猪囊尾蚴蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦分析

猪囊尾蚴粗抗原在进行人体囊虫病的免疫诊断中有比较好的效果。但猪囊尾蚴抗原成分复杂,为了进一步提高阳性率,减少交叉反应,需要纯化抗原,分离出特异的抗原组分。我们用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦(IEF)对猪囊尾蚴的囊液、头节囊壁和全囊抗原蛋白质组分进行了比较分析。     

用间接酶标测定法评价不同猪囊尾蚴抗原在人囊尾蚴病免疫诊断中的价值

用硫酸铵分段沉淀法将猪囊尾蚴及其囊液的蛋白质分别分离为8种抗原,用间接酶标法检测猪囊尾蚴病病人、其他寄生虫病人及正常人血清中的相应抗体。结果表明,在8种抗原制品中,囊液部分提纯抗原P_1诊断囊尾蚴病的阳性率最高。囊尾蚴粗抗原的部分提纯成份P_(25-55)的阳性率次之。 P_1和囊液粗抗原对包虫病病人血清存在严重的交叉反应,而P_(25-55)交叉反应较低。P_1与肺吸虫病病人血清有交叉反应,但P_(25-55)与肺吸虫病人血清无交叉反应。P_25-55的来源比P_1丰富,是此病免疫诊断的实用抗原。     

猪囊尾蚴蛋白水解酶的初步研究

猪带绦虫病是人畜共患病。迄今国内外对囊虫病的研究主要报道特异性的诊断方法[1 ,2 ] 和诊断抗原[3 ,4] 。Ｍａｎｏｕｔｃｈａｒｉａｎ等[5 ] 克隆了肥头绦虫囊尾蚴囊液蛋白编码 5 6、74和 78ｋＤａ的保护性抗原基因。孙树汉等[6 ] 以囊虫病患者血清和病猪血清为探针筛选猪囊尾蚴ｃＤＮＡ文库 ,克隆了用于诊断的人特异性抗原、猪特异性抗原及人、猪共同抗原。关于猪囊尾蚴蛋白水解酶 ,目前尚未见研究报道。本文从猪囊尾蚴体内提取蛋白酶 ,研究其对各种底物的分解活性及酶抑制剂和二价阳离子对酶活性的影响。 河北省自然科学基金资助项目 (…     

棘球蚴病和囊尾蚴病病人血清的血清交叉反应

用病理学检查证实为细粒棘球蚴病或猪囊尾蚴病病人的血清,按Kagan等的方法进行间接血凝试验(IHA),将血清从1:32到1:4,096作倍比稀释,用作棘球蚴病IHA试验的抗原为绵羊棘球蚴囊液,用于囊尾蚴病IHA试验的抗原为脱脂的人绦虫链体浸液。     

猪带绦虫基因组学及猪囊尾蚴病候选疫苗的研究进展

基因组学、蛋白质组学、生物信息学的快速发展,以及分子生物学和免疫学等新技术的出现推动了猪囊尾蚴病的研究。本文就猪带绦虫基因组学的研究近况及猪囊尾蚴病的候选疫苗和抗原等进行综述,旨在为猪带绦虫基因组学研究及猪囊尾蚴病的防治提供新的思路,为开发新型、高效抗猪囊尾蚴病疫苗或筛选诊断用抗原分子提供有益的资料。     

猪囊尾蚴可溶性蛋白的提取和分析

猪囊尾蚴粗提抗原存在着诸多非特异性反应成分，尤其是分子量在８５ｋＤａ以上的多种蛋白参与同其它寄生虫免疫学交叉反应［１］。本文以盐析法分离出具有较强交叉反应的９４、１１０和１４０ｋＤａ蛋白组分，并对其做了初步分析。材料和方法抗原分离猪囊尾蚴取自长春地区...     

猪囊尾蚴特异性抗原编码cDNA的阶段特异性表达

目的：分析猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ的阶段特异性表达机制。方法：用猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ（λｃＣ２８）及抗λｃＣ２８单表位抗体作探针，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交技术分析了λｃＣ２８编码ｃＤＮＡ在猪带绦虫各发育阶段的特异性表达。结果：猪囊尾蚴和成虫不同节片抗原蛋白具有阶段特异性，λｃＣ２８ｃＤＮＡ编码的２８ｋＤａ抗原蛋白只在囊尾蚴阶段表达，成虫幼节、成节、孕节都不表达。结论：猪囊尾蚴阶段特异性抗原的编码基因存在于囊尾蚴阶段和成虫的幼节中，但仅有囊尾蚴阶段的ｍＲＮＡ表达２８ｋＤａ抗原蛋白。     

猪囊尾蚴与猪细颈囊尾蚴染色体DNA的硷基组成

<正> 本文首次对猪囊尾蚴与细颈囊尾蚴DNA的硷基组成进行了分析。 材料与方法 一、虫种 猪囊尾蚴采自天津,猪细颈囊尾蚴采自广州。 二、染色体DNA的制备 采用SDS-酚-乙醇沉淀法。 三、DNA的定量及纯度测定 按Maniatis方法进行。 四、DNA熔点(Tm)的测定与GC含量的计算按Mandel方法进行,将纯化的DNA溶液用1×SSC     

猪囊尾蚴病免疫和诊断抗原的分子生物学研究进展

猪囊尾蚴病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。猪囊尾蚴特异性和保护性抗原的研究是猪带绦虫病、猪囊尾蚴病免疫和诊断的基础。天然抗原来源有限,限制了其应用,而重组抗原的应用可解决质量控制和抗原来源的问题。该文就近年来猪囊尾蚴病免疫和诊断抗原的分子生物学研究进展进行了综述。     

应用胶体金探针技术IGSS进行猪囊尾蚴与抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb特异性结合的定位研究

本文报道将IGSS应用于抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究。用猪囊尾蚴囊液抗原免疫BALB/C小鼠的脾细胞与胃髓瘤细胞系NS-D融合,经克隆化获得三株分泌抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb杂交瘤细胞A_(91)、G_(11)、F_(3),用ELISA检测证实杂交瘤细胞分泌特异性抗体。对其诱生腹水经ELISA、IHA检测显示腹水中高效价特异性的McAb,     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验研究

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距囊结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋毛虫病猪、肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。提示用单克隆抗体不仅能检测到猪体组织液中特异性循环抗原，而且具有较高的敏感性和特异性，建立了一种通过检测组织液来判定肉类是否感染猪囊尾蚴的免疫学方法。     

抗猪囊尾蚴单克隆抗体的初步研究

为了对囊尾蚴病的免疫诊断提供有价值的单在隆抗体（McAb)，我们应用杂交瘤技术，通过对骨髓瘤细胞NS－1与用猪囊尾蚴囊液抗原免疫的BALB／C小鼠脾细胞融合试验及反复筛选和多次克隆化，建立了3株分泌抗猪囊尾蚴抗原的McAb杂交瘤细胞株1D4、4E11和4E12。其分泌的抗体具有很强的种的特异性，与细粒棘球蚴和肥颈绦虫囊尾蚴抗原均不发生交叉反应。免疫球蛋白亚类鉴定表明3株均属IgG1。经蛋白质转移电泳试验（Western blot)确定，与所获McAb发生特异反应的抗原是猪囊尾蚴头节囊壁（SCW）抗原分子量为25kDa和17kDa的蛋白组分。     

猪囊尾蚴抗原基因GP50的表达及鉴定

目的为了寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子,克隆猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并进行表达、鉴定。方法设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴抗原GP50基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,然后在真核表达载体pBKCMV中亚克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot观察表达结果。结果RT-PCR法扩增出一条大小约897bp的特异性片段,克隆质粒pGEM-GP50和真核表达质粒pBKCMV作BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段。诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约36kDa大小的融合蛋白条带,Western blot结果显示其可与猪囊尾蚴病人血清起反应。结论本实验成功地克隆了猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并在原核细胞中进行了表达及鉴定,为进一步的免疫诊断研究奠定了基础。     

猪囊尾蚴Ts2基因的免疫筛选克隆及生物信息学分析

目的筛选并分析猪囊尾蚴新基因,为猪囊尾蚴病患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原及有效的疫苗候选分子。方法用猪囊尾蚴病患者血清抗体筛选猪囊尾蚴cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片段进行扩增并测序,通过互联网NCBI GenBank和蛋白质分析软件进行分析。结果筛选阳性克隆,经分析具有738bp完整开放阅读框,是1个新基因,登录号EU221317,命名为Ts2。结论成功克隆了猪囊尾蚴Ts2基因片段,为进一步实验提供了条件。     

猪囊尾蚴抗原cC1与γ-干扰素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

目的： 构建含猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与猪γ 干扰素（ Ｉ Ｆ Ｎ γ） 的融合表达载体。方法： 从已克隆的含人猪囊尾蚴共通抗原ｃ Ｃ１ 的质粒中, 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出含酶切位点及接头的ｃ Ｃ１ 和 Ｉ Ｆ Ｎ γｃ Ｄ Ｎ Ａ, 两ｃ Ｄ Ｎ Ａ 经接头融合后构建成融合形式的原核表达载体转入大肠杆菌 Ｘ Ｌ Ｂｌｕｅ。结果： 经酶切分析, 表明重组载体中含１５ｋｂ 插入片段。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示一５２ ｋ Ｄａ 的诱导产物。结论： 猪 Ｉ Ｆ Ｎ γ和猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合ｃ Ｄ Ｎ Ａ 在大肠杆菌中获得表达。     

猪囊尾蚴DNA限制性片断长度多态性分析

本文采用SDS-酚-乙醇沉淀法提取猪囊尾蚴与猪细颈囊尾蚴染色体。应用6种限制性核酸内切酶及分子杂交技术对5株猪囊尾蚴和1株猪细颈囊尾蚴的染色体DNA进行分析。结果显示猪囊尾蚴与猪细颈囊尾蚴之间以及猪囊尾蚴各株之间在DNA水平上存在差异。显示出DNA技术在寄生虫种、株间鉴别中的敏感性及特异性,同时为不同地区猪爽尾蚴抗原差异和猪囊尾蚴病“血清型”的存在提供了佐证。     

猪囊尾蚴抗原cC1与γ-干扰素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

目的： 构建含猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与猪γ干扰素（ Ｉ Ｆ Ｎγ） 的融合表达载体。方法： 从已克隆的含人猪囊尾蚴共通抗原ｃ Ｃ１ 的质粒中, 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出含酶切位点及接头的ｃ Ｃ１ 和 Ｉ Ｆ Ｎγｃ Ｄ Ｎ Ａ, 两ｃ Ｄ Ｎ Ａ 经接头融合后构建成融合形式的原核表达载体转入大肠杆菌 Ｘ Ｌ Ｂｌｕｅ。结果： 经酶切分析, 表明重组载体中含１５ｋｂ 插入片段。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示一５２ ｋ Ｄａ 的诱导产物。结论： 猪 Ｉ Ｆ Ｎγ和猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合ｃ Ｄ Ｎ Ａ 在大肠杆菌中获得表达。     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

带绦虫囊尾蚴的囊液和膜糖蛋白抗原

为了确定带绦虫囊尾蚴的囊液和膜的成分中是否含有交叉反应少、有诊断价值的抗原组分,作者通过直接同位素标记、小扁豆外源性凝集素(LcH)-琼脂糖珠4B亲和层析以及SDS-PAGE等方法分析猪带绦虫、牛带绦虫和肥头绦虫囊尾蚴的表膜蛋白以及前两种囊尾蚴的囊液,并用不同的感染宿主血清与上述抗原进行免疫沉淀试验,以评价各种抗原的特异性。     

猪囊尾蚴一种蛋白抗原的cDNA分子克隆

目的从猪囊尾蚴cDNA文库中克隆某种编码蛋白抗原的基因.方法用脑囊尾蚴病人血清筛选猪囊尾蚴cDNA文库,获得阳性克隆后,经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的cDNA片段,并将其亚克隆入pUC18质粒载体中,用双脱氧核苷酸末端终止法测定插入片段的核苷酸序列.测序后与GenBank中的核苷酸序列进行同源性分析.结果经3次筛选,从cDNA文库中克隆出一个阳性克隆,测序后其长度为546 bp,含有一个开放读码框,编码158个氨基酸.同源序列分析结果表明此基因片段与编码猪囊尾蚴的一种免疫原性蛋白基因(NC-9)同源性高达99%.结论本研究克隆出一种编码猪囊尾蚴蛋白抗原的基因.