人胎盘滋养层细胞的分离和鉴定

目的:体外分离足月妊娠胎盘滋养层细胞,观察其形态学特点,检测人类白细胞抗原-E(HLA-E)在滋养层细胞的表达情况。方法:采用0.25%胰酶和胶原酶I联合消化法及Percoll密度梯度分离法分离人足月妊娠胎盘组织中滋养层细胞,光学显微镜观察分离出的细胞形态,透射电镜观察分离出的细胞超微结构;RT-PCR技术检测分离出的滋养层细胞HLA-E的表达。结果:光学显微镜下初分离的细胞呈大圆形,以单个核为主;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富,胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴。在分离的细胞上检测到HLA-E的表达。结论:采用胰酶和胶原酶I联合消化及Percoll密度梯度分离法可获得高纯度的滋养细胞,在透射电镜下可见到超微结构,同时检测到滋养层细胞上表达HLA-E。     

胎盘滋养层细胞模型的建立及其应用

滋养层细胞是胎盘结构中体现其屏障作用最重要的细胞,与多种妊娠疾病的发生、发展有关.另外,大多数病毒可导致胎盘感染并波及胎儿,因此滋养层细胞与宫内传播也有关.为了阐明多种妊娠相关疾病的发病机制及病毒宫内传播的机制,目前众多研究者通过在体外建立滋养层细胞模型进行了大量有价值的研究,此文对相关的研究进展进行综述.     

胎盘滋养层与妊娠的免疫调节

位于母胎界面的胎盘滋养层细胞在抗原表达，抵抗杀伤细胞攻击，产生和分泌免疫分子及受体，异质性IgGFc受体分布，TLX及补体调节蛋白等方面具有的独特性及特殊作用，对建立和维持正常妊娠有重要意义。     

胎盘滋养层与妊娠的免疫调节

位于母胎界面的胎盘滋养层细胞在抗原表达，抵抗杀伤细胞攻击，产生和分泌免疫分子及受体，异质性ＩｇＧＦｃ受体分布，ＴＬＸ及补体调节蛋白等方面具有的独特性及特殊作用，对建立和维持正常妊娠有重要意义。     

滋养层蛋白质与早期流产

胎盘除产生激素外还产生数种蛋白质。其中某些蛋白质在妊娠进展中可提供对诊断有意义的指征。但很多作用机理还未阐明。两种滋养层蛋白质即妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)和CA125用于诊断早期流产价值已进行了研究。PAPP-A的产生随着妊娠进展其数量增加。因此可作为预测3个月内的流产。子宫外孕时其值也降低。对39名确诊为妊娠的妇女,于胚     

RU具有直接抑制胎盘激素分泌的作用

RU486是一种有效的孕酮拮抗剂,它抑制孕酮对子宫的作用,目前已将其作为中止早孕的堕胎药试用于临床。本文就RU486对离体胎盘细胞的作用进行了研究。方法:从无妊娠合并症行剖腹产的妇女取足月胎盘。迅速进行离体培养。以放免法测定hCG、hPL和孕酮。结果:人足月胎盘细胞滋养层在48小时培养中分化为合胞体滋养层,并使hCG、hPL和孕酮量增加。细胞培养后的24小时孕酮拮抗剂浓度增至10nmol～10μmol/l,评价RU486对胎盘激素分泌的     

胎盘绒毛滋养层细胞MMP-9表达与妊高征的关系

目的 :研究MMP 9在胎盘绒毛滋养层细胞的表达 ,探讨MMP 9在妊高征发病中的作用。方法 :用免疫组化两步法检测 42例妊高征患者及 2 5例正常妊娠者胎盘组织中滋养层细胞MMP 9的表达。结果 :正常妊娠组滋养细胞MMP 9表达阳性率为 72 0 % ,明显高于妊高征组 (4 0 5 % ) ,P <0 0 5。随妊高征病情的加重 ,MMP 9的表达有减少趋势。结论 :妊高征患者胎盘滋养细胞MMP 9的表达明显减少 ,且随其病情加重 ,MMP 9表达有减少趋势。表明MMP 9与妊高征的发生有密切关系。     

体外感染巨细胞病毒的胎盘滋养层细胞超微结构的变化

目的探讨巨细胞病毒(CMV)对胎盘滋养层细胞超微结构的影响.方法取无菌胎盘组织分离提纯滋养层细胞,以含20%感染CMV患者血清的培养液感染滋养层细胞(实验组),同时用含20%正常人血清的培养液感染滋养层细胞作为阴性对照(对照组),以透射电子显微镜观察其超微结构变化.结果实验组滋养层细胞肿胀,可见"猫头鹰眼细胞",细胞内观察到许多病毒颗粒样结构;溶酶体大量增生,可见到类似病毒核衣壳样小空泡;粗面内质网和高尔基复合体增生,线粒体增大.结论CMV可通过感染胎盘滋养层细胞进而使胎儿发生宫内感染;CMV使胎盘滋养层细胞超微结构发生改变,影响其在母-胎界面的免疫调节,丧失了对胚胎的免疫保护.     

体外感染巨细胞病毒的胎盘滋养层细胞超微结构的变化

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)对胎盘滋养层细胞超微结构的影响。方法:取无菌胎盘组织分离提纯滋养层细胞,以含20%感染CMV患者血清的培养液感染滋养层细胞(实验组),同时用含20%正常人血清的培养液感染滋养层细胞作为阴性对照(对照组),以透射电子显微镜观察其超微结构变化。结果:实验组滋养层细胞肿胀,可见"猫头鹰眼细胞",细胞内观察到许多病毒颗粒样结构;溶酶体大量增生,可见到类似病毒核衣壳样小空泡;粗面内质网和高尔基复合体增生,线粒体增大。结论:CMV可通过感染胎盘滋养层细胞进而使胎儿发生宫内感染;CMV使胎盘滋养层细胞超微结构发生改变,影响其在母一胎界面的免疫调节,丧失了对胚胎的免疫保护。     

HCV感染实验探讨人胎盘滋养层细胞分子生物性及侵袭力

目的探讨持续感染丙型肝炎病毒(HCV)对体外培养人胎盘合体滋养层细胞分子生物学性状及其金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9合成及分泌的影响。方法分别采用Matrigel人工重建基底膜侵袭实验、MTT法细胞黏附实验、细胞移动实验,研究HCV RNA阳性患者血清感染的体外培养人胎盘滋养层细胞(感染组)侵袭能力以及侵袭相关的黏附、移动能力的改变;检测培养上清中人绒毛膜促性腺激素(HCG)浓度以评估感染对细胞激素合成、分泌能力的影响。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清MMP-2和MMP-9水平,分析感染组和对照组(健康体检者血清培养)数据间的差异,并用明胶酶谱进一步验证ELISA结果。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分析感染对细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达的影响。结果感染组细胞侵袭、黏附、移动以及激素合成、分泌能力较对照组细胞均显著下降(P0.05)。感染组细胞分泌MMP-2和MMP-9能力明显下降(与对照组比较,MMP-2:t=4.186,P0.05;MMP-9:t=2.325,P0.05);RT-PCR结果显示感染组细胞proM-MP-2和proMMP-9 mRNA表达弱于对照组,但差异无显著性(proMMP-2:t=1.196,P0.05;proMMP-9:t=1.417,P0.05)。结论持续HCV感染的体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成、分泌能力下降。持续感染HCV可抑制体外培养人胎盘合体滋养层细胞包括侵袭能力和激素合成、分泌能力在内的多种生物学功能。     

人胎盘组织和滋养层细胞膜联素V的检测

目的检测膜联素V(AnnexinV)在人胎盘组织的表达及其分布,探讨乙肝病毒(HepatitisBVirus,HBV)感染胎盘细胞的可能方式.方法收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织39例、血清学HBsAg阴性孕妇足月胎盘组织4例,将培养的滋养层细胞制成细胞爬片,用免疫组化方法检测胎盘组织和滋养层细胞中的Annexin V.随机选取7例胎盘组织采用免疫荧光标记方法结合激光共聚焦技术对Annexin V进行重测.结果Annexin V存在于人类胎盘组织中,位于滋养层细胞、间质细胞及绒毛毛细血管内皮细胞的胞浆中.结论胎盘中含有丰富的AnnexinV,推测其可能是乙肝病毒进入滋养层细胞并感染胎儿的潜在受体.     

polyI:C诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染的体外研究

目的:探讨体外polyI:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用。方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyI:C处理3天,同时设对照组。采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测细胞上清液HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,并以荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN-β水平。结果:与对照组比较,polyI:C均可显著抑制Bewo细胞HBV复制(P<0.01或0.05),但与2μg HBV重组质粒转染组比较,转染8μg HBV重组质粒组polyI:C对HBV复制的抑制率显著下降(P<0.01),且polyI:C诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达及IFN-β水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:polyI:C可诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染,但随着HBV感染量的增大,通过下调细胞TLR3 mR-NA表达及IFN-β产生,其抗HBV感染的作用被显著削弱。     

滋养层细胞凋亡与稽留流产的关系

目的:探讨滋养层细胞凋亡与稽留流产的关系。方法:对30例正常早孕吸宫流产病例和35例稽留流产病例的绒毛滋养层细胞进行凋亡研究。常规光镜观察细胞形态学变化;免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原PCNA、抑凋亡基因Survivin和促凋亡基因P53在细胞中的表达。结果:稽留流产组绒毛形态学结构均出现不同程度的退行性改变,绒毛细胞滋养层细胞中PCNA表达较正常早孕组明显减少,差异具有非常显著性意义(P<0.01),合体滋养层细胞PCNA少量表达;稽留流产组绒毛滋养层细胞Survivin低于正常早孕组,而P53则高于正常早孕组,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:滋养层细胞凋亡的增加可能是稽留流产发生的一个重要病理过程,其机制可能与PCNA、Survivin和P53基因的表达异常有关。     

polyⅠ:C诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染的体外研究

目的:探讨体外polyⅠ:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用.方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyⅠ:C处理3天,同时设对照组.采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测细胞上清液HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,并以荧光定量RT - PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN -β水平.结果:与对照组比较,polyⅠ:C均可显著抑制Bewo细胞HBV复制(P＜0.01或0.05),但与2μgHBV重组质粒转染组比较,转染8μgHBV重组质粒组polyⅠ:C对HBV复制的抑制率显著下降(P＜0.01),且polyⅠ:C诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达及IFN -β水平显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:polyⅠ:C可诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染,但随着HBV感染量的增大,通过下调细胞TLR3 mRNA表达及IFN -β产生,其抗HBV感染的作用被显著削弱.     

孕酮拮抗剂RU486抗生育作用包括直接抑制胎盘激素的分泌

人工合成19非类固醇RU486是一种有效的孕酮拮抗剂,能抑制孕酮对子宫的作用,对啮齿动物有抗生育效应。在受体水平竞争性抑制孕酮,在下丘脑—垂体水平阻断生殖组织(子宫内膜、宫颈)的生物效应。给早孕妇女使用RU486通常第2天开始阴道出血,第4、5天或更迟胎盘娩出。作者对培养的胎盘细胞进行了RU486的研究。     

神经病靶酯酶在子痫前期的表达变化及对胎盘滋养层细胞的影响

目的 探讨神经病靶酯酶在子痫前期的表达变化及对胎盘滋养层细胞的影响.方法 选取2017年6月-2018年10月本院收治的子痫前期孕妇30例为研究对象,设为PE组,另选30例健康孕妇设为对照组.采用定量PCR和Western blot检测2组孕妇胎盘NTE表达水平.采用转染法研究NTE表达水平变化对滋养层细胞HTR-8/...     

滋养层细胞侵入的调控因子与妊娠疾病

滋养细胞的过度侵入与浸润活力不足与多种妊娠疾病相关，滋养细胞侵入受到多种因素的影响，本文对TGF—β、VEGF、IL、IGF、TNF-α、MMPs等多种细胞因子与滋养细胞侵入活力的关系进行了简析。     

黄体生成激素与卵泡生长发育

黄体生成激素是在下丘脑促性腺激素释放激素刺激下,由垂体前叶分泌的促性腺激素.黄体生成激素与卵泡生长发育过程有着密切联系,体现在原始卵泡的活化、卵母细胞的生长、优势卵泡的选择及诱发排卵等方面,甚至与排卵障碍性疾病有关.     

激素分泌的司令员——下丘脑

“人体之最”运动会上群雄角逐．这次登场的是一位其貌不扬、形如核桃般大小的选手。 主持人：现正上场的是下丘脑，他自称激素分泌的“司令员”，是各大内分泌组织器官的统帅，让我们期待他一展雄风!     

多肽PFHCG对胎盘滋养层细胞增殖及迁移的影响研究

目的 探讨多肽PFHCG对滋养层细胞功能的影响及其可能参与子痫前期的作用机制。方法 用0.5、1、5、10、20、40μM浓度的多肽PFHCG处理HTR-8/SVneo细胞,观察其对细胞增殖及迁移功能的影响。使用测序技术检测多肽对细胞基因表达水平的影响。结果 多肽PFHCG在高浓度时(10、20、40μM)可显著抑制HTR-8/SVneo细胞增殖及迁移能力,低浓度时(0.5、1、5μM)可促进细胞迁移。基因测序共检测到322个差异表达的基因,KEGG通路分析显示PFHCG可能通过MAPK通路发挥作用。结论 多肽PFHCG高浓度时可抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖与迁移能力,低浓度时可促进细胞迁移,且可能通过MAPK通路发挥作用。