两性霉素B/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯纳米粒的体外细胞摄取研究

目的：研究聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯(PEG-PBLG)纳米粒对两性霉素B(AmB)的增溶作用和纳米粒的体外巨噬细胞摄取特性，方法：透析法制备AmB／PEG-PBLG纳米粒，HPLC法测定AmB的含量，荧光分光光度计测定芘标记纳米粒的细胞摄取率。结果：不同分子量的0．2％(w/v)PEG-PBLG纳米粒分散液中，AmB的浓度为714．1～961．2μg/mL，与在水中的溶解度相比提高了85．0～114．4倍。PEG所占比例高的Py-NP99(E／G=64／36)的细胞摄取率约为Py-NP114(E／G=33／76)的1／2。表明Pv-NP99能有效抑制血浆蛋白吸附，逃避MPM摄取。结论：PEG-PBLG纳米粒可有效增溶AmB，并且随PEG比例的增加纳米粒抗吞噬能力增强，有利于AmB非lIES部位的转运．     

PPLA纳米微球的溶血率与粒径相关性研究

目的 研究新型聚乙二醇接枝聚乳酸(PPLA)自组装纳米微球浓度、微球粒径对溶血率的影响.方法 研究按照国家医疗器械生物学评价IS010993.1-1997和GB/T16886.1-2001标准和要求进行,采用透析法,用动态激光光散射仪(DLS)进行粒径及Zeta电位检测,制备不同浓度、不同行粒径的PPLA自组装纳米微球.就制备的纳米微球采用水浴法及测量540 nm处光密度值并计算出纳米微球的溶血率.结果 随着微球浓度的增加,溶血率增加,粒径为960.8 nm的微球,在浓度为2.0 mg/mL时出现了轻度溶血;相同浓度(1.0 mg/mL或1.5 mg/mL)的微球,随着粒径(200 ～ 300 nm)的减小,溶血率增加,但都小于5％,可作注射用;在0.9％ NaCl溶液中,PPLA纳米微球的临界溶血浓度为1.5～2.0 mg/mL,在此范围符合国家药物溶血标准.结论 纳米药物的纳米效应对其临床应用存在负面影响,粒径在纳米微球的溶血及其他性能评价存在显著影响,相同浓度下,微球的粒径越大,溶血率越小.     

化学沉淀法制备纳米HAP-sol及其血液相容性研究

目的:研究改性后的纳米HAP粒子的血液相容性.方法:采用化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石溶胶(HAP-sol),以聚丙烯酸纳(PAA-Na)为稳定剂.通过体外溶血试验和血淋巴细胞毒性试验(MTT法)来评价HAP-sol的血液相容性.结果:红细胞溶血率在0～3%之间,细胞毒性分级为0级或1级,纳米HAP-sol对血红细胞无溶血作用,也没有明显的细胞毒性效应.结论:以PAA-Na为稳定剂,纳米HAP-sol有良好的血液相容性,纳米HAP-sol用于静脉注射药物有一定的安全性.     

纳米载银基托树脂的生物相容性评价

目的:研究纳米载银基托树脂的生物相容性,为纳米载银基托树脂的临床应用提供生物学依据.方法:根据中华人民共和国医药行业标准,用分子滤过法检测纳米载银抗菌剂--载银磷酸复盐STR-1质量分数分别为5 g/L和10 g/L的纳米载银基托树脂的细胞毒性,并测定含两种不同质量分数抗菌剂STR-1的基托树脂与抗菌剂粉体STR-1的溶血率.结果:不含抗菌剂的对照组基托树脂、抗菌剂质量分数分别为5 g/L和10 g/L的纳米载银基托树脂对小鼠成纤维细胞L929无毒性作用,细胞培养第2小时及第24小时,对照组和实验组滤膜染色均匀,呈蓝色,染色密度无变化,褪色面积为0 mm²,毒性分级均为0级.抗菌剂粉体STR-1、含5 g/L和10 g/L抗菌剂的载银基托树脂溶血率分别为1.7%,3.5%和3.7%,溶血率均小于国家医药行业标准规定的5%,为无溶血作用.结论:抗菌剂STR-1含量分别为5 g/L和10 g/L的纳米载银基托树脂具有较好的生物相容性,具备了临床应用的前提.     

巯基化羧甲基壳聚糖载醋甲唑胺纳米球滴眼剂的生物安全性评价

目的:研究巯基化羧甲基壳聚糖载醋甲唑胺纳米球滴眼剂的生物相容性。方法:以巯基化羧甲基壳聚糖为载体,包裹醋甲唑胺得到载药纳米球,制备成滴眼剂。采用迟发超敏试验、细胞毒性试验(MTT法和LDH法),对该滴眼剂进行生物安全性评价。结果:醋甲唑胺纳米球滴眼剂对豚鼠皮肤未出现红斑水肿现象,无致敏性,细胞毒性反应为2级,LDH释放率为37.09 %,MTT试验和LDH试验IC50结果为0.24 g/mL和0.54 g/mL。结论:醋甲唑胺纳米球滴眼剂具有良好的生物相容性。     

萘普生/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯共聚物纳米胶束

[目的]研究萘普生(naproxen)/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯共聚物(PEG-PBLG)纳米胶束的制备、形态和体外释药规律。[方法]合成了PEG-PBLG两亲嵌段共聚物;采用透析法制备了萘普生/PEG-PBLG载药胶束;通过透射电镜观察、动态光散射测定、紫外吸光度测定等手段分析胶束的微观形态、粒径大小和载药量、测定了载药胶束的体外释药速率。[结果]萘普生/PEG-PBLG载药胶束粒径在30～245 nm范围,胶束呈核-壳型结构,PEG-PBLG胶束可大大增溶疏水性药物,萘普生/PEG-PBLG胶束具有缓释作用,萘普生的体外释放速率大小主要由介质的pH值决定,也受胶束粒径的影响。[结论]PEG-PBLG载药胶束是一种缓释性能良好、有应用前景的纳米胶束。     

沉降法制备新型聚氨酯血液相容性材料

采用一种新型聚氨酯纳米微球（PUI-NPs）修饰聚氨酯（PU）薄膜,利用沉降法制备出具有良好血液相容性的聚氨酯/聚氨酯纳米微球(PU/PUI-NPs)。以扫描电镜、红外光谱、X射线光电子能谱对PU/PUI-NPs膜表面结构进行表征。以血小板黏附、复钙、溶血和蛋白吸附实验对PU/PUI-NPs膜的血液相容性进行了表征。结果表明:PUI-NPs已被成功引入PU膜表面,PU/PUI-NPs膜的血液相容性比PU有显著的提高,相比于PU,PU/PUI-NPs膜的细胞毒性更低。     

纳米羟基磷灰石人工骨的毒性与细胞相容性实验研究

目的评价纳米羟基磷灰石人工骨的毒性与细胞相容性相容性,从而为运用于骨缺损修复提供有关安全性的数据和资料.方法对新型纳米羟基磷灰石人工骨进行亚急毒性试验、抑菌试验、热原试验、细胞毒性试验、溶血试验等试验.结果此纳米羟基磷灰石人工骨材料无毒,无抑菌作用,不引起溶血,不含致热原物质.结论此纳米羟基磷灰石材料具有很好的安全性和细胞相容性     

纳米羟基磷灰石/聚氨基酸复合材料生物安全性评价

目的 初步评价新型骨修复材料纳米羟基磷灰石/聚氨基酸(nano-hydroxyapatite and poly-amino acid, n-HA/PAA)的生物安全性.方法 按照ISO10993-1标准中规定以自制n-HA/PAA为实验组进行以下实验: ①体外细胞毒性实验:采用L929成纤维细胞,完全培养基为阴性对照,苯酚为阳性对照,通过细胞形态学、MTT试验以及流式细胞进行细胞毒性评价;②全身急性毒性实验:以生理盐水为阴性对照组观察2组小鼠腹腔注射材料浸提液和生理盐水后72 h内有无中毒和死亡现象;③致敏试验:白化豚鼠30只均分3组,以生理盐水为阴性对照组、二硝基氟苯丙酮溶液为阳性对照组观察各组动物致敏区有无红肿和红斑,并记分;④溶血实验:生理盐水作为阴性对照组,灭菌蒸馏水为阳性对照组,分别加入抗凝兔血后计算溶血率;⑤热源实验:新西兰大白兔3只,按10 ml/kg注射材料浸提液,测量正常体温与注射后连续 3 h 内每小时体温的差值;⑥遗传毒性实验:KM小鼠30均分3组,分别按100 g/kg间隔24 h注射材料浸提液、环磷酰胺及生理盐水2次,观察骨髓嗜多染红细胞及含微核小体的骨髓嗜多染红细胞,并计算微核率.结果 体外细胞毒性实验观察材料对细胞形态与生长无明显影响,MTT检测实验组细胞毒性为1级,流式细胞仪检测材料不会引起细胞凋亡;全身急性毒性实验显示实验组动物无中毒及死亡;致敏试验显示致敏区无水肿及红斑;溶血实验表明材料溶血率为0.71%,符合小于5%的实验标准;热源实验显示实验动物无明显体温升高;遗传毒性实验显示材料微核试验阴性,无遗传毒性.结论 n-HA/PAA复合材料具有良好的生物安全性.     

明胶/壳聚糖创伤敷料的生物安全性评价

目的:对明胶/壳聚糖敷料进行生物安全性评价.方法:进行皮肤刺激,皮肤致敏,细胞毒性和溶血实验,并按照统一的标准判定.结果:皮内注射实验:各组各点局部无红斑、水肿反应;皮肤致敏实验:试验组及空白对照组溶液家兔的致敏率为0%,而阳性对照组为100%,二者相比有显著性差异;溶血实验:除阳性对照组外,各组溶血率均在1%以内,符合规定不大于5%的标准;微核实验:材料浸提液组的微核率为1.6%o,与生理盐水对照组比较无显著性差异(P＞0.05),材料浸提液组与阳性对照组(微核率为20%o)比较有显著性差异(P＜0.01);细胞毒性实验:镜下见纤维细胞生长良好,形态和数量均和对照组无显著性差异,MTT法测得细胞活性和对照组无差别,细胞毒性总评级为0.结论:明胶/壳聚糖生物膜不含致热原、致敏原,无皮肤刺激反应,不引起皮肤过敏反应,无溶血反应,生物安全性保证其可望用于临床.     

庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板的制备及系列研究

目的:制备负载庆大霉素-壳聚糖纳米粒的涂层钛板并对其表面形态?体外释药行为及抗金黄色葡萄球菌的性能进行评价?方法:采用溶剂铸膜(solvent casting)法制备庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板,扫描电镜观察其表面形态,磷酸盐缓冲液中研究其体外释药行为,将庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板置于均匀涂有1 × 108 CFU/ml金黄色葡萄球菌的Mueller-Hinton(MH)平板上连续培养直至抑菌环消失,以抑菌环直径为主要观察指标评价其在体外对金黄色葡萄球菌的抑制作用?结果:扫描电镜示庆大霉素-壳聚糖纳米粒较均匀地分布于钛板表面;体外释药行为显示庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板中庆大霉素的释放可达到14 d,维持在52%左右;体外抑制金黄色葡萄球菌作用可维持9 d,抑菌环最大直径为(3.82 ± 0.03) cm?结论:制备的庆大霉素-壳聚糖纳米涂层钛板表面形态良好,体外释药稳定,对金黄色葡萄球菌有良好的抑制作用?     

白藜芦醇载药纳米微球的制备?表征及体外对胶质瘤U251细胞的抑制作用

目的:用可生物降解的高分子材料制备白藜芦醇载药纳米微球,并检测该载药纳米微球的各项特征,评价其体外抗肿瘤效果?方法:通过开环聚合法制备mPEG -PCL二嵌段共聚物,采用溶剂分散法制备负载白藜芦醇的纳米微球?观察纳米微球的形态?粒径分布?包封率和载药量?体外释放和体外对于恶性胶质瘤细胞株U251的抗肿瘤活性?结果:通过溶剂分散法制备的纳米粒子呈球形,平均粒径为(71.8±0.2)nm,白藜芦醇纳米微球的最高载药量达到19.4%?体外释放实验显示,载药微球具有缓释特性?细胞与负载荧光素纳米微球共培养后发现,细胞可通过胞吞作用将纳米微球摄入?细胞实验表明,白藜芦醇纳米微球对U251细胞的生长有明显的抑制作用,特别是在低浓度下白藜芦醇微球对于肿瘤细胞的杀伤作用明显优于游离白藜芦醇,随着药物浓度的增加白藜芦醇微球与游离白藜芦醇对于肿瘤细胞的杀伤作用相差不大?结论:采用mPEG-PCL为载体制备的白藜芦醇纳米微球具有缓释特性和抑制U251细胞增殖的作用,具有良好的应用价值?     

普乐林注射液的安全性评价

目的 评价普乐林注射液的安全性。方法 观察普乐林注射液对小鼠的急性毒性,对人红细胞的体外溶血作用,对豚鼠致敏性及免疫性溶血的影响。结果 小鼠静注普乐林的LD50为816.7mg/kg;在6h内,未见体外溶血和红细胞凝集反应,未引起豚鼠明显过敏症状,但其红细胞体外溶血分数增加。结论 普乐林注射液对实验动物无明显毒性,但部分豚鼠有发生不同程度免疫性溶血的可能。     

利巴韦林葡萄糖注射液的安全性评价

目的　评价利巴韦林葡萄糖注射液的安全性。方法　观察利巴韦林葡萄糖注射液对小鼠的急性毒性,对家兔红细胞的体外溶血作用,对兔耳血管的刺激性和对豚鼠的致敏作用。结果　小鼠灌胃和静脉注射利巴韦林的ＬＤ５０ 分别为６３０９６ ｍｇ／ｋｇ 和１３８０４ ｍｇ／ｋｇ 。未见明显致敏作用及血管刺激性。在６ 小时内,未见体外溶血和红细胞粘集反应。结论　利巴韦林葡萄糖注射液对实验动物无明显毒性反应。     

低频超声刺激对无机空心纳米微球药物释放影响的体外研究

目的 研究低频超声对无机空心纳米微球携载药物释放的影响,并探讨无机空心纳米载体用作超声靶向药物治疗载体的可行性。方法 以植酸为调控剂,钙盐和亚硒酸盐为反应物,在水热条件下制备无机空心纳米微球。然后以牛血清白蛋白（BSA）为模型药物,载入无机空心纳米微球中,并给予低频超声刺激,测定BSA的释放量。结果 水热条件下成功制备了分散性良好的无机空心纳米微球,低频超声刺激下有利于加速纳米空心微球中BSA的释放,且BSA的释放率随低频超声功率的增加而加快。结论 本方法制备无机纳米空心微球简单、快速,且制备的微球分散良好。低频超声刺激有利于加速无机空心纳米微球中的药物释放速率。该微球有望用作低频超声靶向药物治疗载体。     

Preparation of arsenic trioxide-loaded albuminutes immuno-nanospheres and its specific killing effect on bladder cancer cell in vitro

Background Recently, arsenic trioxide (As2O3) was considered as a novel anti-tumor agent. However, it showed severe toxicity effect on normal tissue at the same time. To improve its therapeutic efficacy and decrease its toxicity, we prepared arsenic trioxide-loaded albuminutes immuno-nanospheres [ As2O3-( HAS-NS)-BDI-1 ] targeted with nonoclonal antibody (McAb) BDI-1 and tested its specific killing effect against bladder cancer cell. Methods As2O3-HAS-NS was prepared by chemical cross-linking method. Monoclonal antibody BDI-1 was purified with ammonium sulphate sahingout and chromatography. Albuminutes microspheres were conjugated with McAb by SPDP cross-linking method. Concentration of As in As2O3-(HAS-NS)-BDI-1 and As2O3-HAS-NS was measured by atomic fluometry method. As2O3- (HAS-NS)-BDI-1 and its activity were detected by SDS-PAGE reduction electrophoresis, indirect immunofluorescence test, light microscope and scanning electron microscope observation. Acridine orange staining and tritiated thymidine (^3H-TdR) incorporation tests were used to indicate soecific killing activity of As2O3-(HAS-NS)-BDI-1 in vitro. Results In As2O3- (HAS-NS)-BDI-1 groups, we saw two protein bands in SDS-PAGE reduction electrophoresis. Albuminutes immuno-nanospheres were rounded with clear green fluorescence by immunofluorescence test. Under microscope, we observed that BIU-87 cells were covered with the As2O3-(HAS-NS)-BDI-1 and that As2O3- (HAS-NS)-BDI-1 moved with the BIU-87 cells. The albuminutes immunonanospheres were tightly junctioned with the BIU-87 cells. Specific killing activity of As2O3-(HAS-NS) -BDI-1 on bladder tumor cells was observed by acridine orange staining and ^3H-TdR incorporation assays. Conclusions As2O3- (HAS-NS)-BDI-1 might bind specifically against BIU-87 cells, thus leading to high activity of killing bladder tumor cells.     

二性霉素B及其脂质体在治疗侵袭性真菌感染中的地位和意义

目的:观察静脉用二性霉素B(AmB)及其脂质体(L-AmB)对侵袭性真菌感染(IF I)的临床疗效及安全性。方法:46例IF I的原发基础病包括血液病32例及非血液系统疾病14例。普通AmB用量为0.5~1.0 m g/(kg.d),L-AmB用量为0.5~2.0 m g/(kg.d),总剂量为215~2950m g,中位数455m g,疗程10~119d,中位数17d。并对进口AmB、L-AmB及国产AmB的抗真菌疗效和副作用进行了比较分析。结果:二性霉素B临床总有效率为73.9%,真菌清除率为71.0%。进口AmB、L-AmB及国产AmB的治疗有效率分别为76.5%、71.5%及73.3%。不良反应发生率中寒颤、发热19.6%,低血钾21.7%,肝、肾功能损害各为10.9%和15.2%。结论:早期诊断、早期治疗及经验性治疗是提高IF I患者生存率、降低死亡风险的关键。只要预防得当,合理用药,定期监测肝肾功能,二性霉素B仍是一相对较为安全有效的药物。     

氟康唑与两性霉素B抗白假丝酵母菌临床分离株的实验研究

目的评价白假丝酵母菌临床分离株对氟康唑(FCZ)与两性霉素B(AmB)的敏感性及两药相互作用的方式. 方法采用美国国家临床实验室标准化委员会M27-A推荐的棋盘微量稀释法,检测了22株白假丝酵母菌临床分离株对FCZ、AmB及两药联合的体外药物敏感性,同时对两药的作用方式进行了判定. 结果联合用药时,FCZ MIC值的几何均数从0.369 mg/L显著降低到0.227 mg/L,AmB MIC值的几何均数从0.223 mg/L显著降低到0.118 mg/L,22.73%受试菌表现为协同作用方式,63.14%的受试菌株表现为相加作用方式,13.64%受试菌株表现为无关作用方式,未观察到拮抗作用的出现.测定不同浓度下药物单独和联合作用的1株菌的菌落形成单位(cfu/ml),联合用药组都较单独用药组有明显减少,且对HF细胞和Hep-2细胞无毒性.结论 FCZ与AmB联合较任一药物单独使用体外抗白假丝酵母菌的活性高,且具有差异毒力.     

庆大霉素-壳聚糖纳米粒治疗兔慢性骨髓炎的实验研究

目的:探讨庆大霉素-壳聚糖纳米粒(gentamicin loaded chitosan nanospheres,GS/CS NPs)对兔慢性胫骨骨髓炎的治疗作用?方法:取48只兔制作慢性胫骨骨髓炎模型,造模3周后行大体观察及患肢X线检查?44只兔造模成功后行不同治疗,A组:未特殊治疗;B组:患肢髓腔壳聚糖纳米粒填塞;C组:患肢髓腔庆大霉素粉末填塞;D组:患肢髓腔GS/CS NPs填塞?治疗3周后行患肢X线片检查及Norden评分?髓腔大体观及髓腔内容物细菌学培养,患肢标本行组织学观察及Smeltzer病理评分?结果:治疗3周后A?B?C组均出现明显的慢性骨髓炎X线表现,髓腔脓肿形成,髓腔内容物细菌学培养阳性,组织学观察示中性粒细胞浸润?骨小梁破坏,A?B组尚可见死骨形成,D组治疗后未见明显阳性表现?Norden评分D组较A?B?C组均有统计学意义(P < 0.05),Smeltzer病理评分D组较A?B?C组均有统计学意义(P < 0.05)?结论:庆大霉素-壳聚糖纳米粒作为局部释药系统治疗兔慢性骨髓炎具有良好的效果?