重组人白血病抑制因子体外诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2及p53表达的关系

目的 :探讨重组人白血病抑制因子 (rh LIF)诱导HL 6 0细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 :不同剂量 (10～ 4 0 0 0U·ml-1)的rh LIF作用HL 6 0细胞 3d后 ,用流式细胞仪观察分析细胞周期变化并检测细胞凋亡率 ,用TUNEL法检测原位细胞凋亡情况 ;分别用免疫组化法和原位杂交法检测rh LIF作用 2、4、6d后P5 3蛋白及p5 3mRNA、bcl 2mRNA表达水平的改变。结果 :rh LIF (10～ 4 0 0 0U·ml-1)作用d 3,细胞凋亡率较对照组显著增加 ,其中以10 0 0U·ml-1组的作用最强 ;rh LIF (80 0U·ml-1)作用 2～ 6d ,P5 3蛋白和p5 3mRNA表达也同步增高 ,而bcl 2mRNA表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :rh LIF能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,该作用与P5 3蛋白表达增加和bcl 2表达降低有关     

槲皮素对HL-60细胞中p53、bcl-2基因表达的影响

目的探讨槲皮素对人早幼粒白血病细胞株（ＨＬ６０）细胞中ｐ５３、ｂｃｌ２基因表达的影响。方法采用台盼蓝排除法确定活细胞数和免疫细胞化学ＳＰ染色法分别检测细胞中ｐ５３、ｂｃｌ２基因表达。结果槲皮素对ＨＬ６０细胞的增殖有明显的抑制作用,当其作用２４ｈ后,其ＩＣ５０为４６６μｍｏｌ·Ｌ－１,槲皮素对ＨＬ６０细胞中ｐ５３、ｂｃｌ２基因表达均有一定的抑制作用,且呈明显的剂量依赖关系。结论槲皮素抑制ｐ５３、ｂｃｌ２的表达可能是其抑制ＨＬ６０细胞增殖和生长的重要机制之一。     

槲皮素对HL-60细胞中p53、bcl-2基因表达的影响

目的探讨槲皮素对人早幼粒白血病细胞株（ＨＬ ６０）细胞中ｐ５３、ｂｃｌ ２基因表达的影响。方法采用台盼蓝排除法确定活细胞数和免疫细胞化学ＳＰ染色法分别检测细胞中ｐ５３、ｂｃｌ ２基因表达。结果槲皮素对ＨＬ ６０细胞的增殖有明显的抑制作用，当其作用２４ｈ后，其ＩＣ５０为４６６μｍｏｌ·Ｌ－１，槲皮素对ＨＬ ６０细胞中ｐ５３、ｂｃｌ ２基因表达均有一定的抑制作用，且呈明显的剂量依赖关系。结论槲皮素抑制ｐ５３、ｂｃｌ ２的表达可能是其抑制ＨＬ ６０细胞增殖和生长的重要机制之一。     

Bcl-2小干扰RNA对HL-60／VCR细胞耐药性逆转的研究

为探讨以bcl-2基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性，构建bcl-2基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60／VCR细胞，G418筛选后应用Western blot进行鉴定；MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化；Western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bax和耐药相关蛋白ZNRD1的表达变化。结果：成功地构建了bcl-2的小干扰RNA载体并转染HL-60／VCR；经蛋白质水平检测证实成功地建立了Bcl-2低表达的白血病细胞模型；转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强，且低表达耐药相关蛋白ZNRD1。结论：该小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性。     

Quercetin down-regulated bcl-2 gene expression in human leukemia HL-60 cells

目的：研究槲皮素对人白血病ＨＬ６０细胞ｂｃｌ２基因表达的影响．方法：采用免疫组织化学技术和ＲＮＡ点杂交观察基因表达．结果：Ｑｕｅ１５－６０μｍｏｌ·Ｌ－１处理ＨＬ６０细胞４８ｈ使ｂｃｌ２蛋白由对照组的９４％表达下调到４５％－８４％，并能明显下调ＨＬ６０细胞ｂｃｌ２ｍＲＮＡ表达．结论：Ｑｕｅ诱导ＨＬ６０细胞凋亡，其诱导凋亡的分子机制与下调ｂｃｌ２基因表达有关．     

c-myc、bcl-2基因表达和蝌蚪提取液抗早幼粒细胞白血病作用的研究

目的 研究蝌蚪提取液(T871)抗早幼粒细胞白血病(APL)的作用及其过程中c-myc、bcl-2癌基因表达的变化。方法 利用细胞生长曲线、形态学观察、流式细胞仪、TUNEL法及原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术，观察T871抗人APL细胞系(HL-60)细胞的作用及其过程中c-myc、bcl-2癌基因表达的变化。结果 T871能抑制HL-60细胞增殖，并出现细胞凋亡的形态学特征，流式细胞仪及TUNEL法检测结果显示凋亡细胞百分数比对照组显增加，并伴有癌基因c-myc、bel-2mRNA表达的下调。结论 T871可抑制HL-60细胞的增殖同时诱导其凋亡，且c-myc、bcl-2癌基因可能参与了此过程。     

Bcl-2 RNA有效靶点的筛选及其对白血病细胞HL-60的促凋亡作用

目的筛选有效的Bcl-2 siRNA并观察其对白血病细胞HL-60的生长抑制作用。方法用体外转录合成法合成双链Bcl-2 siRNA,将其转染入HL-60细胞;用流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达,MTT法、流式细胞术及吉姆萨(Giemsa)染色法观察细胞增殖及凋亡情况。结果有效Bcl-2 siRNA有抑制HL-60细胞生长及促进细胞凋亡作用。结论有效Bcl-2 siRNA能特异性促进HL-60细胞凋亡,抑制其生长。     

As4S4对人白血病细胞HL-60细胞COX-2表达和PGE2水平的影响

目的体外研究中药雄黄主要成分(As4S4)对白血病细胞HL-60细胞的增殖和诱导凋亡的作用及其可能的机制。方法以不同浓度的As4S4(7.5、15、30、60mmol/L),分别处理24h,48h,72hHL-60细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;Western blot检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达,用放射免疫法检测细胞PGE2释放水平。结果不同浓度(7.5、15、30、60mmol/L)的As4S4处理的HL-60细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系。24h时IC50为30mmo/L,与对照组相比,差异有显著性(P<0.01)。As4S4诱导HL-60细胞的凋亡率分别为(7.28±1.03)%、(26.98±2.21%)、(47.15±2.66)%、(61.73±3.12)%,与对照组比较(3.84±1.88)%,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性,As4S4明显抑制COX-2的活性和表达,随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);不同浓度As4S4作用24h,可明显抑制Hela细胞PGE2释放水平,其值分别为(70.56±2.03)、(48.58±2.28)、(29.25±1.57)和(18.02±1.04),与对照组比较(3.15±1.01)差异有显著性(P<0.01)。结论As4S4体外对HL-60细胞具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,其机制可能与抑制COX-2活性表达和抑制细胞释放PGE2水平有关。     

IFN-γ对MMP-2和TIMP-2在HL-60细胞中表达的影响

目的研究白血病细胞株HL-60中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶天然抑制剂-2(TIMP-2)的表达及细胞因子干扰素(IFN-γ)对MMP-2和TIMP-2转录水平的调节。方法分别在HL-60细胞生长的不同时期(1~5d)收集细胞,采用半定量RT-PCR方法,分析白血病细胞株HL-60中MMP-2和TIMP-2 mRNA的表达水平;以不同浓度的IFN-γ作用于HL-60细胞,24、48h后RT-PCR检测MMP-2和TIMP-2mRNA水平的变化。结果细胞接种后24h MMP-2的mRNA水平最高。IFN-γ各个浓度组对MMP-2 mRNA表达均有抑制作用(P<0.05),且随着作用浓度的增高mRNA表达减少;能够增强TIMP-2mRNA表达(P<0.05)。结论明确了白血病细胞株HL-60株在转录水平表达MMP-2和TIMP-2;IFN-γ对MMP-2 mRNA水平有明显的抑制作用,而对TIMP-1mRNA水平有增强作用。     

bcl-2反义肽核酸诱导HL-60 K562细胞凋亡

目的　探讨不同结构的反义药物对HL 60、K562细胞系生物学活性的影响。方法　应用细胞计数、细胞形态观察和流式细胞术观察并比较反义肽核酸和反义寡核苷酸对白血病细胞HL 60、K562生物学活性的影响。结果　 1 0 μmol/L靶向bcl 2mRNA蛋白编码区的反义肽核酸能有效地抑制HL 60、K562细胞的生长、下调bcl 2蛋白的水平及诱导细胞凋亡。 1 0 μmol/L针对bcl 2mRNA同样靶点的反义肽核酸和寡核苷酸作用HL 60和K562细胞 72h ,反义肽核酸仍表现出较强的促细胞凋亡的作用 ,而反义寡核苷酸诱导细胞凋亡的作用则有所下降。结论　反义bcl 2肽核酸能诱导HL 60、K562细胞的凋亡 ,比反义寡核苷酸有更好的反义作用。     

阳离子脂质体增加bcl—2反义寡脱氧核苷酸G3139在HL—60细胞中的摄取及活性

目的:探讨阳离于脂质体DOSPER对bcl-2反义寡脱氧核苷酸G3139在HL-60细胞中的摄取和活性的影响。方法:流式细胞仪测定细胞结合的平均荧光强度和Bcl-2蛋白阳性细胞的百分数;荧光显微镜观察细胞内FTTC荧光素标记G3139的分布;RT-RCR测定bcl-2 mRNA的表达。结果:①DOSPER增加细胞对G3139的摄取,当DOSPER/G3139(μg:μg)为2:1时,细胞对G3139的摄取在2h左右达到高峰,为G3139直接作用时的20倍,细胞核和细胞浆中的G3139为明亮的点状聚集;而G3139直接作用时,G3139则弥漫分布于细胞浆中;②细胞内的G3139可向胞外转运。DOSPER介导转染G3139 4h后,细胞内的G3139符合方程C(t)=68.2e~(-0.60t) 31.8e~(-0.02t)(初值为100％),t_(1/2)约为1.1h,而G3139直接作用后,细胞内的G3139符合方程C(t)=64.8e~(-2.27t) 35.2e~(-0.04t),t_(1/2)约为18min;③在DOSPER介导转染下,G3139在浓度1μmol·L~(-1)时,特异性减少bcl-2 mRNA的表达,同时使Bcl-2蛋白阳性率从97％±4％下降到70.6％±2.1％。结论:DOSPER增加细胞对G3139的摄取和改变G3139在细胞内的分布可能是其增强G3139活性的重要机制。     

Patensin-induced apoptosis is accompanied by decreased bcl-2 expression and telomerase activity in HL-60 cells

The present study aimed to investigate the effect of telomerase activity in patensin-induced apoptosis and the regulation of B cell leukemia/lymphoma 2 (bcl-2) gene expression in human leukemia HL-60 cells. Apoptosis of HL-60 cells was induced by patensin (100 μmol L_-1) for 3, 6, 12 and 24 h. Apoptosis and bcl-2 were determined by flow cytometry analysis. A polymerase-chain-reaction-based telomeric repeat amplification protocol assay was used to detect the telomerase activity. Patensin induced growth arrest and apoptotic cell death in HL-60 cells. The telomerase activity was inhibited in a time-dependent manner during the patensin-induced apoptosis of HL-60 cells, and the expression of bcl-2 was progressively down-regulated by patensin. Inhibition of the telomerase activity of HL-60 cells was closely related to the patensin-induced apoptosis. The present results indicate that inhibition in telomerase and reduced bcl-2 gene expression may play a role in the patensin-induced apoptosis of HL-60 cells.     

脂质体转染bcl-2反义寡核苷酸G3139在HL-60细胞中的动力学模式

目的　应用阳离子脂质体介导或直接转染时 ,建立HL 6 0细胞摄入由 5 FITC标记的bcl 2反义寡核苷酸G3139的动力学模式及观察G 3139在细胞内的分布。方法　流式细胞仪测定细胞内的相对平均荧光强度 ,荧光显微镜观察细胞内的荧光分布。结果　①脂质体介导转染法显著提高HL 6 0细胞对G 3139的摄入 ,当DOSPER/G 3139(μg/μg)为 2 2 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达G 3139直接作用时的 40倍 ,而且HL 6 0细胞对G 3139的摄入跟G3139的浓度和作用时间有关。②细胞内的G 3139可向胞外转运 ,在DOSPER介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1/ 2 约为 4h ,而G 3139直接作用后 ,t1/ 2 约为 0 5h ;③DOSPER介导转染 6h后 ,细胞内荧光物质主要以明亮的点状聚集在细胞核和部分细胞浆的细胞器中 ,而G 3139直接作用时 ,荧光物质则弥漫分布于胞浆中。结论　DOSPER可以增加G 3139的细胞摄入并改变其胞内分布 ,可能是阳离子脂质体增加bcl 2反义寡核苷酸生物活性的重要原因。     

毛兰素诱导人白血病HL—60细胞的凋亡

目的：研究毛兰素对HL－60细胞增殖的抑制作用,探讨其诱导细胞凋亡的机制。方法：用MTT比色法测定了毛兰素对HL－60细胞增殖的抑制作用：应用荧光显微镜、透射电镜、DNA电泳及流式细胞仪观察了药物对细胞凋亡的诱导作用,并用免疫组化的方法从基因水平阐述了凋亡的发生。结果：毛兰素20－81．9nmol/L在72h内显著抑制HL－60细胞增殖,作用24h后,对HL－60细胞的IC50为38nmol/L,而阳性对照药长春新碱对HL－60细胞的IC50为101nmol/L,前者明显优于后者;形态学观察可见凋亡的特征性改变;琼脂糖电泳出现典型的DNA“ladder”;流式细胞仪结果表明细胞被阻滞于G2／M期;免疫组化可见bcl-2表达下降,bax表达升高。结论：毛兰素显著抑制HL－60细胞的生长,该抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡和改变HL－60细胞bcl-2和bax基因的表达而实现的。     

二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用。方法采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析凋亡相关蛋白的表达。结果二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性。结论二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用。     

氢醌抑制HL-60细胞分化上调过氧化物酶2-Cys过氧化物氧还蛋白表达

目的研究氢醌(HQ)对HL-60细胞向单核系、粒系分化的影响。方法 HQ 1,5和50μmo·lL-1分别与豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)20 nmol·L-1或1.25%DMSO共同处理细胞,分别于48和96 h收集细胞。通过观察细胞形态、硝基四氮唑蓝还原反应鉴定细胞分化;CCK-8检测细胞增殖,荧光定量PCR检测2-Cys过氧化物氧还蛋白(Prxs)基因表达的变化;Western印迹检测2-Cys Prxs蛋白表达的变化。结果在HQ1~50μmol·L-1作用下,HL-60细胞向单核系分化受到抑制;HQ1和5μmol·L-1对DMSO诱导的粒系分化无影响,但HQ50μmol·L-1可抑制细胞向粒系分化。HQ5和50μmol·L-1与诱导剂的共同作用可以抑制HL-60细胞增殖。与正常对照组比较,PMA和DMSO组2-Cys Prxs基因表达水平均有降低的趋势,HQ1,5和50μmol.L-1+PMA20 nmol·L-1组PrxⅠ,PrxⅢ和PrxⅣ各个基因表达水平与PMA组比较均有增高的趋势;DMSO诱导分化组中仅HQ 50μmol·L-1+1.25%DMSO组PrxⅠ和PrxⅢ基因表达水平与单独DMSO组比较显著增高(P<0.05)。结论 HQ1和5μmol.L-1可以抑制HL-60细胞向单核系分化,HQ50μmol·L-1可抑制细胞向粒系分化,并上调PrxⅠ和PrxⅢ基因的表达。     

新型bcl-2基因反义寡核苷酸F951诱导人白血病HL60细胞凋亡

目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL60细胞共孵育48h后,线粒体凋亡细胞:未处理组、FNS对照组分别为3.00%、13.57%,F9513个剂量分别为30.95%、38.08%、52.55%;Caspase活性细胞:未处理组、FNS对照组分别为0.08%、0.14%,F9513个剂量组分别为43.68%、60.54%、80.37%。凝胶电泳分析:F951处理组可见典型的DNALadder,且随着药物浓度的提高诱导DNA Ladder的作用更加明显;TUNEL和电镜检查:未处理组与FNS对照组中仅偶见凋亡细胞,F951各剂量组凋亡细胞常见,且随着药物浓度的提高凋亡细胞增多。结论F951具有诱导HL60细胞凋亡的作用;F951诱导肿瘤细胞凋亡的作用是通过抑制bcl-2基因,启动细胞凋亡调控通道而实现的。     

华蟾素诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

目的：观察华蟾素（cinobufacini）对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用的机制。方法：以HL-60细胞为研究对象，采用MTT法观察细胞增殖作用；Annexin V-FITC／PI双染和吖啶橙／溴乙锭（AO／EB）荧光染色法检测细胞凋亡；罗丹明染色法检测线粒体膜电位；分光光度法检测Caspase-3活性。结果：在0．78～6．25μg&#183;ml^-1，华蟾素能明显的抑制HL-60细胞的增殖；华蟾素作用24h后，AnnexinV阳性的细胞从7．81％增加至66．02％，而且在荧光显微镜下可以明显观察到凋亡细胞；线粒体膜电位下降和Caspase-3活性升高。结论：华蟾素能够抑制HL-60细胞增殖，这种作用与其诱导细胞凋亡破坏线粒体功能和激活Caspase-3有关。     

姜黄素对马利兰耐药HL-60细胞生长的影响

目的探讨姜黄素对马利兰耐药HL-60细胞生长的影响。方法采用MTT法检测姜黄素对马利兰耐药HL-60细胞的抑制率并观察姜黄素与马利兰联用对HL-60马利兰耐药细胞的增敏作用。结果与对照组相比，姜黄素对马利兰耐药HL-60细胞的生长具有明显的抑制作用，24、48、72h的IC50分别为7．85、5．46、3．94（μg／ml），呈时间、浓度依赖性；姜黄素与马利兰联用对HL-60马利兰耐药细胞均有增敏作用。结论姜黄素对马利兰耐药HL-60细胞的生长具的明显抑制作用，且与马利兰无交叉耐药性，可作为白血病马利兰化疗的增敏剂。