高低精子活力的鸡睾丸和附睾转录组系统分析

为探究精子活力与睾丸和附睾组织对种公鸡基因表达的影响,本研究选取精子活力存在显著差异的海兰褐种公鸡8只(高活力4只,低活力4只),屠宰后采集其睾丸和附睾组织进行转录组测序。利用DESeq2的双因素模块筛选不同精子活力组间和不同组织间的差异表达基因,并进行功能富集分析。结果表明：1)2个组织高精子活力和低精子活力组间的差异表达基因有112个;在高精子活力组高表达的基因有32个,低精子活力组高表达的基因有80个。高低精子活力间差异表达基因显著富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生IgA的肠道免疫网络和甘油磷脂代谢3条通路,其中CTRP3、TDRD5、KATNAL2、SOCS3和CSF3等差异表达基因可能是调控鸡精子活力的重要基因。2)睾丸和附睾组织间鉴定出9 212个差异表达基因,在睾丸组织高表达的基因有5 206个,在附睾组织中高表达的基因有4 006个。睾丸特异性高表达基因显著富集在细胞周期、细胞核质转运、减数分裂和甘油磷脂代谢等8条通路,其中YTHDC2、MEIG1、GTSF1、JAM3和SFMBT1等差异表达基因在精子发生过程中发挥着重要作用。在附睾组织高表达的基因参与了MAP...     

CYP19基因在牦牛睾丸及附睾组织中的表达定位

[目的]为了探讨CYP19基因在牦牛睾丸及附睾不同部位的表达差异性.[方法]应用免疫组织化学、qRT-PCR方法、Western-blot等检测方法,研究成年牦牛睾丸及附睾头、体、尾等4个组织中CYP19基因的表达和定位.[结果]免疫组化结果显示在睾丸支持细胞、间质细胞和生殖细胞中P450arom蛋白均有较强表达,在附...     

日粮中硒对精子质量的影响

研究旨在探讨猪日粮中长期添加硒对其精液生产和精子质量的影响和添加硒后对精液储存期间精子质量的影响。试验处理组日粮为分别在基础日粮(对照组)中添加有机硒和无机硒0.3ppm。公猪从(20.97±0.18)d日龄开始饲喂处理组日粮直到试验结束(382.97±0.18)d。每处理组公猪(n=6)每周采集1次精液,连续采集5个月。此后在4d之内采集6次精液。在采集后的第1天和第6天对其质量进行测定。研究结果表明,饲喂有机硒公猪的血浆硒含量极显著高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,处理组公猪的精液体积和浓度、精子总数、精子活力、形态、脂质过氧化和谷胱甘肽过氧化物酶的活性均无显著变化(P>0.05)。试验结果表明,公猪日粮中补充有机或无机硒对其精液和精子的数量和质量均无显著影响,同时对收集后精液的储存也没有影响。     

小花棘豆中毒对家兔睾丸和附睾中SOD表达的影响

【目的】研究小花棘豆毒性成分对家兔睾丸、附睾组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及基因表达的影响。【方法】将48只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、35、70 d每次每组随机采集4只家兔的睾丸和附睾组织,通过羟胺法检测SOD活性的变化,real-time PCR检测SOD mRNA的表达,免疫组化和Western Blot检测SOD蛋白的表达。【结果】从第35 d开始,与对照组相比,各试验组家兔附睾、睾丸中T-SOD、Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活性均极显著下降(P﹤0.01),mRNA表达量和蛋白表达量均呈现出明显的下降趋势,而且其差异性随中毒时间的延长而变化。【结论】小花棘豆中毒可导致家兔睾丸、附睾中SOD活性与表达异常,且与小花棘豆中毒呈现一定的时间-剂量效应。     

牛附睾和附睾液分析与牛附睾尾精子在模拟附睾液中存活试验

[目的]新鲜精液在离开生殖腺后存活时间很短.相关研究表明副睾液为精子的存活提供了特殊的环境.试验探讨和研究牛附睾精子在体外模拟附睾液中的存活试验的各因素的影响.[方法]试验对公牛附睾头部和尾部的摩尔渗透压和蛋白质浓度进行了分析,牛附睾尾部精子在不同蛋白浓度的CEP-2溶液中,在4℃条件下孵育120h.每24h做一次精子活力检测.[结果]5 d后精子活力仍然超过60;.附睾头、尾部的渗透压分别为(287.0±13.7)mOsm和(310.8±17.0)mOsm.蛋白浓度分别为(37.43±12.55)mg/mL和(50.58±11.08)mg/mL.[结论]附睾尾精子在蛋白浓度为40mg/mL,渗透压为345 mOsm时,精子存活率最高.     

间接免疫荧光方法检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达

采用间接免疫荧光方法对小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达进行检测.结果表明,小鼠睾丸组织Hsp70呈极强的表达(+++),并且在各级生精细胞及支持细胞都呈极强表达;小鼠附睾头、附睾体、附睾尾的Hsp70呈现极强表达(+++),主要在附睾上皮细胞,而管腔内精子偶见阳性染色.说明间接免疫荧光方法能够特异性、原位地检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达,而且操作简单,适用于研究Hsp70在精子发生和成熟过程的作用.     

二花脸公猪不同耐冻性精子的蛋白质组学分析

【目的】二花脸猪是我国优良的地方猪种之一,冷冻精液可提高二花脸公猪的利用率,并加强其种质资源保护,但目前生产的二花脸猪冷冻精液基本不能满足生产需要。研究通过分析二花脸公猪不同耐冻性精子的蛋白质组学,以促进二花脸公猪精子耐冻性蛋白质标志物的筛选,从遗传水平分析精子耐冻性的影响因素,为提高精子耐冻性提供参考依据。【方法】通过冻存14头二花脸种公猪的精液,再对冷冻精液的冻后质量进行分析,根据精子冻后活率和冻后活力的高低筛选出耐冻性好和差（good freezability ejaculates, GFE和poor freezability ejaculates, PFE）的公猪各3头,利用串联质谱标记(tandem mass tag, TMT)技术对GFE组和PFE组的精子蛋白进行定量蛋白质组学分析,鉴定出GFE组和PFE组精子中的差异蛋白(differentially abundant proteins, DAPs)。利用GO富集分析对差异蛋白的功能进行注释,利用KEGG富集分析对差异蛋白的生物通路进行注释,通过STRING蛋白质互作数据库进行差异蛋白的互作网络分析并利用Cytoscape...     

GnRHR在不同日龄建昌黑山羊睾丸、附睾中的分布与表达

[目的]定位并比较不同日龄建昌黑山羊睾丸及附睾中GnRHR的分布及表达情况。[方法]分别收集55、104、300、1 140日龄建昌黑山羊的睾丸、附睾头和附睾尾组织,然后进行脱水、包埋、切片后,采用免疫组化定位GnRHR在各个组织中的分布。[结果]GnRHR在建昌黑山羊睾丸、附睾头和附睾尾组织细胞中均有分布,在上皮下层、基质层中分布较多,其表达量在300日龄的附睾尾和1 140日龄的睾丸中达到较高水平。[结论]GnRHR在睾丸、附睾中均有表达,而且不同日龄阶段表达存在组织细胞特异性。     

不同品种公猪睾丸、精液品质发育规律及相关性研究

为明确公猪睾丸在选育中的意义,研究公猪睾丸参数、精液质量参数的发育性规律以及两者间的关联性。选择936头分布在280～1 409日龄的生产公猪,其中589头杜洛克、233头长白、114头大白。对睾丸和精液质量参数采用一般线性模型,以品种和日龄分组为固定因素进行多变量分析;使用二次项模型分品种分别对睾丸总体积和有效精子数进行发育曲线拟合;控制日龄变量,对睾丸与精液质量参数进行偏相关性分析。在睾丸大小方面：杜洛克>大白>长白,其中杜洛克与大白差异不显著（P>0.05）,但两者均极显著（P<001）高于长白;在精液质量整体比较上：长白优于杜洛克优于大白,但差异不显著（P>0.05）;但在体积、密度、活力和畸形率上,三品种公猪均存在显著（P>0.05）或极显著(P<0.01)差异;睾丸随日龄增长呈先增大后萎缩趋势,精液整体质量随日龄增长呈下滑趋势;三品种公猪睾丸的大小均与精液量和有效精子数呈正相关,且大部分具有显著（P<0.05）或极显著性(P<0.01)。同日龄时期,三品种公猪睾丸的大小顺序为杜洛克>长白>大白,其中长白大于大白具有普遍性; 综合来看,三品种的精液质量比较结果为长白优于杜洛克优于大白,其中长白优于大白具有普遍性;公猪睾丸萎缩临界日龄可用于公猪淘汰依据,选育公猪时可重点选留睾丸较大者。     

季节、品种对种公猪精液量及精子活力的影响

[目的]研究季节、品种两大因素对成年公猪精液量及精子活力的影响效应。[方法]对21头长白猪和26头大白猪在一年内不同季节的精液量和精子活力进行观察和测定,并对这些精液品质进行统计学分析。[结果]季节对成年公猪精液量的影响达到显著水平（P〈0．05）,但2个品种对精液量的影响没有显著差异（P〉O．05）,其中长白猪的精液量在春季最多,秋、冬、夏依次减少,而大白猪的精液量在秋季最多,夏、春、冬三季则依次减少;季节和品种对成年公猪精子活力的影响均不显著（P〉O．05）,但是长白猪和大白猪的精子活力均在春季最高,而夏季最低,此外一年四季长白猪的精子活力明显高于大白猪。[结论]结果为提高猪场的繁殖效率和生产水平奠定基础。     

小鼠睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡蛋白质组分的鉴定及功能分析

【目的】对睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)蛋白质组分进行鉴定,以明确其在精子发生、成熟及功能维持方面所发挥的作用。【方法】用总外泌体分离试剂盒 (total exosome isolation,TEI)分别富集小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs,用免疫印迹法对EVs进行鉴定。用透射电镜观察EVs的形态,动态光散射粒径分析仪(dynamic light scattering,DLS)分析其直径分布。用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析EVs的蛋白质组分,运用DAVID 6.8在线分析工具从细胞组分、分子功能、生物学过程三方面对筛选出的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析。【结果】用TEI法分离纯化的EVs均可检测到分化抗原63(cluster differentiation antigen 63,CD63)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)标记蛋白,表明EVs分离成功。透射电镜下观察EVs呈凹杯状,睾丸组织来源的EVs以直径30~140 nm的居多,附睾组织EVs直径在105 nm处有峰值,前列腺组织EVs直径在50和90 nm处有峰值。用LC-MS/MS分析3种EVs的蛋白组分,睾丸组织EVs筛选到1 148种蛋白,附睾组织EVs筛选到902种蛋白,前列腺组织EVs筛选到651种蛋白。睾丸组织EVs特有蛋白有667种,主要参与RNA加工及剪切、精子发生、DNA损伤应答等生物学过程;附睾组织EVs特有蛋白有311种,主要参与转运、代谢和免疫作用等生物学过程;前列腺组织EVs特有蛋白有142种,主要参与代谢活动等。三者共有蛋白277种,主要发挥蛋白质结合、RNA结合等分子功能,参与蛋白质翻译和运输等生物学过程。【结论】睾丸、附睾和前列腺组织EVs分别在精子发生、精子的睾丸后成熟及功能维持中发挥一定的作用。     

LCN5蛋白在雄性绵羊生殖器官及精子中的表达定位

[目的]探究绵羊附睾视黄酸结合蛋白——载脂蛋白5(lipocalin5,LCN5)在睾丸、附睾不同区段及输精管组织表达特点及其精子中的定位,为LCN5在雄性生殖器官中的功能研究提供理论依据.[方法]选择体重相近((65.23±1.95)kg)、体况良好、健康无病的9月龄公绵羊6只,其中3只使用假阴道法采集精液,3只做无...     

富硒猴头菌中含硒蛋白提取工艺研究

以富硒猴头为原料,采用蒸馏水、Tris-HCl、PBS、NaOH溶液、NaCl、乙醇对富硒猴头中硒蛋白的提取分离工艺进行了初步研究,结果表明,NaOH溶液的蛋白提取量和硒提取率最优。进而以NaOH溶液作为浸提液,对富硒猴头中可溶性硒蛋白的提取工艺进行了系统的研究,通过单因素试验确定的富硒猴头中硒蛋白的提取工艺为:提取温度60℃,料液比1∶20,碱液浓度0.100 moL/L,提取时间10 h,提取3次,等电点沉淀蛋白溶液pH值调节至3~4。在单因素试验基础上,进行了4因素3水平的正交试验,得出了提取的最佳条件为:提取温度70℃,料液比1∶20,NaOH溶液浓度0.07 moL/L,提取时间8 h,在此条件下硒蛋白质的提取率为67.47%。     

GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位

目的研究谷胱甘肽过氧化物酶-5 (glutathione peroxidase-5,GPx5)在成年牦牛隐睾及正常附睾组织的表达及分布特征,探索其对牦牛精子成熟及生殖机能的调节作用。方法选取4岁成年牦牛隐睾及正常附睾各8对,应用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫组织化学SP法、免疫组织荧光染色法及IPP图像分析研究GPx5的表达及分布特征。结果(1)牦牛正常组附睾上皮为假复层柱状纤毛上皮,管腔内有大量精子,管腔外围结缔组织丰富;隐睾组附睾组织趋向纤维化,间质内胶原纤维增生,无正常精子。(2) GPx5在牦牛正常组附睾头部和体部表达均显著高于隐睾组(P<0.05)。(3) GPx5在2组附睾基细胞、晕细胞、管周肌样细胞、静纤毛及血管内皮细胞均有不同程度表达,正常组附睾上皮主细胞GPx5呈强阳性表达,而隐睾组主细胞无阳性表达;正常组附睾头部和体部顶端细胞GPx5呈阳性表达,尾部顶端细胞GPx5则呈强阳性,隐睾组附睾头、体和尾顶端细胞GPx5均呈强阳性表达。结论高原低氧环境下,牦牛隐睾附睾趋向纤维化;隐睾附睾头及附睾体GPx5显著降低,且主要表现为主细胞及基细胞的表达缺失,提示其与精子氧化应激损伤及抗氧化调节密切相关。     

IL-1β和IL-6在建昌黑山羊睾丸和附睾中的分布与发育性表达

【目的】研究IL-1β和IL-6在建昌黑山羊的睾丸、附睾头和附睾尾中的分布和发育表达。【方法】采用免疫组化技术分别检测55、104、300和1 140日龄建昌黑山羊睾丸、附睾头和附睾尾中IL-1β和IL-6分布和表达水平。【结果】结果表明:在各个日龄睾丸的曲精细管的精原细胞中检测到IL-1β和IL-6,在55和104日龄睾丸结缔组织中检测到IL-1β,以及300和1 140日龄睾丸曲精细管基膜中检测到IL-6;在附睾头、尾生殖管道的柱状纤毛上皮细胞和基膜细胞中均检测到IL-1β和IL-6。相同组织不同日龄IL-1β、IL-6比较分析表明:IL-1β、IL-6的表达从55到300日龄在精原细胞表达逐渐降低,而在睾丸结缔组织和曲精细管基膜层中,随日龄增加,表达水平显著升高(P<0.05);在附睾头部,IL-1β、IL-6随发育日龄没有显著变化(P>0.05);而在附睾头部的柱状纤毛上皮细胞中,IL-1β在300日龄时的表达水平显著低于55和104日龄(P<0.05),IL-6在104日龄时的表达水平显著高于55日龄(P<0.05)。【结论】IL-1β和IL-6在建昌黑山羊的睾丸和附睾中均检测到,而且在睾丸和附睾尾部的表达与发育日龄有关。     

动物硒蛋白功能、表达及其肉质调控机制研究进展

硒蛋白是微量元素硒(Se)在动物体内发挥生物学功能的主要形式,其表达调控与动物生长和畜禽肉质密切相关。介绍动物体内Se元素吸收代谢的过程及其主要存在形式,系统总结动物硒蛋白的结构、种类、表达分布、生物学功能、合成过程、影响因素与候选功能基因等,重点分析硒蛋白在活体肌肉中的作用,以及对畜禽肉质调控的影响。通过梳理上述方面的研究进展,以期为新饲料添加剂开发和畜禽肉质调控研究提供科学依据。     

GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位

【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶-5（glutathione peroxidase type-5, GPX5）在成年绵羊附睾的表达特征以及GPX5蛋白在附睾中的定位,为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于-80 ℃冰箱,采用实时荧光定量PCR和Western blotting的方法,对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的GPX5 表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于4%多聚甲醛溶液中24h,按照石蜡切片的方法制做组织切片。用GPX5特异性抗体孵育组织切片,利用DAB显色试剂盒对阳性信号进行标记。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成年绵羊附睾头GPX5基因的表达量极显著高于附睾体和附睾尾（P＜0.01）,而在输精管和睾丸几乎不表达。Western blotting的结果显示,GPX5蛋白在成年绵羊附睾头高表达,在附睾体和附睾尾有微量蛋白存在,睾丸和输精管中未发现GPX5蛋白。这表明GPX5主要在成年绵羊附睾头表达;经过免疫组化染色分析,GPX5蛋白主要位于附睾头上皮细胞质以及静纤毛,附睾体和附睾尾中的GPX5蛋白主要集中在静纤毛。在附睾头、附睾体和附睾尾中的精子上以及附睾腔都可以观察到GPX5蛋白,表明GPX5蛋白从附睾上皮分泌到附睾腔中,随着精子在附睾中的运输与精子结合。【结论】在成年绵羊附睾中,GPX5主要由附睾头上皮细胞合成和分泌,在附睾管腔中与精子结合,为精子功能的正常发挥提供保护。     

公猪精液品质和精子形态的品种差异及随年龄变化的规律分析

为综合评价公猪精液质量,研究公猪精液质量参数和精子形态参数的品种差异,并探讨公猪精液质量随年龄的变化规律,选取杜洛克、长白和大白公猪共114头,采用一般线性模型,以品种和年龄为固定因素对其精液质量参数、精子形态参数进行多变量分析。结果显示,杜洛克公猪的精子密度(619.20百万个/mL)显著(P0.05)高于长白公猪(363.18百万个/mL)和大白公猪(336.92百万个/mL);杜洛克与大白公猪的精子活力和直线运动率均显著高于长白公猪(P0.05);长白公猪精子正常形态率(92.95%)显著(P0.05)高于杜洛克公猪(90.78%);1年龄的公猪精子密度(556.98百万个/mL)显著(P0.05)高于2、3年龄(382.44百万个/mL、373.32百万个/mL);大白公猪精液的弯尾率、卷尾率均显著(P0.05)低于杜洛克公猪和长白公猪,长白公猪的精子近端质滴率(2.28%)显著(P0.05)低于杜洛克公猪(3.94%)和大白公猪(2.92%),3年龄的公猪精子近端质滴率显著(P0.05)低于2年龄;在正常精子形态参数方面,杜洛克公猪和大白公猪精子的头部长度、尾巴长度均显著高于长白公猪(P0.05),杜洛克公猪(2.96μm)和长白公猪(2.94μm)精子的头部宽度均显著(P0.05)高于大白公猪(2.87μm),杜洛克、大白、长白公猪精子的头部周长依次降低且彼此间差异显著(P0.05),长白公猪精子的头部面积/总精子长度显著(P0.05)高于大白公猪,长白公猪的头部宽度/头部长度显著(P0.05)高于杜洛克公猪和大白公猪,1、2年龄的公猪精子头部长度、头部周长、头部长度/总精子长度、头部长度/尾巴长度均显著(P0.05)高于3年龄,1、2年龄的公猪精子尾巴长度/总精子长度和头部宽度/头部长度均显著(P0.05)低于3年龄。综上,杜洛克公猪常规精液质量参数最优,其次为大白公猪和长白公猪,但其精子形态参数相比于长、大白公猪较劣。年龄因素对公猪精液质量影响不显著。     

精子中H-Y抗原的蛋白和mRNA表达背离

目的:进一步验证成熟精子中是否存在H-Y抗原的mRNA,并探讨精子mRNA的保留机制。方法:采集健康男性志愿者的精液,通过上游法纯化精子,使用多克隆抗H-Y抗原的IgY抗体和FITC标记的兔抗鸡IgG对精子进行免疫组化和流式细胞仪检测,观察成熟Y精子膜表面是否带有H-Y抗原。提取成熟精子总RNA,用RT-PCR的方法观察精子mRNA中是否含有H-Y抗原的mRNA。结果:免疫组化实验显示可在许多精子的头部与尾部的交界处非常清晰地看到H-Y抗原的荧光;流式细胞仪检测显示49.86%精子为H-Y抗原阳性。RT-PCR结果显示,未扩增到H-Y抗原的mRNA特异性条带。结论:成熟精子表面存在有H-Y抗原,但未检测到H-Y抗原的mRNA。     

谷子硒结合蛋白基因及其与抗旱性的关系

[目的]土壤与肥料中的硒元素进入植物体后,与植物中的蛋白质和活性有机成分结合成为植物有机硒,即植物硒结合蛋白。本研究以硒结合蛋白结构和功能为基础,探索其与谷子抗旱的关系。[方法]以谷子耐旱品种勾勾母鸡咀(GG)和干旱敏感品种晋汾16(JF16)为试材,以转录组中硒结合蛋白基因家族中10个基因为对象,利用生物信息学分析其基因组基本信息、基因间亲缘关系及启动子顺式元件,并对Seita.4G100300基因进行表达水平分析。[结果]发现谷子硒结合蛋白基因家族中基因启动子上游1 500bp的调控元件具有响应胁迫的多种功能(ABA、Ethylene、GA、MeJA、Light、MYB、SA、热和低温等);经过干旱处理,Seita.4G100300基因在GG和JF16中表达水平均增加,且其在耐干旱品种GG中表达水平的增幅显著大于干旱敏感品种JF16。[结论]谷子硒结合蛋白基因家族在氨基酸序列和表达模式方面具有较为丰富的多样性。本研究有助于我们理解硒结合蛋白的结构和功能,为进一步研究硒结合蛋白与植物抗逆性关系提供理论依据。