子痫前期胎盘中差异表达的长链非编码RNA的研究

目的通过筛选及验证在子痫前期患者胎盘组织中差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),探讨lncRNA与子痫前期的关系。方法收集18例子痫前期胎盘样本和同期出生的20例正常妊娠产儿胎盘样本,采用lncRNA芯片进行研究,筛选出差异表达的lncRNA及基因,采用国际通用的基因本体(GO)功能注释分析法和KEGG通路分析法,对差异表达基因进行功能注释与分析,并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果检测到显著差异表达的lncRNA共有14个,其中表达上调的有9个,表达下调的有5个;检测到显著差异表达基因212个,表达上调的93个,表达下调的119个。对212个差异表达的基因进行GO功能注释分析,显示差异表达基因主要参与染色质结合、γ-谷氨酰转移酶的活性和SMAD结合等信号途径;KEGG通路分析结果显示,差异表达的基因包括细胞周期相关、补体和凝血级联反应相关、全身性红斑狼疮相关等与信号通路相关的作用基因。对显著差异表达的3个lncRNA:linc-ASCL1-3、linc-KLF6-2和linc-ROBO1-3进行qRT-PCR验证,其结果与lncRNA芯片检测结果相符。结论子痫前期的胎盘组织与正常胎盘组织相比,lncRNA表达谱发生了显著变化,可能与子痫前期的发生有关。     

长链非编码RNA和微小RNA在子痫前期发病机制中的研究进展

子痫前期（preeclampsia,PE）是一种以妊娠期高血压和蛋白尿为特征的血管性疾病,是孕产妇及胎儿死亡的主要病因之一。胎盘在PE的发病中起着核心作用,但其发生机制尚未阐明。非编码RNA功能众多,已有研究表明长链非编码RNA(long non-coding,lncRNA)和微小RNA(microRNA,miRNA)可通过影响胎盘滋养层细胞功能对PE的发生与发展产生影响。为此,本研究就lncRNA和miRNA在PE发病机制中的研究进展进行综述,为PE的预防与治疗提供参考。     

子痫前期患者脐带血管内皮细胞损伤与粘附分子的关系

目的探讨子痫前期患者脐带血内皮细胞及血管内皮细胞粘附分子(VCAM-1)的变化。方法将子痫前期孕妇血清与其共同培养,采用免疫荧光分析法,检测内皮细胞上粘附分子VCAM-1的表达情况。结果子痫前期孕妇血清作用于内皮细胞表面,细胞粘附分子(VCAM-1)的表达增高,而正常孕妇血清作用无变化。结论子痫前期孕妇血清可以在内皮细胞诱发产生大量的细胞粘附分子,使得内皮细胞易从基质上丢失,造成内皮细胞的损伤。     

子痫前期血管内皮细胞损伤机制的研究进展

子痫前期由于胎盘的缺血缺氧,使胎盘来源的“毒性因子”过多的进入母体循环,导致相应受体的表达增多及激活,使内皮细胞内活性氧的产生增多,一氧化氮的灭活增加。活性氧作为细胞内的第二信使激活转录因子NFκ-B,导致炎症相关基因的表达,促使中性粒细胞黏附,造成内皮炎性损伤;同时循环中促损伤后修复的作用削弱,进一步加剧了内皮损伤。     

PPIA基因过表达对人脐静脉内皮细胞lncRNA表达的影响

目的 了解PPIA基因在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中过表达对长链非编码RNA(ln-cRNA)差异表达的影响.方法 以HUVEC为研究对象,采用慢病毒转染构建PPIA过表达细胞,经鉴定后进行lncRNA测定,进行差异化分析,和lncRNA顺式调控靶标分析.结果 成功构建PPIA过表达HUVEC细胞,lncRNA测定...     

非编码RNA在子痫前期发病过程和临床诊治中的研究进展

子痫前期(preeclampsia,PE)是一类严重的妊娠期并发症,病情可能快速进展为多器官功能障碍,病死率高,其发生、发展涉及多种机制。大量研究发现非编码RNA与PE的发生、发展密切相关,能通过调节滋养层细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及胎盘血管生成能力等过程影响病情进展,对PE具有诊断和治疗意义,或可作为将来PE的高效诊断及有效治疗的靶点。本文总结近年来文献,对PE中非编码RNA的作用机制及其在临床诊疗中的应用价值进行综述。     

子痫前期血清对血管内皮细胞凋亡及细胞因子表达的影响

目的探讨子痫前期患者血清诱导血管内皮细胞核因子-κB(NF-κB)活性及血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的结果。方法对血管内皮细胞株进行体外培养,分别加入正常妊娠及子痫前期患者血清。2 h后W estern b lot法测定细胞胞浆NF-κB抑制因子(I-κB)和胞核NF-κB活性;48 h后流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫法测定VCAM-1的表达。结果子痫前期患者血清培养的血管内皮细胞胞浆I-κB含量明显低于正常妊娠血清培养组(P<0.05),胞核NF-κB含量以及VCAM-1的表达明显高于正常妊娠血清培养组(P<0.05)。结论子痫前期患者血清可促进血管内皮细胞VCAM-1的表达、NF-κB的活性以及血管内皮细胞的凋亡;NF-κB在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡及VCAM-1的表达过程中可能起重要作用。     

子痫前期血清对血管内皮细胞凋亡及细胞因子表达的影响

目的 探讨子痫前期患者血清诱导血管内皮细胞核因子-κB(NF-κB)活性及血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的结果.方法 对血管内皮细胞株进行体外培养,分别加入正常妊娠及子痫前期患者血清.2 h后Western blot法测定细胞胞浆NF-κB抑制因子(I-κB)和胞核NF-κB活性;48 h后流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫法测定VCAM-1的表达.结果 子痫前期患者血清培养的血管内皮细胞胞浆I-κB含量明显低于正常妊娠血清培养组(P＜0.05),胞核NF-κB 含量以及VCAM-1的表达明显高于正常妊娠血清培养组(P＜0.05).结论 子痫前期患者血清可促进血管内皮细胞VCAM-1的表达、NF-κB的活性以及血管内皮细胞的凋亡;NF-κB在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡及VCAM-1的表达过程中可能起重要作用.     

lncRNA SNHG5和miR-132-3p在子痫前期病人胎盘组织中的表达关系研究

目的：观察长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(lncRNA SNHG5)和miR-132-3p在子痫前期(PE)病人胎盘组织中的表达,分析二者的相关性及对PE的诊断价值。方法：选取112例PE病人作为研究对象,根据PE严重程度分为重度组58例和轻度组54例,另外选取同期健康妊娠孕妇60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织中lncRNA SNHG5和miR-132-3p表达;Pearson相关分析观察PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p的相关性,及lncRNA SNHG5、miR-132-3p与临床指标的相关性;ROC曲线分析lncRNA SNHG5和miR-132-3p水平对PE的诊断价值。结果：轻度组和重度组PE病人24 h尿蛋白、收缩压以及舒张压水平均高于对照组(P<0.05);重度组收缩压、舒张压均高于轻度组(P<0.05)。轻度组、重度组lncRNA SNHG5水平低于对照组(P<0.05),miR-132-3p水平高于对照组(P<0.05);重度组lncRNA SNHG5水平低于轻度组(P<0.05)。...     

Linc01635对川崎病血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨linc01635对川崎病（KD）血管内皮细胞凋亡的影响。方法：通过生物信息学网站预测和RNA FISH检测来分析linc01635的亚细胞定位。用KD患者血浆或健康儿童血浆刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,qRT-PCR检测HUVECs内linc01635的相对表达量。通过慢病毒过表达或siRNA敲减HUVECs中的linc01635,流式细胞术分析细胞凋亡情况。用KD血浆诱导细胞凋亡,检测linc01635在KD诱导血管损伤中的作用。结果：Linc01635在HUVECs中主要分布于细胞核和细胞质。与健康对照相比,KD血浆培养的HUVECs中的linc01635相对表达量下降（P＜0.01）。Linc01635过表达抑制了HUVECs的凋亡（P＜0.01）,而linc01635敲减使HUVECs凋亡增加（P＜0.01）。KD血浆能促进HUVECs凋亡,而过表达linc01635能抑制KD血浆诱导的凋亡（P＜0.01）。结论：KD血浆处理会导致血管内皮细胞中linc01635表达量下降,而linc01635的减少会促进血管内皮细胞凋亡。     

lncRNA与心血管疾病

非编码RNA(ncRNA)占哺乳动物RNA的98%,既往认为非编码RNA不具备生物学功能,但近些年来的研究发现,非编码RNA可从表观遗传学、转录调控及转录后调控等多个层面实现对基因表达的调控,其表达水平的变化与多种疾病密切相关,亦影响到心血管疾病的发病进程。其中,长链非编码RNA(lncRNA)成为基因组学研究中一颗冉冉升起的新星,其可从转录水平调控疾病相关基因的表达,亦可竞争性结合microRNA,以影响目的基因的表达和功能。文章从非编码RNA的来源、分类、作用机制及lncRNA在心血管疾病中的研究进展进行综述。具有细胞和组织特异性的lncRNA未来则有望成为一类全新的疾病诊断、判断预后的特异标志物和新药作用靶点,为疾病的临床诊断与治疗提供新思路。     

lncRNA TCONS⁃00020455及TCONS⁃00020457在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的：探讨长链非编码RNA（long non?coding RNA,lncRNA）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）组织中表达量的变化和lncRNA在PTC发生发展中的作用。方法：应用微阵列芯片技术检测PTC手术切除的癌组织及癌旁组织中的lncRNA表达谱,并从中随机选取5条差异表达的lncRNA（Fold change≥2,P < 0.05）,应用real?time PCR方法验证表达谱芯片结果。比较不同表达水平lncRNA与PTC患者临床特征、疾病分期之间的关系。结果：基因芯片结果显示,lncRNA在PTC组织及癌旁组织中的表达具有明显差异性,429个表达上调,1 449个表达下调。在41例PTC患者癌组织及癌旁组织中,real?time PCR检测结果显示,lncRNA TCONS?00020455（TCON?455）及TCONS?00020457（TCON?457）在PTC癌组织中的表达水平均显著高于癌旁组织,差异均具有统计学意义（P < 0.05）。进一步分析发现,lncRNA TCON?455及TCON?457表达水平与PTC患者淋巴结转移、多发病灶和TNM分期相关（P均<0.05）,而与年龄、性别均无相关性（P均>0.05）。结论：PTC患者的癌组织中存在lncRNA异常表达。lncRNA TCON?455和TCON?457的高表达可能与PTC转移和恶化有关。     

重度子痫前期患者的血清作用下NK细胞对血管内皮细胞分泌内皮素-1及前列环素的影响

目的 研究在重度子痫前期患者的血清作用下,NK细胞对血管内皮细胞分泌内皮素-1(ET-1)及前列环素的影响.方法 重度子痫前期组、正常妊娠组各18例,采用1∶1配比的病历对照研究.用20％重度子痫前期及正常妊娠妇女的血清孵育NK细胞,加入脐带血管内皮细胞(HUVEC)培养体系中培养24 h.采用放射免疫方法检测NK细胞与HUVEC培养上清液中ET-1及前列环素的稳定代谢产物6-keto-PGF1α的水平.结果 重度子痫前期组血管内皮细胞分泌ET-1的水平为(40.35±8.94)pg/mL,与正常妊娠组(33.06±7.88)pg/mL相比显著增高(P＜0.01),差异具有统计学意义;重度子痫前期组血管内皮细胞分泌6-ke-to-PGF1α的水平为(527.23±102.59)pg/mL,与正常妊娠组(629.64±114.45)pg/mL相比显著降低(P＜0.01),差异具有统计学意义.结论 在重度子痫前期患者的血清作用下,NK细胞导致血管内皮细胞分泌血管收缩因子内皮素-1增多,分泌血管舒张因子前列环素减少.     

子痫前期患者血浆对HUVEC凋亡和增殖的影响及其与LPA受体的关系

目的：探讨子痫前期（pre-eclampsia,PE）患者血浆对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡和增殖的影响,并进一步分析其与溶血磷脂酸（lyso-phosphotidic acid,LPA）受体的关系,为其临床研究提供可参考依据。方法：收集2012年1月～2013年6月70例我院确诊的PE孕妇,其中轻度PE 38例,重度PE 32例,同时随机抽取30例正常孕妇作为对照组。所有孕妇空腹抽取静脉血,分别配成不同成分培养液对健康产妇分娩后的HUVEC进行培养,应用MTT比色法检测HUVEC的凋亡和增殖,采用免疫组化检测LPA受体Edg4、Edg7的表达。结果：重度PE组细胞增殖抑制率（IR）及LPA水平均高于轻度PE组及对照组,轻度PE组IR及LPA水平均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。PE孕妇HUVEC由长梭形变为圆（椭圆）形,细胞间隙增大,且细胞排列疏松,而重度PE组上述情况更明显。重度PE组Edg4阳性例数、mRNA表达及Edg7阳性例数、mRNA表达均高于轻度PE组及对照组,轻度PE组Edg4阳性例数、mRNA表达及Edg7阳性例数、mRNA表达均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：内皮细胞损伤是PE发生的原因之一,且血浆LPA水平升高及其受体Edg4、Edg7表达增加可能参与了PE孕妇血管内皮细胞损伤的发生、发展过程。     

子痫前期血清诱发血管内皮细胞凋亡机制的实验研究

目的：探讨子痫前期患者血清对体外生长血管内皮细胞凋亡情况的影响及发生机制.方法：对血管内皮细胞进行体外培养,分别加入正常孕妇血清和重度子痫前期患者血清,采用流式细胞术检测血管内皮细胞凋亡率、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）活性,并在培养体系中加入阳离子染料JC-1后检测血管内皮细胞线粒体跨膜电位变化.结果：①子痫前期血清组诱导血管内皮细胞早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率分别为（10.8±3.2）％与（6.8±1.8）％,明显高于正常孕妇血清组的早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率（4.2±1.7）％与（3.3±1.1）％（P＜0.05）;②子痫前期血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率为（8.3±1.2）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率（3.6±1.1）％（P＜0.05）：③子痫前期血清组诱导血管内皮细胞其线粒体损伤率为（8.9±2.1）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞的线粒体损伤率（3.0±0.8）％（P＜0.05）.结论：子痫前期患者血清可促进体外生长血管内皮细胞的凋亡,Caspase-3和线粒体凋亡在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡中可能起重要作用.     

IL-27通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期发病机制的相关研究

目的：探讨IL-27参与原代人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）功能受损的信号通路,及其在子痫前期发病机制中的作用。方法：①使用Western blot检测子痫前期和正常足月胎盘组织中白介素（interleukin,IL）-27及其受体WSX-1的表达;②分离并培养原代人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光的方法鉴定HUVECs细胞;③对原代HUVECs予以50 ng/mL人重组IL-27蛋白刺激15 min、30 min、1 h和2 h后,提取蛋白,Western blot方法检测JAK2、STAT1的活化情况;④使用JAK的特异性抑制剂AG490处理原代HUVECs后,分为6个处理组,分别是空白对照组（Con）、DMSO组、抑制剂组（AG490）,IL-27处理组（IL-27）、IL-27和DMSO共同处理组（DMSO+IL-27）、IL-27和抑制剂共同处理组（AG490+IL-27）,然后用Transwell和细胞管腔成型实验检测IL-27对原代HUVECs血管成形能力的影响。结果：①IL-27及其受体WSX-1的蛋白水平在子痫前期胎盘组织中高于正常足月胎盘（t=2.980,P=0.020;t=2.520,P=0.040）;②成功在体外建立培养原代人脐静脉内皮细胞的模型;③人重组IL-27（50 ng/mL）刺激HUVECs细胞后可以激活JAK2/STAT1信号通路;④与相应对照组相比,IL-27组、DMSO+IL-27组的迁移和血管成形能力降低（t=16.050,P=0.000;t=16.610,P=0.000;t=11.360,P=0.000;t=11.740,P=0.000）。但是AG490+IL-27组与AG490组相比,并无明显变化（t=0.420,P=0.770;t=0.290,P=0.790）。结论：IL-27可能通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期的发病。     

lncRNA FOXD2-AS1对胶质瘤患者预后的评估及对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA FOXD2-AS1在评估临床胶质瘤患者预后方面的意义,并研究FOXD2-AS1对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 收集2012年1月至2015年1月间空军军医大学唐都医院神经外科收治的53例胶质瘤患者的标本组织,同期取脑外伤行开颅手术的30例患者的正常脑组织作为对照组.qRT-PCR法检...     

lncRNA HAND2-AS1和GLUT-1在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的:检测口腔鳞癌患者中长链非编码RNA HAND2-AS1(lncRNA HAND2-AS1)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的表达情况,并探究两者与患者病理特征及预后的关系。方法:选取本院口腔科经病理检查确诊为口腔鳞癌患者68例,取其手术切除的口腔鳞癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)分别检测癌组织及癌旁正常组织lncRNA HAND2-AS1与GLUT-1 mRNA表达水平,免疫组织化学法检测GLUT-1蛋白表达情况;通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线评估lncRNA HAND2-AS1、GLUT-1蛋白表达对口腔鳞癌患者预后的影响;采用Cox回归分析口腔鳞癌患者预后的影响因素。结果:口腔鳞癌组织lncRNA HAND2-AS1表达水平低于癌旁正常组织,GLUT-1 mRNA表达水平、GLUT-1蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA HAND2-AS1低表达组术后5年总生存率低于高表达组,GLUT-1蛋白阳性组术后5年总生存率低于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA H...     

润滑障碍中的lncRNA⁃mRNA共表达网络的构建及功能预测

目的：通过构建阴道润滑障碍（lubrication disorder,LD）女性阴道上皮组织差异表达lncRNA?mRNA共表达网络,探索LD患者的潜在发病机制。方法：利用以|Log2FC|≥2且校正后P值＜0.05,鉴别LD和正常对照组之间的长链非编码RNA（long non?coding RNA,LncRNA）以及mRNA的表达谱,利用Cytoscape软件构建差异表达lncRNA及差异表达mRNA网络,采用Gene Ontology（GO）和KEGG Pathway分析共表达网络中mRNA的生物学功能。结果：通过下一代测序技术,根据|Log2FC|≥2且校正后P值＜0.05标准筛选出LD组和正常对照组中共计499条上调表达的lncRNA、337条下调表达的lncRNA,以及1 582条上调表达mRNA、633条下调表达的mRNA。随后,通过其中100个lncRNA与311个mRNA构建了基于差异表达的lncRNA和mRNA的共表达网络。最后,共表达网络的功能富集分析表明mRNA主要与心肌相关的疾病和功能有关。结论：LD的发病机制可能与血液循环功能障碍、局部肌肉功能障碍以及cGMP通路等有关,需要相关研究来进一步证实。