L-天冬氨酸α-脱羧酶异源表达和转化条件的优化

为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件.得到最优诱导条件:在OD600达到0.6左右时加入诱导剂IPTG 0.5 mmol/L、25℃下诱导表达18h时,酶活力达...     

紫外和He-Ne激光复合诱变筛选L－丙氨酸高产菌株

对L－丙氨酸产生菌德阿昆哈假单孢菌分别进行紫外、激光以及紫外－激光的复合诱变筛选。结果表明,复合诱变正突变率幅度较大,从紫外－激光的复合诱变得到的突变株中筛选到3株遗传性状稳定的高产菌株,其L-天冬氨酸－β－脱羧酶的活性较之出发菌株分别提高19．97％、30．04％和26．55％,经9次传代培养,突变株性质稳定。     

利用假单胞菌天冬氨酸—β—脱羧酶高效生长L—丙氨酸

通过诱变筛选得到一株具有高活性Ｌ－Ａｓｐ－β－脱羧酶的菌株ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＮＸ－１，对该株酶形成和酶反应的条件进行了详细研究，该株可以高效地转化Ｌ－Ａｓｐ生成Ｌ－Ａｌａ，转化４￣５ｄ，每Ｌ培养液可转化Ｌ－Ａｓｐ量高达１４００ｇ左右，生成Ｌ－Ａｌａ浓度高达９０％以上，摩尔转化率近１００％。     

L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌株的构建 及其培养条件研究

L-天冬氨酸α-脱羧酶以L-天冬氨酸为底物, 脱去α-羧基后生成β-丙氨酸.利用PCR 扩增技 术, 将Escherichia coli DH5α中的PanD 基因克隆后连接到pET28c(+)载体上, 先转化E .coli DH5α中, 经过50 μg/mL 卡那霉素抗性筛选和酶切、测序验证后, 转化表达菌株E .coli BL21 (DE3), 得到具有L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的工程菌株E .col i BL21(DE3)/ pE T28c(+)-panD . 经乳糖诱导该基因能有效表达C-末端具有组氨酸标签的L-天冬氨酸α-脱羧酶.通过对乳糖诱导时 间、乳糖诱导质量浓度、诱导温度、诱导菌龄和培养基诱导初始pH 值等发酵条件的优化, 得到最佳 培养条件为:乳糖诱导时间20 h , 乳糖质量浓度12 g/L , 诱导温度为35 ℃, 诱导菌龄为3 .5 h , 诱导 培养基初始pH 5 .5 , 通过对转化产物β-丙氨酸的检测结果分析显示, 工程菌株E .col i BL21 (DE3)/pE T28c(+)-panD 在优化条件下, 酶活力达186 U .     

活性炭对β-丙氨酸生物转化液脱色效果研究

用活性炭为脱色剂,以透光率、β-丙氨酸吸附率及综合指标为考察指标,通过单因素试验和正交试验,研究不同奈件(料液初始pH值、活性炭质量浓度、温度及作用时间)下活性炭作用于β-丙氨酸转化液的脱色规律,为活性炭处理生物料液提供一定的科学依据.试验结果显示:pH3.0时,透光率达到56.66%,β-丙氨酸吸附率为13.56%.β-丙氨酸转化液最佳活性炭脱色工艺条件:温度为60℃,活性炭投入量为0.03g/mL,脱色时间60 min,在此条件下透光率达到60.20%;β-丙氨酸吸附率最小,为12.66%,综合指标比值为476%.     

氯化镝与α-丙氨酸配合物的合成及表征

合成了氯化铜与α－丙氨酸的两种配合物：Ｄｙ（Ａｌａ）Ｃｌ３·６Ｈ２Ｏ和Ｄｙ（Ａｌａ）Ｃｌ３·３Ｈ２Ｏ。用化学分析，ＩＲ，ＤＶ，Ｘ－射线及ＴＧ—ＤＴＧ对配合物进行了表征。     

利用α-β曲线对三阶液压伺服系统的优化

在文献[1]对三阶液压伺服系统二次型优化结果的基础上,分析了用α-β曲线及α-β裕度曲线给三阶液压系统优化所带来的方便,分析了位置、速度、加速度反馈对系统特性的影响,介绍了利用α-β曲线对三阶液压系统进行快速优化的简便方法.     

紫外-可见-短波近红外漫反射光谱结合化学计量学对丙氨酸的手性进行快速的定性定量分析研究

以D-、L-和DL-丙氨酸为对象,首次研究了紫外-可见-短波近红外漫反射光谱结合化学计量学快速、无损地定性、定量分析固体手性化合物的可行性。在粒度过100目、样品与光纤探头距离5.6mm的最优条件下测量漫反射光谱,经预处理后,采用主成份分析法（PCA）和判别偏最小二乘法（PLS-DA）建模进行定性分析,结果预测判别准确率为100%。定量分析上,16个不同比率的L-/D-丙氨酸二元混合粉末样的光谱经波长选择、光谱数据预处理后,以偏最小二乘回归法（PLR）和支持向量回归法（SVR）建模,校正集和预测集的最优决定系数（R2）均在0.99和0.98以上,绩效偏差率（RPD）值远高于2。研究表明,采用紫外-可见-短波近红外漫反射光谱法结合化学计量学可应用于手性固态丙氨酸的快速、无损分析,并有望于运用到手性药物的质量检测上。     

α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯水解酶产生菌发酵培养基的响应面优化

对耐酪氨酸冢村氏菌(Tsukamurellatyrosinosolvens)E105菌株生物拆分外消旋体α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯制备左乙拉西坦关键手性中间体(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸的发酵培养基进行优化,以提高其产酶活力.首先考察了碳源和氮源对菌种产酶活力的影响,并通过PlackettBurman实验得出影响该菌株产水解酶的最主要因素为酵母粉质量浓度和初始pH值.继而采用中心组合实验并结合响应面分析优化发酵培养基组成,确定了最佳的酵母粉质量浓度为12.1 g/L,最佳的初始pH值为7.06.在优化的条件下酶活力可达1 024.6 U/mL,较优化前提高了67％,表明采用响应面法优化发酵培养基组成是提高该菌株产酶活力的有效途径之一.     

函数的广义α -多项式插值与优化

研究了用一种广义α-多项式插值及其优化的问题，给出了在一定条件下这种多项式的存在唯一性及其误差估计，在此基础上证明了最优广义α-插值多项式的存在性，并说明了其数值求法。     

微生物转化法生产β-苯乙醇的研究进展

β-苯乙醇是具有玫瑰风味的芳香醇,玫瑰芬芳的广泛需求使得β-苯乙醇成为香料和化妆品中使用最多的香味成份。利用微生物生产β-苯乙醇的原理即为利用酶或微生物将前体物L-苯丙氨酸转化为β-苯乙醇。概述了生物转化法生产β-苯乙醇的方法,介绍了β-苯乙醇合成的代谢途径、转化的微生物种类、β-苯乙醇对酵母细胞毒性和发酵液中β-苯乙醇提取。     

α-分离公理的研究

在L-拓扑空间介绍了α-T0,α-T-1,次-α-T0分离公理.给出了它们的等价刻画,并且指出了α-T0意味着α-T-1和次-α-T0,证明了α-T0,α-T-1和次-α-T0具有遗传性.     

α-乙酰乳酸脱羧酶的3种固定化方法的比较

用磁性淀粉微球作为载体 ,采用溴化氰活化法、戊二醛交联法及物理吸附法固定化α 乙酰乳酸脱羧酶 (ALDC) ,并对它的理化性质进行了对比 ,得到的结果是戊二醛交联法固定法ALDC的各种理化性质最为理想 ,它的总活力为 1 660U/g ,蛋白载量为 1 2 3 .1 7mg/ g ,比活为 1 6.4 8U/mg ,活性回收率为 1 4 .92 %。它的催化最适温度为 3 0℃ ,最适pH为 5 ,连续 1 0次催化底物后其活力仍保持 77.2 % ,且其半衰期为 2 1 6d。     

酸性β-半乳糖苷酶基因密码子优化及高效表达

选用酵母偏好密码子,设计合成一种酸性β-半乳糖苷酶基因,并研究其在毕赤酵母中的高效表达。优化后,密码子适应指数(CAI)由原来的0.61提升到0.85。在基因的5'端融合编码α信号肽序列,在3'端融合编码6个组氨酸标签序列,并在N端编码α信号肽和编码成熟酸性β半乳糖苷酶基因间分别引入编码kex2和Ste13裂解信号序列。基因克隆到pPICZα-A表达载体,构建成分泌型重组酵母表达载体pPICZα-β-Gal。在醇氧化酶(AOX1)启动子调控下,酸性β-半乳糖苷酶得到高效分泌表达,达到508 mg/L,比优化前提高3倍。重组酸性β-半乳糖苷酶具有天然的酸性β半乳糖苷酶相同的酶活性。     

L-丝氨酸发酵生产菌发酵条件的优化

通过单因子实验对产L-丝氨酸羟甲基转移酶的基因工程菌发酵生产L-丝氨酸的培养基组成及培养条件进行了研究,得到了优化后的培养基及培养条件.经过优化后的培养基组成为味精 25 g/L,玉米浆 40 g/L,K2HPO4 1.0 g/L,MgSO4 1.0 g/L.其最佳培养条件为500 mL三角瓶装液体积50 mL,摇床转速220 r/min,培养温度37 ℃,pH值 7.5,种子培养时间10 h,发酵培养时间22 h.在上述最佳条件下,发酵液中L-丝氨酸的质量浓度为25.97 g/L,比优化前提高了45.1%.     

胆甾-3β,5α,6β-三醇衍生物的合成

研究了胆甾-3β,5α,6β-三醇的水溶性衍生物的合成.以胆固醇为原料在质量分数为88%的甲酸中以质量分数为30%的过氧化氢(H2O2)溶液氧化、甲醇中碱水解得胆甾-3β,5α,6β-三醇,收率83.5%,m.p.228~230℃,再以胆甾-3β,5α,6β-三醇与草酰氯于丙酮中0℃反应15min,吡啶为催化剂,然后加入少量水继续反应约30 min,得胆甾-3β,5α,6β-三醇-3,6-二草酸单酯,收率61.5%,m.p.207~209℃.经IR和1H-NMR确证结构正确.     

核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸的合成

2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸是酶法合成核苷类药物的重要中间体,以往的化学合成法立体选择性不高,笔者以α/p混合构型的1-氯-3',5’-二(O-对氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖为原料,采用结晶诱导不对称转化技术,合成了单一构型的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐,HPLC测定其α构型含量为96.8％,总收率82.14％.考察了反应物投料比,反应时间,反应温度等因素的影响,得到了较佳工艺条件为:投料摩尔比为1∶3,-5～0℃下结晶诱导反应23 h然后在含有3％环己胺的甲醇溶液中,45℃下反应36 h脱除保护基.该工艺反应条件温和、操作简单、产物立体选择性好且收率高,是经济价值较高的合成路线.     

α-乙酰乳酸脱羧酶的磁性固定化条件研究

采用分散聚合法,在Fe3O4磁流体存在下,通过PVA分子单体共聚制备出磁性聚乙烯醇微球。微球粒径分布在2.5×10-2~5×10-2μm,其中3.7×10-2~4.1×10-2μm的微球占总微球的44%,制备微球粒径分布均匀。以磁性聚乙烯醇微球为载体,通过戊二醛交联法进行ALDC的固定化,制备固定化酶,并对其固定化条件进行了初步研究。结果显示,在酶固定化过程中,自由酶的添加量为20 mL/g微球,戊二醛的添加量为0.98%。在其固定化最佳条件下,制备的固定化ALDC的活力为65 180 U/g,而且其比活、活性回收率分别可达872.32 U/mg和42.33%。     

核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸的合成

2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸是酶法合成核苷类药物的重要中间体,以往的化学合成法立体选择性不高,笔者以α/β混合构型的1-氯-3′,5′-二(O-对氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖为原料,采用结晶诱导不对称转化技术,合成了单一构型的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐,HPLC测定其α构型含量为96.8%,总收率82.14%.考察了反应物投料比,反应时间,反应温度等因素的影响,得到了较佳工艺条件为:投料摩尔比为1∶3,-5～0℃下结晶诱导反应23h然后在含有3%环己胺的甲醇溶液中,45℃下反应36h脱除保护基.该工艺反应条件温和、操作简单、产物立体选择性好且收率高,是经济价值较高的合成路线.     

功能化β-环糊精包合L-苯丙氨酸印迹聚合物的制备及性能分析

文中建立了-种新型的L-苯丙氨酸（L—Phe）印迹聚合物的制备方法,采用饱和水溶液重结晶法制备功能化β-环糊精-L-苯丙氨酸包合物,通过紫外分光光度法、傅里叶红外光谱、热重．差示扫描量热分析法等检测手段对包合物进行表征．首次在包合物研究基础上加入辅助功能单体、交联剂、复合光引发剂在混合有机相中制备了L-苯丙氨酸分子印迹聚合物并且能够成功洗脱进行再吸附．结果表明,常温下每20mg包合印迹聚合物、未包合印迹聚合物以及非印迹聚合物的饱和吸附量分别为179．3μmol／g、146．36μmol／g和64．65μmol／g．