免疫微菌落染色法(IMCS)快速检出药品中的致病菌

目的 探讨免疫微菌落染色法(IMCS)在药品中快速检出致病菌.方法 采用国内创立的免疫微菌落染色法快速检出药品中污染的致病菌.结果 本法检出阳性菌的时间只需4-5h,灵敏度比常规细菌培养法高,特异性尚好.结论 免疫微菌落染 色法(IMCS)可作为药品卫生细菌学检测一种简便,快速方法.     

ATP荧光检测法和细菌菌落计数法在托幼机构消毒效果监测中的比较

目的比较ATP荧光检测法和实验室细菌菌落计数法检测结果,探讨ATP荧光检测法检测托幼机构物体表面污染程度的可行性。方法实验室使用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌作为研究对象,使用ATP荧光检测法进行检测,分析菌落数值与ATP检测数值之间的关系;托幼机构现场采取ATP荧光检测法和实验室细菌菌落计数法平行采样,记录数值进行比较。结果实验室检测结果显示,在菌落总数为1×10~4~1×10~8cfu时大肠埃希菌菌落数自然对数值与ATP荧光检测法数值自然对数值的直线回归方程(R~2=0.959,P=0.004)和金黄色葡萄球菌菌落数自然对数值与ATP荧光检测法数值自然对数值的直线回归方程(R~2=0.961,P=0.003)拟合程度高,但是检测范围受限;托幼机构现场检测以采样介质种类、班级大小、幼儿园机构级别进行分类统计,结果显示两种检测方法数值直线回归方程拟合度非常低,呈非直线相关关系。结论实验室染菌情况下,两种检测方法检测数值可以通过直线回归方程进行转换;现场检测中,两种检测方法数值的直线回归方程拟合度低,不能互换。因此,在现场托幼机构消毒效果监测中,ATP荧光检测法尚不能替代细菌菌落计数法。     

血液净化中心透析液细菌污染监测与分析

①目的 了解透析液细菌含量超标的原因,以确定有效地解决措施,选择一种更符合无菌技术的采样方法.②方法 对血透室透析液采用A、B2种方法进行比较,现场采样,倾注培养,计数细菌菌落数.③结果 2008～2010年血液透析器入口监测显示,细菌菌落数超标主要集中于1#机、3#机、4#机、5#机、6#机、8#机、10#机、11#机、12#机、15#机型.A方法采样合格率为100.00%;B方法采样细菌超标平均为61.76%.共34份超标样品平均达21份.④结论 透析机因机型的不同,其细菌污染差异有统计学意义,与操作人员采样方法的差异也有统计学意义.     

荧光定量PCR在结核杆菌微菌落培养研究中的应用

目的 研究结核杆菌微菌落培养中细菌繁殖的周期.方法 利用荧光定量PCR对微菌落形成前后细菌DNA的拷贝教进行检测分析,在基因水平判定结核杆菌生长繁殖一代所需要的时间以及观察微菌落形成的最短时间.结果 对培养前后的拷贝数进行t检验,t值分别为4.35和3.97,v=4,培养前后细菌数变化比较有显著差异(P＜0.05).结论 结核杆菌培养12 h可以生长一代.     

ICU分区前后空气细菌污染状况调查分析

目的:了解ICU分区前、后室内空气细菌污染状况,客观地评价外科ICU分区管理对于空气污染的影响。方法:分区管理即将感染患者和非感染患者分区收治。在动态状态下,对ICU分区前及分区后感染区(A)、非感染区(B)室内空气(沉降菌)分别进行5次采样培养,对细菌计数和致病菌进行分析鉴定。结果:分区前5次空气采样共培养出细菌93株,细菌总数为(591.33±162.53)cfu/m3,分区后5次空气采样A区细菌菌落总数为61株,细菌总数为(392.12±174.43)cfu/m3,B区培养出细菌30株,细菌总数为(201.30±90.62)cfu/m3。A、B区细菌菌落数与分区前比较均有减少,B区与分区前相比空气细菌总数明显降低(P<0.05)。分区前检出金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌致病菌;分区后A、B区均未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、铜绿假单胞菌等致病菌。结论:采用分区管理的方法将感染与非感染患者从地域上分开,减少了ICU各区空气中细菌总数及致病菌的种类,有效地降低了非感染区空气污染程度。     

微菌落-双分子信标技术快速检测结核杆菌的应用评价

目的探讨结核病的准确、快速、高特异性诊断方法,建立并评价微菌落-双分子信标法在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法采用MC-双分子信标技术与达安公司的结核分枝杆菌核酸检测试剂的检测结果相比较。结果 102份临床标本中微菌落-双分子信标法检出25份阳性,阳性率25%;达安结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒检出25份阳性,阳性率也是25%。其中各有1例阳性标本为阴性,2种检测方法比较无显著性差。结论微菌落-双分子信标技术具有准确、快速、高特异性等特点,不仅可快速发现结核病患者,而且可以监测疫情,反映疾病的流行程度。     

甲氧西林耐药的CO2依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离和鉴定

目的对由临床分离的一株拟是金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行鉴定、药敏试验和补偿试验,为预防和控制SCVs感染提供依据。方法从患儿脑瘤切除部位分泌的脓液中分离培养出一株金黄色葡萄球菌,进行菌落形态观察及生化鉴定、药敏试验、金黄色葡萄球菌种特异性基因(nuc)和甲氧西林耐药相关基因(mecA)的测序以及补偿试验。结果该菌株通过Vitek-2 Compact系统鉴定为金黄色葡萄球菌,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和甲氧西林耐药相关基因mecA。菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血圈不明显(24 h);凝固酶活性下降;触酶阳性;革兰染色为革兰阳性球菌,呈葡萄状排列;对β-内酰胺类抗生素有抗药性;补偿试验鉴定该SCVs为CO2依赖型。结论成功分离鉴定出一株甲氧西林耐药的CO2依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为开展金黄色葡萄球菌SCVs相关疾病的预防和控制及其相关致病机制研究奠定基础。     

老年丝虫性乳糜尿患者尿细菌L型感染的研究

采用改良的Ｋａｇａｎ氏培养基及常规血培养基，分离乳糜尿患者尿中细菌型、细菌Ｌ型并做药物敏感试验。结果从１０５例老年丝虫性乳糜尿患者的清洁中断尿中分离出细菌Ｌ型４８株，其菌落特征、革兰氏染色、细胞壁染色等均符合细菌Ｌ型的特点，经返祖鉴定为金黄色葡萄球菌３０株、表皮葡萄球菌１０株、大肠杆菌７株、未鉴定１株。揭示丝虫性乳糜尿患者常伴有细菌Ｌ型的尿路感染，细菌Ｌ型感染与患者尿液蛋白排出量、病程有密切的关系，可加重乳糜病情，致病程迁延不愈     

分枝杆菌计数方法的比较研究

目的:建立牡牛分枝杆菌的快速检测方法.方法:采用紫外分光光度计法、测湿重法、平板菌落计数法测定细菌数,建立紫外分光光度计法、测湿重法对平板菌落计数法的标准曲线.结果:建立了紫外分光光度计法和湿重法相对于平板计数法的标准曲线,通过准确度分析表明在细菌含量在每毫升105～108之间时,两标准曲线线性关系良好.结论:该方法可用于牡牛分枝杆菌的快速计数.     

招远市2004年城区托幼机构消毒质量监测结果分析

目的：了解城区托幼机构消毒工作现状，发现存在问题，进一步搞好消毒工作。方法：室内空气采用平板沉降法检测细菌菌落总数，用棉拭子抹拭法检测工作台面、玩具及手细菌菌落总数，快速纸片法对餐饮具进行大肠菌落测定。结果：室内空气合格率为82．40％，手洗消前后的合格率分别为16．42％、89．84％，物体表面消毒前后的合格率分别20．00％、98．44％，餐饮具合格率为90．97％。结论：进一步加强对托幼机构的卫生监督检测和消毒技术指导工作。     

细菌微菌落及其初步应用

A new rapid and useful microcolony technique was developed by using cellulose-acetate membrane as a supporter. The bacteria were inoculated on the membrane and cultivated for 3-6h. Then the membrane was rendered, fixed and colored. The microcolonies were observed and counted under the microscope. By using this technique the microcolonies of 139 strains of bacteria were observed. 72 strains of Staphylococcus were differentiated by means of observing the characteristics of the microcolonies. The correlation rate between the microcolony method and the routine method was 90.28%. This technique was also first used to determine the bacteria numbers in urine within 6h, and the advantages of it were significant compared with the plate count method.     

应用连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA

目的 建立检测沙眼农原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口—连接酶链反应—酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛，对6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌进行Gap—LCR反应并以ELISA和EB染色电泳检测扩增产物以比较两者的检测限度。结果Gap LCR可检出6种CT标准株并不与其他细菌发生交叉反应，ELISA可检出10fg DNA模板的扩增产物，较EB电泳法敏感10倍。结论 Gap—LCR—ELISA是一高度敏感特异的检测CT感染的核酸扩增技术，是适宜于我国广大医疗基层单位进行大规模CT分子流行病学研究的极具前景的方法。     

芳香硝基化合物可降解性研究

经过驯育得到具有降解芳香硝基化合物能力的混合菌群及6种单一菌株。在好氧条件下,芳香硝基化合物浓度为600mg/L肘,混合菌群对其降解率,24h为77.6％,48h为88.2％以上。而6种单一菌株对芳香硝基化合物的降解率,48h均在20.0％～21.6％间。该驯育菌群降解芳香硝基化合物的适宜条件为:好氧.温度25～30℃,不加外源碳、氮营养,只加少量磷酸盐及镁盐。     

全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌的鉴定能力及应用价值

目的:探讨Vitek 2 Compact型全自动微生物鉴定药敏分析仪对病原菌的鉴定能力及临床价值。方法:选取某医院各科患者的呼吸道、泌尿生殖道、脓液、血液等样本中分离的病原菌126株和本院实验室保存的参考菌株60株以及4种质控菌株作为本次检测的菌株。采用法国生物梅里埃公司生产的Vitek 2 Compact型全自动微生物鉴定药敏分析仪及相应的鉴定卡进行鉴定,分析鉴定结果正确率、鉴定时间及药敏结果。结果:4种质控菌株中每种菌株各测试10次,共40次,鉴定重复率为100%。90株革兰阴性菌中,鉴定正确的菌株为87株,鉴定正确率为96.67%;96株革兰阳性菌中,鉴定正确的菌株为93株,鉴定正确率为96.88%。肠杆菌属、非发酵糖菌和链球菌属、微球菌属4种菌株均在9 h以内完成鉴定,其中肠杆菌属和微球菌属在6 h内完成了85%左右的鉴定。革兰阴性菌的药敏结果符合率为93.94%,革兰阳性菌的药敏结果符合率为93.40%,总符合率为93.66%。结论:Vitek 2 Compact型全自动微生物鉴定药敏分析仪对病原菌的鉴定正确率较高,能快速给出鉴定结果,对指导疾病诊断和抗菌药物的合理使用具有重要的临床价值。     

MALDI-TOF MS技术在鉴定临床少见非发酵菌中的应用

摘要：目的  评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术在快速鉴定临床少见非发酵菌中的应用价值。方法  选取2013年7月-2016年10月安徽医科大学第一附属医院检验科分离的67株临床少见非发酵菌,包括痰液分离的21株,尿液分离的13株,血液分离的9株,骨髓液分离的9株,分泌物分离的8株,腹透液分离的2株,脑脊液分离的1株,胆汁分离的1株,其他体液分离的3株。以16S核糖体RNA（16SrRNA）序列分析为金标准,比较MALDI-TOF MS与Vitek2 Compact鉴定系统鉴定的准确性。结果  67株临床少见非发酵菌中,MALDI-TOF MS将66株（98.5%）鉴定到种水平,1株（1.5%）鉴定到属水平;Vitek2 Compact鉴定系统将59株（88.1%）鉴定到种水平,8株（11.9%）未能鉴定;67株少见非发酵菌均扩增到16SrRNA目的基因片段并成功测序,67株（100.0%）都成功鉴定到种水平。以16SrRNA序列分析为金标准,MALDI- TOF MS和Vitek2 Compact鉴定系统正确鉴定到种水平准确性分别为98.5%（66/67）和88.1%（59/67）。结论  与传统的细菌生化反应方法相比,MALDI-TOF MS技术操作简便、耗时短、费用低,鉴定结果与16SrRNA序列分析的符合率高,可以提高临床对少见非发酵菌鉴定的准确率。

     

Accumulation of ciprofloxacin and lomefloxacinin fluoroquinolone-resistant st rains of Escherichia coli

目的：研究膜孔蛋白OmpF缺失和主动外排在耐药大肠杆菌蓄积亲水性氟喹诺酮环丙沙星、洛美沙星中的作用和意义。方法：菌体内药物蓄积量和主动外排的作用采用荧光测定法;细菌膜孔蛋白以SDS-PAGE分析。研究的菌株包括大肠杆菌K-12膜孔蛋白缺失突变株JF701(OmpF^ )、JF703(OmpC^ );敏感株Ecs及其实验室诱变耐药株R2、R256,临床分离耐药株R5、R6。结果：Ecs中的药物蓄积稳态浓度与JF701一致,较JF703高1/3（环丙沙星）或1/2（洛美沙星）,但JF703仍对氟喹诺酮敏感;而耐药菌中的药物蓄积量除R2稍高于JF703外,较敏感菌低2-10倍。加入DNP后,两个药物的蓄积量均增高,尤其耐药株的升高显,表达这些菌株的主动外排（泵）系统功能明显增强。膜孔蛋白检查发现,Ecs株有OmpF和OmpC,R2、R256缺失OmpF,R5、R6缺失OmpC。结论：大肠杆菌减少对亲水性氟喹诺酮的蓄积量涉及OmpF缺失和主动外排（泵）,而后可能是一重要因素。     

Characterization and phylogenetic analysis of novel polyene type antimicrobial metabolite producing actinomycetes from marine sediments: Bay of Bengal India

Objective

To isolate and indentify the promising antimicrobial metabolite producing Streptomyces strains from marine sediment samples from Andrapradesh coast of India.

Methods

Antagonistic actinomycetes were isolated by starch casein agar medium and modified nutrient agar medium with 1% glucose used as a base for primary screening. Significant antimicrobial metabolite producing strains were selected and identified by using biochemical and 16S rDNA level. Minimum inhibitory concentrations of the organic extracts were done by using broth micro dilution method.

Results

Among the 210 actinomycetes, 64.3% exhibited activity against Gram positive bacteria, 48.5 % showed activity towards Gram negative bacteria, 38.8% exhibited both Gram positive and negative bacteria and 80.85 % isolates revealed significant antifungal activity. However, five isolates AP-5, AP-18, AP-41 and AP-70 showed significant antimicrobial activity. The analysis of cell wall hydrolysates showed the presence of LL-diaminopimelic acid and glycine in all the isolates. Sequencing analysis indicated that the isolates shared 98.5%-99.8% sequence identity to the 16S rDNA gene sequences of the Streptomyces taxons. The antimicrobial substances were extracted using hexane and ethyl acetate from spent medium in which strains were cultivated at 30°Cfor five days. The antimicrobial activity was assessed using broth micro dilution technique. Each of the culture extracts from these five strains showed a typical polyene-like property. The lowest minimum inhibitory concentrations of ethyl acetate extracts against Escherichia coli and Curvularia lunata were 67.5 and 125.0 µg/mL, respectively.

Conclusions

It can be concluded that hexane and ethyl acetate soluble extracellular products of novel isolates are effective against pathogenic bacteria and fungi.     

伤寒杆菌耐药质粒pRST98与细菌外膜泡的关系

目的：研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98与细胞外膜泡（OMV）形成的关系。方法：将（1）携带pRST98的野生型耐药性伤寒杆菌－－ST1及ST2；（2）不含pRST98的野生型敏感伤寒杆菌－－ST3及ST4；（3）不含质粒的大肠杆菌－－E.coliK12W1485;(4)用十二烷基硫酸钠消除pRST8的突变体菌株－－ST1（R^-)及ST2（R^-)；和（5）经接合转移将pRST98导入敏感型伤寒杆菌及大肠杆菌的接合子－－pRST98/ST3、pRST98/ST4及pRST98的耐药伤寒杆菌消除pRST98前后，不含pRST98的的敏感伤寒杆菌和大鼠肝菌在导入该质粒前后，细菌形成OMV的数量和形态均无明显变化。结论：伤寒杆菌耐药质粒pRST98在体外与细菌外膜泡的形成未发现有明显关系。     

The aflatoxin B1 isolating potential of two lactic acid bacteria

Objective

To determine lactic acid bacteria''s capability to enhance the process of binding and isolating aflatoxin B1 and to utilize such lactic acid bacteria as a food supplement or probiotic products for preventing absorption of aflatoxin B1 in human and animal bodies.

Methods

In the present research, the bacteria were isolated from five different sources. For surveying the capability of the bacteria in isolating aflatoxin B1, ELISA method was implemented, and for identifying the resultant strains through 16S rRNA sequencing method, universal primers were applied.

Results

Among the strains which were isolated, two strains of Lactobacillus pentosus and Lactobacillus beveris exhibited the capability of absorbing and isolating aflatoxin B1 by respectively absorbing and discharging 17.4% and 34.7% of the aforementioned toxin existing in the experiment solution.

Conclusions

Strains of Lactobacillus pentosus and Lactobacillus beveris were isolated from human feces and local milk samples, respectively. And both strains has the ability to isolate or bind with aflatoxin B1.     

大肠埃希菌临床分离菌株喹诺酮类抗生素耐药机制研究

目的探讨我院临床分离的大肠埃希菌株耐药基因的分布及其在耐药中的作用机制。方法选择我院临床分离的大肠埃希菌菌株,采用纸片扩散法进行喹诺酮类药物药敏试验,筛选耐药菌株并测定环丙沙星MIC,对喹诺酮耐药菌株进行qnrA、qnrB、aac-（6’）-Ib-cr、GyrA及ParC检测,并进行基因扩增测序。结果 84株临床分离的大肠埃希菌菌株中有24株对喹诺酮类药物耐药,耐药率为28.4%。其中对2种药物耐药4株,对3种药物耐药6株,对5种药物耐药14株。耐药菌株MIC值为对照菌株148～596倍,24株耐药菌中检出qnrA质粒基因12株、qnrB质粒基因4株、aac-（6’）-Ib-cr基因4株、GyrA基因喹诺酮决定区突变11株、ParC基因决定区突变4株。结论我院存在大肠埃希菌喹诺酮耐药菌株,且耐药菌株耐药机制复杂,耐药基因的产生及酶类耐药突变是主要原因,临床要加强对耐药菌株的检测。