皂素处理联合MALDI-TOFMS直接鉴定血培养阳性病原菌

目的评估皂素处理联合基质辅助激光解析电离飞行时间(MALDI-TOF MS)直接鉴定血培养阳性病原菌的可行性,以及比较与传统血培养联合MALDI-TOF MS法鉴定结果的符合率。方法共收集阳性血培养标本240例,使用皂素处理方法裂解血细胞富集和纯化待测菌,采用MALDI-TOF MS对待测标本进行菌种鉴定,同时阳性血培养瓶也转移接种至血平板进行培养,纯菌落同样用MALDI-TOF MS鉴定菌种。结果 240例阳性血培养瓶有197例真阳性瓶和43例假阳性瓶。在193例单菌株感染血培养瓶中,菌株的鉴定符合率为69.9%。其中75例革兰阴性杆菌的鉴定率为84.0%;65例葡萄球菌属的鉴定率分别为78.5%;10例肠球菌属的鉴定率为80.0%。43例假阳性报警血培养瓶的鉴定符合率为86.0%。结论皂素提取联合MALDI-TOF MS可作为一种快速鉴定血流感染常见菌的有效方法,有较高的鉴定符合率,且成本低廉,可为临床快速、合理选用抗菌药物提供依据。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原菌鉴定中的应用

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在快速鉴定血流感染病原菌的应用价值,并分析MALDI-TOF MS方法鉴定病原菌的准确性。方法收集321例血流感染患者的血液标本进行血培养,微生物室细菌培养结果均为阳性。从血培养阳性瓶中取病原菌至分离胶促凝管中,应用MALDI-TOF MS对富集的病原菌进行菌种鉴定。同时,对血培养瓶中的阳性标本进行常规培养,获得的纯菌落采用VITEK 2 COMPACT微生物分析系统进行检测,并将MALDI-TOF MS检测结果与VITEK 2 COMPACT结果进行对比。若检测结果有差异,则进一步进行基因测序法予以确定。结果 321例阳性血培养标本中共分离出180株革兰阴性杆菌, MALDI-TOF MS鉴定准确率为97.78%,无鉴定错误,但4株无鉴定结果;分离出的141株革兰阳性菌中,主要以革兰阳性球菌为主, MALDI-TOF MS鉴定准确率为84.39%, 1株蜡样芽胞杆菌误鉴定为大肠埃希菌,出现了菌属水平鉴定错误,其余为种类鉴定错误。结论与传统血培养及生化鉴定比较, MALDI-TOF MS在血流感染中的鉴定符合率较高,且鉴定方法简便、迅速。     

感染性疾病多学科交叉研究专题基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原菌鉴定中的应用

目的 探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在快速鉴定血流感染病原菌的应用价值,并分析MALDI-TOF MS方法鉴定病原菌的准确性.方法 收集321例血流感染患者的血液标本进行血培养,微生物室细菌培养结果均为阳性.从血培养阳性瓶中取病原菌至分离胶促凝管中,应用MALDI-TOF MS对富集的病原菌进行菌种鉴定.同时,对血培养瓶中的阳性标本进行常规培养,获得的纯菌落采用VITEK 2 COMPACT微生物分析系统进行检测,并将MALDI-TOF MS检测结果与VITEK 2 COMPACT结果进行对比.若检测结果有差异,则进一步进行基因测序法予以确定.结果 321例阳性血培养标本中共分离出180株革兰阴性杆菌,MALDI-TOF MS鉴定准确率为97.78％,无鉴定错误,但4株无鉴定结果;分离出的141株革兰阳性菌中,主要以革兰阳性球菌为主,MALDI-TOF MS鉴定准确率为84.39％,1株蜡样芽胞杆菌误鉴定为大肠埃希菌,出现了菌属水平鉴定错误,其余为种类鉴定错误.结论 与传统血培养及生化鉴定比较,MALDI-TOF MS在血流感染中的鉴定符合率较高,且鉴定方法简便、迅速.     

分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS直接检测血培养阳性细菌

目的建立用分离胶促凝管联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接检测血培养阳性待测菌的方法并评估其鉴定符合率。方法共收集阳性血培养491例,利用分离胶促凝管直接从血培养瓶中富集并提纯菌体,采用MALDI-TOF MS对待测菌进行菌种鉴定,同时对报阳性血培养瓶进行转种培养,纯菌落用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)进行鉴定。若两者鉴定结果不一致,则以基因测序结果予以确证。结果 491例阳性血培养瓶鉴定出的待测菌包括30个属和64个种。在462例单菌株感染血培养瓶中,菌株的种、属鉴定符合率分别为73.6%和3.7%。其中175例革兰阴性菌的种、属鉴定率分别为84.0%(147例)和2.9%(5例);251例革兰阳性菌的种、属鉴定率分别为75.3%(189例)和4.4%(11例);36例念珠菌的种、属鉴定率分别为19.4%(7例)和2.8%(1例)。在29例复数菌感染血瓶中,鉴定出其中一种细菌的种、属鉴定率分别为79.3%(23例)和10.3%(3例)。血流感染中常见病原菌的菌种鉴定符合率达83.3%~96.9%。结论本研究建立了分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS直接检测血培养阳性待测菌的方法,与传统的培养鉴定方法相比,对血流感染中主要病原菌的鉴定符合率较高,且方法快速、简便,成本低廉,适合在临床微生物实验室中推广应用。     

MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性病原的临床应用

目的了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接快速检测血培养报阳样本的可行性。方法收集同济大学附属同济医院报阳血培养样本682例,从血培养瓶直接抽取血液至分离胶采血管离心富集细菌后,采用MALDI-TOF MS进行直接鉴定(快速质谱法)。同时对报阳血培养标本进行涂片镜检及转种培养后,分别采用Vitek 2 Compact自动化鉴定药敏仪及MALDI-TOF MS对培养菌落进行鉴定,比较两者鉴定结果的一致性,结果不一致的菌株采用16S rDNA基因测序进行验证。结果682例血培养阳性样本中,有664例检出单数菌,其中539例(81.2%)快速质谱法可准确鉴定(种/属),122例(18.4%)未鉴定出(种/属),仅3例(0.5%)鉴定错误,分别为泛菌属、肺炎克雷伯菌和头状葡萄球菌。664株菌株中,革兰阴性菌367株,革兰阳性菌286株,念珠菌11株,以转种培养后质谱鉴定结果为标准,革兰阴性菌、革兰阳性菌、念珠菌快速质谱法的鉴定准确率(种/属)分别为85.8%/6.0%、65.0%/3.1%、63.6%/0;革兰阴性杆菌的鉴定准确率显著高于革兰阳性球菌和真菌,差异有统计学意义(χ²=57.967,P<0.01;χ²=7.21,P<0.05)。革兰阴性菌中,肠杆菌科、非发酵菌及其他革兰阴性菌鉴定准确率(种/属)分别为89.0%/5.0%、65.0%/10.0%、66.7%/22.2%。革兰阳性菌中,葡萄球菌属、肠球菌属、链球菌属和其他革兰阳性菌鉴定准确率(属/种)分别为70.9%/1.1%、71.4%/2.4%、40.5%/10.8%、50%/7.1%。有18例样本检出复数菌,快速质谱法从其中14例中检出复数菌,鉴定准确率为77.8%,均只鉴定到种。结论快速质谱法检测血培养报阳样本具有可行性,对单数菌的鉴定错误概率非常低,且对临床常见病原菌鉴定准确率均>70%。但对复数菌鉴定效果不佳。临床可根据实际需求选择合适的细菌鉴定方法。     

分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS快速检测血培养阳性瓶中细菌的探讨

目的建立一种使用分离胶促凝管联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的方法直接检测血培养中阳性菌的方法。方法收集阳性血培养标本318例,利用分离胶促凝管直接从血培养瓶中富集并提纯菌体,采用MALDI-TOF MS对革兰阴性菌进行菌种鉴定,同时分离纯菌落用Phoenix-100全自动微生物分析系统进行鉴定。结果 292例单菌株感染血培养瓶中,两种方法对菌株的种、属鉴定符合率分别为82.4%和22.7%。在26例复合菌感染中,两种方法鉴定出其中一种细菌的种、属鉴定率分别为79.3%和10.3%。结论本研究建立了采用分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS法直接检测血培养中阳性菌的方法,与传统的培养鉴定方法相比,对血流感染具有更高灵敏度,适合在临床微生物实验室中推广应用。     

MALDI-TOF MS直接鉴定阳性厌氧血培养瓶中细菌的研究

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性厌氧血培养瓶中细菌的可行性和准确性,评价不同前处理方法用于质谱快速鉴定的临床应用价值。方法收集2017年8月至2018年8月临床非重复阳性厌氧血培养瓶,经革兰染色镜检确认均有菌生长。利用分离胶促凝管法和0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)法处理阳性厌氧血培养瓶并用MALDI-TOF MS直接鉴定,与转种后菌落鉴定结果相比较,分析鉴定准确率和一致性。结果共收集阳性厌氧血培养瓶240瓶,包括单菌阳性234瓶,混合菌6瓶,平均报阳时间为(16.87±13.12)h;218瓶(90.83%)可用MALDI-TOF MS直接鉴定,4瓶(1.67%)混合菌生长仅鉴定其中一种菌或无可靠鉴定结果。SDS法和分离胶法对革兰阴性菌的鉴定准确率(94.81%、94.16%)显著高于革兰阳性菌(87.50%、81.25%),差异有统计学意义(χ2=3.96、9.53,P0.05);SDS法和分离胶法直接鉴定与菌落鉴定结果的一致率分别为92.31%、89.74%。SDS法前处理鉴定的准确率和鉴定分值≥2.0的比例(94.17%、69.23%)均高于分离胶法(90.83%、65.81%);SDS法厌氧菌的鉴定分值≥2.0的比例(83.33%)明显高于分离胶法(58.33%)。结论 MALDI-TOF MS可应用于临床常见厌氧血培养阳性菌的鉴定,SDS法前处理对厌氧菌的快速鉴定有较高的准确率。     

MALDI-TOF MS在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值

目的了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联合HBL微生物培养系统(简称HBL系统)在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值。方法收集104例人工关节置换术后患者关节液样本,分别接种于血培养瓶及常规培养琼脂平板,将阳性培养物分别进行2种直接MALDI-TOF MS鉴定、常规MALDI-TOF MS鉴定和平板培养鉴定,比较4种方法鉴定结果及鉴定时间。结果直接和常规MALDI-TOFMS均检测到84.8%(84/99)的阳性结果,但平板培养仅检测到60.6%(60/99)的阳性结果。HBL系统处理后直接MALDI-TOF MS鉴定革兰阳性菌和革兰阴性菌,检出率分别为86.9%和91.9%,高于分离胶富集细菌后直接MALDI-TOF MS(78.3%和83.8%)和平板培养(70.1%和67.6%)。HBL系统处理后直接MALDI-TOF MS鉴定的阳性结果中,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高。HBL系统处理后直接MALDI-TOF MS的鉴定时间为5～14 h,低于常规MALDI-TOF MS(45.2 h)和平板培养(54.3 h)。结论与常规培养比较,HBL系统处理后直接MALDI-TOF MS鉴定病原菌用时短,且具有一定的准确率,对人工关节置换术后病原菌的快速诊断有一定价值。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱微生物鉴定系统性能验证方案的建立

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)在常规临床微生物鉴定中的性能验证方法,指导临床实验室规范微生物鉴定程序。方法选取标准菌株、质控菌株和临床菌株共115株,包含革兰阳/阴性球菌30株、革兰阳/阴性杆菌31株、真菌30株,厌氧菌、苛养菌各12株,所有菌株均经Vitek Compact鉴定和/或细菌16S r DNA、真菌ITS DNA测序分析验证。任意选择3种MALDI-TOF MS微生物鉴定系统厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱,采用检测系统推荐方法进行菌株鉴定,进行准确度验证试验。精密度验证:选取标准菌株和临床菌株10株,1位操作者使用3个检测系统对10株菌株分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d; 3位操作者使用3个检测系统对10株菌株每d分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d,从而验证鉴定结果的重复性。结果厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱对标准/质控菌株(除外厌氧菌)的鉴定符合率为100%;对临床菌株的属水平鉴定符合率为100%;对革兰阴/阳性杆菌的种水平鉴定符合率分别为100%、100%、96.77%;对革兰阳性球菌的种水平鉴定符合率分别为96.67%、96.67%、100%;对真菌的种水平鉴定符合率均为90%一致;对苛养菌的种水平鉴定符合率均为100%;对厌氧菌鉴定符合率为91.67%种水平一致。精密度验证试验结果重复性100%。结论 3种MALDI-TOF MS系统在革兰阳/阴性球菌、革兰阳/阴性杆菌、真菌、苛养菌鉴定的准确度和精密度符合要求,验证通过。本文建立的微生物鉴定质谱仪性能验证方案可满足综合性医院临床微生物实验室常规鉴定基本要求。     

Percoll分离法联合MALDI-TOFMS直接鉴定血培养专性厌氧菌阳性标本的应用价值

目的评价Percoll分离法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定血培养专性厌氧菌阳性标本中的应用价值。方法收集2018年3月至2020年9月血培养中单独厌氧瓶阳性标本,用Percoll分离法和十二烷基硫酸钠(SDS)洗涤法两种方法对标本进行菌体富集和纯化处理,采用MALDI-TOF MS对标本进行直接鉴定,以转种后菌落鉴定结果为标准,对两种不同前处理方法的鉴定准确率进行比较。结果共有71份血培养专性厌氧菌阳性标本纳入研究,采用Percoll分离法处理标本,专性厌氧菌"种"水平鉴定准确率为84.5%,其中革兰阴性菌的"种"水平鉴定准确率为80.0%,革兰阳性菌的"种"水平鉴定准确率为87.8%。采用SDS洗涤法处理标本,专性厌氧菌的"种"水平鉴定准确率为60.6%,其中革兰阴性菌的"种"水平鉴定准确率为46.7%,革兰阳性菌的"种"水平鉴定准确率为70.7%。与SDS洗涤法相比,采用Percoll分离法处理标本明显提高了MALDI-TOF MS对革兰阴性菌的鉴定准确率(χ~2=7.177,P=0.007)。结论使用Percoll分离法处理血培养专性厌氧菌阳性标本,用于MALDI-TOF MS直接鉴定,可明显提高专性厌氧菌特别是革兰阴性厌氧菌的鉴定准确率,且操作简便,成本低,适合在临床微生物实验室中应用。     

血培养阳性标本分离胶促凝管联合SDS 前处理与固体培养基短时培养菌膜应用MALDI-TOF MS 快速鉴定最佳时间探讨

目的　探讨血培养阳性标本分离胶促凝管联合十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）前处理与固体培养基短时培养菌膜应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flightmass spectrometry,MALDI-TOF MS）快速鉴定的最佳时间。方法　收集2020 年8 月～ 2021 年1 月来源于咸阳市第一人民医院微生物室的243 瓶血培养阳性（单数菌）样本,采用MALDI-TOF MS 技术对分离胶促凝管联合SDS 前处理标本直接鉴定,同时对固体培养基短时培养（6h 内）菌膜鉴定,以传统培养（24h）方法鉴定结果为金标准,分析MALDI-TOF MS 快速鉴定血培养阳性菌株的最佳方法和时间。结果　243 瓶血培养阳性标本共鉴定出病原菌44 种,分离率前五位的细菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。SDS 前处理法直接鉴定总符合率为75.72%（184/243）,其中革兰阴性菌和革兰阳性菌符合率分别为84.97%（130/153）和60.00%（54/90）;固体培养基生长2h,4h 和6h 的菌膜鉴定总符合率依次为44.44%（108/243）,72.02%（175/243）和90.53%（220/243）,其中革兰阴性菌依次为59.48%（91/153）,83.01%（127/153）和92.81%（142/153）,革兰阳性菌依次为18.89%（17/90）,53.33%（48/90）和86.67%（78/90）。金黄色葡萄球菌SDS 前处理法直接鉴定和2h,4h 生长菌膜鉴定符合率均高于凝固酶阴性葡萄球菌（χ2=4.795,12.083, 9.035,均P ＜ 0.01）。革兰阴性菌SDS 前处理法直接鉴定和2h,4h 生长菌膜鉴定符合率均高于革兰阳性菌（χ2=17.880,37.808,24.758, 均P ＜ 0.01)。结论　MALDI-TOF MS 可对血流感染（bloodstreaminfection,BSI）主要病原菌进行快速直接鉴定,根据革兰染色结果联合固体培养基短时培养菌膜鉴定,可进一步缩短细菌鉴定时间,为临床抗感染治疗提供早期依据。     

利用MALDI-TOF MS快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌

目的探讨利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌的可行性,为临床早期诊断血流感染并提供合理的用药依据。方法血培养瓶呈阳性结果以后按照日常处理流程转种于血平板上,孵育2、4、6、8h后,挑取菌膜于靶标板上,用MALDI-TOF MS进行病原菌鉴定。同时,所有标本经过16～24h的隔夜培养后,用MALDI-TOF MS、VITEK?Compact、各种生化反应以及凝集反应进行确认。结果该研究共有来自102例患者的171份单一菌感染的血培养阳性瓶用于试验,包括76份(44.4%)革兰阳性菌和95份(55.6%)革兰阴性菌。与最终鉴定结果比较,在转种培养2、4、6、8h时用MALDI-TOF MS进行鉴定的成功鉴定率分别为106份(62.0%)、150份(87.7%)、161份(94.2%)、165份(96.5%);其中,革兰阳性菌的鉴定率分别为26份(34.2%)、56份(73.7%)、66份(86.9%)、70份(92.3%),革兰阴性菌的鉴定率分别为80份(84.2%)、94份(98.9%)、95份(100.0%)、95份(100.0%)。结论该研究表明,利用MALDI-TOF MS快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌是一个早期可靠的方法。     

评估SDS在MALDI-TOFMS直接鉴定阳性血培养样本中的应用价值

目的评价十二烷基硫酸钠(SDS)前处理方法在提高基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性血培养样本准确率中的作用。方法收集2016年3—9月阳性血培养瓶378瓶,试验前采用分离胶促凝管富集病原菌,试验后期增加SDS的洗涤过程,得到纯化的菌体后采用MALDITOF MS直接鉴定。同时对阳性血培养样本进行常规转种培养,获得纯菌落后采用MALDI-TOF MS鉴定,以此为最终结果,比较2种不同前处理方法的鉴定准确率。结果未使用SDS洗涤的血样本87例,其中单种细菌感染的血样本83例,种鉴定准确率为73.5%,有4例为复数菌感染。使用SDS洗涤的血样本286例,其中单种细菌感染的血样本277例,种鉴定准确率为82.7%,有9例为复数菌感染。改良后革兰阳性菌的鉴定准确率从65.7%增加至90.5%,酵母的鉴定准确率从11.1%增加至50.0%,差异有统计学意义(P0.05)。结论使用SDS洗涤处理的血培养阳性样本采用MALDI-TOF MS直接鉴定,可提高血培养中主要病原菌的鉴定准确率,且操作简便、快速,成本低廉,适合在临床微生物实验室中应用。     

MALDI-TOF MS结合短时培养法在阳性血培养病原菌鉴定中的临床应用

目的评估基质辅助激光电离解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)结合短时培养法在阳性血培养病原菌鉴定中的应用价值。方法前瞻性收集北京友谊医院2017年3月至10月的162例单一病原菌血培养阳性标本,取3 ml培养液离心后刮取分离胶表层浓集的病原菌,血平板培养1~4 h,直接用菌膜涂靶板,MALDI-TOF MS菌株鉴定,同时与常规培养后再鉴定的传统方法比较菌种鉴定结果的准确性。结果共收集革兰阳性细菌73株,革兰阴性细菌89株。与传统培养法相比,MALDI-TOF MS结合短时培养法的鉴定时间由1~2 d缩短至1~4 h,革兰阳性细菌和革兰阴性细菌的鉴定准确率分别为87.7%和98.9%。结论用MALDI-TOF MS结合短时培养法可以大大缩短阳性血培养病原菌鉴定时间,尤其适用于革兰阴性杆菌所致的血流感染。该方法操作简单,结果可靠,有良好的临床应用价值。     

MALDI-TOF MS结合短期培养法快速检测中段尿样本中的病原菌

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)结合短期培养法快速检测中段尿样本中病原菌的价值。方法收集1 873例患者的中段尿样本,每份样本一分为二,一份用于中段尿常规培养结合Vitek 2 Compact微生物鉴定仪检测;另一份样本离心集菌后,短期培养4或6 h,采集菌膜直接用MALDI-TOF MS进行鉴定,并以中段尿定量培养结合Vitek 2 Compact微生物鉴定仪的检测结果为金标准,评估MALDI-TOF MS结合短期培养法对尿路感染病原菌鉴定的敏感性及特异性。结果在1 873例临床样本中常规培养方法检出病原菌381例,阳性检出率为20.3%。其中单一细菌生长的样本346例(90.8%),2种细菌生长的样本27例(7.1%),3种及3种以上细菌生长的样本8例(2.1%)。在单一细菌生长的样本中,短期培养4 h后MALDI-TOF MS直接检测的检出率为80.1%(277/346),短期培养6 h后MALDI-TOF MS直接检测的检出率为97.1%(336/346)。除鲍曼不动杆菌、屎肠球菌和粪肠球菌鉴定符合率稍低(81.4%、76.9%和86.7%)外,MALDI-TOF MS结合6 h短期培养法的鉴定符合率均为100.0%。结论将中段尿样本离心集菌后短期培养4~6h,采集菌膜直接用MALDI-TOF MS进行检测,可大大缩短培养时间,为临床提供快速的病原菌报告。     

MALDI Sepsityper~(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术直接鉴定阳性血培养病原菌的应用评估

目的比较MALDI Sepsityper~(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术直接鉴定血培养阳性病原菌的有效性。方法收集上海交通大学医学院附属仁济医院2016年4-6月血培养仪报警的非重复血培养瓶138个,以传统培养鉴定的方法为金标准,同时采用以上两种前处理方法处理阳性标本,再进行MALDI-TOF MS鉴定。结果本次共收集非重复的血培养阳性标本138份,排除6个假阳性血瓶,鉴定出的病原菌包括革兰阴性菌70株(53.03%)、革兰阳性菌57株(43.18%)、真菌3株和2例复数菌。MALDI Sepsityper~(TM)Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法的血培养快速鉴定病原菌准确率分别为91.67%和84.09%,种鉴定准确率分别为83.33%和61.36%。两种前处理方法处理后,革兰阴性菌的准确率分别为98.57%和95.71%,革兰阳性菌的准确率分别为87.72%和78.59%,两者鉴定所需时间为40 min/样本和25 min/样本。结论虽然MALDI Sepsityper~(TM)Kit比血清分离胶促凝管法鉴定准确率稍高但两者差异无统计学意义(91.67%对84.09%,P0.05),与MALDI Sepsityper~(TM) Kit相比,血清分离胶促凝管法是一种快速、易获得、低廉的MALDI-TOF MS直接鉴定血培养病原菌的前处理方法。     

基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪快速鉴定结果的阳性血培养中常见细菌直接药物敏感性试验的评估

目的 :为有效缩短阳性血培养中常见细菌药物敏感性(药敏)试验的报告周转时间,探讨在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定结果的基础上,对阳性血培养中的常见细菌直接进行药敏试验的可行性。方法:应用MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养中的细菌,对其中能够准确鉴定的常见细菌直接进行纸片扩散法(Kirby-Bauer法,K-B法)和自动微量稀释测最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)法药敏试验(直接药敏试验)。同时,将血培养阳性细菌按常规操作流程转种至合适的培养基,培养过夜后获得的纯菌落再进行K-B法和MIC法常规药敏试验。将直接药敏试验结果与常规药敏试验结果进行比对。结果:以常规药敏试验结果为标准,革兰阳性球菌的K-B法和MIC法直接药敏试验结果与之符合率分别为98.5%和98.4%,小误差率均为0.9%,大误差率分别为0.6%和0.7%;革兰阴性杆菌的K-B法和MIC法直接药敏试验结果的符合率分别为97.8%和98.1%,小误差率分别为1.4%和1.1%,大误差率分别为0.8%和0.9%。以血培养阳性报警为起始时间,阳性血培养中细菌直接药敏试验的报告周转时间约为24 h,而常规药敏试验的报告周转时间约需48 h。结论:阳性血培养中常见细菌的直接药敏试验结果与常规药敏试验结果高度相符,且直接药敏试验的报告周转时间可提前至24 h。因此,结合MALDI-TOF MS快速鉴定的结果,对阳性血培养中的常见细菌直接进行药敏试验可在临床微生物室中推广应用,为临床及时、合理和有效的抗生素治疗提供可靠依据。     

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定常见细菌和酵母菌

目的 应用MALDI-TOF MS鉴定临床常见病原菌.方法 复苏560株临床分离株,其中革兰阳性细菌(G+ )260株、革兰阴性细菌(G-)180株、酵母菌60株、肠道致病菌60株.MALDI-TOF MS鉴定结果与Vitek2 Compact全自动微生物鉴定系统比对,结果差异菌株采用16S rDNA测序验证.结果 MALDI-TOF MS与Vitek2 Compact鉴定结果比较,G+细菌鉴定符合率为94.6％( 246/260),G-细菌鉴定符合率为96.7％ (174/180),酵母菌鉴定符合率为95.0％ (57/60),肠道致病菌鉴定符合率为93.3％( 56/60).15株鉴定结果不符的菌株经16S rDNA测序确认,结果与Vitek2Compact和MALDI-TOF MS鉴定符合率分别为26.7％ (4/15)和66.7％( 10/15).结论 MALDI-TOF MS可用于常见病原微生物鉴定,其快速、低成本的特点具有推广价值.     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱直接检测尿路感染病原菌性能评价

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接检测尿路感染病原菌的性能。方法收集1 000例门诊及住院患者中段尿样本,接种于固体培养基,采用MALDI-TOF MS仪和全自动微生物鉴定系统对单个菌落进行鉴定;对中段尿样本进行前处理后直接采用MALDI-TOF MS仪进行分析。结果1 000例中段尿样本中,培养法检出215例菌落计数≥10~5 CFU/mL的细菌,阳性检出率为21.5%;其中162例分离到单一细菌,53例分离到混合细菌。2种仪器对215株细菌鉴定结果的符合率达100%。革兰阴性杆菌占76.3%,革兰阳性菌占23.7%。MALDI-TOF MS仪直接检测检出185例菌落计数≥10~5 CFU/mL的细菌,阳性检出率为18.5%;其中145例分离到单一细菌,40例分离到混合细菌。直接检测法无假阳性,但阳性检出率较培养法低,阳性漏检率达到14.0%(30/215)。结论采用MADLI-TOF MS仪直接检测感染性中段尿样本,具有鉴定诊断时间短、成本低和适用性好的优点。     

636例血标本的病原菌种类分布与耐药性研究

目的 了解本院血培养分离到的病原菌菌种及对抗生素的耐药性.方法 利用Bact/Alert3D全自动血培养仪及其配套的血培养瓶对636份标本进行血培养,阳性血培养转种后用MicroScan A/s-4细菌鉴定及药敏测试仪进行测试.结果 636份血培养标本中,检出病原菌65株(10.22%),革兰阳性球菌占40%,革兰阴性杆菌占55.4%,真菌占4.6%,葡萄球菌属和肠杆菌科的细菌是本院菌血症和(或)败血症的主要病原菌.革兰阳性球菌中未发现对万古霉素耐药的菌株,革兰阴性杆菌对亚胺培南有高度敏感性,但对常用抗生素有较普遍的耐药性.结论 血培养检出菌种复杂,耐药率高,应加强血培养中致病菌及其对抗生素的耐药性监测.