肝门部胆管癌中乙肝、丙肝病毒感染与p53异常表达的关系及意义

目的 探讨乙肝病毒，丙肝病毒感染在肝门部胆管癌发病中的作用及与p53异常表达的关系。方法 采用免疫组织化学方法对68例石蜡包埋肝门部胆管癌标本中的HBV－X，HCV－C和p53蛋白进行检测，并结合临床资料进行分析。结果 68例肝门部胆管癌中乙肝病毒X蛋白阳性率为8．8％（6／68），丙肝病毒C蛋白阳性率为35％（24／68），两者均阳性1例（1．5％）；p53蛋白阳性率为45．6％（31／68）。乙肝，丙肝病毒感染的肝门部胆管癌在分化和浸润程度，淋巴结转移，根治程度与非病毒感染的肝门部胆管癌有明显差异，p53与乙肝病毒X，丙肝病毒C蛋白表达呈显著的正相关（P＜0．001）。结论 乙肝，丙肝病毒感染与肝门部胆管癌发生有关。乙肝，丙肝病毒感染的肝门部胆管癌恶性程度高，可能有较差的预后。HBV－X，HCV－C蛋白可能在HBV，HCV感染肝门部胆管癌的病因中起重要作用，p53蛋白在肝门部胆管癌中的异常表达与HBV，HCV感染有关。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对肝门部胆管癌ras p21、p16蛋白表达的调控作用

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C蛋白)导致肝门部胆管癌发生的机制.方法用免疫组织化学过氧化物酶-抗过氧化酶(PAP)法对36例肝门部胆管癌及其癌旁肝组织的HCV C蛋白和ras p21及p16蛋白进行检测,并对比分析HCV C蛋白对上述癌基因和抑癌基因蛋白产物表达的影响.结果 36例肝门部胆管癌患者中HCV C蛋白阳性表达率为61.1%(22/36),癌旁组织中HCV 核心蛋白的阳性表达率为38.9%(14/36),两种组织间差异有非常显著性(P<0.01).HCV C蛋白阳性组rasp21蛋白的阳性表达率和p16蛋白表达缺失率分别为59.1%(13/22)和81.8%(18/22),而HCV C蛋白阴性组rasp21蛋白的阳性表达率和p16蛋白表达缺失率分别为14.3%(2/14)和35.7%(5/14) .结论肝门部胆管癌的发生与HCV感染有关;HCV C蛋白致癌的分子机制可能涉及癌基因rasp21和激活和抑癌基因p16功能的受抑.     

p27蛋白在肝门部胆管癌的表达及临床意义

目的探讨p27蛋白在肝门部胆管癌的表达及临床意义。方法采用免疫组化方法测定44例肝门部胆管癌及8例正常胆管组织中p27蛋白的表达情况。结果p27表达的阳性率为77．2％，以低表达为主。p27的表达与肿瘤的分化、淋巴转移及神经浸润显著相关（P〈0．05）。p27蛋白高、低及阴性表达组的平均生存时间分别为84个月、72个月与65个月。p27蛋白低表达组与缺失组的生存曲线明显低于高表达组生存曲线。结论肝门部胆管癌中p27的表达是反映肝门部胆管癌生物学行为和判断预后的重要指标。     

Survivin蛋白在肝门部胆管癌中的表达及其与p53相关性的研究

目的：检测肝门部胆管癌中凋亡抑制因子Survivin蛋白的表达，研究其与肝门部胆管癌的临床特征的关系，并探讨其与p53的相关性。方法：采用免疫组织化学方法检测86例肝门部胆管癌组织、10例癌旁组织（距肿瘤边缘约1．0cm）及10例正常胆管组织中Survivin蛋白和p53蛋白的表达，结合临床病理学资料进行统计学分析。结果：86例肝门部胆管癌组织中，Survivin蛋白阳性率为82．6％（71／86），p53蛋白阳性率为76．7％（66，86），Survivin与p53在癌旁组织和正常胆管组织中均呈阴性表达，与癌组织相比差异有统计学意义（P〈O．05）；Survivin表达与肝门部胆管癌病理分级、Bismuth分型、患者的性别及年龄和肿瘤大小均无关（P〉0．05），但淋巴结转移阳性组Survivin蛋白表达水平明显高于淋巴结转移阴性组，差异有统计学意义（P〈0．05）；p53蛋白在肝门部胆管癌中与肿瘤组织病理分级、淋巴结有无转移相关（P〈0．05），与其他病理学特征无关（P〉O．05）。71例Survivin阳性表达者中同时表达p53阳性者58例，15例阴性表达者中表达p53阳性者8例，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：肝门部胆管癌组织中Survivin和p53的表达显著高于癌旁组织和正常胆管组织，其在肝门部胆管癌的发展、转移过程中可能具有重要作用。     

肝门部胆管癌mdr—1 mRNA的表达及与临床病理指标间的关系

目的：检测肝门部胆管癌新鲜组织中多药耐药基因（mdr-1)mRNA表达,探讨其与肝门部胆管癌和12例正常胆管mdr-1 mRNA进行了检测,并与癌组织的分化程度,病理类型,部位,浸润转移对比研究。结果：26例肝门部胆管癌组织中mdr-1 mRNA阳性表达率为65．4（17／26）,正常胆管,组织表达率为8．3（1／12）,二者差异有显著性（P＜0．01）,mdr-1 mRNA阳性表达与肝门部胆管癌的分化程度,发生部位,病理类型,浸润转移无关（P＞0．05）,结论：肝门部胆囊癌中有mdr-1 mRNA的高表达,mdr-1阳性可做为肝门部胆管癌化疗耐药的指标。     

DPC4蛋白在不同部位胆道恶性肿瘤中的缺失表达

目的探讨DPC4蛋白的缺失表达与胆道恶性肿瘤发病机制的关系. 方法我们通过免疫组织化学法检测了71例原发性胆道恶性肿瘤中DPC4蛋白的表达,其中包括38例胆总管癌,18例胆囊癌,15例肝门部胆管癌.另外,胆总管癌按是否伴远处转移分为转移组(27例)和非转移组(11例). 结果 DPC4蛋白的缺失表达率在胆总管癌中为47.3%,在胆囊癌中为11%,在肝门部胆管癌中为13%.胆总管癌中的DPC4蛋白的缺失表达率与胆囊癌中的和肝门部胆管癌中的相比差异有极显著性(P<0.01).在胆总管癌转移组中DPC4蛋白的缺失表达率为48.1%,在非转移组为45.4%(P>0.05). 结论 DPC4基因的失活与胆道恶性肿瘤的发生关系密切,且其在不同部位的胆道恶性肿瘤中失活率差异较大,但与胆总管癌的远处转移关系不明显.     

肝门部胆管癌病理学及分子生物学特征的研究

目的探讨肝门部胆管癌的病理学和分子生物学特征。方法分析68例肝门部胆管癌病例的病理学类型、神经和淋巴结浸润发生率；比较不同分化程度组患者血清CA19-9和CEA含量；免疫组织化学法观察肿瘤预后相关基因产物Her-1、Her-2、p170、血管内皮生长因子（VEGF）及突变型p53蛋白；细胞角蛋白CK7、CK18、CK19、CK20；增殖相关蛋白Ki-67、Top-Ⅱ的表达情况。结果68例患者肿瘤病理学类型全部为腺癌，中、低分化腺癌占85．29％；神经浸润发生率为91．18％、淋巴结浸润率为27．94％。高、中、低分化腺癌组，患者血清CA19-9、CEA含量之间的差异元统计学意义（P〉0．05）。Her-1、Her-2、p170、VEGF和突变型p53阳性表达率分别为26．1％、21．7％、51．2％、36．O％和48．8％。CK7、CK18、CK19阳性表达率均为100％。Ki-67、Top-Ⅱ阳性率分别为93．3％、83．7％；Kappa检验显示，Ki-67与Top-Ⅱ对胆管癌细胞增殖程度的检验效果一致性较好（P〈0．01）。结论肝门部胆管癌以中、低分化腺癌为主；肿瘤具有很高的神经浸润发生率；血清CA19-9、特异性角蛋白检测有助于肝门部胆管癌的鉴别诊断；Ki-67与Top-Ⅱ对肿瘤增值程度的检测效果相当。     

血管生成在肝门部胆管癌发生发展中作用的研究

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和血管生成与肝门部胆管癌发生发展的关系。方法　应用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)和免疫组化技术对2 6例肝门部胆管癌、癌周组织及 12例正常组织中VEGFmRNA和蛋白及微血管密度 (MVD)进行检测。结果　 2 6例肝门部胆管癌组织中VEGFmRNA阳性表达率为 77% (2 0 / 2 6 ) ;癌周组织阳性表达率为2 7% (7/ 2 6 ) ;正常组织表达率为 8% (1/ 12 ) ,三者差异有显著性 (P <0 0 1)。VEGFmRNA阳性表达与VEGF蛋白表达具有一致性 ;VEGFmRNA阳性者MVD值显著高于阴性者 (P <0 0 1) ;VEGFmRNA表达和MVD与肝门部胆管癌的分化程度、浸润转移密切相关 (P <0 0 5 ) ,而与肿瘤发生部位、病理类型、大小、临床分型无关 (P >0 0 5 )。结论　VEGF在肝门部胆管癌的发生和浸润转移过程中发挥重要作用 ,肿瘤血管生成与肝门部胆管癌浸润转移密切相关。     

β-连环蛋白在肝门部胆管癌中的表达及其与c-myc表达的关系

目的　探讨 β 连环蛋白异常表达和c myc阳性表达在肝门部胆管癌发生、发展过程中的作用及其机理。方法　应用免疫组织化学SP法对 4 2例肝门部胆管癌及 10例胆管良性病变组织中的 β 连环蛋白和c myc蛋白进行检测 ,并结合临床资料进行分析。结果　β 连环蛋白在 10例胆管良性病变组织中均呈正常表达 ,且c myc均呈阴性表达 ;而在 4 2例胆管癌患者中 30例癌组织细胞胞浆内的 β 连环蛋白的异常表达率明显高于胆管良性病变组织 ,且异常表达率与肝门部胆管癌的淋巴结转移显著相关 (P<0 .0 5 ) ,而与肝门胆管癌大小、分化程度和侵袭状况无关 (P>0 .0 5 )。胆管癌中c myc表达阳性率与肝门胆管癌的大小、侵袭状况及淋巴结转移无关 (P>0 .0 5 ) ,而与肝门部胆管癌的分化程度密切相关 (P<0 .0 5 )。β 连环蛋白异常表达与c myc阳性表达在肝门部胆管癌中呈显著的正相关性 (r =0 .32 4 ,P<0 .0 1)。结论　肝门部胆管癌细胞中存在 β 连环蛋白异常表达和c myc蛋白阳性表达的现象 ,与胆管癌的一些生物学行为密切相关。β 连环蛋白的异常表达可能是肝门部胆管癌转移的分子机理之一。     

p^21WAF1和p53基因在胆管癌组织中的表达研究

目的 探讨p^21WAF1、p53基因与胆管癌发生发展的关系。方法 采用免疫组化方法,检测48例胆管癌和8例伴慢性炎症的胆管壁组织中p^21WAF1、p53蛋白表达情况。结果 胆管癌中p^21WAF1、p53阳性表达率分别为25％和54％。而伴炎症的胆管组织阳性表达率分别为88％和0。p^21WAF1蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结转移或远处转移以及TNM分期呈显著相关性;而p53则与这些指标无关,与p^21WAF1蛋白无相关性。结论 胆管癌的发生发展可能与p^21WAF1、p53等多基因表达异常有关,p^21WAF1基因异常表达是衡量胆管癌恶性行为的有用指标。     

人非小细胞肺癌P16基因突变研究

目的探讨ｐ１６基因缺失和突变与人非小细胞肺癌发生、发展的关系。方法应用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ分析及ＤＮＡ序列分析技术，对４５例人非小细胞肺癌组织中ｐ１６基因外显子１和外显子２进行基因缺失和突变分析。结果４５例肺癌样品中共检出１９例ｐ１６基因缺失，总的缺失率为４２．２％（１９／４５）。其中纯合型缺失８例（１７．８％），半合型缺失１１例（２４．４％）；外显子１缺失７例（１５．６％），外显子２缺失１２例（２６．７％）；ｐ１６基因外显子２的突变检出率为３１．１％（１４／４５）；ＤＮＡ序列分析显示ｐ１６基因７２位密码子无义突变７例，７５位密码子错义突变７例。结论ｐ１６基因的缺失和突变可能与人非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

不同时期胃癌中p16基因缺失和突变的研究

目的　探讨p16基因纯和缺失和突变与胃癌发生的关系。方法　采用PCR、多重PCR、PCR SSCP和DNA测序技术分析 5 0例胃癌组织中p16基因的表达情况 ,其中早期胃癌 7例 ,进展期胃癌 43例。结果　p16基因总的点突变频率为 8.0 0 % (4 5 0 ) ,早期胃癌为 14 .2 9% (1 7) ,进展期胃癌为 6.98% (3 4 3 ) ,两者比较差异无显著性意义 (P>0 .0 5 ) ;p16基因突变与肿瘤的大小、位置、分化程度和有无淋巴结转移无关 (P>0 .0 5 )。p16基因总的纯和缺失频率为 16.0 0 % (8 5 0 ) ,早期胃癌为 0 (0 7) ,进展期胃癌为 18.60 % (8 4 3 ) ,两者比较差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;p16基因缺失频率与肿瘤分化程度和有无淋巴结转移有关 (P<0 .0 5 )。结论　p16基因点突变是胃癌发生的早期事件 ,对胃癌早期诊断有一定帮助 ;p16基因纯和缺失是胃癌的晚期事件 ,可能与胃癌的转移和复发有关。     

Concordant loss of MTAP and p16/CDKN2A expression in gastroesophageal carcinogenesis: evidence of homozygous deletion in esophageal noninvasive precursor lesions and therapeutic implications

The gene that encodes methylthioadenosine phosphorylase (MTAP), an enzyme involved in adenine and methionine salvage pathways, is located on chromosome 9p21 telomeric to the p16INK4A/CDKN2A tumor suppressor gene. Inactivation of the p16INK4A/CDKN2A gene occurs by three different mechanisms: hypermethylation of the gene promoter, intragenic mutation coupled with loss of the second allele, and homozygous deletion. Immunohistochemical labeling for the p16INK4A/CDKN2A gene product parallels gene status but does not elucidate the mechanism of gene inactivation. Since the MTAP gene is often co-deleted with p16INK4A/CDKN2A, concurrent immunolabeling for both proteins can identify cases with homozygous p16INK4A/CDKN2A gene deletion. MTAP loss itself has therapeutic implications since it may confer selective sensitivity to inhibitors of de novo purine biosynthesis, such as L-alanosine. Twelve tissue microarrays were constructed from 92 cases of Barrett-associated adenocarcinomas and precursor lesions and 112 cases of gastric adenocarcinoma and precursor lesions comprising 1161 individual cores. Multiple cores were arrayed from any given case, and when available, included the entire histologic spectrum of intestinal metaplasia-dysplasia-carcinoma. Tissue microarrays were labeled with monoclonal antibodies against MTAP protein (clone 6.9, Salmedix, Inc) and p16 (clone 16P07, Neomarkers). Complete loss of labeling was considered negative, while any labeling (p16: nuclear; MTAP: cytoplasmic and nuclear) was considered positive. Loss of MTAP labeling occurred exclusively in conjunction with loss of p16 labeling, confirming that the previous findings from this group that concurrent loss of MTAP and p16 labeling is a surrogate marker of 9p21 homozygous deletions. Complete loss of MTAP and p16 was seen in 4 of 25 (16%) patients with Barrett's esophagus, 4 of 18 (22%) with low-grade dysplasia, 5 of 39 (13%) with high-grade dysplasia, 17 of 78 (22%) with invasive adenocarcinoma, and 8 of 36 (22%) of metastases. There were 7 cases of esophageal adenocarcinoma with loss of both MTAP and p16 for which precursor lesions were available. In 6 on these 7 cases (85%), the precursor lesion(s) had loss of both MTAP and p16. Lack of MTAP and p16 expression was seen in 11 of 106 (10%) cases of gastric adenocarcinoma. All metaplastic (30 biopsies from 20 cases) and dysplastic (15 biopsies from 13 cases) gastric tissues had both intact MTAP and p16INK4A/CDKN2A gene products. No precursor lesions were available from the gastric cancers that had loss of both MTAP and p16. Two benign gastric hyperplastic polyps also had intact p16 and MTAP. Concurrent MTAP and p16 loss detected by immunohistochemistry can serve as a convenient surrogate for p16INK4A/CDKN2A gene homozygous deletion in archival tissues. Inactivation of p16INK4A/CDKN2A by homozygous deletion appears to be an early event in Barrett carcinogenesis, occurring in noninvasive precursor lesions, including nondysplastic Barrett mucosa, in subsets of cases. In the absence of MTAP, cells depend exclusively on the de novo synthesis pathway for production of adenosine. This loss of MTAP during 9p21 homozygous deletion might be exploited therapeutically using de novo purine synthesis antimetabolites to treat a subset of invasive gastroesophageal adenocarcinomas and esophageal precursor lesions.     

乳腺癌细胞p16基因的研究

目的 探讨Ｐ１６基因在乳腺癌中的突变形式和频率以及有效的检测手段。方法 采用细胞２,反复贴壁法纯化人乳腺癌细胞、经多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析技术。对１４例纯化乳腺癌细胞标本,１４例新鲜未纯化标本和２７例石蜡包埋标本及相应的癌旁乳腺组织标本的这６基因突变进行了对比性研究。结果 纯化的癌细胞组Ｐ１６基因突变率为４２．９％,而新鲜未纯化细胞组、石蜡包埋细胞组及癌旁乳腺细胞组的Ｐ     

P16基因突变在人胰腺癌中作用的研究

目的 探讨P16基因的突变在人胰癌发生及侵袭转移中的作用,为临床提供有益的帮助。方法 应用PCR、PCR－SSCP、DNA测序技术,研究P16基因的突变情况。结果 在35患者胰腺癌标本中,发现在12例在P16基因第二外显子部分存在至少522bp的纯合缺失,另有7例存在2个点突变,总突变率为54．3％,而癌旁组织无P16基因的突变,统计学分析表明P16基因的突变与人胰腺癌多种生物学及临床分期Ⅲ期有明确的关系。结论 研究结果提示P16基因的突变人胰腺癌的发生、组织分化、浸润程度、淋巴结转移及临床分期有明显的相关性,有助于判断胰腺癌的恶性程度和患者的预后。     

原发性肝细胞癌中p16蛋白的表达及其基因的缺失性研究

目的　研究原发性肝细胞癌中p16蛋白的表达及其基因的缺失情况,探讨p16基因与肝癌的关系。　方法　采用回顾性调查研究方法,收集我院原发性肝癌25例,用免疫组织化学SP法、聚合酶链反应（PCR）方法检测肝癌及癌旁组织中p16蛋白的表达及其基因的扩增情况。　结果25例肝癌中,p16蛋白阴性表达率为68%（17/25）,癌旁组织中p16蛋白阴性表达率为4%（1/25）。两者差异有显著意义(P<0.01)。p16蛋白的表达与肝癌分化程度关系密切(P<0.05),而与癌灶体积、甲胎球蛋白（AFP）值的差异无显著意义(P>0.05)。p16基因在癌组织中的缺失率（28%,7/25）显著高于癌旁组织（4%,1/25）（P<0.05）。p16基因缺失与肝癌分化程度、癌灶体积、AFP值无关(P>0.05)。　结论　p16基因失活与肝癌发生关系密切。除了基因缺失之外,还有其他引起p16基因失活的因素存在。p16蛋白的检测可能是预测病人预后的一个指标,但尚需进一步证实。     

胆管癌中PTEN和p16抑癌基因蛋白的表达及其临床意义

目的　探讨抑癌基因PTEN和p16蛋白表达与胆管癌生物学行为的关系。方法　应用免疫组化方法检测 43例胆管癌组织和 10例慢性胆管炎胆管壁组织的PTEN和p16基因蛋白的表达 ,并综合分析它们与胆管癌临床病理因素间的关系。结果　在胆管癌组织中 ,PTEN和p16表达阳性率分别为3 9 .5 %和 44 .2 %。PTEN和p16表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移密切相关 (P <0 .0 5 )。PTEN表达与p16表达呈正相关 (r =0 .62 ,P <0 .0 0 5 )。结论　检测PTEN和p16抑癌基因表达可作为评估胆管癌生物学行为和预后的参考指标。     

CDKN2/p16基因存在状态与肺癌

目的　研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在肺癌发展中的作用。方法　采用免疫组化和改良标本处理的PCR技术 ,对 89例肺癌病人手术标本CDKN2 /p16基因第 1、2外显子纯合缺失和P16蛋白表达丢失情况进行分析对比研究。结果　CDKN2 /p16基因第 1或 (和 )第 2外显子总缺失率为2 5 8% (2 3/ 89) ,P16蛋白丢失率为 47 2 % (4 2 / 89) ,基因的缺失和蛋白的丢失集中发生于非小细胞肺癌(NSCLC) ,并与转移和分期有关。结论　CDKN2 /p16基因的异常可能是NSCLC区别于小细胞肺癌(SCLC)的特有的分子事件 ,其在NSCLC的发生发展中起一定的负调控作用     

原发性肝癌及癌旁组织中抑癌基因p16的表达及其临床意义

目的 探讨抑癌基因ｐ１６在肝癌及癌旁中的表达及意义。方法 应用免疫组化方法对５０例肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌旁肝硬化组织（４４例）手术切除石蜡包埋标本进行Ｐ１６基因蛋白表达的测定,结合临床病理指标进行分析。结果 ｐ１６基因在ＨＣＣ中的阳性表达４８％（２４／５０）,癌旁９１％（２４／５０）,癌旁９１％（４０／４４）。ｐ１６基因表达与ＨＣＣ的分化程度密切相关（ｐ＝０．０１４）,在分化Ⅰ－Ⅱ级中ｐ１６阳性率     

结直肠癌p16/MTS1基因纯合缺失的研究

目的 探讨p16/MTS1基因结合缺失与结直肠癌的发生及临床病理关系.方法 采用聚合酶链反应方法,对68例结直肠癌组织中p16/MTS1基因纯合缺失进行检测.并用Fisher精确检验的方法,对p16/MTS1基因纯合缺失与临床病理关系进行统计分析.结果 68例结直肠癌组织,p16/MTS1基因纯合缺失率为35.29%.Duekes C、D期的缺失率明显高于Duckes A、B期(P<0.05).低分化腺癌p16/MTS1基因纯合缺失率(11/16)高于高分化腺癌肿瘤(4/25)(P<0.05).侵犯到浆膜及浆膜外者p16/MTS1基因纯合缺失率高于侵犯在浆膜内者(P<0.05).结论 p16/MTS1基因纯合缺失与结直肠癌的临床分期、病理分化、肌层浸润等生物学特征有关.