关于黄鳝的性逆转

１　　性逆转与体长的关系黄鳝（Ｍｏｎｏｐｔｅｒｕｓ　ａｌｂｕｓ）不像其它动物那样终生属于一个性别,是前半生为雌性后半为雄性,其中间转变阶段叫雌雄间体,这种由雌到雄的转变叫做性逆转现象［１］。一般体长２０～２４ｃｍ以下的个体均为雌性,２４～３０ｃｍ的个体雌性占９０％以上,３０～３６ｃｍ的个体雌性占６０％左右,３６～３８ｃｍ的个体雌性占５０％,３８～４２ｃｍ的个体雄性占９０％左右,４２ｃｍ以上则几乎全部为雄性,５３ｃｍ以上则全部为雄性［１～３］。但曾有人观察到另一种情况,即从池塘中捕获的体长在５…     

黄鳝性逆转时生殖腺的组织学与超微结构的变化

黄鳝由雌转雄性时,其生殖腺滤泡细胞变得肥大和充满分泌物,卵母细胞的微绒毛、线粒体与放射带退化,卵黄液化。滤泡细胞吞噬卵黄颗粒并消化吸收后,最后形成类胡罗卜素瘤。随着卵巢的退化,精细胞与精巢逐渐形成。     

黄鳝性逆转与性腺蛋白关系的分析

实验采用聚丙烯酰胺梯度胶电泳方法，对２６２黄鳝的性腺蛋白进行了分析，结果表明雌性黄鳝随着性腺的成熟性腺蛋白组分有所增多，相反雄性黄鳝随着性原的成熟其性腺蛋白组分则有所减少；；雌鱼性腺Ⅱ－Ⅲ期为１０－１２条区带，雄鱼性腺Ⅲ－Ⅵ期为１３－１０条区带。兼性期性腺蛋白组分明显增加为１５－１９条区带，其增加的蛋白带为一组位于凝胶偏负极端、分子量相近的蛋白分子，性逆转时精巢的组建可能与这组蛋白的调节有关。性逆     

黄鳝性逆转过程中同工酶的分析研究：I.雌雄个体不同组织的同工酶分析

作者采用三种垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对雌雄黄鳝６种组织的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、酯酶（ＥＳＴ）进行了研究。结果表明ＬＤＨ同工酶谱为细带型,可分为３区８条带,其迁移率率为Ａ＞Ｂ＞Ｃ,其中Ｃ４仅出现在心、脑和肌肉中。ＬＤＨ在肝中表达甚微。ＥＳＴ同工酶显示３区７条带。黄鳝的同工酶有明显的组织较明显。在两性中的表达也存在一定的差异,这种差异ＥＳＴ比ＬＤＨ明显;肝、肾和性腺比其它组织较明显。这两种同工酶在雌性     

黄鳝性逆转过程中Gsdf基因cDNA片段的克隆和表达分析

通过RT-PCR法从黄鳝性腺中首次克隆获得黄鳝Gsdf(gonadal soma-derived factor)基因的片段序列,该片段序列长218 bp,编码72个氨基酸。氨基酸序列分析表明黄鳝Gsdf基因片段与其他物种的相似性在61%~76%之间,其中与舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)GsdfⅠ型、舌齿鲈GsdfⅡ型同源性最高,均为76%;系统进化树显示,黄鳝Gsdf与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Gsdf基因聚成一支,与鲈形目鱼类亲缘关系较近。此外,不同性腺组织的基因检测结果显示,黄鳝Gsdf在卵巢和间期性腺的表达量很低,两者没有显著性差异(P0.05);在精巢组织中的表达量显著高于卵巢、间期性腺组织的表达量(P0.05)。上述结果表明Gsdf基因可能在黄鳝的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。     

黄鳝性逆转过程中同工酶的分析研究 Ⅰ．雌雄个体不同组织的同工酶分析

作者采用三种垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对雌雄黄鳝６种组织的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、酯酶（ＥＳＴ）进行了研究。结果表明ＬＤＨ同工酶谱为细带型,可分为３区８条带,其迁移率为Ａ＞Ｂ＞Ｃ,其中Ｃ＿４仅出现在心、脑和肌肉中。ＬＤＨ在肝中表达甚微。ＥＳＴ同工酶显示３区７条带。黄鳝的同工酶有明显的组织特异性,在两性中的表达也存在一定的差异,这种差异ＥＳＴ比ＬＤＨ明显;肝、肾和性腺比其它组织较明显。这两种同工酶在雌性中的表达均比在雄性中强。以上反映了差别的基因活性。本文还讨论了黄鳝同工酶的遗传基础,亚基的组成以及ＬＤＨ迁移率和黄鳝演化地位的关系。     

黄鳝性腺自然逆转过程中vasa基因的表达分析

本研究采用RNA反义探针原位杂交技术,对vasa基因在黄鳝(Monopterusalbus)性腺发育过程中的表达情况进行了分析。结果表明:vasamRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期卵母细胞的胞质中均匀分布,在Ⅳ、Ⅴ期卵母细胞中vasamRNA有向胞质外周皮层迁移集中的趋势,但不明显;退化的卵粒也呈现vasamRNA阳性反应;在Ⅲ、Ⅳ期卵巢的被膜中检测到带有vasa阳性信号的细胞,这些细胞可能是待向精原细胞分化、迁移到卵巢被膜上的原始生殖细胞(Primordialgermcell,PGC),在性逆转过程中这些PGC可能由卵巢被膜迁移到精小叶中并发育成精子;在成熟精巢中,vasa在精原细胞和初级精母细胞中表达。进一步采用碱性磷酸酶染色法分析黄鳝卵巢及精巢后发现:在卵巢中,除了卵母细胞外,卵巢被膜中也检测到了带有碱性磷酸酶阳性信号的细胞;在成熟精巢中,只在生殖腺囊内的雄性生殖细胞中检测到碱性磷酸酶,而精巢被膜中没有检测到带有碱性磷酸酶阳性信号的细胞。本研究结果初步表明:黄鳝的雄性生殖细胞可能起源于雌性阶段卵巢被膜中的原始生殖细胞[动物学报51(3):469-475,2005]。     

ERK/JNK在黄鳝雌、雄发育阶段生殖腺中的表达和定位

为探讨MAPK家族中ERK和JNK两个主要亚族在黄鳝雌、雄发育阶段生殖腺中的表达状况,应用蛋白质免疫印迹杂交技术和免疫组织化学法检测了ERK、JNK在黄鳝卵巢组织和精巢组织中的表达和定位。蛋白免疫印迹杂交显示:ERK在黄鳝雌、雄性腺组织中均有强的表达;JNK在性腺中的表达总体上弱于ERK,JNK1在精巢组织中的表达比卵巢组织显著降低,但JNK2在雌、雄性腺组织中的表达无明显差异。在免疫组织化学的观察中,ERK和JNK在卵原细胞和精原细胞中均为阳性反应,且定位相似:细胞质及细胞核核质呈阳性反应,核仁阴性。随着卵母细胞生长和成熟,ERK和JNK在卵母细胞胞质中阳性反应逐渐减弱。实验结果提示,ERK和JNK在黄鳝卵巢发育、凋亡退化以及雄性发育的启动过程中可能具有重要调控作用     

小鼠卵巢生殖干细胞分离培养鉴定

通过比较不同酶分离方法获得小鼠（Mus musculus）卵巢生殖干细胞的数量以及不同饲养层培养卵巢生殖干细胞的生长状态,筛选出最佳酶分离方法和饲养层,以期建立更优化的培养体系,并对优化培养体系长期培养的卵巢生殖干细胞进行功能鉴定。选取5日龄C57BL/6雌性乳鼠卵巢,机械法制备卵巢组织碎片后,分别采用传统两步酶法（胶原酶和胰蛋白酶）和改良两步酶法（胶原酶、DNA酶、透明质酸酶、分离酶Ⅱ和胰蛋白酶）分离卵巢生殖干细胞,差速贴壁法纯化后,观察不同酶消化方法对卵巢生殖干细胞数量的影响;将分离得到的卵巢生殖干细胞分别培养于小鼠胚胎成纤维细胞STO系[sandosinbred mice(SIM)embryo-derived thioguanine and ouabain-resistant]、多聚赖氨酸以及明胶3种不同的饲养层,观察卵巢生殖干细胞的生长增殖状态;将传至第6代的卵巢生殖干细胞用碱性磷酸酶检测法和免疫荧光法对卵巢生殖干细胞标志物MVH、Oct4、C-kit和增殖标记物Brdu进行鉴定。结果发现两种酶分离方法均可从卵巢中分离得到卵巢生殖干细胞,其中传统两步酶法获得的细胞经差速贴壁法纯...     

胎牛雄性生殖干细胞源类ES细胞的分离培养与多能性研究

雄性生殖干细胞(male germ stem cells , mGSCs)来源于原始生殖细胞(primordial germ cells ,PGCs) ,且终生存在于性分化后的睾丸中。从20周胎牛分离睾丸细胞,2步连续贴壁速率差法能有效纯化胎牛mGSCs ,经流式细胞仪检测,CD9阳性细胞的比例达到95.8 %。原代与支持细胞共培养,出现隆突状和鸟巢状两种细胞集落。获得1株传至4代仍呈现集落生长的细胞株,且集落AKP染色阳性。对第3代鸟巢状细胞集落免疫组化和诱导分化分析,结果显示:SSEA1和Oct-4免疫组化染色阳性;短期内可自发形成c-kit染色阳性的分化态精原细胞;定向诱导分化形成了表达神经丝蛋白(Neuro filament ,NF)的神经样细胞和表达α-actin的心肌样细胞团。试验结果表明:20周胎牛雄性生殖干细胞在体外可形成具有多分化潜能性的类胚胎干(embryonic stem,ES)细胞。     

黄鳝自然性反转的研究

黄鳝特别引起生物学家的兴趣,因为它是一种生活在淡水中具有性反转现象的硬骨鱼类。       

黄鳝卵巢发育的研究

作者对252尾黄鳝卵巢标本进行观察记录,运用常规染色法、组织化学法和扫描电镜研究了黄鳝的卵子发生、卵巢发育和卵巢周年变化规律。讨论了黄鳝的卵黄发生、卵巢发育分期和产卵类型等问题。本研究为黄鳝人工繁殖提供有关科学依据。     

外源性甲基睾丸酮对雌性和间性黄鳝性腺发育的影响

本文研究了大剂量外源雄性激素（甲基睾丸酮,MT）对活检后的雌性和雌雄间性黄鳝发育的影响。我们应用色拉油溶解外源雄性激素对雌性和雌雄间性黄鳝进行腹腔注射,采用石蜡组织切片法,对MT对活检后的雌性和雌雄间性黄鳝性腺发育的影响进行组织学研究。试验未得到具有生殖能力的性逆转雄鱼,但发现了一些十分有趣的结构,将为进一步揭开黄鳝性逆转之谜奠定了一定的基础。结果如下：① MT可促进雌鳝卵母细胞退化,但不能使卵巢完全解体; ② MT可促进雌性和间性黄鳝性腺生殖板扩大、伸展,但不能使间质细胞增生;③ MT可促进雌性和间性黄鳝性腺生殖板上出现“中空小叶”,这种结构可以分成两种类型,即Ⅰ型“中空小叶”(“HL-Ⅰ”)和Ⅱ型“中空小叶”(“HL-Ⅱ”),Ⅱ型“中空小叶”可能是非正常发育下产生的生精小叶;④ MT对雌雄间体早期的黄鳝的雄性生殖细胞的发育有促进作用,对雌雄间性晚期的黄鳝可促进其生精小叶内的雄性生殖细胞外排,而形成另一类型的“中空小叶”。 ⑤ MT对雌雄间体黄鳝的作用强于对雌性黄鳝的作用。     

黄鳝性别的自然反转现象与血清蛋白关系的初步研究

实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对49条黄鳝的血清蛋白进行了分析,实验结果表明雌、雄黄鳝随着性腺的发育,血清蛋白组分有所增加,雌鱼性腺Ⅲ—Ⅳ期为10—11条区带。雄鱼性腺Ⅰ到Ⅳ期为11—14条区带。性别反转的黄鳝血清蛋白的区带数明显增加,分析结果为20条区带,经CS-910薄层色谱扫描具有较多的吸收峰,极为有趣的是性别反转的黄鳝血清蛋白在凝胶负极一端的大分子脂蛋白和中等分子的球蛋白组分发生了很大的变化。而正极分子较小的白蛋白组分仍保持着雌鱼血清蛋白的吸收峰,因此作者认为黄鳝性别反转作用可能与血清蛋白中较大分子组分的增加有关。     

催产时黄鳝性类固醇激素含量变化的研究

本文首次报道哺乳动物促黄体生成素释放激素类似物（ＬＨＲＨ－Ａ）诱导黄鳝排卵过程中,血浆雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）和睾酮（Ｔ）含量变化的规律。根据１７２尾黄鳝血样放射免疫测定结果,试验组雌鱼于排卵前相继出现Ｅ２和Ｐ浓度高峰（Ｐ〈０．０１）;雄鱼于催产后２４ｈ出现Ｔ浓度峰值（Ｐ〈０．０１）;试验组雌鱼的Ｔ含量与对照组无显著差异（Ｐ〉０．０５）。在对照组,雄鱼的Ｅ２和Ｐ浓度及雄鱼的Ｔ含量差异不显著（Ｐ〉     

革胡子鲇原始生殖细胞的起源、迁移及性腺分化

革胡子鲇又称埃及胡子鲇,是一种多次产卵类型的硬骨鱼。作者用组织学、组织化学、电子显微镜等方法对革胡子鲇的原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)的起源、特征、迁移方式和性腺分化进行了研究。实验结果:PGCs来源于内胚层;PGCs的细胞质中存在着一种与生殖细胞有关的电子致密物--生殖质(Germ plasm);PGCs在迁移过程中有主动迁移的能力;PGCs到达生殖嵴的部位后,与生殖上皮细胞(Epithelisl cells)一起共同形成原始性腺;原始性腺分别逐步向精巢和卵巢分化;生殖质与性腺的分化有密切关系;卵巢的分化比精巢早。