不同浓度胰岛素作用的Ishikawa细胞中白血病抑制因子（LIF）的表达研究

目的探寻高胰岛素（INS）对子宫内膜腺上皮细胞白血病抑制因子（LIF）表达的影响,探讨多囊卵巢综合征（PCOS）常见的胰岛素抵抗（IR）对其内膜容受性的影响。方法体外培养高分化子宫内膜腺癌细胞Ishikawa,分别采用浓度为10mU／L、30mU／L、90mU／L的INS溶液作用细胞24h,使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各浓度组细胞培养上清液中LIF水平。结果对照组LIF表达水平均高于各INS作用组;不同浓度INS作用组间无差异。结论不同浓度INS溶液作用的Ishikawa细胞培养上清液中LIF均呈低水平表达,提示IR可能成为影响PCOS患者内膜容受性因素之一,造成PCOS患者不良的生殖结局。     

催乳素细胞腺瘤患者IGF-1及IGFBP-3的表达和意义

目的 分析催乳素细胞腺瘤患者胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor 1,IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白（insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3）的表达及其临床意义。方法 选取2018年1月至2021年12月昆明医科大学第二附属医院收治的60例催乳素细胞腺瘤患者作为研究组,选取同期进行健康体检的60名志愿者作为对照组。比较研究组及对照组IGF-1和IGFBP-3的表达情况及IGF-1/IGFBP-3比值。结果 研究组IGF-1表达水平及IGF-1/IGFBP-3比值均高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）,但两组IGFBP-3表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;不同性别的催乳素细胞腺瘤患者IGF-1表达水平及IGF-1/IGFBP-3比值比较,差异无统计学意义（P>0.05）,侵袭性肿瘤患者的IGF-1表达水平及IGF-1/IGFBP-3比值较非侵袭性肿瘤患者高,差异均有统计学意义（P<0.05）。通过受试者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析,IGF-1表达水平及IGF-1/IGFBP-3比值对催乳素细胞腺瘤预后有较为优势且显著的预测价值,IGFBP-3表达水平对催乳素细胞腺瘤诊断无明显预测价值。结论 IGF-1及IGF-1/IGFBP-3比值对于催乳素细胞腺瘤预后具有一定的预测价值,值得临床医师关注。     

补肾益气活血方对胎儿生长受限胎鼠IGF-1、IGFBP-1及IGFBP-3表达的影响

目的 观察补肾益气活血方对胎儿生长受限胎鼠肝脏IGF-1、IGFBP-1、IGFBP-3表达的影响,探讨补肾益气活血方治疗FGR的作用机制.方法 采用被动吸烟法建立SD大鼠FGR模型,分为正常组、FGR组、补肾益气活血方治疗组(中药组)、精氨酸治疗组(精氨酸组).采用免疫组织化学方法检测胎鼠肝脏IGF-1、IGFBP-...     

胰岛素样生长因子-1在妇科疾病中的作用

在许多组织增生过程中，通过内分泌、旁分泌和自分泌会产生胰岛素样生长因子-1(IGF-1)。最近的研究发现，IGF-1存在于各种增生组织，如子宫内膜和卵巢组织。患有严重子宫内膜异位症时，血清中IGF-1水平较高，而子宫内膜局部的：IGF-1水平减低，这可能是导致不孕的原因，多囊性卵巢综合征(PCOS)患者卵巢局部的IGF-1活性增强，与患者肥胖、高雄激素水平等一系列临床症状有关。IGF-1在良、恶性肿瘤中也起着重要的作用，IGF-1能刺激子宫肌瘤细胞的生长。围绝经期妇女若存在高IGF-1和低IGF-1结合蛋白-3(IGFBP-3)水平，则患乳腺癌的风险增大。绝经前后女性的高IGF-1水平与宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌的发病率存在相关性。     

妙奥春对阿尔茨海默病模型大鼠IGF-1、IGFBP-1表达的影响

目的：研究妙奥春对阿尔茨海默病（AD）大鼠胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及胰岛素样生长因子结合蛋白．1（IGFBP-1）表达的影响。方法：SD大鼠分为正常对照组、模型组、假手术组、小剂量组、大剂量组。采用鹅膏蕈氨酸毁损大鼠脑基底核制备AD动物模型,妙奥春干预4周后测试大鼠学习及记忆能力,以RealtimePCR、Westernblot方法分别检测脑组织中IGF-1、IGFBp-1基因和蛋白的表达。结果：模型组大鼠平均逃避潜伏期较正常对照组明显延长（P〈0．05）,大、小剂量组平均逃避潜伏期较模型组明显缩短（P〈0．05）,其中大剂量组所用时间短于小剂量组;大、小剂量组IGF-1基因和蛋白的表达较模型组显著上升（P〈0．05）,IGFBP-1基因和蛋白的表达则明显下降（P〈0．05）,大剂量组对IGFBP-1基因的调节更加显著（P〈0．05）。结论：妙奥春可显著改善大鼠学习记忆功能,在上调IGF-1基因和蛋白表达的同时下调IGFBP-1的表达,提示IGF-1、IGFBp-1的参与可能是妙奥春治疗AD的作用机制。     

贝那普利对肝星状细胞IGFBP-2 mRNA表达的影响

目的：探讨血管紧张素I （Angiotensin I ,AngI ）及血管紧张素转化酶抑制剂贝那普利对体外培养的肝星状细胞胰岛素生长因子结合蛋白-2（insulin-like growth factor binding protein-2,IGFBP-2）mRNA表达的影响。方法采用肝星状细胞珠HSC-T 6作为研究模型,将培养的肝星状细胞分为对照组、AngI 组、贝那普利组和贝那普利＋AngI 组采用实时荧光定量PCR（Realtime fluores-cence quantitative PCR,RTFQ PCR）的方法检测肝星状细胞中IGFBP-2 mRNA的表达水平。结果（1）在体外培养的肝星状细胞中AngI 组高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）AngI＋贝那普利组IGFBP-2 mRNA低于AngI组（P〈0.05）。结论 AngI 能促进肝星状细胞IGFBP-2 mRNA表达,贝那普利的抗肝纤维化作用,可能与IGFBP-2 mRNA表达降低有关。     

早产儿血清IGF-1、IGFBP-3浓度与孕周、胎龄及体重相关性探讨

目的:检测早产儿血清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平,探讨其与孕周、胎龄及体重的相关性。方法:选取2017年5月—2018年10月期间在我院出生或住院的早产儿175例作为观察对象,并选取23例正常孕周、胎龄、体重的新生儿作为对照组。分别测定两组血清IGF-1和IGFBP-3水平,并进行统计分析。结果:(1)早产儿血清IGF-1和IGFBP-3水平男女差异无统计学意义(P>0.05)。(2)早产儿血清IGF-1及IGFBP-3水平跟孕周呈正相关,对照组与34~(+1)～36~(+6)周比较(P值<0.05),与34~(+1)～36~(+6)周、32~(+1)～34周、30~(+1)～32周、28～30周比较(P值均<0.01)。(3)早产儿血清IGF-1与IGFBP-3水平跟胎龄成正相关,对照组>适于胎龄组>小于胎龄组,各组比较(P值均<0.01)。(4)早产儿血清IGF-1及IGFBP-3水平与体重成正相关,对照组>低体重儿>极低体重儿>超低体重儿,各组比较(P值均<0.01)。结论:早产儿血清IGF-1和IGFBP-3水平较正常孕周、胎龄、体重的新生儿低,且与孕周、胎龄及体重成正相关,结合早产儿血清IGF-1与IGFBP-3水平,评估胎儿在宫内时的生长发育情况,可能有助于早产儿的治疗与转归。     

IGF-1和IGFBP-3在非小细胞肺癌患者血清和肺癌组织中的表达及意义

目的检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血清中的含量和肺癌组织局部的表达情况,探讨IGF-1和IGFBP-3与NSCLC发生发展的关系及其在NSCLC辅助诊断、危险性预测和治疗中的临床意义。方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺癌组和对照组患者外周血血清中IGF-1、IGFBP-3的水平;运用免疫组化方法检测肺癌组和对照组患者肺组织标本的IGF-1与IGFBP-3表达情况。结果肺癌组血清中IGF-1表达高于对照组(P<0.05),肺癌组血清中IGFBP-3的表达显著低于对照组(P<0.05),IGF-1在肺癌组织中的表达强于对照组(P<0.05),IGFBP-3在肺癌组织中的表达弱于对照组(P<0.05)。结论 NSCLC患者血清IGF-1、IGFBP-3表达在非小细胞肺癌的发生、发展及远处转移中有重要作用,检测其水平变化对肺癌的诊断、判断预后有重要意义。     

大鼠INS-1细胞中IGFBP-2 mRNA的表达调控

目的:研究大鼠胰腺肿瘤β-细胞(INS-1)中,葡萄糖(Glucose)、胰岛素(Insulin)和生长激素(GH)对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)基因的表达调控,探索IGFBP-2基因调节机制及其在维持正常胰腺细胞生理功能中的作用.方法:RNA印迹法(Northern blotting)检测INS-1细胞IGFBP-2 mRNA的表达,酶标法测定INS-1细胞胰岛素分泌量.结果:葡萄糖对IGFBP-2 mRNA调节作用不同;高浓度(10mmol/L)葡萄糖条件下,胰岛素分泌量增加,而IGFBP-2mRNA表达被抑制;低浓度(1～5.6 mmol/L)葡萄糖条件下,胰岛素分泌量无显著性变化,IGFBP-2 mRNA正常表达.INS-1细胞在不完全培养液中,加入GH培养,在不同时间间隔提取培养液进行IGFBP-2 mRNA检测,结果发现,培养16 h以上,IGFBP-2 mRNA表达开始显著下降.外源胰岛素抑制IGFBP-2 mRNA的表达.结论:葡萄糖和生长激素对INS-1细胞中IGFBP-2 mRNA表达的抑制作用是通过胰岛素调控的.     

第一内含子对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响

目的构建人胰胰岛素基因真核表达载体,为胰岛素基因研究奠定基础.方法从人基因组文库中扩增胰岛素基因的第一内含子,经测序证实其序列完全正确后,与pCMV-mINS中的mINS基因融合,构建成带有第一内含子的胰岛素基因组基因真核表达质粒pCMV-ImINS.分别用pCMV-mINS和pCMV-ImINS转染BHK细胞,经G418筛选,将阳性克隆传至20代后,用放免方法和免疫组化法分析胰胰岛素和/或胰岛素原在BHK细胞中的表达量情况.结果经放免测定,pCMV-mINS和pCMV-ImINS在BHK细胞中胰岛素和/或胰岛素原的表达量分别为4.077μIU/ml 和5.068μIU/ml.经免疫组化分析,pCMV-mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为190.0±19.56;pCMV-ImINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为186.4±10.24.结论在BHK细胞中胰岛素基因的第一内含子对胰岛素的表达起正调控作用.     

应激性肾上腺素对THP-1细胞TGF-β1与ABCA1 mRNA表达的影响

目的探讨心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与ABCA11 mRNA表达的影响。方法不同浓度肾上腺素（1pmol／L-1μmol／L）处理THP-1源巨噬细胞24h，运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1与ABCA1 mRNA表达。结果1pmol／L-10nmol／L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较，差异无统计学意义。而100nmol／L及1μmol／L的肾上腺素下调TGF-β1和ABCA1 mRNA水平，与各自对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论一定浓度的肾上腺素下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与ABCA1mRNA水平。     

IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响

目的:研究IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响.方法:(1)复苏并培养人单核细胞株THP-1细胞并诱导为巨噬细胞和泡沫细胞.(2)RT-PCR法检测A-CAT-1 mRNA在单核细胞、巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1和泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体中的表达.结果:(1)单核细胞株THP-1细胞被诱导为巨噬细胞和泡沫细胞.(2)与单核细胞比,巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1的ACAT-1 mRNA表达均明显增高,尤以泡沫细胞加IL-1中增高明显;与泡沫细胞加IL-1比,泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体的ACAT-1 mRNA表达下降.结论:(1)IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA的表达有上调作用,IL-1单克隆抗体可以拮抗这种效应.(2)IL-1可上调ACAT-1 mRNA表达水平,可能是巨噬细胞脂质过负荷后A-CAT-1上调的始动因子之一.     

胰岛素、地塞米松、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对3T3-L1脂肪细胞脂肪水孔蛋白表达的调节作用

目的通过细胞培养研究胰岛素样生长因子-1(IGF鄄1)、地塞米松对成熟脂肪细胞水孔蛋白(Aquaporinadipose,AQPap)基因表达的影响,并与胰岛素的作用相比较,以此了解AQPap基因表达的影响因素,探讨其在肥胖及糖尿病发病中所起作用。方法用不同浓度(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)的胰岛素、IGF鄄1(10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)及地塞米松刺激液(10-6、10-7、10-8mol/L)刺激诱导分化第9天的3T3鄄L1细胞6h;提取细胞RNA,运用半定量RT鄄PCR技术,检测AQPapmRNA表达量的变化。结果与对照组相比,10-9mol/L胰岛素刺激细胞6h可使AQPap基因表达下降16%,10-6mol/L胰岛素使之下降超过50%。IGF鄄1也降低AQPap的基因表达,但相同浓度(10-7mol/L)刺激下,IGF鄄1的作用要弱于胰岛素(P<0.05)。地塞米松对AQPapmRNA的表达量无明显影响,不过,同时给予10-6mol/L的地塞米松和胰岛素与单用10-6mol/L胰岛素相比,AQPapmRNA的表达量有所上升(P<0.05)。结论胰岛素对3T3鄄L1脂肪细胞AQPap的表达起抑制作用,并呈剂量及时间依赖性。IGF鄄1也有抑制作用,但较胰岛素弱。地塞米松能够拮抗胰岛素对3T3鄄L1脂肪细胞AQPap基因表达的下调作用。     

大鼠胰腺β肿瘤细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白-2和3的表达调控

目的：研究大鼠胰腺β肿瘤细胞(INS-1)中，生长激素(GH)、催乳素(PRL)、葡萄糖和胰岛素对胰岛素样生长因子结合蛋白-2和3(IGFBP-2、3)的表达调控，探素IGFBP-2和3对维持正常β细胞生理功能的作用。方法：RNA印迹法检测INS-1细胞中IGFBP-2和3的mRNA表达情况及蛋白免疫印迹法分析INS-1细胞中IGFBP-3和2蛋白表达。结果：在INS-1细胞中，GH和PRL调控IGFBP-3 mRNA和蛋白表达。葡萄糖对IGFBP-2m RNA调节作用不同：高浓度(10mmol／L)葡萄糖条件下，IGFBP-2 mRNA表达被抑制；低浓度(1．0-5．6mmol／L)葡萄糖条件下，IGFBP-2mRNA有表达。葡萄糖浓度为5．6mmol／L时，加入GH孵育16h，IGFBP-2m RNA表达被抑制。外源胰岛素抑制IGFBP-2m RNA的表达。结论：GH和PRL可以调控IGFBP-3的mRNA和蛋白表达，IGFBP-2mRNA表达主要通过胰岛素调控。     

LPA2受体介导LPA诱导的人支气管肺上皮细胞PAI-1表达

目的研究溶血磷脂酸(LPA)对原代培养人支气管肺上皮细胞(NHBE)表达纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的调节作用。方法原代培养人支气管上皮细胞培养于6孔板培养板内,经LPA诱导后,收取RNA裂解液并用实时荧光定量RT-PCR技术检测PAI-1 mRNA表达水平;利用RNA干扰技术研究LPA受体的作用。结果 LPA可诱导NHBE细胞PAI-1 mRNA表达上调且呈时间相关性,此效应可被LPA2 siRNA完全阻断。结论 LPA2受体介导LPA诱导NHBE细胞表达PAI-1。     

卡介苗诱导人肺腺上皮细胞hBD-1 mRNA的增强表达

使用热灭活的卡介苗刺激培养的人肺腺上皮细胞(SPC－A－1),利用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法和Northern杂交分析,证实了卡介苗能诱导SPC－A－1细胞β－防御素－1基因(hBD－1)的增强表达。卡介苗菌量和刺激时间与SPC－A－1细胞hBD－1基因表达量的关系曲线显示,hBD－1 mRNA 在人肺腺上皮细胞的增强表达在一定范围内表现为具刺激剂量和时间依赖关系。实验为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下了基础。     

实时定量PCR检测胰岛素和高糖对巨噬细胞ACAT-1表达的影响

目的利用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)mRNA的表达。探讨胰岛素和高糖对人THP-1细胞分化的巨噬细胞ACAT-1mRNA表达的影响。方法体外培养人单核细胞株THP-1细胞,由佛波醇肉豆蔻酸乙酸盐(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由胰岛素和高糖共同干预不同时间(0、6、12、24、48h),用实时定量PCR检测ACAT-1mRNA表达。结果胰岛素和高糖共同作用不同时间后巨噬细胞ACAT-1mRNA的表达量间差别有显著性意义(P<0.01),作用12h与0、6、24、48h的ACAT-1mRNA表达量间差别均有显著性意义(P<0.01),作用48h的ACAT-1mRNA表达量与0h相比差别无显著性意义(P>0.05)。结论胰岛素和高糖共同作用下,巨噬细胞ACAT-1mRNA表达逐渐增加,12h达到高峰,然后逐渐下降,48h恢复到0h时水平。成功建立和应用实时定量PCR检测巨噬细胞ACAT-1mRNA水平是准确评价巨噬细胞功能的方法之一。     

卷柏活性部位对胰岛素抵抗大鼠肝脏胰岛素受体mRNA表达的影响

目的 探讨卷柏对胰岛素抵抗大鼠肝脏胰岛素受体mRNA表达的影响.方法 动物分为5组,每组8只.阳性对照组给予盐酸二甲双胍片,给药组分别给予卷柏水提液及大孔树脂50%乙醇洗脱组分(简称50%组分),用RT-PcR方法检测大鼠肝脏胰岛素受体mRNA表达水平.结果 阳性对照组、卷柏水提液、卷柏50%乙醇洗脱组分与模型组比较,大鼠肝脏胰岛素受体基因mRNA表达水平显著提高(P＜0.01).结论 卷柏通过改善大鼠肝脏胰岛素受体基因mRNA表达而改善胰岛素抵抗.     

小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响

目的 探讨小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响及可能的作用机制.方法 采用小檗碱干预后,用MTT法、放射免疫法及Western blotting确定小檗碱干预的合适浓度范围及检测NIT-1细胞胰岛素水平和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-ac-tivated protein kinase,AMPK)蛋白的表达.结果 小檗碱在浓度为100μmol/L时对基础培养基和高糖培养基干预的NIT-1细胞的增殖存在显著性抑制作用(P<0.05);而小檗碱在浓度为30μmol/L时就明显抑制高脂培养基诱导的NIT-1细胞的增殖(P<0.05).小檗碱分别对基础、高糖和高脂诱导的NIT-1细胞短时相干预(1 h)后,显示葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)被明显抑制(P<0.05);小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1细胞长时相干预(24 h)后显示基础胰岛素分泌和GSIS均有一定的增加(P<0.05,P<0.01).小檗碱可以促进高糖高脂诱导的NIT-1细胞AMPK蛋白的表达.结论 小檗碱不仅仅作为一种AMPK激活来调节胰岛素分泌,其也可能通过其他的通路进一步影响胰岛素分泌.