山羊粪便总DNA提取方法的比较

本试验比较了从山羊粪便中提取总DNA的四种方法的优缺点,旨在为后续实验提供合适的提取方法。笔者首先采用PBS缓冲液过夜处理粪便标本,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB抽提法、天根试剂盒法和OMEGA试剂盒法提取样品总DNA。结果显示：酚-氯仿抽提法提取的DNA完整性不好,且纯度低;CTAB法提取的DNA浓度和纯度都较高,但完整性不好;试剂盒法提取方便,操作简单,时间短,但提取的浓度较低,其中天根试剂盒法提取的DNA纯度高,完整性好。综合考虑,天根试剂盒法是提取山羊粪便总DNA的最佳方法。     

少量动物粪便细菌总DNA提取方法的研究

本研究首先采用棉签直接插入肛门法采集仔猪粪便样品,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB法和试剂盒法等3种方法提取样品中细菌总DNA。结果表明:UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒更适宜于提取少量动物粪便细菌总DNA及后续的分子生物学试验。     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

普氏原羚粪便DNA提取方法的改进与比较

为提高普氏原羚粪便DNA提取效果,在总结传统提取粪便DNA方法的基础上,设计了新的提取方法.该方法以NaCl替代TE溶解粪便样品.增加溶茵酶用量以减少蛋白酶K用量.经琼脂糖凝肢电泳和PCR扩增12SrRNA片段对改进方法与传统提取粪便DNA方法进行比较,发现用改进方法提取的DNA质和量均比传统方法好,且可满足一般分子生物学实验的需要.扩增的普氏原羚12SrRNA片段已经测序.并递交GenBank,登录号为EU247756.新方法不仅克服了传统提取法中DNA降解严重的问题.而且有效地解除了粪便DNA对Taq酶的抑制作用.为普氏原羚遗传多样性保护提供技术支持.     

一种改进的方法提取白头鹤粪便DNA

现有的粪便DNA提取方法通用性不好,DNA纯度不高不适用于白头鹤等水鸟,本研究探索一种改进的硫氰酸胍裂解法。通过线粒体DNA细胞色素b、控制区基因和微卫星DNA的PCR扩增及线粒体DNA控制区序列的测定,经琼脂糖凝胶电泳检测以及测定序列显示,提取的DNA模板纯度高,效果很好,证实改进方法的可靠性、有效性。为其他濒危水鸟的非损伤取样提供了新的材料和方法,为其保护遗传学的研究提供一定的新技术。     

柱花草总RNA提取方法比较

以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis Reyan No.2）叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较SDS 酚抽提法、CTAB法、Trizol试剂盒和柱式植物RNAout试剂盒法提取柱花草总RNA的质量和纯度。结果表明,改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA的OD260 nm/OD280 nm分别是1.85和1.93,OD260 nm/OD230 nm均大于2.0。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法及柱式植物RNAout试剂盒法均有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。其他两种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA逆转录成cDNA,cDNA能扩增出一条清晰的β actin基因片段,进一步证明了改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的总RNA具有很高的纯度,其中柱式植物RNAout试剂盒法的效果好于改良CTAB法。     

圈养华南虎人工育幼技术的研究

为了提高华南虎繁育水平,以广州动物园出生的4只华南虎幼虎为研究对象,进行全人工育幼研究.人工育幼采用猫用奶粉Pet AG KMR作为替代乳,奶粉与水的调和比例初始采用1:8,根据日龄变化调整至1:4.每日饲喂次数根据个体情况适时调整,开始6次/日,之后逐渐减少为1次/日,每日添加消化酶及各种矿物质,30 d时开始饲喂肉...     

犊牛盲肠微生物总DNA的提取方法

采用反复冻融法、玻璃珠法和超声波+反复珠磨的方法提取犊牛盲肠的微生物总DNA,并对以上三种方法进行比较,从中确定最佳的方法,以实现普通实验条件下成功提取符合PCR扩增要求的DNA.经紫外分光光度分析表明,超声波+反复珠磨的方法所得的DNA的A<,260>/A<,280>的比值为1.81,0.8%琼脂糖凝胶电泳结果显示,所提DNA片段分子量大于20 kb,适于酶解和PCR扩增要求.以提取的DNA样品为模板,利用细菌通用引物,对其16S rDNA进行PCR扩增,获得了1.7 kb大小特异性很好的预期条带.这是研究犊牛盲肠微生物的关键一步.     

超声波提取牛奶中细菌DNA方法的优化

本试验通过采集乌鲁木齐燕儿窝种牛场2003年5月份所有泌乳奶牛的牛奶样品,使用不同超声波功率（0、100、120、140、160 W）处理后,采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基磺酸钠（SDS）法提取牛奶中细菌DNA,并通过DNA浓度、纯度和细菌通用引物扩增16S rDNA的V6-V8区判定DNA的质量,筛选出提取牛奶中细菌DNA的最佳方法。结果表明,未使用超声波处理样品,直接采用CTAB、SDS法提取出的DNA无法扩增出细菌16S rDNA V6-V8区,而使用不同超声波功率（100、120、140、160 W）处理后能扩增出细菌16S rDNA V6-V8区,其中超声波功率140 W处理样品10 min并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的浓度最高,为203.35 μg/mL。因此,超声波功率140 W处理样品并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的方法最优,能满足从分子水平上进一步研究乳房炎相关细菌的要求。     

瘤胃细菌DNA提取方法的研究与优化

为优化出可获得完整瘤胃细菌总DNA的方法,以满足分子生物学研究需要,试验采用3种DNA提取方法对瘤胃细菌DNA进行提取并对提取效果进行了比较。结果表明:细菌基因组试剂盒法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳无杂带,DNA的提取效果最佳,PCR扩增效果较好;珠磨-CTAB法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳结果存在少量杂带;水煮法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在2.0以上,无电泳条带,DNA严重降解。推荐采用细菌基因组DNA试剂盒法和珠磨-CTAB法对瘤胃细菌进行DNA提取。     

提取家蚕肠道微生物总DNA的2种方法的比较研究

为寻找提取家蚕中肠道微生物总DNA的方法,比较研究了2种方法:①直接提取家蚕中肠道内容物的总DNA,再选择性研究其中来源于微生物的DNA;②先分离家蚕中肠道的微生物,再提取其总DNA.结果表明,方法②所得到的DNA数量较少,但纯度较高;方法①的数量多,种类齐,但杂质多.2种方法分别适合于不同的研究目的.     

小鼠基因组DNA提取方法比较研究

脱氧核糖核酸(DNA)作为大部分有机体和病毒的遗传物质,与生物的遗传与变异息息相关。很多研究都是基于核酸分析的基础开展的,对核酸的纯度要求很高。本研究采用4种常用方法提取小鼠基因组DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明,酚/氯仿抽提法获得的DNA纯度较好,无RNA污染,但有少许蛋白质未剔除;试剂盒法提取到的DNA纯度高、核酸浓度大且无污染,但片段较小,可进行常规的PCR等核酸水平研究。     

提取动物组织DNA的方法比较

传统方式提取DNA大多运用氯仿、苯酚以及异丙醇等其他相关的试剂,此提取DNA的方式纯度相对而言比较低,实验过程非常的复杂、耗时之多,并且还有可能产生毒性的物质。所以,运用商品化的试剂盒针对DNA进行提取,显得更加的简洁、便利。本文首先介绍了试剂盒提取DNA方法的相关内容,并以两种动物组织DNA提取方法的比较为具体的案例进行了分析。     

微孢子虫DNA提取方法的比较

本实验采用陈秀改进法、SDS法、CTAB法和TEK改进法对四种微孢子虫SD1、SD2、SD3、SD4基因组DNA进行抽提,并对抽提效果做了对比,结果表明,陈秀改进法对SD1、SD2、SD3基因组DNA抽提效果较好,TEK改进法对SD2、SD3、SD4基因组DNA抽提效果较好,SDS法和CTAB法对四种微孢子虫基因组DNA的抽提效果均不理想,     

猪粪样DNA提取方法的比较

哺乳动物胃肠道中存在约30个属500多种不同的细菌,约1×1014个活细菌,其形成了复杂而动态平衡的微生态系统,对宿主营养物质的消化、吸收及免疫机制激活等起着十分重要的作用[1].这微生态平衡失调,机体正常的生理功能就会发生紊乱,导致疾病的发生、流行,对畜牧养殖业尤其是规模化养殖等带来极大的潜在威胁.因而,近年来对胃肠道微生物区系结构及其多样性研究成为热点,但由于胃肠道的特殊生存环境,目前有60%～80%的微生物是无法用传统的分离培养技术进行研究, 从而阻碍了人们对胃肠道微生物结构及其多样性的客观认识.     

微生物总DNA的提取

目前,对微生物多样性的研究越来越多地从传统的培养方法转向分子生物学方法,现代分子生物学技术的蓬勃发展解决了不可培养微生物研究的难题,使肠道微生物的研究进入了一个新的发展阶段,而肠道微生物总DNA的提取是整个分子生物学方法的关键.主要总结了前人提取土壤、植物、粪便、瘤胃和肠道微生物DNA的试验方法,介绍了微生物总DNA的纯化方法,为用于分子生物学研究的肠道微生物总DNA的提取提供依据.     

鹌鹑肠道微生物总DNA的最佳提取方法

为了获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA,试验采用常规的饱和苯酚/氯仿法(方法一)、牛瘤胃DNA的提取法(方法二)和对上述两种方法进行优化后得到的肠道微生物DNA的提取法(方法三)对鹌鹑肠道微生物总DNA进行了提取,并对结果进行了比较。结果表明:应用方法一和方法二提取的DNA浓度比较低,电泳显示样品DNA条带没有方法三明亮;以方法三提取的肠道总DNA为模板,采用细菌通用引物,对其16S rDNA V3可变区进行PCR扩增,得到较清晰的图谱,条带整齐。说明采用方法三提取鹌鹑肠道微生物DNA较完整,可用于后续的分子生物学试验研究。     

苜蓿总RNA提取方法比较研究

以苜蓿叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法、Tris-热硼法和尿素法等五种方法提取的苜蓿总RNA的质量和纯度.结果表明:改良CTAB法提取的RNA的OD260nm/OD230nm大于2.O并且OD260am/OD280nm接近1.8,具有较高的纯度.凝胶电泳结果表明,改良CTAB法有28SrRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解;其它四种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象.将改良CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增后出现4条清晰的条带,进一步证明了改良CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求.     

丰容对圈养华南虎行为影响的初探

从2011年12月到2012年4月,应用全事件取样法和目标动物取样法对南昌动物园2只处于育龄期的华南虎进行了丰容前后的行为观察,对丰容前后行为发生的时间分配、行为比例进行了研究比较。结果显示：丰容前主要出现踱步行为（刻板行为）,休息行为和摄食行为（摄食行为的发生受人为控制）等行为,丰容后行为谱明显丰富,行为种类增多,玩耍行为,社会行为占据整个行为谱的时间比重加大,丰容前后行为存在显著的差异。研究结构表明可以通过丰容来改变华南虎的行为节律,从而减少其刻板行为,增加了社会行为,对提高动物繁殖的成功率可能起到一定作用。     

圈养华南虎自然分娩及育幼行为研究

华南虎是极度濒危的国家Ⅰ级保护动物,现有种群都在中国各地动物园的人工圈养之下,幼仔哺育也多采用人工手段介入,本研究对南昌动物园的雌虎"昌昌"自然分娩及育幼等行为进行分析总结,发现在母性较强的情形下应尽可能减少人为干扰,优先考虑以母乳喂养。母虎的产前行为大都是为分娩做准备,如整理产床、舔舐阴部,同时也表现出不安,如来回走动、调整姿态。产后的行为几乎完全是为了便于照顾幼虎,如哺乳、舔衔幼虎等,并且变得平静。虽然产后休息和睡眠行为较产前有增加,由产前53%增至62%,但显然母虎睡眠的深度不如产前,并且即使在母虎休息和睡眠状态下,也有被动的哺乳行为同时存在,这从幼虎吸乳的频率(54%)大大超过母虎主动哺乳的频率(3%)可以看出来。母虎产前由于不安,移动频率多达17%,而产后则降至2%。产前母虎特别注意对产道的清理,舔舐阴道达到了8%,而产后只有1%。分娩前后都有调整姿态的行为,虽频率相当但动机不同,产前是因为不安,而产后明显是出于对幼虎庇护和哺育的需要。母虎带大的幼虎具有较强的野性,表现为对人的恐惧和攻击性,生长速度也较理想。