肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒评价技术的研究

目的探索适合评价核酸检测试剂盒的评价方法。方法本研究采用室内技术参数验证的方法对某公司的肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒(实时荧光PCR法)进行评价。对检测的灵敏度特异性、假阳性/假阴性、检测限、耐受性及与标准方法的一致性共6个方面的参数分析评价。结果评价结果表明,对生鲜肉、酱卤肉、熏烤肉、速冻调理肉制品4类共40种肉制品,试剂盒检测结果与标准检测方法检测结果无显著差异,即试剂盒可以满足肉及肉制品牛源性成分核酸检测的需求。结论本文为检测机构筛选合适的牛源性成分检测试剂盒有一定的借鉴意义,并对建立核酸检测试剂盒的评价方法提供一定的技术帮助。     

肉制品中动物源性成分DNA检测方法的研究进展

肉制品主要成分标识的真实性是全球重要的食品安全问题之一,特别是肉制品中动物源性成分的掺假和标识问题已引发全球关注。如何对肉制品中动物源性成分进行鉴定和标识已成为产品真实性鉴定的热点。基于DNA分子稳定性强的优点,DNA检测技术被广泛用于食品安全检测和监测诸多领域,体现出了灵敏度高、特异性强等优势。本文重点从动物源性检测的靶序列DNA选择和DNA分析技术研究2个方面,阐述了肉制品中动物源性成分定性、定量检测技术的研究和应用,并讨论动物源性成分定量分析的可能性,为我国实施动物源性成分量化监管提供思路。     

PCR法检测肉制品中鹅源性成分

目的 建立一种PCR法检测肉制品中鹅源性成分的方法。方法 根据鹅的线粒体DNA(mtDNA)序列设计引物, 以9种动物的DNA为模板, 利用新设计的鹅的特异性引物进行PCR反应, 并用琼脂糖凝胶电泳检测引物的特异性和敏感性。结果 通过PCR反应, 仅鹅的DNA扩增得到了194 bp的目的片段, 其余物种DNA和空白对照均无目的片段。扩增产物的核苷酸序列与GENBANK中检索到的相应序列基本相符合。 结论 该方法特异性强、灵敏度高, 适合检测肉制品中的鹅源性成分。     

狗源性DNA检测试剂盒的研制与评价

本研究旨在研制一种快速鉴定肉制品中狗源性成份的DNA检测试剂盒,并对此试剂盒做出方法学评价。以改良SDS-PK法提取狗肉及掺假肉品种(狐肉、貂肉)基因组DNA,选择具有种属特异性的线粒体细胞色素B基因作为鉴定靶基因,应用Primer5.0设计特异性引物,建立狗源性DNA检测方法,组装狗源性DNA检测试剂盒,并进行特异性、稳定性及重复性评价。结果表明,本试剂盒可有效检测肉制品中狗、狐、貂源性成分,DNA提取效率高,仅0.05 g肉样即可提取浓度高于100 ng/μL的基因组DNA,OD_260/280处于1.80~2.00之间,最低检测限为10^-4 ng/μL,所有检测步骤可在4.5 h内完成,操作简便,特异性高。试剂盒所采用试剂安全无毒,反复冻融20次后仍然有效,可于-20 ℃保存一年。随机抽取12份市售样品进行检测,有3份样本中存在狐、貂肉冒充狗肉现象,掺假率高达25%,该结果与长春食品药品检验中心检测结果一致。狗源性DNA检测试剂盒灵敏性高、特异性强,检测结果准确稳定,具有良好重复性,适用于狗肉快速定性检测。     

肉及肉制品中动物源性成分核酸检测方法研究进展

民以食为天,食以安为先。肉类为人类的生命活动提供了丰富的蛋白质、脂肪和B族维生素等,是人们生活的重要食品。但在利益的驱动下肉制品行业内掺假事件时有发生,严重侵害了消费者权益,并造成了不良的经济和社会影响。因此加强研究肉类产品动物源性成分的检测技术,广泛开展肉及肉制品中动物源性成分的检验意义重大。本文综合论述了目前已有的肉及肉制品中动物源性成分的核酸检测技术,并对有应用前景的新技术做了简要介绍。     

可视化LAMP检测常见肉制品中猪肉成分

根据GenBank中公布的猪线粒体色素细胞b基因序列设计6 条特异性环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）引物,通过简化线粒体DNA提取步骤,优化反应体系,以常见的牛、羊、鸡、鸭、马、驴肉为阴性对照验证该方法的特异性,掺假率梯度稀释以验证该LAMP法的最低检测限,建立常见肉制品中猪肉成分的可视化LAMP检测方法。结果表明：该方法提取目的基因操作简单、稳定,该可视化LAMP检测法以4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐为指示剂,能准确检测出常见肉类中猪肉是否掺杂,检测结果肉眼可见,灵敏度为10 pg/μL。     

用于转基因检测的番木瓜基因组DNA提取方法的比较

本研究以番木瓜果实的不同部位,果皮、果肉和种籽为材料,比较了改进CTAB法和试剂盒法两种提取基因组DNA的方法。分别对植物叶绿体基因rbcL和番木瓜特异基因Papain进行了普通PCR和荧光PCR扩增,检验提取DNA的质量。结果显示改进CTAB法和试剂盒法都能提取得到纯度较高的DNA,适合普通和荧光PCR反应的要求,适用于外源基因的检测。改进CTAB法提取的DNA浓度要高于试剂盒法,而试剂盒法提取DNA所用的时间较短,更为方便,但成本较高。同时材料取样部位最好是果皮和果肉,果皮和果肉为材料提取得到的DNA纯度很高,适用于荧光PCR的要求。     

肉制品中牛源性成分的PCR-RFLP检测

根据牛线粒体DNA特异性片段设计出引物,应用PCR-RFLP技术检测出7种生肉和4种加工肉制品中的牛源性成分,并根据线粒体中Cytb保守序列设立内源参照基因检测DNA提取效率。方法简便、快速、适合实验室常规物种检测。     

骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取及猪、羊源性成分的检测

目的 优化深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取方法, 鉴定检测其动物源性成分。方法 采用2种试剂盒法, 并对试剂盒部分步骤进行适度修改后提取骨胶原蛋白肽粉中的基因组DNA, 分别用猪、羊引物和探针对提取的DNA片段进行实时荧光PCR扩增检测。结果 只有DNeasy Blood & Tissue Kit提取试剂盒法提取的DNA纯度较好, A260/A280比值为1.73, 浓度为8.2 ng/μL, 并且经18S rDNA片段的PCR扩增结果表明样品中含有哺乳动物DNA, 且DNA中不含抑制PCR反应物质。检测结果表明该骨胶原蛋白肽粉中含有猪源性成分。 结论 采用试剂盒法提取深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA时, 需对部分步骤做修改后才可进行。     

环介导等温扩增与qPCR用于检测肉制品中狗源性成分的比较

目的 建立基于实时荧光PCR和环介导等温扩增检测肉制品中狗源性成分的检测方法并比较2种方法的检测效能.方法 针对狗线粒体CYTB基因保守序列,采用Primer Explorer Version 4软件设计环介导等温扩增引物,Primer Express 3.0.1软件设计实时荧光PCR引物及探针.提取狗肉基因组DNA作...     

Development of a Polymerase Chain Reaction System for the Detection of Dog and Cat Meat in Meat Mixtures and Animal Feed

The identification of species origin of meat represents a considerable problem for food and animal feed analysis. In the present study a PCR‐mediated method for the detection of dog and cat meat was developed. For this the cytochrome b gene sequence of both species was analyzed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. The use of the restriction enzymes Alu I and Hae III yielded specific restriction profiles characteristic for each species. The meat of both species could additionally be differentiated with species‐specific oligonucleotide primers based on specific parts of the cytochrome b gene sequences characteristic for dog and cat. The use of these oligonucleotide primers allowed a direct identification of dog and cat meat in meat mixtures even after heat treatment.     

应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌

建立一种运用多重聚合酶链式反应(PCR)结合基因芯片技术检测大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌5种食源性致病菌的快速、准确、灵敏的方法。分别选取编码大肠埃希氏菌的slt基因、沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、志贺氏菌ipaH基因和单核细胞增生李斯特菌inlA基因,并以细菌16S rDNA基因作为阳性对照,设计引物和探针,进行多重PCR扩增,产物与含特异性探针的芯片杂交。结果表明：该基因芯片可同时特异性地检测5种致病菌,多重PCR检测灵敏度为20pg,而DNA芯片检测灵敏度可达2pg;用所制备的基因芯片检测实际肉及肉制品样品,准确率高于传统培养法。所建立的基因芯片检测方法特异性好、灵敏度高,可为食源性致病菌的检测提供理想手段。     

乳制品中活双歧杆菌检测试剂盒的研制及应用

在EMAReal-Time PCR检测方法的基础上,组装检测乳制品中活双歧杆菌的荧光定量PCR试剂盒。建立了EMAReal-Time PCR检测乳制品中活双歧杆菌的标准曲线。组装出检测乳制品中活双歧杆菌的荧光定量PCR试剂盒。该试剂盒批内及批间变异系数(CV)均小于5%;对乳制品中常见乳酸菌无交叉反应;最低检测限为2×104CFU/mL。该试剂盒在-20℃下,至少可保存6个月,4℃可保存3个月。分别采用研究所获得的试剂盒和平板菌落计数法检测12份市售酸乳中的活双歧杆菌的数量,2种检测方法计数结果差异不显著(P>0.05)。该方法所建立的标准曲线相关系数大于98%。所研制的试剂盒重复性较好、特异性较强、灵敏度较高,可以准确地定量检测乳制品中的活双歧杆菌。     

肉品中致病菌的多重PCR检测及固相化试剂盒的研究

沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌0157:H7是肉品中的重要食源性致病菌,建立其快速检测方法对肉品的质量控制具有重要作用.本研究根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因以及人肠杆菌0157:H7的咖E基因,分别设计出三对特异性引物,通过对多重PCR反应体系和条件的优化,建立多重PCR检测体系,并集成快速检测试剂盒.结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在肉品中的检测灵敏度可达1CFU/g,整个检测时间在24h以内.集成的试剂盒检测性能良好,具有较强应用价值,可推广应用于食品卫生检测以及临床检验等领域.     

基于COI序列的DNA微条形码技术鉴别熟肉制品中11种肉掺假的研究

建立并优化了基于COI序列的DNA微条形码技术（mini-barcoding）检测熟肉制品中11种常见肉类掺假的方法。样品经超声与真空冷冻干燥处理,提取DNA模板和PCR扩增后,目标扩增物经切胶纯化后进行克隆测序,并将测序结果提交GenBank数据库Blast比对。筛选出适合猪、牛、羊、鸡、鸭、鸽子、马、驴、鹅、兔、鼠11种肉类的扩增的通用引物COI-A,对PCR扩增条件进行优化,并建立18个掺假模式,对低经济价值肉类（猪、鸡、鸭、马、驴、鼠）的掺入的最低比例进行考察。结果表明：11种熟肉的DNA经通用引物COI-A扩增后,其扩增效率均为100%,18个掺假模式中,牛肉和羊肉中掺入6种低经济价值肉类的最低检出比例为5%,而掺入鸡肉的最低检出比例为10%,而鹅肉、鸽子肉和兔肉的掺假模式中最低检出比例为10%;利用本方法检测30批次市售样品,发现有18批次的熟肉制品存在掺假情况。该方法前处理简单,灵敏度合适,重现性好,可作为高经济价值熟肉制品中掺假低经济价值肉类的有效检测方法。     

肉和肉制品中肠杆菌科细菌的检测和计数

本文对七种阴性菌株和四种阳性菌株进行研究,建立了肉和肉制品中肠杆菌科细菌检测和计数的方法,并对新鲜肉、冷冻肉、冷藏肉和肉制品进行测定。实验结果发现:冷藏、冷冻和新鲜肉的表层样品肠杆菌科细菌的检出量较高,都超过了110 MPN/g,而深层样品肠杆菌科细菌的检出量较少,大部分为<0.3 MPN/g,熟肉制品、香肠类、肉松、肉干类和腊制品中的肠杆菌科细菌的检出量都较少,预加工肉制品中有少数样品的肠杆菌科细菌超过了110 MPN/g。     

肉及肉制品微生物检测新技术研究进展

肉及肉制品营养丰富,也易受微生物污染,其食用安全性备受关注。本文介绍肉及肉制品中微生物限量要求,分析传统微生物检测方法的弊端,综述快速测试片法、三磷酸腺苷生物荧光法、分子诊断法、免疫分析法、光谱法、仪器法等新技术在肉及肉制品中微生物检测应用中的研究进展,以期为国内学者开展相关研究提供参考,满足肉类产业对微生物检测快速、准确的需求,为肉类企业减轻流通压力并降低由此带来的经济损失。     

Determination of Sex Origin of Meat and Meat Products on the DNA Basis: A Review

Sex determination of domestic animal's meat is of potential value in meat authentication and quality control studies. Methods aiming at determining the sex origin of meat may be based either on the analysis of hormone or on the analysis of nucleic acids. At the present time, sex determination of meat and meat products based on hormone analysis employ gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), high-performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry (HPLC-MS/MS), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Most of the hormone-based methods proved to be highly specific and sensitive but were not performed on a regular basis for meat sexing due to the technical limitations or the expensive equipments required. On the other hand, the most common methodology to determine the sex of meat is unquestionably traditional polymerase chain reaction (PCR) that involves gel electrophoresis of DNA amplicons. This review is intended to provide an overview of the DNA-based methods for sex determination of meat and meat products.     

基因芯片在肉品检测中的应用(英文)

As a new micro-analysis technique DNA chip has became one of research hot spots. This article summarized the basic concept of DNA chip technique,the application in meat product detection and discussed the advantaged and disadvantaged of DNA chip technique. It can provide theoretical principle for the application of DNA chip technique.     

环介导等温扩增技术检测肉及肉制品中沙门氏菌

建立用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肉及肉制品中沙门氏菌的方法。利用靶基因的6 个区段设计4 条引物,应用具有链置换活性的Bst DNA 聚合酶,能够在恒温(65℃左右)条件下特异、高效、快速地扩增待测物的DNA。针对沙门氏菌的特异基因invA 基因设计两对LAMP 引物,建立LAMP 检测沙门氏菌的新方法,并对肉及肉制品中的沙门氏菌进行检测。结果表明：建立LAMP 技术检测肉及肉制品中沙门氏菌的方法,该方法能够特异检测沙门氏菌,且灵敏性可达10-9CFU/mL,对48 份样品检测,该方法检出率为91.6%、敏感性100%、特异性70.0%、符合率为93.8%、检出时间1.5h。