丽春红和维多利亚蓝（B）显示纤维,细胞和肌肉的新染法

在人体和动物组织制片中,用特殊染色显示胶原纤维和弹力纤维的方法较多,但是所显示的染色效果较差.为了研究工作和诊断学的需要,进行了反复实验性研究,发现酸性染料Ponceau's(丽春红S),碱性染料的Victoria blue及B(维多利亚蓝及B)等试剂,能较好的显示胶原、弹力纤维,细胞和肌肉的成分.而在目前还未见报道.实验证明所建立新的二种染色方法,使组织     

显示钙质、纤维和细胞的组合染色法及其应用

在人体和实验动物组织病变的情况下,含有多种不同形态特点的钙盐沉积物。为了能够更好证明钙质和其它的组织成分,经过改进与选用的菌素红(Alizarinred S)、碘绿(Iodine green)、亮绿(Brilliant green)和马汀氏黄(Martius yellow)染色剂进行组合染色,能够分别显示钙质呈红色,胶原纤维呈蓝绿色、细胞核呈绿色和红细胞呈黄色,色彩鲜艳,对比清晰,是较为可靠的染色方法。     

外源性硫化氢保护实验性癫痫持续状态大鼠海马神经元作用的研究

目的:为研究外源性硫化氢(H_2S)对实验性癫痫持续状态(status of epilepticus,SE)大鼠海马神经元的保护作用,我们用供体Na HS对氯化锂-匹罗卡品所致幼鼠SE海马神经元的影响,并对SE引起的脑损伤进行靶点干预。方法:用氯化锂-匹罗卡品建立大鼠SE模型,并分为正常+Na HS组,癫痫组,癫痫+Na HS组和癫痫+羟胺组,另设正常组(对照组),每组6只。用比色法测定血浆和海马H_2S浓度,用Real-Time PCR检测海马胱硫醚-β合酶(CBS)基因mRNA表达,用HE染色和Nissl染色观察海马神经元形态。结果:癫痫组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达明显低于正常组(P0.01),癫痫+Na HS组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达明显高于癫痫组(P0.01),癫痫+羟胺组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达显著低于癫痫组(P0.05)。HE染色显示,癫痫组海马CA3区锥体细胞明显减少,细胞层次紊乱,形态不规则;尼氏染色显示,癫痫组海马CA3区尼氏体明显减少,锥体细胞排列紊乱;与癫痫组比较,癫痫+Na HS组海马尼氏体缺失和锥体细胞排列紊乱明显改善。结论:外源性H_2S对实验性癫痫持续状态大鼠海马组织CBS mRNA表达具有上调作用,并提高血浆和海马组织H_2S含量。同时,外源性H_2S对实验性癫痫大鼠海马组织神经元具有保护作用。     

应用激光捕获显微切割技术分离肝癌石蜡组织标本中细菌及螺杆菌基因的检测

目的　对肝癌石蜡组织标本病理切片中发现的细菌进行分离鉴定。方法　38例肝癌石蜡组织标本经聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16S rRNA,阳性标本病理切片后行石炭酸碱性品红染色观察幽门螺杆菌(H.pylori),应用激光捕获显微切割技术(LCM)分离光镜下观察到的细菌,分离的细菌经PCR扩增螺杆菌16S rRNA,PCR产物进行测序及同源比较,阳性者再扩增H.pylori的特异基因[相对分子质量(Mr)为26×103 蛋白,H.pylori种特异抗原]和相关功能基因(cagA,vacA)。结果15例肝癌石蜡组织标本中检测到螺杆菌16S rRNA,选取观察到细菌数量较多的6例用于LCM分离。分离的6例细菌样本均扩增出螺杆菌16S rRNA,经测序与H.pylori有99%~100%的同源性。4例Mr为26×103 蛋白基因阳性,1例扩增出cagA基因,未扩增出vacA基因。结论　肝癌石蜡组织中经PCR检测到的H.pylori就是病理观察到的细菌。     

肝组织中糜酶浓度在慢性肝炎肝纤维化中的意义

目的:为探讨肝组织中糜酶(Chymase)浓度在慢性病毒性肝炎肝纤维化中的意义。方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测45例慢性肝炎肝组织中Chymase浓度,观察不同的纤维化分期(S1-S4),其肝组织中Chymase浓度;用免疫组织化学染色法观察Chymase单克隆抗体标记的肥大细胞分布情况。结果:慢性肝炎纤维化分期重的S3和S4患者,其肝组织中Chymase浓度(S3+S4=31.3±24.6ng/mg)明显高于纤维化轻的S1和S2患者(S1+S2=5.7±4.8ng/mg),P<0.01;免疫组化染色结果,Chymase标记的肥大细胞主要分布于纤维化旺盛的汇管区与类洞壁,其分布与纤维化部位相一致,且肝组织中Chymase浓度高的患者,其肝组织内Chymase标记的肥大细胞分布增多。结论:肝组织中Chymase浓度可能与慢性肝炎肝纤维化关系密切。     

重视特殊染色在肝脏活检病理诊断中的应用

尽管免疫组化和分子病理学技术飞速发展,特殊染色技术在日常病理诊断中仍起到不可替代的作用.许多特殊染色仍用于肝组织染色,如活检、移植肝、部分肝切除和尸检标本的组织病理学评价,这些方法可提高日常肝脏疾病诊断(如慢性肝炎肝纤维化的分期、肝硬化的发展进程、铁和铜的贮积以及肿瘤组织来源等)的精确度.该文主要介绍Masson三色和网状纤维结缔组织染色(Gordon-Sweets嗜银染色法)、过碘酸-Schiff(PAS)和淀粉酶预处理PAS(DPAS)、铁和维多利亚蓝等特殊染色方法 的适应症和具体用途.     

PPA-O显示人体子宫组织中弹性和胶厚纤维的组合染色法

在进行人体正常和肿瘤子宫组织的形态学研究中，选用丽春红S（poncean S）、苦味酸（picric acid）和地衣红（orccin）进行组合染色，简称PPA-O法。经反复实验后，能够同时分别显示组织中弹性纤维、胶原纤维和平滑肌的分布及变化情况，得到了较好的染色效果，现将方法介绍如下。     

TUNEL法原位检测肿瘤组织细胞凋亡的改进

原位末端标记技术是当今较为流行的一类定量凋亡细胞评判方法,以脱氧核苷酸末端转移酶(TdT) 介导的核苷酸(dUTP) 缺口末端标记法(TUNEL )应用最为广泛.在对各种组织进行凋亡研究时,多数采用从各种试剂公司购买的试剂盒.虽然试剂盒使用方便,但是有时结果并不理想,如非特异性染色过多,背景染色深.对动物组织的研究更是如此.我们在TUNEL染色过程中如何更好地利用试剂盒,在避免假阳性、消除非特异性反应、降低背景染色等方面进行了探索和改进,获得了满意的实验结果,现介绍如下.     

新生期肺炎链球菌肺炎对VA的影响及其与肺部免疫及气道反应性的关系研究

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎(Streptococcus pneumoniaepneumonia,S.pp)对维生素A(VA)水平的影响及其与肺部免疫及气道反应性的关系。方法 Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×10~7CFU肺炎链球菌5μl建立新生期S.pp模型,对照组滴注等量PBS,新生期肺炎链球菌肺炎补充VA组(S.pp+VA)感染后口饲补充VA,每天1次,连续4天,对照组给予等量VA溶解溶质菜籽油。收集感染后第7、14、21、28天肺组织、血清、肝脏组织标本,高效液相色谱仪(HPLC)监测组织中VA水平。小鼠成年后肺组织病理切片HE染色观察肺组织病理改变,体积描记法检测小鼠肺功能,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清IL-4、IL-5、IL-13、IL-17A、INF-γ水平,流式细胞术检测肺组织中的CD4+T细胞亚群Th1、Th2及Foxp3~+Treg。结果 S.pp组小鼠肺组织VA持续降低至感染后4周,血清VA降低直至感染后2周恢复正常,而肝脏中VA水平无统计学差异。S.pp+VA组肺组织炎性细胞浸润较S.pp组显著减轻,S.pp+VA组BALF中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17A水平显著低于S.pp组(P0.05),IFN-γ则显著增高(P0.01),肺组织Th1、Foxp3~+Treg显著高于S.pp组(P0.01),Th2水平明显降低(P0.01),且Th1/Th2比值显著增高(5.7 vs 1.7,P0.001))。S.pp+VA组小鼠气道反应性显著低于S.pp组(P0.001)。结论新生期肺炎链球菌肺炎致肺部VA水平持续降低至成年期,肺炎后补充VA能减轻新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织炎性细胞浸润,促进Foxp3~+Treg表达、纠正Th1/Th2失衡,抑制成年期气道高反应性形成。     

显示皮肤组织细胞、胶原纤维和粘多糖的组合染色法

在人体皮肤活检组织的诊断与研究中，为了能够更好的显示多种组织成份，而进行反复实验，已分别组合了Ponceau S，Picric acid，Alcian blue(丽春红s、苦味酸、阿尔辛蓝)染色法，简称P—PA-AB法；Orange G,Alcian blue,Schiff(橙黄G，阿尔辛蓝、雪夫试剂)染色法，简称O-AB-PAS法。克服了原法着色成份单一，染色效果差的缺点，经过改进后的2种组合对比染色，得到了较好的染色效果，现将方法报道如下：     

显示肥大细胞核与胞质颗粒及平滑肌纤维的组合染色法

为了能够在人体和实验动物组织中更好的证明肥大细胞等组织成分，我们选用俾土麦棕（Bismarck brown）、碘绿（Lodine green）、马汀黄S（Martius yellow S）进行组合染色（简称BB-IG-MY组合染色法），以求找到对比清晰的组合染色方法。     

免疫组化染色与14C尿素呼气试验在幽门螺杆菌相关胃炎诊断中的比较

目的探讨免疫组化染色技术在诊断胃活检组织中幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)的价值。方法收集行~(14)C尿素呼气试验(UBT)的239例胃活检组织,采用免疫组化染色检测HP感染,其结果分别与金标准进行对比分析,金标准的设定参考第四次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告并适当修改,以~(14)C UBT、免疫组化和HE三个条件中至少有两个阳性者定为HP阳性。结果筛选出符合条件的胃活检组织239例,与金标准相比免疫组化染色的敏感性和特异性最高,分别为97. 3%和100. 0%;而~(14)C UBT和HE染色的敏感性和特异性分别为91. 1%、81. 9%和80. 4%、92. 9%。~(14)C UBT的假阳性率为9. 6%,假阴性率为4. 2%。结论免疫组化检测HP有高度的敏感性和特异性,染色结果判断清晰直观,准确可靠,推荐其用于HP胃炎的综合诊断。     

结直肠癌患者8号染色体微卫星改变的研究

目的研究结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者8号染色体微卫星改变的情况,探讨结直肠癌发病的分子机制.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色方法,选取8号染色体上4个微卫星住点,对34例结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织及其相应正常组织的微卫星改变情况进行检测分析.结果①34例患者中有14例至少在一个位点发生微卫星改变,总检出率为41.18%,其中D8S135、D8S255、20.59%、17.65%及11.76%.癌旁组织中未检测到微卫星改变.②发生两个以上位点改变的10例,在有微卫星改变的患者中占71.42%.结论在8号染色体所选位点上存在较高频率的微卫星改变,提示可能存在与结直肠癌发病密切相关的基因,为结直肠癌的早期诊断提供了一个有意义检测指标.     

外源性硫化氢减轻小鼠阻塞性肾损伤

目的:探讨外源性硫化氢(H2S)在小鼠阻塞性肾损伤中的保护作用及可能机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、手术组和H2S组,每组5只,单侧输尿管结扎(UUO)构建肾阻塞模型,H_2S组小鼠腹腔注射H_2S供体硫氢化钠(Na HS),手术组和假手术组小鼠注射等体积的生理盐水,每天1次。7 d后处死小鼠,取出肾脏,提取RNA行RT-PCR检测3组小鼠肾脏内源性H_2S催化酶mRNA表达的差异;组织HE染色观察3组小鼠肾脏的组织结构的变化;Masson染色检测3组小鼠肾脏纤维化的差异;检测血浆胱抑素C含量来反映肾小球滤过能力;Western blot检测LC3、beclin-1和纤连蛋白(FN)蛋白表达的变化。结果:与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中胱硫醚β-合成酶(CBS)、胱硫醚γ-裂解酶(CSE)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)的mRNA表达显著降低,胶原纤维显著增多,而H_2S组小鼠肾组织胶原纤维又比模型组显著减少。与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中FN的蛋白表达显著升高,而H_2S组小鼠的FN表达量比手术组小鼠显著降低;与假手术组相比,手术组和H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达均显著增高,而H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达又显著高于手术组。结论:外源性H_2S可能通过上调细胞自噬而减轻UUO小鼠的肾纤维化。     

螺杆菌感染与NF-κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系,从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例,采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16S rRNA,随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌(H.pylori, Hp)的特异基因相对分子质量(M_r)26×10~3的种特异性抗原和相关功能基因(CagA,VacA)。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32.5%(13/40)的食管癌组织中发现有螺杆菌16S rRNA基因存在,正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较,食管癌组织中螺杆菌序列与H.pylori的16S rRNA序列有99%～100%同源性。阳性标本均扩增出Hp特异基因M_r 26×10~3种特异性抗原,但仅2例扩增出CagA基因,3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示,16S rRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100%(13/13),而16S rRNA阴性食管癌组织表达率仅占18.5%(5/27),二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染,该螺杆菌可能为Hp。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加,可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。     

针刺对脊髓源性神经营养物质生物学效应的影响

为了探讨电针刺激对脊髓背角组织中神经营养活性物质生物学效应的影响 ,本实验采用 5只双侧备用根猫 (切除双侧L1 ～ L5 ,L7～ S2 DRG,保留 L6 为备用背根 ) ,随机在一侧进行针刺 (穴位为足三里与悬钟、伏兔与三阴交 ) ,连续针刺 5天后处死动物取材 ,将其脊髓背角组织 (T1 2 ～ S3节段 )提取液进行聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳 ,并结合细胞钓蛋白和鸡胚DRG联合培养。结果显示 :电泳后的凝胶条染色显示出清晰蛋白带 2 4条 ,其相对迁移率 (Rf) 0 .11蛋白带吸收峰面积百分比 ,针刺侧者较非针刺侧显著增高 (P <0 .0 5 ) ;细胞钓蛋白带法显示凝…     

直肠癌的血管生成和血管内皮生长因子表达的实验研究

目的　探讨直肠癌组织微血管密度 (MVD)和血管内皮生成因子 (VEGF)表达与肿瘤浸润和转移的关系 .方法　应用CD31抗体和VEGF抗体 ,采用免疫组化S -P法对 14 1例手术切除的直肠癌患者进行血管标记和染色 ,并取 10例直肠正常组织对照 .结果　有淋巴转移组直肠癌MVD、VEGF表达强度与无淋巴结转移组、正常对照组间比较 ,均有显著性差异 (p<0 .0 1) ,且MVD与VEGF表达两者呈正相关 (r=0 .93) .结论　直肠癌组织内微血管密度和VEGF表达强度与直肠癌的浸润深度及淋巴结转移密切相关 ,两者均可考虑作为预测直肠癌发生转移的指标 .     

神经组织的双重免疫组化染色法

在研究心传导系统神经组织的正常分布、增龄变化及其病变与猝死的关系的过程中,我们建立了一套能同时显示神经轴突和雪旺氏细胞的双重免疫组化染色方法.1 材料与方法1.1 主要试剂 一抗:鼠单克隆PGP9.5抗血清,英国Ultraclone公司;兔多克隆S100抗血清,丹麦Dakopatts公司.桥联试剂:羊抗鼠IgG/碱性磷酸酶与羊抗兔IgG/辣根过氧化酶,丹麦Dakopatts公司.底物:萘酚AS-MX磷酸与固蓝B:美国Sigma公司;二氨基联苯胺(DAB):美国Sigma公司.1.2 标本 人尸检心脏与传导系统组织10例,均为常规福尔马林固定、石蜡包埋的标本,切片厚度5μm,裱于Superfrost plus(英国BDH)玻片上.1.3 免疫组化染色方法(1)高压消毒蒸锅暴露抗原:切片经脱蜡、抑制内源性过氧化酶后,浸入1mmol/L的EDTA缓冲液(PH8.0),置入高压消毒蒸锅处理(120℃,105kPa)10min,冷却后移入0.01mmol/L的PBS(pH7.1,下同)平衡10min,进行下面的免疫组化染色.(2)双重免疫组化染色步骤:①滴加一抗混合物:PGF9.5(1:4000) S100(1:12000),4℃,16～18h.     

人类高分辨染色体核糖作顺反子的表达

编码18S与28S核糖体RNA的基因位于核仁组织区(NOR)内,这就是大家熟悉的核糖体顺反子的位点。用Goodpasture的氨银染色技术表明,这些核糖体的顺反子位于人类近端着丝粒染色体(13、14、15、21和22)的副缢痕区。在原位杂交实验中发现10个近端着丝粒染色体全都有标记。但用银染     

肠上皮Depdc5/mTORC1信号轴调控小鼠小肠上皮稳态

目的 探讨Depdc5敲除介导的mTORC1信号通路持续激活对小鼠肠道上皮稳态的调控作用。方法 将小鼠分为4组,Depdc5^flox/flox组(对照组)、Depdc5^flox/flox:Villin-Cre组(IKO组)、rapamycin-Depdc5^flox/flox组(rap-Ctrl组)、rapamycin-Depdc5^flox/flox:Villin-Cre组(rap-IKO组),每组各5只。Western blot检测肠道上皮DEPDC5蛋白表达及mTORC1下游分子S6的磷酸化(PS6)水平。RT-qPCR检测小肠组织中不同类型细胞标记基因Dclk1、Trpm5、Muc2 mRNA的表达。苏木精-伊红染色(HE染色)对组织形态学进行检查。免疫组化染色(IHC)检测簇细胞、潘氏细胞、增殖细胞的数目。阿尔新蓝染色法检测杯状细胞的数目。结果 IKO组小鼠小肠和结肠组织中PS6蛋白表达为0.957±0.028高于对照组的0.598±0.041(P<0.05),并且IKO组小鼠小肠上皮不...