CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤活性研究

为研究CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤作用,作者采集正常人外周血分离单个核细胞(PBMC),先用抗CD3的单克隆抗体(CD3McAb)和rIL-2诱导和激活,使之成为CD3McAb激活的杀伤细胞(CD3AK),再制备CD3AK的冻融提取液,然后进行体内、外抗肿瘤实验.结果:低剂量的CD3McAb和rIL-2能明显诱导PBMC的活化和增殖;激活后的CD3AK细胞冻融提取液可抑制小鼠肝癌实体瘤细胞H22在小鼠体内生长,其抑瘤率达68.20%(肿瘤局部注射)和60.38%(腹腔注射);在体外实验中,该提取液能有效杀伤K562和Raji瘤细胞,其杀瘤活性分别为83.32%和66.83%.以上研究说明CD3AK细胞冻融提取液有可能成为肿瘤生物治疗的一种新型制剂.     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

用人的外周血单核（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂ ａｃｔｉｖａｔｉｖｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ），并系统地研究ＣＤ３ＡＫ细胞的生物学特性及其体外抗肿瘤作用。结果表明，ＣＤ３ＡＫ细胞是异质细胞群，前体细胞来源丰富，主要是Ｔ细胞；经期内大量扩增，体外可长期存活，广谱杀瘤活性较低的ＩＬ－２依赖性。ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖机制与其表面高表达Ｉ     

小鼠CD3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能有小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤的细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对     

CD3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的 体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。方法 取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。结果 ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型     

CD3AK小鼠体内外抗肿瘤作用的实验研究

ＣＤ３ＡＫ细胞是一种增殖快、扩增倍数多、细胞毒活性高和低ｒＩＬ－２剂量依赖的新型免疫活性细胞。本实验应用ＣＤ３ＡＫ细胞治疗小鼠Ｂ１６黑色素瘤原发和肺转移肿瘤，结果显示：ＣＤ３ＡＫ细胞仅需小剂量的ｒＩＬ－２即可激活，且体外抑癌效应增强，实验动物的瘤体大小和肺转移结节数明显下降，生存期显著延长。     

CD3AK细胞抗肿瘤作用与MHC限制性关系

目的 研究抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3McAb activated killer cells,CD3AK细胞)杀伤肿瘤细胞作用与MHC限制性的关系。方法 采用微量淋巴细胞毒实验方法测定CD3AK细胞及肿瘤细胞MHC表型，用MTT法测定CD3AK细胞杀伤活性。结果 (1)不同人来源的CD3AK细胞，其MHC表型不同，但对同种肿瘤传代细胞都有很强的杀伤作用，且不同人来源的CD3AK细胞间杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(2)同一来源CD3AK细胞对不同肿瘤传代细胞株(MHC表型不同)的杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(3)人外周血诱导的CD3AK细胞对鼠肿瘤细胞株(Yac—1)与对人肿瘤传代细胞株(K—562，Raji)一样具有很强的杀伤作用。结论 CD3AK细胞杀伤肿瘤的作用是非MHC限制的，在临床应用中可用正常人外周血诱导得到的CD3AK细胞体外培养增殖后输给肿瘤病人进行治疗。该效应细胞来源方便，可用于肿瘤术后清除残留肿瘤细胞，具有重要应用价值。     

CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用机制的研究

目的：探讨CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用的机制。方法：将卵巢癌细胞株（A2780)分成两组,实验组采用CD3AK＋A2780,对照组采用LAK＋A2780,分别共育24h并于作用前和作用后每4h收集一次上清液以检测TNF－α和IFN－γ分泌水平。结果：实验组和对照组共育前,后上清液中均有TNF－α和IFN－γ分泌,但共育后TNF－α和IFN－γ分泌水平显著高于共育前（P＜0．01）,且同一效靶比的实验组TNF－α和IFN－γ分泌水平明显高于对照组（P＜0．05）。结论：CD3AK细胞可通过分泌细胞因子TNF－α和IFN－γ杀伤肿瘤细胞。     

CD3AK细胞对白血病细胞的体外杀伤作用

ＣＤ３单克隆抗体（ＣＤ３ＭｃＡｂ）对Ｔ细胞具有强烈的丝裂原作用。本文显示将ＣＤ３ＭｃＡｂ联合ＩＬ－２激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）对人急性白血病新鲜细胞和Ｋ５６２细胞均有明显匀伤作用。正常人ＣＤ３Ａ铎各型急性白血病杀伤活无差别;正常人与白血病缓解期的ＣＤ３ＡＫ细胞杀伤力类同,且自体与异体亦无区别,但是,复发期ＣＤ３ＡＫ细胞杀瘤作用明显减弱。     

脐血CD3AK细胞对不同肿瘤细胞株杀伤活性的比较

目的:比较脐血CD3AK细胞在体外对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。方法:脐血单个核细胞经CD3McAb和rIL-2诱导成CD3AK细胞,作用于不同的肿瘤细胞株(食管癌Eca109,胃癌BGC823,肺癌A549和白血病HL-60),用MTT法测其杀伤活性。结果:脐血CD3AK细胞对HL-60的杀伤活性高于对Eca109、A549和BGC823的杀伤活性(P<0.05),而对后3者的杀伤活性间差异无统计学意义。结论:脐血CD3AK细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性存在差异,临床上应引起注意。     

抗CD3单克隆抗体激活杀伤细胞高效扩增培养体系的建立及细胞毒活性检测

目的： 建立从20mL外周血中高效扩增抗CD₃单克隆抗体激活的杀伤细(CD₃AK)的培养体系,并进行体外细胞毒活性检测。 方法： 采用抗CD₃单克隆抗体（Anti-CD₃ mAb）激活人外周血单个核细胞（PBMC）,在人重组白细胞介素2(rIL-2)的协同活化下,获得CD₃AK。对CD₃AK进行长期体外培养,进行增殖动力学、免疫表型和体外抗肿瘤活性的分析。 结果：在培养第7～22天,CD₃AK增殖倍数明显提高,最高可达317倍;免疫表型分析显示,CD₃⁺细胞从活化前的51.9%增加至94.6%,CD₄⁺细胞从19.5%增加至51.1%,CD₈⁺细胞从22.1%增加至52.1%;效靶比20∶1组和40∶1组的杀伤肿瘤细胞活性明显高于10∶1组（P<0.05和P<0.01）;在7～19 d的培养天数之内,杀伤肿瘤细胞活性最强。 结论： 从外周血中高效扩增的CD₃AK是以CD₃⁺、CD₄⁺和CD₈⁺细胞为主的异质性细胞群,在体外有明显的杀伤肿瘤细胞活性。     

Expression of Anti-CD4 Human/Murine Chimeric Antibody and Their Killer Tumor Activity

MonoclonalantibodiesagainstCD4molecule(anti-CD4McAb)ofhumanTlymphocyteshavebeensuccessfullyusedforthetreatmentofautoimmunediseasesandpreventionoforgantransplantationrejectioninhuman[1'Zj.However,murinemonoclonalantibodies(Ahs)haveimmunogenicityonhumanandproduceneutralizinghumananti-mouseantibodies(HAMA).ToreducetheimmunogenicityofmurineMcAbinhuman,chimericAhshavebeenproduced,inwhichtheVregionsofthemouseantibodywiththedesiredspecificityarecombinedwithhumanCregions["4j.Inthisstudy,anti-C…     

抗CD3单抗增强激活骨髓抗白血病效应的研究

目的：为了研究增强ｒＩＬ－ ２ 激活的骨髓细胞（激活骨髓ＡＢＭ）的抗白血病效应。方法：应用抗ＣＤ３ 单抗与ｒＩＬ－ ２ 联合作用体外激活骨髓细胞,采用ＭＴＴ比色分析法测定不同条件下ＡＢＭ杀伤肿瘤细胞活性。结果：ｒＩＬ－ ２、抗ＣＤ３ 单抗＋ ｒＩＬ－ ２ 体外诱导３ ｄ 的ＡＢＭ 杀伤活性分别为５６．４％ ±９．０％ ,６５．８％ ±９．２％ ,两组相比差异显著（Ｐ＜ ０．０１）;体外诱导７ ｄ 细胞增殖倍数分别为３．７,６．０ 倍。结论：在合理的诱导条件下,能够增强ＡＢＭ 的杀伤活性,扩大ＡＢＭ 的增殖效应,从而使有限的骨髓细胞在短期内达到有效的治疗剂量     

抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备和活性检测

目的制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。方法采用常规免疫学方法制备抗抗CD3ScFv单克隆体并制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]的分离纯化。采用FACS法测定分别经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱及抗E-tag亲和层析柱纯化的抗CD3ScFv蛋白和Diabody[CD3×Pgp]对K562/A02和Jurkat细胞特异结合活性。采用间接ELISA法进行抗抗CD3ScFv抗体特异性结合活性的检测。结果抗抗CD3ScFV单克隆抗体能特异性地与抗CD3ScFv蛋白结合而不与血清发生反应。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱和经抗E-tag亲和层析柱纯化后的抗CD3ScFv蛋白均能与Jurkat细胞特异结合。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱纯化的去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合的阳性率分别为89.87%和83.95%;与其亲代抗体竞争结合K562/A02和Jurkat细胞后,结合率分别下降为56.30%和43.78%。结论制备了抗抗CD3单克隆抗体和亲和层析柱,可用于抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。     

活化B淋巴细胞与NS_1瘤细胞融合瘤苗的抗肿瘤免疫治疗

目的：观察活化Ｂ淋巴细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合瘤苗对荷ＮＳ１瘤ＢＡＢＬ／Ｃ小鼠免疫治疗作用。方法：用灭活ＮＳ１瘤细胞及其裂解物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠活化的Ｂ淋巴细胞;以５０％ＰＥＧ为融合剂,将免疫脾Ｂ淋巴细胞与野生型ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,经ＨＡＴ选择性培养、筛选融合细胞,以融合细胞作为瘤苗,免疫治疗荷ＮＳ１瘤小鼠２次。结果：融合细胞体在宿主体内的致瘤性降低;融合细胞瘤苗免疫治疗荷瘤小鼠的肿瘤组织体积逐渐减小、最终完全消失,小鼠存活期显著延长。结论：活化的Ｂ淋巴细胞与ＮＳ１细胞融合瘤苗能有效诱导小鼠体内的抗肿瘤反应。     

NK细胞上清液提高CTL细胞对肿瘤细胞杀伤力及机制的研究

目的研究从白细胞介素2(IL-2)、IL-2+IL-12、IL-2+IL-18、IL-2+IL-12+IL-18活化的NK细胞提取的上清液是否能提高细胞毒性T细胞(CTL)对黑色素瘤细胞的杀伤率及其机制。方法提取NK细胞,IL-2 6 000IU/mL、IL-2 6 000IU/mL+IL-12 10ng/mL,IL-2 6 000IU/mL+IL-18 100ng/mL,IL-2 6 000IU/mL+IL-12 10ng/mL+IL-18 100ng/mL活化,3d后提取上清液,与M05细胞培养过夜,流式细胞仪检测肿瘤细胞表面Ⅰ类组织相容性抗原(MHCⅠ)表达,以其为靶细胞检测CTL细胞对M05细胞杀伤率。结果 NK细胞上清液提高M05细胞表面MHCⅠ分子表达及CTL细胞对M05细胞杀伤率。结论 NK细胞上清液能够增强CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。     

抗CD3/CD45双特异抗体激活的效应细胞对白血病细胞的杀伤效应

目的探讨双特异性抗体用于白血病自体干细胞移植体外净化的可能性。方法以抗ＣＤ３／ＣＤ４５双特异性抗体激活外周血单个核细胞,以ＨＬ６０为靶,用ＬＤＨ方法测定杀伤效应。结果靶效比例不同时,抗ＣＤ３／ＣＤ４５激活的效应细胞对ＨＬ６０细胞都表现出杀伤效应。结论抗ＣＤ３／ＣＤ４５可能用于骨髓／造血干细胞移植的体外净化。     

抗CD3单链抗体基因克隆表达及生物活性鉴定

The genes encoding antibody heavy and light chain variable regions(VH and VL)were cloned by RT-PCR from OKT3 hybridoma cells,which produced anti-CD3 moleclonal antibody.The VH and VL genes were fused and become a single chain Fv(scFv).The scFv gene was cloned into pCANTAB5E vector and expressed on bacterial phage surface.By three panning rounds,we have obtained two single-chain antibodys that specific for CD3.The antiCD3 scFv wil be a reagent fox diagnosis and therapy of immuno-disorder.     

抗前列腺癌/抗CD3双特异性单链抗体的构建及表达

目的 构建并表达抗前列腺癌／抗人CD3双特异性单链抗体,观察其生物学活性及临床意义。方法 利用PCR方法及分子生物学基因克隆技术,构建抗前列腺癌／抗人CD3双特异性单链抗体融合基因,测序正确后,利用EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点,将融合基因亚克隆入真核表达载体进行表达,表达产物纯化后,利用流式细胞仪进行生物学活性测定。结果 经酶切、测序分析证实插入的基因片段大小为1．5kb,序列与设计完全一致;SDS-PAGE和Western印迹实验证明：表达产物分泌于细胞培养上清,相对分子质量为6l000;流式细胞仪结果显示：双特异性单链抗体与PBMC和PC-3细胞的阳性结合率分别为54．1％和53．7％。结论 抗前列腺癌／抗人CD3双特异性单链抗体具有较好的生物学活性,为进一步的体内实验奠定了基础。