DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌的关系研究

目的探讨DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌发生的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测33例肝细胞癌及相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态,分析上述组织中两种基因甲基化状态与临床资料的关系。结果DKK-3和WIF-1基因在癌组织中甲基化率明显高于癌旁组织和正常组织(P<0.05,P<0.05),而癌旁组织和正常组织中DKK-3和WIF-1基因甲基化率相比无明显差异;癌组织中DKK-3基因甲基化与临床资料中年龄及肝硬化有关;癌组织中WIF-1基因甲基化与临床资料中乙肝表面抗原、肝硬化有关。结论DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化与HCC的发生相关;DKK-3和WIF-1基因致肝细胞癌的发生机制可能与肝硬化致肝细胞癌的发生机制不尽相同,两者是否有相互作用尚不清楚。     

肝细胞癌多基因甲基化研究

目的 通过研究肝癌中多基因启动子区的甲基化,说明抑癌基因甲基化在肝癌发生的普遍性。 方法分别抽提冻存的肝癌、癌旁组织和正常肝组织的DNA,利用亚硫酸氢钠具有使未甲基化的胞嘧啶转为尿嘧啶而不改变甲基化胞嘧啶的特性分别设计甲基化引物和非甲基化引物,然后分别进行PCR 反应。我们分别检测了转移抑制基因p15, SYK, TIMP-3, E-cadherin,RASSAF1 和肿瘤相关基因p53, RB1, WT1, p14, p16启动子区在60个肝癌、癌旁和6个正常肝组织的甲基化情况。 结果60个肝癌标本中10个基因的甲基化情况各不相同：从p53的8%~90%的RASSAF1;肝癌组织比癌旁组织的甲基化平均水平高,二者在统计学上有显著差异（P<0.05）。 结论肝癌中有多个基因存在甲基化,且肝癌组织甲基化水平较癌旁组织高。     

宫颈脱落细胞DKK-3基因甲基化在宫颈癌中的意义

目的检测宫颈脱落细胞Dickkopf相关蛋白3(DKK-3)基因启动子甲基化并研究其在宫颈癌中的临床意义。方法选择宫颈癌患者(CER组)和健康女性(CON组)为研究对象,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测两组研究对象宫颈脱落细胞DKK-3基因启动子甲基化,比较DKK-3基因启动子甲基化率在不同临床病理因素中的差异。结果 CER组宫颈癌患者宫颈脱落细胞DKK-3基因启动子甲基化率明显高于CON组健康女性(53.8%vs.0.0%,P0.01)。CER组宫颈癌患者宫颈脱落细胞DKK-3基因启动子甲基化率在HPV感染、组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和国际妇产科联盟(FIGO)分期中的差异均有统计学意义(均P0.05),有HPV感染、组织学分级高、肿瘤最大径大于或等于4cm、有淋巴结转移、有远处转移和FIGO分期晚的宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率明显高于无HPV感染、组织学分级低、肿瘤最大径小于4cm、无淋巴结转移、无远处转移和FIGO分期早的患者。结论宫颈癌患者宫颈脱落细胞DKK-3基因启动子甲基化与HPV感染、组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和FIGO分期有关,可用于评估宫颈癌的病情严重程度和预后。     

肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化及蛋白表达的研究

目的 通过检测肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化状态与蛋白表达的关系,探讨p14ARF基因启动子甲基化与肝细胞癌的关系.方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)方法及免疫组化(IHC)法分别检测50例肝细胞癌组织和癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平.结果 癌组织及癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化阳性率分别为28%(14150)和4%(2/50)(P<0.01).癌与癌旁组织p14ARF蛋白表达差异极显著(P<0.01).p14ARF基因启动子甲基化和蛋白表达与临床分期、门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤个数及血清AFP值无关,而在肿瘤分化程度上p14ARF盯蛋白表达有显著差异,p14ARF基因启动子甲基化则无差异.p14ARF基因启动子甲基化与蛋白表达呈负相关.结论 启动子区甲基化是p14ARF基因失活的重要机制.p14ARF启动子区异常甲基化可能参与了肝癌的发生、发展,在肝癌的进展中起重要作用.     

肝癌患者血浆WIF基因甲基化检测临床研究

目的 研究WIF-1基因在肝癌组织和血浆中的表达关系以及与肝癌发生、转移乃至复发的临床意义.方法 收集南通大学附属肿瘤医院2008年3月～2009年10月间48例肝细胞癌(HCC)、癌旁组织、对应血浆及正常健康体检者血浆标本24例,诊断标准以病理诊断为标准.采用甲基化特异性PCR方法对所有组织和血浆标本WIF-1基因表达进行分析.结果 48例HCC患者临床标本中,25例WIF甲基化表达阳性,阳性率为52.08%;48例血浆中,15例WIF甲基化表达阳性,阳性率为31.25%,组织和血浆符合率为60%.癌旁组织以及健康对照组血浆中均未见WIF甲基化表达.WIF-1甲基化阳性与阴性患者中AFP、AFU表达均有明显差异(χ2=7.919,P<0.05;χ2=9.001 5,P<0.05);在与HBsAg关系中,发现WIF-1甲基化表达与HBsAg没有关系.15例血浆甲基化阳性的HCC患者中,10例复发或转移,占66.7%;33例非甲基化阳性者中,10例复发或转移,占30.3%,二者之间有明显的差异(χ2=5.61,P<0.05).结论 甲基化阴性患者预后明显优于阳性患者,监测高危人群的肝癌组织和血浆中WIF-1基因表达对肝癌患者早期转移复发有一定的临床诊断价值,临床上血浆中WIF-1表达检测可以代替组织中WIF-1基因表达,作为一种简便的方法易于临床推广应用,特别对AFP阴性的患者预后具有一定的临床价值.     

膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态的研究

目的 探讨膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态及其意义。方法 收集30对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织；采用甲基化特异聚合酶链反应（methylation specific PCR，MSP）检测hMLH1基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果 30对膀胱癌组织、癌周正常组织中hMLH1基因的甲基化阳性率分别为10／30、1／30，二者差异有统计学意义（P〈0．叭）；hMLH1基因甲基化阳性率在Ta-T1期、T2-T3期膀胱癌中分别为7／19、3／11，二者差异无统计学意义（P〉0．05）；在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌中分别为7／18、2／9、1／3，三者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化，但与膀胱癌的临床病理特点无显著相关性，提示hMLH1的异常甲基化可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

应用BSP克隆测序检测肝细胞癌组织中Dynamin 3基因启动子区域甲基化水平

目的检测原发性肝细胞癌组织Dynamin 3(DNM3)基因启动子区域36个CpG的甲基化水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征的关系,探讨DNM3基因甲基化在肝癌形成过程中的作用。方法提取30对患者肝细胞癌组织和癌旁组织DNA,经亚硫酸氢盐处理后,进行巢式PCR并联合克隆测序检测DNM3基因的甲基化水平。结果肝细胞癌患者的甲基化事件发生率为83.3%(25/30)。癌组织的DNM3基因启动子区域平均甲基化率为37.8%,癌旁组织为12.0%,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。DNM3基因甲基化诊断肝癌的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)为0.831,对肝癌有较好的诊断价值。结论 DNM3作为肝细胞癌的一种抑癌基因,其启动子区域高度甲基化可能会促进肝细胞癌的形成。     

散发性乳癌WIF-1基因启动子区多态性研究

目的探讨WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T位点单核苷酸多态性与散发性乳癌发生的关系。方法采用等位基因特异性扩增（ASA）法对200例乳癌病人和200例正常对照者的WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T位点单核苷酸多态性进行分析,PCR产物进行测序。结果乳癌病人WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T位点基因型频率与正常对照者比较差异具有显著性（χ2=117.475、38.798,P〈0.001）;乳癌病人rs58172684 G等位基因频率显著高于正常对照者（χ2=11.620,P〈0.001）。rs58172684 A/G位点AA、AG、GG等3种基因型和rs2336433 C/T位点CC、CT、TT等3种基因型与年龄、病理分级、组织分型及淋巴结转移无关（P〉0.05）。结论乳癌病人WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T单核苷酸多态性可能与散发性乳癌的发生相关,G等位基因可能为其发生的遗传危险因素。     

血清 GSTP1基因甲基化定量分析在肝细胞癌的早期诊断价值

目的：建立实时荧光定量甲基化方法研究肝细胞癌（HCC）患者外周血血清中游离谷胱甘肽-硫-转移酶P1基因（GSTP1）启动子区域甲基化状态,探讨其是否可作为HCC早期诊断的指标。方法收集95例血清标本,包括40例HCC、30例肝硬化和25例健康体检者,采用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）技术对血清中GSTP1基因的甲基化水平进行定量分析,应用接受者操作特性（ROC）曲线评估其诊断价值。结果肝癌患者血清中GSTP1基因甲基化定量水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。ROC曲线分析表明通过GSTP1基因甲基化定量分析能够高效区分肝癌和肝硬化及健康者（AUC＝0．8641）,以甲基化率2％作为诊断HCC的临界值,其诊断特异度为87．5％,敏感度达69．6％;联合检测血清GSTP1基因甲基化和血清AFP可将HCC检出率提高至75％。结论实时荧光定量甲基化方法可精确定量血清中GSTP1基因甲基化水平,在HCC的早期诊断中有一定的应用价值。     

APC、P16基因甲基化与肝细胞癌关系的Meta分析

目的应用Meta分析的方法评价APC基因和P16基因甲基化与肝细胞癌(HCC)的关系。方法检索1978～2011年在Medline、Pubmed等数据库及1994～2011年在中国知网和万方数据库收录的所有有关P16、APC基因甲基化与HCC病例对照研究文献,按纳入与排除标准筛选文献,并用RevMan 5.0软件进行统计分析。结果纳入国内外标准的16篇数据合并结果显示,APC基因甲基化病例组488例,对照组HCC患者肿瘤组织434例,其中HCC癌旁组织390例,非肿瘤肝病患者组织21例,健康人组织23例;HCC组与癌旁组织组合并的有效率的比值比(OR)=5.91,95%CI为4.20%～8.31%;HCC肿瘤组与正常组织组OR=35.19,95%CI:6.00%～206.33%。P16甲基化病例组HCC患者肿瘤组织400例,对照组共437例,其中HCC癌旁组织398例,非肿瘤肝病患者组织21例,健康人组织18例。HCC组与癌旁组织组的OR=5.69,95%CI:3.96%～8.19%,HCC肿瘤组与正常组织组OR=12.18,95%CI:2.56%～58.03%。结论 APC、P16基因的高甲基化导致了该基因的失活,与HCC的发生和发展有密切关系。     

DKK-3基因甲基化在胃癌病情及预后评估中的价值

目的研究胃镜活检组织Dickkopf相关蛋白(DKK-3)基因甲基化在胃癌病情及预后评估中的价值。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应检测胃癌患者肿瘤组织、癌旁正常组织及健康人胃镜活检组织的DKK-3基因甲基化,比较不同临床病理因素中DKK-3基因甲基化的差异,分析3年生存率与DKK-3基因甲基化的关系。结果观察组研究对象肿瘤组织DKK-3基因甲基化率显著高于癌旁正常组织和健康对照组研究对象正常组织,差异有统计学意义(P0.05),DKK-3基因甲基化率在癌旁正常组织和健康对照组研究对象正常组织差异无统计学意义(P0.05)。观察组胃癌患者肿瘤组织中DKK-3基因甲基化率在性别、年龄、病变部位、肉眼形态、幽门螺杆菌感染和病理类型中差异无统计学意义(P0.05),在分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期中差异有统计学意义(P0.05)。DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率为23.8%,未甲基化胃癌患者3年生存率为52.6%,DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率显著高于未甲基化患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论胃癌患者胃镜活检组织DKK-3基因甲基化率越高则病情越重、预后越差,可作为胃癌病情及预后评估的标志物。     

强直性脊柱炎患者血清中DKK-1的表达及其意义

目的检测不同病期强直性眷柱炎（ankylosingsporidylitis,AS）患者血清中Dickkopf-1（DKK—1）和肿瘤坏死因子（INF—a）的表达水平,初步探讨成骨相关因子表达水平与As的关系。方法采用酶联免疫吸附法（EUsA）检测47例As患者（包含22例早期患者和25例中晚期患者）、20例类风温性关节炎（RA）患者和20例健康对照人群血清DKK—1和TNF—a的表达水平。结果AS和RA患者血清中DKK—1和TNF—a水平明显高于正常对照,AS和RA患者组相比较血清DKK-1和TNF—a水平没有显著差异。中晚期As患者DICK—1水平较早期患者明显降低,INF—a表达也有降低,但无显著差异,Spearman分析显示,AS患者血清DKK-1和TNF—a表达水平正相关。结论随着AS骨化程度的进展,DKK—1表达呈下调趋势,提示DKK-1的表这下调可能参与了AS患者的骨化,DKK—1可能是与As骨化程度相关的血清标志物。     

肾细胞癌中Wif-1基因的甲基化状态及表达

目的检测肾细胞癌(RCC)中Wnt抑制因子-1(Wif-1)基因的甲基化状态及表达水平,探讨其在肾细胞癌发生发展中的可能机制。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例肾细胞癌及相应癌旁正常肾组织中Wif-1基因的甲基化状态及表达水平。结果 Wif-1基因在RCC组织中的甲基化率显著高于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。Wif-1基因在RCC组织中的相对表达量显著低于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。在RCC组织中,Wif-1基因甲基化阳性组mRNA的相对表达量与甲基化阴性组mRNA的相对表达量比较无显著差异(P>0.05)。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化在肾细胞癌的发生中是一个频发事件。     

宫颈脱落细胞RASSF1A基因甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究宫颈脱落细胞RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测宫颈癌患者和健康女性宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化,分析与病理因素间的关系。结果宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率为64.0%,高于健康女性的1.3%(P<0.05)。宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率在宫颈癌不同组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、Figo分期患者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌病理因素密切相关,可作为宫颈癌病情判断和预后评估的标志物。     

肾癌组织中Tim-3基因的甲基化分析

目的分析肾癌组织中Tim-3基因启动子的甲基化情况,探讨Tim-3甲基化在肾癌发生中的可能作用。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）检测20例肾癌组织和3例癌旁组织中Tim-3基因启动子甲基化状态,分析检测结果。结果肾癌组织中有11例（55%）检测到了Tim-3基因甲基化表达,相应癌旁组织中没有检测到Tim-3基因甲基化表达。结论肾癌组织中Tim-3基因启动子发生甲基化,Tim-3基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关。     

The tumor-suppressor gene LZTS1 suppresses hepatocellular carcinoma proliferation by impairing PI3K/Akt pathway

BackgroundTo study the role of LZTS1 in hepatocellular carcinoma (HCC) proliferation and the molecular mechanism involved.MethodsLZTS1 expression was studied in 10 HCC cell lines and 1 normal hepatocyte cell line by western blot analysis and qRT-PCR. One HCC cell line was selected and transfected with LZTS1 lentivirus. Cell proliferation and cell cycle were then determined by CCK-8 assay and flow cytometry, respectively. LZTS1, cyclin D1, CDK1, Cdc25C, pS473 Akt, and pT308 Akt mRNA and protein expressions were measured. PS473 Akt and pT308 Akt expression level was also compared with the HCC cells treated with LY294002.ResultsCompared with the normal hepatocyte cells, LZTS1 expression in HCC cells was significantly lower. After the transfection with LZTS1 lentivirus, HCC cell proliferation ability decreased markedly and HCC cells were blocked at G2/M phase. Cyclin D1 and CDK1 expression were both decreased but not significantly. Cdc25C expression was increased significantly. PS473 Akt and pT308 Akt expression level was increased significantly as well, which were almost the same with those transfected with LY294002.ConclusionLZTS1 could inhibit HCC cell proliferation by impairing PI3K/Akt pathway.