鞣花酸的抗氧化性及其对PC-12细胞氧化损伤的保护作用研究

通过鞣花酸清除自由基、抑制亚油酸自氧化、还原铁离子(Fe³⁺)能力实验研究其抗氧化活性；以过氧化氢(H₂O₂)诱导PC-12细胞建立氧化损伤模型，探索鞣花酸对PC-12细胞氧化应激损伤的保护作用，建立鞣花酸抗氧化活性与对细胞氧化应激损伤之间的联系。结果表明，鞣花酸对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O₂^-)、ABTS⁺·自由基清除的半抑制浓度分别为92.14、36.70、47.91μg/mL；对亚油酸自氧化的抑制率高达90%；对铁离子具有很强的还原能力。鞣花酸对H₂O₂诱导的PC-12细胞氧化损伤具有良好的保护作用，且与抗氧化活性之间具有良好的相关系。鞣花酸对细胞氧化损伤的保护作用可能与提高细胞的抗氧化能力有关。     

地鳖虫酶解液体外抗氧化作用的研究

通过正交试验得出Arazyme蛋白酶酶解地鳖虫的最佳工艺条件为加酶量300 U,酶解时间5 h,料水比1:20.并分析了其酶解液对羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)的清除作用以及对亚油酸自氧化反应的抑制作用.结果表明:地鳖虫酶解液对·OH、O2-·、DPPH三种自由基的最高清除率分别为75.15%(浓度为50 g/L)、31.72%(浓度为2.5 g/L)、74.88%(浓度为80 mg/L);在肽含量为2.0 mg时,对亚油酸自氧化反应的抑制率为95%.     

核桃相关多酚及其与血清白蛋白的互作研究

核桃青皮与核仁含有没食子酸、鞣花酸、咖啡酸、槲皮素等丰富的多酚。这些多酚有抗氧化、抗炎、保护皮肤、抗肿瘤等多种生物学活性。其中的绿原酸、阿魏酸、儿茶素等许多组分已采用光谱法研究了与血清白蛋白的相互作用,结果表明其猝灭类型为静态猝灭、猝灭速率常数范围7.28×1011~7.28×1013L(/mol·s)、结合常数范围3.23×103~2.80×108mol/L、结合位点数0.86~1.91、结合距离1.93~5.18nm,其作用力以疏水作用为主、范德华力或氢键、质子化力、静电引力为主。这些参数有助于了解核桃相关多酚在体内的转运、代谢过程和生理功能,为其开发利用奠定基础。     

鞣花酸微球的制备及其对前脂肪细胞生长和成脂分化的影响

目的：采用海藻酸钠/壳聚糖对石榴皮鞣花酸进行包裹,制备成鞣花酸微球,并观察其对前脂肪细胞的生 长及成脂分化的影响。方法：利用扫描电子显微镜、傅里叶变换红外光谱仪和释放率分析仪鉴定制备的鞣花酸微 球;噻唑蓝法检测不同质量浓度的鞣花酸微球在6、12、24 h和36 h时对前脂肪细胞生长的影响,苏木精-伊红染色 观察细胞形态及数量的变化;油红O染色观察鞣花酸微球对前脂肪细胞成脂分化的影响,异丙醇萃取测定脂肪生成 量。结果：成功制备了海藻酸钠/壳聚糖包裹的鞣花酸微球,0.1、0.3 g/L和0.5 g/L的鞣花酸微球能够抑制前脂肪细 胞的生长及成脂分化,且具有剂量-效应关系,对脂滴生成的抑制率可达80%。结论：以海藻酸钠/壳聚糖作为石榴 皮鞣花酸的包裹材料制备鞣花酸微球是可行的,鞣花酸微球具备潜在的保健价值。     

单宁酸与大豆分离蛋白相互作用研究

利用荧光光谱、紫外光谱和圆二色谱,从分子水平研究单宁酸与大豆分离蛋白的相互作用。结果表明:单宁酸对大豆分离蛋白有较强的荧光猝灭作用,当单宁酸浓度小于6×10~(-6)mol/L(相对于大豆分离蛋白质量分数5. 1%)时,猝灭类型为静态猝灭,当单宁酸浓度大于6×10~(-6)mol/L时,同时存在静态猝灭和动态猝灭;单宁酸通过疏水作用与大豆分离蛋白结合,导致大豆分离蛋白的色氨酸和酪氨酸残基微环境亲水性增强,但对大豆分离蛋白的二级结构没有显著影响。     

鼠尾草酸对α-淀粉酶的抑制作用

抑制α-淀粉酶的活性可以有效降低餐后血糖浓度升高,故本实验从抑制率、抑制类型、荧光猝灭效应及分子模拟几个方面出发研究鼠尾草酸对α-淀粉酶的抑制作用。结果显示,鼠尾草酸对α-淀粉酶有较为显著的抑制作用,半数抑制浓度为1.12 mg/mL,以可逆的竞争性方式抑制α-淀粉酶的活性。荧光猝灭实验结果表明,鼠尾草酸与α-淀粉酶结合后使α-淀粉酶的荧光特性发生静态猝灭。分子对接结果显示鼠尾草酸与α-淀粉酶作用后没有催化底物生成新的产物,而是形成可逆的酶-抑制剂复合物,引起变构调节,从而扰乱了α-淀粉酶的构象动力学,最终导致酶催化活性降低。     

三种多酚与牛血清蛋白相互作用的初步研究

采用紫外光谱法、荧光光谱法、圆二色谱法、同步荧光光谱法等方法分析异荭草素、鞣花酸和安石榴苷与牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)的相互作用。结果表明,三种多酚类化合物对BSA的荧光猝灭机制主要为静态猝灭;与3种多酚结合后,BSA的构象发生变化,异荭草素与BSA的结合位点比例约为2∶1,安石榴苷、鞣花酸与BSA的结合位点比例约为1∶1;异荭草素、安石榴苷、鞣花酸与BSA相互作用的主要作用力初步确定为疏水作用力,并且此3种多酚与BSA之间的结合主要是吸热和熵驱动的反应。3种多酚均与牛血清蛋白产生不同程度的结合,为蛋白质与多酚复合物的研究提供了理论支撑。     

1-脱氧野尻霉素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用机制

运用紫外光谱法、荧光光谱法和圆二色光谱法,研究桑叶提取物1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin,DNJ）对α-葡萄糖苷酶的作用。结果发现：DNJ与α-葡萄糖苷酶反应的半抑制浓度为0.297 μg/mL,作用类型为竞争型抑制;其与α-葡萄糖苷酶主要通过静电吸引力相互作用形成基态复合物,并使α-葡萄糖苷酶的内源荧光猝灭;DNJ与α-葡萄糖苷酶相互作用形成复合物的过程是熵驱动的吸热反应,静电吸引力是两者结合反应的主要驱动力。不同温度（273、298、310 K）条件下荧光猝灭常数（Ksv）分别为1.48×104、1.29×104、1.12×104 L/mol。DNJ使α-葡萄糖苷酶的构象发生变化,且使其二级结构重新排列;诱导酶活性口袋关闭,不利于底物结合到活性位点,推测这可能是DNJ抑制α-葡萄糖苷酶活性从而降低血糖水平的机理。     

紫甘薯花色素与胰蛋白酶相互作用特性

测定紫甘薯花色素与胰蛋白酶反应前后酶的催化活性、催化反应动力学并采用紫外光谱法、荧光光谱法和红外光谱法研究紫甘薯花色素与胰蛋白酶相互作用特性。结果表明：紫甘薯花色素对胰蛋白酶催化活性有明显的抑制作用,抑制类型为可逆的竞争性抑制,抑制常数Ki＝6.16×10－4 mmol/L,当紫甘薯花色素与胰蛋白酶的物质的量比为140∶1,在 37 ℃反应 15 min,抑制率达到38.61%,而反应时间对催化活性的影响不明显;紫甘薯花色素可使胰蛋白酶的内源荧光猝灭,猝灭类型为静态猝灭,室温下猝灭常数Kq为1.73×1012 L/（mol·s）,结合常数KA为3.88×104 L/mol,结合位点数n为0.86;热力学参数确定两者之间的作用力主要为氢键和范德华力;根据Förster能量转移理论得出它们的结合距离为3.56 nm;红外光谱经过去卷积、二阶导数处理得知与紫甘薯花色素作用后胰蛋白酶的α-螺旋含量降低,β-折叠含量升高。     

牡蛎酶解产物的ACE抑制活性和清除自由基活性研究

研究了牡蛎蛋白质分别经537酸性蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶作用所得酶解产物的ACE抑制活性以及对DPPH·、·OH、O2·三种自由基的清除作用。结果表明,两种酶的作用产物都具有一定的ACE抑制活性和清除自由基活性。综合评价工艺条件以及功能实验结果得出,采用537酸性蛋白酶可以简化工艺,对于水解度为16％的酸性蛋白酶酶解产物,蛋白浓度为1mg/mL时,对ACE的抑制率为71.71％;20mg/mL时,对DPPH·、O2·自由基的清除率分别为76.23％、24.36％;8mg/mL时,对·OH自由基的清除率为8947％。相对分子质量分布结果表明,体系主要存在2肽到5肽的多肽类物质,HPLC图谱中对应峰面积约占总面积的76.99％。     

Inhibitory effects of natural plants of Jeju Island on elastase and MMP-1 expression

In order to search for new active cosmetic ingredients of natural origin, we screened about 60 plants collected from Jeju Island, which is located in the southernmost part of the Republic of Korea. We investigated their free radical scavenging activity, elastase inhibition activity, and reduction of MMP-1 mRNA expression for the development of anti-aging ingredients as raw materials for use in cosmetics. In the free radical scavenging capacity assay, 12 extracts, including Typha orientalis (seed) and Torreya nucifera (leaf), showed significant free radical scavenging activity (up to SC50 < 30 μg/ml). Among these extracts, Nymphaea tetragona (rhizome) extract showed the highest free radical scavenging activity (SC50 = 4.7 μg/ml). In the anti-elastase inhibition assay, seven extracts, including T. orientalis (seed) and Persicaria hydropiper (whole plant), showed high inhibitory activity (>50% at 100 μg/ml). Among these extracts, P. hydropiper (whole plant) extract showed the highest elastase inhibition activity (IC50 = 46.7 μg/ml). In the MMP-1 expression assay using RT-PCR, T. orientalis (seed), Pyrrosia hastata (root), and Capsicum annum (whole plant) showed slightly lower inhibition activity than EGCG, which was used as a control. Furthermore, four extracts, including P. hydropiper (whole plant), Filipendula glaberrima (root), N. tetragona (root), and Camellia japonica (leaf), completely inhibited the expression of MMP-1 in human fibroblast cells. The results showed that four of the 60 plant extracts may hold potential for use as natural active ingredients for anti-aging cosmetics.     

The effects of areca catechu L extract on anti-aging

The anti-aging effects of Areca catechu L extract (CC-516) on skin were investigate both in vitro and in vivo. The CC-516 has a high proportion of proline (13%) of free amino acid content. The inhibitory effect of CC-516 on the elastase exhibited 37 to 90% inhibition by 10 to 250 mug/ml concentration; the IC _ 50 values with 40.8 mug/ml for porcine pancreatic elastase (PPE) and 48.1 mug/ml for human leukocyte elastase (HLE), respectively. One of the effects of elastase is that it is known to reduce the number of elastin fibers at the level of the enzyme deposition. The number of elastin fibers was increased when we drift from the deposit number of elastase with 100 mg/ml of CC-516. CC-516 showed protection of elastic fiber against degradation by the enzyme in an ex vivo assay. The CC-516 increased proliferation of human fibroblast cell by 85% at 10 ; -4 concentration, compared with control, whereas the increase by ascorbic acid was 50%. The collagen synthesis was increased by 40% at 10 ; -4% concentration of CC-516. The treatment with CC-516 improved skin hydration, the skin elasticity, and skin wrinkles. From this study, we suggest that CC-516 can be used as a new anti-aging component for cosmetics.     

桃胶多糖体内外抗氧化作用的研究

为了研究桃胶多糖体内外抗氧化的作用,实验采用体外测定桃胶多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐阳离子自由基(ABTS+·)、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O₂-·)等的清除率及对铁的还原能力,体内通过建立D-半乳糖小鼠氧化损伤模型,给予不同剂量(2、4、6 g/kg)桃胶多糖灌胃,测定血清及肝脏中丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果显示,桃胶多糖体外对DPPH·、ABTS+·、·OH和O₂-·的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为6.95、0.56、1.10、0.11 mg/mL,且对铁还原力随着浓度(0.02~0.14 mg/mL)的升高而增大;在体内实验中,与模型组相比,连续服用不同剂量(2、4、6 g/kg)的桃胶多糖能够显著或极显著降低小鼠血清及肝脏中MDA含量、提高T-AOC能力、增强SOD及GSH-Px的活性(P<0.05或P<0.01),同时剂量间存在一定的量效关系。研究结果表明桃胶多糖具有良好的体内外抗氧化活性,可进一步申报成为新型的食品资源,应用于制药与食品工业中抗氧化、抗衰老、降血糖等保健产品的开发。     

Free radical scavenging capacity of Maillard reaction products as related to colour and fluorescence

The free radical scavenging activity of Maillard reaction products (MRPs) produced by heating glucose or lactose with lysine, alanine or glycine was estimated directly by means of a 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH·) method. Model systems of sugar (lactose and glucose) and amino acid (alanine, glycine, and lysine) were heated without pH control at 100°C up to 24 h. Fluorescence (347 and 415 nm), browning (absorbance at 420 nm), colour parameters in the CIELab scale, and free radical scavenging activity were determined. Browning is not directly related to the free radical scavenging properties of MRPs formed at prolonged heating conditions. This study shows that fluorescence measurement of heated sugar/amino acid systems is more effective than browning to follow the formation of MRPs with free radical scavenging activities. This approach could be applied to optimise the formation of natural antioxidants during food processing where browning is not desirable for consumers.     

黄精多糖的提纯、硫酸化和羧甲基化修饰及其抗氧化活性研究

以黄精为原料,采用超声辅助法提取黄精多糖,经DEAE-52纤维素层析及葡聚糖凝胶层析柱Sephadex G-200分离纯化,得到平均分子量为21.58 kDa的纯黄精多糖(PSP1-A),浓硫酸法制备硫酸酯化多糖(SPSP1-A),氢氧化钠-一氯乙酸体系法制备羧甲基化多糖(CPSP1-A)。通过傅里叶红外光谱法对衍生物进行结构验证,并采用体外实验法对比修饰前后黄精多糖的抗氧化活性。结果表明,黄精多糖提纯修饰后得到取代度为1.44的硫酸化产物和取代度为0.49的羧甲基化产物。在最大浓度10 mg/mL时,CPSP1-A对DPPH·和·OH的清除率分别为74.69%和91.27%。与PSP1-A相比,CPSP1-A对DPPH·和·OH清除力提高,还原力增强,但对ABTS+自由基清除力下降;而SPSP1-A对以上三种自由基的清除作用均增强,10 mg/mL时对DPPH·、·OH和ABTS+·的清除率分别为98.70%、95.72%和97.87%,且还原力明显提高,在10 mg/mL时,SPSP1-A还原力是PSP1-A的三倍多。结果表明,两种修饰均是提高黄精多糖抗氧化能力的有效方法。     

高抗氧化活性肉用乳杆菌的筛选鉴定及其在发酵香肠中的应用

目的 筛选高抗氧化活性肉用乳杆菌,并应用到发酵香肠中。方法 以肉品发酵剂标准、自由基清除率、耐过氧化氢能力和抗氧化酶活性为指标进行菌株筛选,经形态学、生理生化及16S rDNA对菌株进行鉴定,通过硫代巴比妥酸值、羰基和巯基值探究菌株对发酵香肠的抗氧化作用。结果 菌株CC-3符合硝酸盐还原酶阳性、氨基酸脱羧酶阴性等肉用发酵剂标准；该菌株具有较高的自由基清除能力,其发酵上清液DPPH.和OH.清除率分别为98.43%、42.75%,菌体细胞.清除率为75.56%；具有较高的抗氧化酶活性,其细胞破碎液T-SOD活力和CAT活力分别为45.17±0.29、58.50±0.28 U. mgprot_^-1,发酵上清液GSH-Px活力为98.16±0.65 U.mgprot_^-1。菌株CC-3鉴定为植物乳杆菌。接种菌株CC-3的发酵香肠与其他组比较在发酵结束时TBARS值和羰基值最低,分别为0.22±0.01、1.57±0.06 nmol.mg_^-1；巯基值最高,为0.05±0.01 nmol.g_^-1。结论 菌株CC-3符合肉用发酵剂标准且具有高抗氧化活性,可以抑制发酵香肠脂肪氧化和蛋白氧化,具有重要的开发潜力。     

乌饭果花色苷复合酶法提取工艺优化及其抗氧化活性

以乌饭果花色苷含量为指标,采用二次回归正交旋转组合设计优化乌饭果花色苷的复合酶法提取工艺,并分析评价其体外抗氧化活性。结果表明:乌饭果花色苷复合酶法提取的最佳工艺条件为加酶量234 U·g-1原料,纤维素酶:果胶酶配比2:1,pH4.0,料液比1:30 g·mL-1,酶解温度50 ℃,酶解时间180 min,在此条件下测得乌饭果花色苷的含量最高,为136.08 mg·100 g-1。同时,体外抗氧化活性研究表明,乌饭果花色苷对·OH、O₂-·清除能力和抗脂质过氧化能力的半抑制浓度IC₅₀分别为92.23、23.93和303.1 μg·mL-1,与同质量浓度抗坏血酸相比,其·OH、O₂-·清除能力弱于抗坏血酸,但抗脂质过氧化能力优于抗坏血酸。     

壳聚糖及其衍生物的抗氧化作用

采用邻二氮菲-Fe2+氧化法和DPPH法,研究5种壳聚糖及其衍生物——壳聚糖(chitosan)、壳寡糖(ol-igo-chitosan)、羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)、N-乙酰氨基葡萄糖(GLcNAc)、氨基葡萄糖盐酸盐(GlcNH2.HCl)的体外清除羟自由基和DPPH.自由基的能力。结果表明:在实验设置的浓度范围内,对羟自由基的清除能力依次为oligo-chitosan>chitosan>GLcNAc>GlcNH2.HCl>CM-Chitosan,且其清除能力随着浓度的增加而增加。其中2 mg/mL的Oligo-chitosan对羟自由基的清除率最大达到97.81%,相当于4 mmol/L的VC对羟自由基的清除能力。对DPPH.的清除能力大小依次为oligo-chitosan>chitosan>GlcNH2.HCl≥GLcNAc>CM-chitosan,且其清除能力随着浓度的增加而增加。2 mg/mL oligo-chitosan的清除率为97.34%,大于6mmol/L VC的清除速率79.92%。2种方法测定的结果比较一致。     

干燥温度对醇提余甘子多酚含量及其抗氧化活性的影响

为探究干燥方式(冷冻真空干燥、热风干燥)和干燥温度(冻干、40、60、80、100℃)对余甘子多酚活性成分的影响,利用高效液相色谱(HPLC)检测不同干燥处理后余甘子醇提液中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸、诃子鞣酸的含量,并测定其总多酚含量和抗氧化活性(ABTS+自由基清除能力和DPPH自由基清除能力)。结果表明,随着干燥温度的升高,余甘子中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸、诃子鞣酸含量均增加,100℃热风干燥时达最高(分别为12.83、6.04、16.89、13.48 mg/g)。总多酚含量与抗氧化活性(ABTS+·清除能力和DPPH·清除能力)也随干燥温度升高而增加,80℃热风干燥时达最高(分别为200.92、695.76、725.05 mg/g)。此外,试验结果表明柯里拉京、诃子鞣酸和总多酚的含量与余甘子醇提样品ABTS+自由基清除能力呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01)。本次试验中,与热风干燥相比,冷冻干燥的样品中4种多酚单体和总多酚含量以及抗氧化活性无明显优势,综合考虑,80℃热风干燥为余甘子的最佳干燥方式。