HPV(16/18)感染情况。并进行宫颈癌与TERC基因和HPV的相关性分析。结果在不同病理分组中TERC基因检测和HPV检测的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),TERC基因检测的阳性率在不同病理分组中的差异有统计学意义(P<0.05),HPV的阳性率在不同病理分组中的差异也有统计学意义(P<0.05),恶性程度越高差异越显著(P<0.01);宫颈癌组TERC基因异常表达阳性率是100%,HPV为91.7%。结论 TERC基因异常表达与宫颈癌的发生发展及HPV感染密切相关。TERC基因和HPV联合检测,有助于提高宫颈癌的早期诊断有重要价值。     

Potential clinical benefit of the in situ hybridization method for the diagnosis of sepsis

Despite the significant development of antibiotics, sepsis is still associated with high morbidity and mortality rates. The identification of pathologic organisms at an early stage of sepsis is critical to improve the outcome, but this is difficult to achieve with the conventional method of blood culture (BC). It has been demonstrated that the genes of pathogenic organisms surviving in neutrophils were detectable with in situ hybridization (ISH) and this method was useful for the accurate and rapid diagnosis of sepsis. In this study, we applied ISH to blood smears 60 patients with suspected sepsis. BC was also carried out using the same blood samples to investigate the diagnostic value of ISH. The number of positive results obtained by ISH was approximately four times higher than that obtained by BC (ISH, 25 [41.7%]; BC, 7 [11.7%]). The positive rate in the 21 patients given antibiotics was 61.9% by ISH (13 patients) and 4.7% by BC (1 patient). The antibiotic treatments targeting the organisms detected by either procedure showed a beneficial clinical outcome. Positive results by ISH were obtained earlier than those with BC (ISH, within 1 day; BC, several days). We conclude that ISH is a useful method for the rapid diagnosis of sepsis.     

女性生殖道鳞状上皮病变的HPV原位杂交检测

目的观察女性生殖道鳞状上皮病变的HPV表达与意义。方法应用原位杂交技术对186例女性生殖道鳞状上皮病变组织进行HPV611、HPV1618和HPV3133定型检测。结果尖锐湿疣HPV611的阳性表达占96.4%,宫颈上皮内瘤变1级(CIN1)中HPV611与HPV1618阳性表达分别为47.6%和50%,HPV检测多项阳性病例占17.1%。结论CIN1中存在高危型HPV感染病例,混合性HPV感染在CIN中不少见。