桂皮醇对IL-1刺激脑微血管内皮细胞COX活性及PGE2释放的影响

 目的观察桂枝汤中分离获得的单体成分桂皮醇对发热相关的环氧酶(COX)和前列腺素E₂(PGE₂)的影响。方法建立大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同终浓度的桂皮醇(0.093,0.186,0.372,0.744,1.488 mmol·L^-1)孵育3 h,之后以30μg·L^-1的IL-1刺激12 h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1,COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。暴露于质量浓度为30μg·L^-1IL-1后,rCMEC内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性变化无统计学差异(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醇后,随浓度增加可下调COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈浓度依赖关系;至浓度为0.744mmol·L^-1时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组相比均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性虽有所降低,但无统计学上的显著差异(P>0.05)。结论桂皮醇能下调IL-1刺激rCMEC释放升高的PGE₂,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。     

桂皮醛对IL-1刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX-2活性及释放PGE2的影响

目的:观察从桂枝汤中分离出的单体桂皮醛对白细胞介素1(IL-1)刺激大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs)与发热有关的信号转导通路上关键信号元件环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响.方法:建立rCMECs培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定.待细胞生长至融合状态后加入不同浓度的桂皮醛(12.5、25、50、100及200 mg/L)孵育3h,随后以30ng/ml的IL-1刺激12h.ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1、COX-2的活性.结果:Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%以上为阳性细胞,证实为rCMECs.暴露于浓度为30ng/ml IL-1后,rCMECs内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性无明显变化(P>0.05).加入不同浓度的桂皮醛后,随浓度增加而下调IL-1升高的COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈一定的浓度依赖关系;至浓度为100 mg/L时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组比较差异均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性无明显变化(P>0.05).结论:桂皮醛能下调IL-1刺激下rCMECs释放的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关.     

桂皮醛解热作用及机制的实验研究

目的：探讨桂皮醛解热作用及其作用机制。方法：采用酵母诱致大鼠发热模型和白细胞介素-1β（IL-1β）刺激小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）作为实验体系,采用酶联免疫法（ELISA）测定致热大鼠下丘脑组织及bEnd.3细胞上清液中前列腺素E2（PGE2）含量。结果：桂皮醛能有效抑制酵母所致大鼠发热反应,显著降低发热大鼠下丘脑PGE2含量,亦能明显抑制IL-1β刺激bEnd.3细胞PGE2的释放。结论：桂皮醛具有明显的解热作用,其解热机制可能与影响PGE2含量有关。     

桂皮醛通过下调mPGES-1和COX-2抑制IL-1β 诱导的RAW264.7细胞PGE2分泌

目的:在明确桂皮醛通过下调COX-2抑制PGE2生成的基础上,进一步探讨其抑制PGE2生成的机制。方法:采用IL-1β刺激的方法,构建炎症模型,并用ELISA法检测PGE2的分泌量,用Real-time PCR法检测mPGES-1和COX-2 mRNA的表达,用Western blotting法检测mPGES-1蛋白,以观测桂皮醛对上述指标的影响。结果:桂皮醛能显著抑制PGE2的分泌,同时,也能显著下调mPGES-1和COX-2 mRNA的表达,及mPGES-1蛋白的表达。结论:桂皮醛对RAW264.7细胞PGE2生成的影响,除通过对COX-2的抑制作用外,也要归因于其对mPGES-1的抑制作用。     

桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β介导的bEnd.3 细胞PGE2代谢通路的影响

目的:研究桂枝汤及其生物转化模拟产物对白细胞介素-1β(IL-1β)介导的小鼠脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)细胞前列腺素E2(PGE2)代谢通路的影响。方法:制备了桂枝汤及桂枝汤生物转化模拟产物的含药血清(分别设五个浓度组),采用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印记法(Western blot),观察桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β刺激的bEnd.3细胞磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶p38(p-p38MAPK)、胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、环氧合酶2(COX-2)、前列腺素E合成酶(PGES)、15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)以及前列腺素E2(PGE2)分泌及表达的影响。结果:IL-1β作用于细胞10 h后,各项指标均明显上调,与对照组比较,P<0.01。除质量终浓度为2.5%的桂枝汤含药血清对PGES,sPLA2;终浓度为1%的模拟药对PGES;终浓度为2.5%的含药血清对PGES,sPLA2,cPLA2作用不显著外,其他各浓度组与模型组比较均出现显著性差异。结论:桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β刺激bEnd.3细胞合成PGE2的代谢酶系统有不同程度的抑制作用,从而降低了前炎症介质和中枢发热介质PGE2的释放和分泌。结果提示,桂枝汤及其生物转化模拟产物对脑微血管内皮细胞分泌PGE2具有相似的药效,为模拟产物的应用和开发提供了实验支持。     

桂枝汤四个主要组成成分不同组合对白细胞介素1β刺激的脑微血管内皮细胞分泌前列腺素E2的影响

目的：研究桂枝汤四个主要组成成分不同组合对白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）刺激的大鼠脑微血管内皮细胞分泌前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）的影响。方法：通过放免法测定这些不同组合成分作用细胞后的上清液PGE2含量。结果：组合中有20组成分组合能降低因IL-1β刺激而产生的PGE2含量，并有统计学意义。结论：这些成分的组合有可能是桂枝汤有效部位A双向调节体温的物质基础。     

中药对脑微血管内皮细胞影响的研究进展

脑微血管内皮细胞不仅仅具有屏障特性,而且还具有多种分泌功能,因此微血管内皮细胞的损伤与脑血管疾病的发生、发展有着密切的关系,也为研究中药防治脑血管疾病的机制提供了基础。近年来,围绕中药减轻脑血管疾病过程中微血管内皮细胞损伤,展开了很多研究。仅从细胞的屏障特性、细胞氧化损伤、细胞的分泌功能等几个方面综述了中药对体外培养脑微血管内皮细胞影响的研究进展。     

秦艽止痛巴布剂对大鼠佐剂性关节炎IL-1β、PGE2的影响

目的观察秦艽止痛巴布剂对大鼠佐剂性关节炎血清中细胞因子白介素-1β、前列腺素E2浓度的影响,探讨秦艽止痛巴布剂对佐剂性关节炎的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂制备类风湿性关节炎大鼠动物模型(AA),用ELISA检测大鼠血清中IL-1β和PGE2的含量。结果与空白组相比,模型组IL-1β、PGE2显著增高(P<0.001);各治疗组IL-1β、PGE2显著低于模型组(P<0.01或P<0.05)。结论秦艽止痛巴布剂治疗关节炎的机制可能与其抑制细胞因子LI-1β活性和炎症介质PGE2产生有关。     

金莲花总黄酮解热作用及对TNF-α,IL-1β和PGE2含量的影响

目的：观察金莲花总黄酮（Flavonoids from Trollius ledebouri Reichb,FTLR）解热作用。方法：选取连续3天基础体温在38.5~39.0 ℃ 的家兔,随机取6只作为正常对照组,其余家兔耳缘静脉注射细菌内毒素250 ng·kg^-1发热模型,取药后1.5 h体温上升>1 ℃ 的家兔30只。按体温分层随机分为发热模型组、FTLR 200,100,50 mg·kg^-1剂量组,阿司匹林组100 mg·kg^-1组,灌胃给药,发热模型组ig等容积蒸馏水。药后1,2,3及4 h分别测体温1次。采用ELISAE法测定血清中TNF-α和IL-1β及脑脊液中PGE₂表达水平。结果：FTLR 200及100 mg·kg^-1剂量组及阿司匹林组家兔各时间点的平均体温明显均低于模型对照组（P<0.01）;50 mg·kg^-1组家兔药后2~4 h体温低于对照组（P<0.05）;各给药组血清中TNF-α和IL-1β及脑脊液中PGE₂的含量均低于模型对照组（P<0.05或P<0.01）。结论：FTLR有明显的解热作用,并有明显的剂量依赖关系。其解热作用机制与抑制细菌内毒素引起的TNF-α,IL-1β和PGE₂等致热因子的合成或释放有关。     

桂枝汤主要成分对PGE2刺激的胚胎大鼠下丘脑神经cAMP-PKA的影响

目的：cAMP-PKA（环磷酸腺苷-蛋白激酶A）是细胞内非常重要的信号转导途径。本实验研究了桂枝汤四个主要组成成分。桂皮酸、桂皮醛、芍药苷及甘草次酸，不同组合对PGE2（前列腺素E2）刺激的胚胎大鼠下丘脑神经细胞内cAMP-PKA水平的影响。方法：用放免法测定不同组合成分作用的细胞cAMP含量和PKA活性。结果：各成分作用时，桂皮酸（0．625μg／mL）、桂皮醛（10、0．625μg／mL）、芍药苷（0．625μg／mL）和甘草次酸（10μg／mL）对细胞cAMP含量或PKA活性有显著的降低作用；在27组不同成分的组合中，有19组对细胞cAMP含量、16组对细胞PKA活性有显著的降低作用。结论：桂皮酸、桂皮醛、芍药苷和甘草次酸的不同浓度组合可能与桂枝汤体温双向调节作用的物质基础有关，其作用可能与调节cAMP-PKA通路有一定的关系。     

黄连解毒汤有效成分对缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的：研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧-复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法：建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064，0.032 μmol·mL-1栀子苷，0.028，0.014，0.007 μmol·mL-1黄芩苷和0.024，0.012，0.006 μmol·mL-1小檗碱分别作用于损伤的细胞，采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术，检测平均吸光度和平均面积，比较各组血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达的变化；采用RT-PCR方法检测并比较各组VCAM-1 mRNA表达的变化。结果：模型组VCAM-1蛋白表达的平均吸光度值和平均面积以及VCAM-1 mRNA表达显著高于正常组(均P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值和平均面积均低于模型组，差异有统计学意义(均P<0.01)。0.007 μmol·mL-1黄芩苷组、0.012,0.006 μmol·mL-1小檗碱组的平均吸光度值较正常组高，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01,P<0.01)，其余各给药组与正常组的差异无统计学意义。0.014 μmol·mL-1黄芩苷组平均面积高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，其余各给药组与正常组的差异无统计学意义。各给药组mRNA表达高于正常组且低于模型组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧-复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞，其保护机制之一是抑制VCAM-1的表达。     

三七总皂苷对拟缺血脑微血管内皮细胞RIG-I表达的影响

目的:研究三七总皂苷对拟缺血损伤的脑微血管内皮细胞维甲酸诱导基因-I(Retinoic Acid-inducible Gene-I,RIG-I)的影响。方法:采用原代培养大鼠脑微血管内皮细胞(Brain Microvascular Endothelial Cell,BMEC),氧糖剥夺法制备拟缺血损伤模型,首先用不同浓度梯度的三七总皂苷进行干预,筛选出三七总皂苷的最佳用药浓度,然后分别采用荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法检测各组细胞中RIG-I mRNA及蛋白的表达水平。结果:三七总皂苷在22μg/m L浓度时能够显著提高拟缺血损伤脑微血管内皮细胞的活性,同时能够从基因和蛋白水平下调RIG-I的表达。结论:三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞具有保护作用,提示三七总皂苷在缺血性脑损伤中使RIG-I的表达下调可能是其发挥抗炎作用的内在分子机制之一。     

Effect of 3-Phenyl-2-Propene-1-ol on PGE2 release from rat cerebral microvascular endothelial cells stimulated by IL-1beta

Fever, an elevation in body temperature, is thought to be terminally mediated by prostaglandin E(2) (PGE(2)). Both Guizhi Tang (GZT) and its active fraction A (Fr.A) showed an antipyretic effect in rats. 3-Phenyl-2-propene-1-ol was one of the active compounds isolated from Fr.A. In the present study, we examined the influence of interleukin-1beta (IL-1beta) on prostaglandin E(2) (PGE(2)) release, and the effect of 3-phenyl-2-propene-1-ol on IL-1beta-induced PGE(2) release from rat cerebral endothelial cells (rCMEC). Cultured rCMEC were used in the study. In vitro, cells express typical phenotypic markers of brain endothelium. Using a monoclonal antibody against von Willebrand factor, immunocytochemical analysis revealed positive immunoreactivity in the cytoplasm of cultured cells. rCMEC were incubated in M199 medium containing IL-1beta in the presence or absence of 3-phenyl-2-propene-1-ol. After incubation, the conditioned media were collected and the amount of PGE(2) was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). IL-1beta increased the production of PGE(2) in a dose- and time-dependent manner. 3-Phenyl-2-propene-1-ol significantly decreased IL-1beta-induced PGE(2) release in a dose-dependent manner. Our results indicate that 3-phenyl-2-propene-1-ol inhibits the PGE(2) release from rCMEC stimulated by IL-1beta, and may have an antipyretic effect.     

黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞核因子-κB的影响

目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧/复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064,0.032μmol.mL^-1栀子苷,0.028,0.014,0.007μmol.mL^-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006μmol.mL^-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术检测核因子-κB(NF-κB)亚单位p65的表达,计算平均吸光度和平均面积,比较NF-κB蛋白表达的变化,计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较NF-κB核移位的变化。结果:模型组NF-κB蛋白表达和核移位显著高于正常组(P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值低于模型组,但差异无统计学意义。所有给药组的平均面积均低于模型组(P<0.01)。所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组(P<0.01,P<0.01)。所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组(P<0.01)。结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧/复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制NF-κB蛋白表达和核移位。     

丹红注射液对乳鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的 研究丹红注射液对缺氧致原代培养的乳鼠脑微血管内皮细胞（rBMECs）损伤的保护作用。方法 原代培养rBMECs,并对其进行兔抗鼠VIII因子鉴定。实验设对照组,缺氧模型组,丹红注射液低、中、高剂量（25、50、100 μL/mL）组,给药后,rBMECs缺氧4 h。显微镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率及DNA的量,按试剂盒方法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平、细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 丹红注射液50、100 μL/mL可显著对抗缺氧造成的损伤,明显改善rBMECs形态,使缺氧所致细胞凋亡数明显减少,有效抑制缺氧诱导的rBMECs发生G₁/S期阻滞,抑制LDH释放,增强SOD活性。结论 丹红注射液对缺氧所致原代培养的rBMECs损伤具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力、抑制细胞凋亡有关。     

黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用。方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤模型,用1.024,0.512,0.256,0.128,0.064,0.032,0.016,0.008μmol.mL^-1栀子苷,0.224,0.112,0.056,0.028,0.014,0.007,0.003μmol.mL^-1黄芩苷和0.192,0.096,0.048,0.024,0.012,0.006,0.003μmol.mL-1小檗碱分别作用于正常组和模型组细胞。细胞活性用MTT比色法检测。结果:0.128,0.064,0.032μmol.mL^-1栀子苷,0.028,0.014,0.007μmol.mL-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006μmol.mL^-1小檗碱能够比较理想的保护缺氧4 h复氧12 h损伤的大鼠脑微血管内皮细胞。结论:适当浓度的栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤主要成分可以保护脑微血管内皮细胞。     

脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型的建立及牛胆酸的保护作用

目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型,并观察了牛胆酸对其影响。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,以氧糖剥夺(Krebs液)再复氧复糖模型模拟缺血再灌注损伤,并用牛胆酸进行了干预,用MTT比色法测定A值代表细胞生存活性。结果:氧糖剥夺4h再复氧复糖12h可造成培养大鼠脑微血管内皮细胞损伤,牛胆酸干预后A值明显高于模型组(P<0.01)。结论:牛胆酸可显著减轻脑微血管内皮细胞体外模拟缺血再灌注细胞损伤。     

实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响

目的　比较槐耳清膏与IL - 2对抑癌基因PTEN表达和IL - 2R阳性细胞的影响。方法　应用二乙基亚硝胺 (DENA)制备 4 0只大鼠肝癌模型 ,分为 5组 ,对照组 (G1)、单纯诱癌组 (G2 )、诱癌加槐耳清膏组 (G3)、诱癌加 9周后槐耳清膏组 (G4 )和诱癌加 9周后IL - 2组(G5 )。于实验第 2 0周处死动物取肝组织 ,用RT -PCR检测PTEN表达 ,免疫组化检测IL - 2R阳性细胞 ,并通过计算机图像分析系统分别比较各组中PTEN的表达量和IL - 2R阳性细胞数。结果　G3,G4 ,G5肝癌的形成率明显降低 ,肝内IL - 2R阳性的活化T细胞数G3和G5显著高于其他各组 (P均 <0 .0 1)。在G5中 ,无癌形成的肝内IL - 2R阳性细胞数显著高于有癌形成者。PTEN相对表达量G3显著高于G2 (P <0 .0 1)。结论　槐耳清膏和IL - 2均能增加肝内IL - 2R阳性细胞数 ,增强体内细胞免疫功能 ,有效抑癌 ;槐耳清膏还能抑制抑癌基因PTEN的缺失而发挥抑癌作用 ,槐耳抗癌的应用前景将优于IL - 2。