外周血中树突状细胞及相关细胞因子水平与Graves病的关联分析

目的 检测Graves病患者在治疗前后外周血中树突状细胞(DCs)不同亚群和相关细胞因子的数量和表达情况,并与健康对照组进行比较,分析DCs细胞亚群和相关细胞因子与Graves病的关联性.方法 利用流式细胞仪检测5 6例Graves病患者和30名健康体检者的外周血树突状细胞亚群数量,其中Graves病患者中30人为治疗前组、26人为治疗后组,同时利用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)及白细胞介素-6(IL-6)等细胞因子的水平.结果 测定得出Graves病治疗前组浆细胞样树突状细胞(mDC)和髓样树突状细胞(pDC)值显著高于健康对照组,经治疗后mDC和pDC值明显降低,略高于健康对照组.通过对比3组细胞因子水平发现,Graves病治疗前组患者血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均高于其他2组,治疗后组与健康对照组的细胞因子水平相近.结论 Graves病患者血中树突状细胞(DC)明显升高,细胞因子分泌失调,经治疗病情好转后,DC和细胞因子水平逐渐恢复正常,提示DC和细胞因子可能参与Graves病的发病机制,并有望作为分析Graves病治疗效果的一项依据.     

Graves病患者外周血中树突状细胞变化

目的探讨Graves病患者外周血中浆细胞样树突状细胞(pDC)和髓样树突状细胞(mDC)与健康对照组的变化。方法利用流式细胞仪FC500检测84例Graves病患者和60名健康体检者的外周血树突状细胞亚群。Graves病患者分为3组:治疗稳定组(40例),治疗中组(25例),治疗前组(19例)。结果测定得出治疗稳定组,治疗中组,治疗前组,健康对照组的pDC值分别为(0.18±0.08)%,(0.20±0.14)%,(0.26±0.17)%,(0.15±0.07)%;治疗前组与健康对照组比较,pDC升高,差异有统计学意义(P<0.05),其他组别之间的pDC值两两比较则差异无统计学意义(P>0.05)。mDC值分别为(0.17±0.09)%,(0.21±0.15)%,(0.27±0.19)%,(0.10±0.05)%;治疗中组和治疗前组分别与健康对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Graves病未治疗的患者血树突状细胞(DC)明显升高,治疗后病情好转的患者DC明显下降,提示DC可能参与Graves病的发病机制,并有望为Graves病治疗效果检测提供依据。     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

建立从人外周血分离，纯化，培养，扩增树突状细胞前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖，分化成熟的影响。方法 人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌｌ，ｅｒｃｏｌｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫增减细胞化学染色。     

Graves病患者外周血白细胞介素-1β的变化

目的 观察Graves病(GD)患者外周血白细胞介素lβ(IL-lβ)的变化。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测30例GD患者用丙基硫氧嘧啶治疗前后外周血中IL-1β的含量。结果 治疗前GD患者外周血中IL-1β含量高于正常对照组，而治疗后下降不明显。IL-1β与患者游离甲状腺素(FT3、FT4)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)检测结果均无相关性。结论 GD患者IL-1β有改变。     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

目的建立从人外周血分离、纯化、培养、扩增树突状细胞（ＤＣ）前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖、分化成熟的影响。方法人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌ、Ｐｅｒｃｏｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４（ＩＬ－４）联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫细胞化学染色。结果分离的ＤＣ前体经１周左右时间培养，细胞数量可扩增２０～３０倍，纯度达９０％以上，ＧＭ－ＣＳＦ与ＩＬ－４联合培养所得到的ＤＣ数量约为用ＧＭ－ＣＳＦ培养的１．５倍。ＤＣ具有典型的树枝状或裙褶状突起，并表达高水平的ＨＬＡ－ＤＲ，其ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３的表达均为阴性。结论用ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４联合作用更能促进ＤＣ的体外扩增及分化。     

Graves病患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞变化的临床意义

对４４例Ｇｒａｖｅｓ病初治患者于治疗前检测外周血Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞活性，结果显示ＣＤ＿３细胞与正常对照组差异无显著性（Ｐ＞０．０５），ＣＤ４细胞低于正常对照组（Ｐ＜０．０５），ＣＤ＿细胞显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ＣＤ＿４／ＣＤ＿８值及ＮＫ细胞则显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），并发现这些变化与Ｔ３、Ｔ４无显著相关性。对Ｇｒａｖｅｓ病的细胞免疫改变作了初步讨论。     

抗甲状腺药物对Graves病患者血中细胞因子的影响

目的探讨抗甲状腺药物(ATD)对Graves病(GD)患者血中白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法采用双抗体夹心ELISA法测定治疗组39例GD患者治疗前后及对照组29例健康者血IL-6、IFN-γ及TNF-α水平。同时,用电化学发光法测定治疗组治疗前后及对照组健康者的血促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺激素(FT4)水平。结果治疗前GD患者与健康者比较,血TSH、FT3、FT4、IL-6、IFN-γ水平间差别均有统计学意义(P<0·05),血TNF-α水平间差别无统计学意义(P>0·05)。治疗后GD患者的血TSH水平与健康者比较,差别有统计学意义(P<0·05),血FT3、FT4、IL-6、IFN-γ、TNF-α与健康者比较,差别均无统计学意义(P>0·05)。GD患者治疗前后比较,除IFN-γ外,血TSH、FT3、FT4、IL-6、TNF-α水平间差别均有统计学意义(P<0·05)。结论ATD在促进GD患者IL-6、TNF-α改善和自身免疫紊乱的恢复方面有一定的作用。     

胎儿微嵌合体对Graves病动物模型甲状腺内树突状细胞的影响

目的：分析Graves病动物模型甲状腺内胎儿微嵌合体和树突状细胞浸润和成熟程度间的关系,探讨胎儿微嵌合体影响Graves病发病的可能机制．方法：利用Ad—TSHR289制备Graves病动物模型进行配对,Real-time PCR测定妊娠前后甲状腺内Y染色体特异性基因序列SRY,免疫组化染色各组甲状腺组织内树突状细胞的特异性标记S-100和成熟树突状细胞的特异性标记CD80．结果：免疫生育组和免疫妊娠组甲状腺内树突状细胞多于单纯免疫组,成熟树突状细胞在免疫生育组最多（P〈0．05）．免疫生育组中SRY基因相对表达量与树突状细胞浸润程度成正相关（r=0．5648,P〈0．05）．无论是在免疫妊娠组还是在免疫生育组,SRY基因相对表达量与成熟树突状细胞浸润程度均为正相关关系（r=0．4262,P〈0．05）．结论：甲状腺内胎儿微嵌合体可能通过促进树突状细胞成熟来改变甲状腺局部的免疫状态,从而促进产后Graves病的发生和加重．     

Graves病患者血脂变化及临床意义

<正> Graves病是一种自身免疫性疾病,临床上常常表现为甲状腺激素分泌增多而致的高代谢症侯群性疾病。甲状腺激素与机体糖、蛋白质、水、电解质及维生素代谢密切相关。甲状腺激素水平的变化,可影响血清脂质的变化。本文通过测定Craves病患者血清甲状腺激素及血脂,以探讨甲状腺激素水平对血脂变化的影响及其临床意义。     

细胞因子诱导不同来源的贴壁细胞分化为树突状细胞的研究

目的：探讨寻树突状态细胞（DC）体外培养的理想来源。方法：通过贴壁的方法分离脐带血、造血动员后的外周血及正常人外周血中DC的前体细胞，体外采用细胞因子诱导，并对其进行形态学的观察和细胞表型检测；同时比较了不同来源的DC的增殖、分泌IL－12的能力及激发同种异体T细胞和脐带血幼雅T细胞（naive Tcells)的作用，结果：经过造血动员后的外周血产生的DC数量和纯度均较高，而且能经体外细胞因子诱导为功能性DC。结论：造血动员后的外周血是较理想的DC来源。     

Changes of Regulatory T Cells in Graves' Disease

The immune mechanism of Graves' diseases (GD) and the roles of regulator T cells were investigated. In 32 patients with GD (GD group) and 20 healthy volunteers (control group), flow cy-tometry was used to detect the proportion of CD4 CD25 cells, MACS to isolate CD4 CD25 cells, RT-PCR to assay the expression of FOXP3, and ELISA to test the level of IL-10, respectively. It was found that there was no significant change in the proportion of CD4 CD25 T cells between GD group and control group (P>0.05), while secretion of IL-10 and expression of FOXP3 in GD group were lower than control group (P<0.01 and P<0.05, respectively). In conclusion, though the proportion of regulatory T cells of peripheral blood lymphocytes in the patients with GD, the functions of them were significantly weakened, which might be a pathogenic factor in GD.     

催乳素对体外单独培养的Graves病外周血单个核细胞活化及增殖影响的研究

目的 :研究催乳素 (PRL)对体外单独培养的Graves病 (GD)外周血单个核细胞的活化及增殖有无直接影响。方法 :提取 12例GD患者和 8例正常健康对照的外周血单个核细胞 ,单用含不同浓度羊催乳素或植物血凝素的培养液进行体外培养。并利用流式细胞技术等测定其表面CD2 5的表达 (反映活化状态 )或细胞内DNA含量以计算增殖指数 (反映增殖状态 )。结果 :GD患者和正常人的外周血单个核细胞经 12 .5 10 0 0ng/ml羊催乳素作用后 ,其CD4+ CD2 5 + 细胞百分率、CD8+ CD2 5 + 细胞百分率及增殖指数均无明显变化 (P均 >0 .0 5 )。所设阳性对照植物血凝素 (5 μg/ml)能直接刺激这两种来源的单个核细胞发生活化、增殖 ,使上述各项指标均显著增高 (P均<0 .0 1)。结论 :催乳素不能刺激体外单独培养的GD外周血单个核细胞发生活化及增殖     

多发性骨髓瘤患者外周血树突状细胞分离、培养及鉴定

目的 研究多发性骨髓瘤（MM）患者外周血树突状细胞（DC）的分离、培养和鉴定。方法 用塑料贴壁的外周血单个核细胞（PBMNC）来源或者免疫磁珠阴性选择分离途径，建立体外培养技术，从MM患者外周血中获取DC。结果 （1）在含粒-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4的无血清培养基（AIM-V）中，37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中培养5～7d，可获得具有典型DC形态学特征的细胞。2种分离途径得率比较无统计学意义（n=5，P〉0．05）。（2）同种混合淋巴细胞反应及自体抗原呈递试验证实，MM患者外周血来源DC具有很强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力及呈递自体抗原的能力。外周血来源DC培养5～7d后流式细胞仪分析表明，部分细胞表达成熟DC特征性标记CD1a。部分表达共刺激分子CD80及CD86，高表达HLA-DR分子，几乎不表达单核细胞特异性标记CD14。重组人白细胞介素-3或／及重组人干细胞因子加入培养体系并不增加MM患者外周血DC得率。免疫表型也无明显改变。提示DC来源于PBMNC中单核细胞，而非CD34^＋造血祖细胞。结论 贴壁分离法及免疫磁珠法均可获取充足数量的DC。     

慢性乙型肝炎病人树突状细胞体外培养的实验研究

目的　从慢性乙型肝炎 (CHB)病人外周血单个核细胞 (PBMC)体外诱导培养树突状细胞 (DCs) ,探讨DCs在CHB特异性免疫耐受中的作用 ,为治疗运用提供实验物质基础。方法　 10例CHB病人外周血 15ml,分离PBMC后在体外培养条件下 ,加入粒单核巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)和白介素 4 (IL 4 ) ,诱导DCs增殖分化。透射电镜分析DCs细胞形态学 ,流式细胞仪检测其表型分子的表达。结果　①经本实验体系从CHBPBMC可诱导DCs生成量为每 15ml(1.2～ 4 .7)× 10 6,透射电镜证实呈典型的DCs细胞形态学 ;②DCs表型分子呈极低表达 ,分别为CD83(8.0 2± 3.99) %、CD80 (8.77± 2 .0 6 ) %和MHC DR(14 .0 5± 2 .6 6 ) %。结论　CHB病人PBMC经GM CSF和IL 4混合细胞因子培养体系能诱导一定量DCs产生 ,表现为典型的树突状细胞形态 ,但表型分子表达低下 ,处于非成熟状态。     

Graves病人外周血NK活性的初步研究

本文应用~(126)I-UdR 释放法检测43例 Graves 病人外周血自然杀伤细胞(NK)活性,结果为66.50±10.66%,明显高于正常对照组(51.20±9.34%).治疗12～18个月的病人 NK 活性(59.04±8.84%)虽低于治疗前(67.60±9.44%)。但仍高于正常对照组.NK 活性与 T_3,T_4水平无关.本文提示 Graves 病人存在 NK 活性异常可能原发于该病的免疫功能紊乱.治疗后 NK 活性未完全恢复正常,可能是停药后复发的原因之一.     

An Investigation on the Phenotype of Cultured Den—dritic Cells from the Peripheral Blood of Patients with Breast Cancer

Objective To induce and culture the dendritic cells in the peripheral blood of breast cancer patients and research on their phenotype.Methods Mononuclear cells were isolated by Ficoll Hypaque centrifugation from32breast cancer patients‘peripheral blood.These cells were plated in six-well culture plates(10^6/ml,2ml/well)in RPMI1640medium supplemented with10%heat-in-activated fetal bovine serum,100ng/mlGM-CSF,20ng/mlIL-4,and/or20n g/mlTNF-α.Twohours later,nonadherent cells were gently removed and fresh medium was added.Cultured cells were ana-lyzed by flow cytometry with flujorescence labeled monoclonal antibodies.Pictures of cultured and fluores-cence stained cells were taken by confocal scanning microscope.Results The diameter of the cells was between 10and 20micron.Cells displayed a characteristicCD1a^ ,CD40^ ,CD80^ ,CD86^ and CD83^ phenotypes.All of these molecules were not specific for dendritic cells.CD1a and CD83 molecules could also be expressed on the surface of CD3^ T lymphocytes and CD19^ B lymphocytes,es-pecially on activated lymphocytes.Conclusion The molecules of CD1a and CD83 are not specific phenotypes for dendritic cells.Currently,we still need to apply both cell morphology and costimulatory molecules such as CD40,CD80,and CD86to the identification of dendritic cells.     

宫颈癌患者外周血来源的树突状细胞的生物学特性观察

【目的】探讨宫颈癌患者外周血来源的树突状细胞(DC)的生物学特性。【方法】14例Ib期及以上的宫颈癌患者为研究组,24例健康女性为对照组。外周血经密度梯度离心得到单个核细胞,其中附壁成分在含GM-CSF/IL-4的完全淋巴细胞培养液培养。光镜和电镜观察培养细胞的形态变化。培养7d后,计算树突状细胞的产量,流式细胞术分析HLA-ABC、HLA-DR、CD40、CD80、CD1a和CD14的表达,同种异体淋巴细胞的混合淋巴反应(MLR)检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖能力。【结果】经过7d培养,两组均诱导出典型形态和表型的DC。宫颈癌患者单位体积外周血的未成熟DC(ImDC)的产量为67.3×106±33.8×106,较对照组低(P<0.05)。研究组的CD40、CD80和CD1a的平均荧光强度(MFI)分别为18±9,15±6和71±11,均较对照组低(P<0.05);而两组ImDC的HLA-ABC、HLA-DR表达强度相似(P>0.05)。相同PBL/DC比值,研究组ImDC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力下降(P<0.05)。【结论】宫颈癌患者的外周血单个核细胞培养的树突状细胞(ImDC)和健康对照组的ImDC具有免疫学差异,提示在应用树突状细胞进行免疫治疗时应考虑这种差异。     

喉癌患者外周血树突状细胞的体外培养

目的探讨从喉癌患者外周血大量诱导树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的有效方法。方法直接从喉癌患者外周血分离DCs;用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)刺激喉癌患者外周血贴壁单核细胞(PBMCs);检测培养前后DCs表面HLA-DR、B7-2表达水平及DCs诱导T细胞增殖能力。结果联合应用GM-CSF及IL-4可以从PBMCs中诱导大量高免疫活性的DCs,并通过增加其表面HLA-DR、B7-2表达而增强DCs免疫功能。结论用GM-CSF及IL-4可以从喉癌患者外周血中诱导出大量高免疫活力DCs。